DETERMINACIÓN DETERMINACIÓN DEL HEMATOCRITO, HEMOGLOBINA E ÍNDICES ERITROCITARIOS Objetivos Objetivo General Determinar los distintos valores de los índices eritrocitarios que se obtendrán utilizando los diferentes valores obtenidos en el laboratorio tales como ser los valores de hematocrito, hemoglobina y recuento de eritrocitos.
Objetivos Específicos Conocer el significado de los distintos índices eritrocitarios y relacionar con la importancia que presentan estos. Saber la importancia que radica en el valor diagnostico que se obtendrá por el valor de los índices eritrocitarios. Aprender a realizar los cálculos que se necesiten para determinar los distintos valores. Reportar e interpretar los resultados obtenidos según el cálculo que se realice. Identificar los principales problemas que se pueden presentar cuando los valores de los índices no se encuentran entre los parámetros normales.
Marco Teórico Los índices eritrocitarios llamados secundarios son los que relacionan el hematocrito con el numero de hematíes y la concentración de hemoglobina, denominados a su vez índices eritrocitarios primarios. Son fundamentalmente tres: a) b) c)
El volumen corpuscular medio (VCM) La hemoglobina corpuscular media ( HCM) Concentración corpuscular media de hemoglobina (CCHM)
Su determinación es muy útil en la valoración y orientación diagnostica de las anemias y pueden calcularse a partir de los tres índices eritrocitarios primarios citados anteriormente. En la actualidad la mayoría de auto analizadores que se emplean en hematología suministran todos los índices eritrocitarios de forma sistemática.
Volumen corpuscular medio El volumen corpuscular medio es un parámetro usado en el estudio de la sangre (Biometría Hemática). Es la media del volumen individual de los eritrocitos (glóbulos rojos).1 El volumen corpuscular medio es calculado de la siguiente manera:
VCM = (Hct / RBC) * 10, donde Hct es el hematocrito, en porcentaje y RBC es el
conteo de eritrocitos, expresado en millones de células por microlitro. Los rangos normales de VCM para varones es de 87+7 fL (fentolitros) y en mujeres de 90+9 fL. De acuerdo al valor en el que se encuentre este parámetro, se desprenden dos conceptos; microcítico y macrocítico (micro=pequeño, macro=grande, cítico=célula). Para un hombre o mujer con un volumen corpuscular medio de 120 es considerado macrocítico, mientras que un VCM de 98 se considera macrocítico sólo para hombres. Un paciente con una variación muy grande en el tamaño de sus eritrocitos, se dice que tiene anisocitosis (an=falta de, iso=igual, cito=célula, osis=condición de), en otras palabras células desiguales. Este parámetro es calculado por los instrumentos automatizados de biometría hemática, los cuales caracterizan, cuentan y miden el tamaño de las células sanguínes utilizando, en su mayoría el Método Coulter.
Hemoglobina corpuscular media
La hemoglobina corpuscular media, o hemoglobina celular media (HCM), es una medida de la masa de la hemoglobina contenida en un glóbulo rojo. Es reportada como parte de un conteo completo de sangre estándar. Está disminuida en anemias microcíticas, y aumentada en anemias macrocíticas. Es calculada dividiendo la masa total de la hemoglobina por la cuenta de RBC. HCM = (Hgb * 10) / RBC Un valor normal en seres humanos es de 26.3 a 33.8 picogramos/célula.
Concentración corpuscular media de Hemoglobina La CCMH corresponde a la concentración de hemoglobina en 1 decilitro de hematíes y se calcula a partir de la concentración de hemoglobina por litro (L) en sangre y del valor hematocrito.
Valores normales de índices eritrocitarios
Anemia
Frote de sangre en un paciente con anemia por deficiencia de hierro. Los (eritrocitos) están pálidos por falta de hemoglobina y tienen variado tamaño y forma. También se observa un glóbulo blanco (la célula más grande y con núcleo) y 3 plaquetas (pequeñas de color morado). La anemia es una enfermedad hemática (sanguínea) que es debida a una alteración de la composición sanguínea, determinada por una disminución de la masa eritrocitaria que condiciona una concentración baja de hemoglobina (ver los parámetros estándares). Rara vez se registra en forma independiente una deficiencia de uno solo de estos factores. La anemia es una definición de laboratorio que entraña un recuento bajo de eritrocitos (véase hematocrito) y un nivel de hemoglobina menor de lo normal. Valores normales
Los rangos de normalidad son muy variables en cada población, dependiendo de factores ambientales (nivel sobre el mar) y geográficas. A nivel del mar encontraremos valores normales mínimos, y a gran altura los valores normales deberán ser más altos (la menor presión parcial de oxígeno (O2) obliga al
organismo a optimizar su transporte). Además, hay variaciones de sexo, observando valores menores en las mujeres (posiblemente por la pérdida de eritrocitos y contenido sanguíneo en cada ciclo menstrual). Sexo
Número de Eritrocitos Hematocrito Hemoglobina
Hombres 4,2-5,4 x 106/mm3
42-52 %
13-17 g/dl
Mujeres 3,6-5,0 x 106/mm3
36-48 %
12 — 16 g/dl
MCV:
80-100 fl.
MCHC:
31-37 g/dl.
MCH:
27-31 pg/célula.
RDW:
11,5-14,5
En general, se establece como normal para un varón un hematocrito entre 42% y 52%, hemoglobina entre 13 y 17 g/dl, y para una mujer: hematocrito entre 36% y 48%, y hemoglobina entre 12 y 16 g/dl. Estos niveles son algo arbitrarios, pues existen límites en los valores normales. Por ejemplo, un sujeto puede tener una disminución de 1 a 2 g/dl en su hemoglobina, y aun así estar dentro de los límites normales.
Expresión clínica Los síntomas y signos de la anemia se correlacionan con su intensidad, su rapidez de instalación y el sitio donde se produce. Otros factores influyentes en el cuadro sintomático son la edad, el estado nutritivo, cardiovascular y respiratorio. Los síntomas que se observan en la anemia aguda se denominan síndrome anémico, e incluyen: debilidad (astenia), palpitaciones y falta de aire (disnea) con el esfuerzo. Frecuentemente y sobre todo en las anemias severas se observa esplenomegalia, hepatomegalia, petequias, equimosis, y/o ictericia. También puede incluir síntomas propios de otros sistemas, como cardiovascular (taquicardia, disnea de esfuerzo marcada, angor, claudicación intermitente), digestivo (dispepsia, disfagia, anorexia, diarrea) o neuropsiquiátrico , depresión, cambios de carácter como irritabilidad. En la pérdida súbita de sangre (hemorragia aguda) y en particular si es voluminosa (aprox. 2 L o 40% del volumen sanguíneo), predominan los síntomas de inestabilidad vascular por hipotensión, contracción vascular, aparecen los signos del shock
hipovolémico, tales como confusión, respiración de Kussmaul, sudoración, y
taquicardia.
Diagnóstico Es fácil diagnosticar un estado de anemia, pero la labor médica debe orientarse a caracterizarla, para así establecer su causa (etiología). Para ello se deben estudiar a fondo las características de los glóbulos rojos, de los reticulocitos, leucocitos y plaquetas que circulan en la sangre mediante un hemograma o citometría hemática, verificando el hematocrito, y las características de las series hematopoyéticas mediante un mielograma. Generalmente salen moretones en la cadera, también conocida como peltre.
Síntomas La anemia afecta si el paciente no presenta suficiente hemoglobina o eritrocitos por litro de sangre. Desde los síntomas tempranos de la anemia, es suave, es fácil confundir los síntomas de la anemia desde síntomas de una cierta enfermedad seria. Los síntomas importantes de la anemia incluyen: palpitación de corazón, fatiga, vértigos, pérdida de concentración, respiración rápida del corazón y piel pálida. La falta de ánimo y la depresión podían también ser un síntoma importante de la anemia. El pulso del dolor de cabeza, de la irritabilidad, del síncope y de limitación son también síntomas de la anemia. Las muestras observables de la anemia son: taquicardia, edema periférico suave, murmur sistólico de la eyección y ronquidos venosos. Los pectoris de la angina entre la gente mayor son una muestra clara de la anemia. Las mujeres tienden para desarrollar la menstruación y el amenorrea anormales si la anemia los afecta mientras que los varones desarrollan impotencia y disminuyen la libido. La anemia podría o ser el resultado de un desorden heredado o podría resultar debido a su ambiente, tal como infección o exposición a una toxina o a una droga.
Clasificación Anemia
Índice de producción de
Índice de producción
reticulocitos inadecuada respuesta productora a la anemia.
Sin hallazgos clínicos de hemolisis o pérdida de sangre: Alteración de la producción.
Hallazgos clínicos y MVC anormal: Hemolisis o pérdida y alteración crónica de la producción*.
Anemia macrocítica (VCM>100)
Anemia normocítica (80
reticulocitos con respuesta adecuada productora = hemolisis o pérdida de sangre sin problemas en la producción de reticulocitos.
Hallazgos clínicos y MVC normal: Hemolisis aguda o pérdida sin tiempo para compensar por la médula ósea**.
Anemia microcítica (VCM<80)
Anemia Drepanocítica: Los glóbulos rojos adoptan forma de hoz en estados de bajo oxígeno (hipoxia) debido a una alteración en la hemoglobina (HbS) y de su membrana; aumentando su fragilidad y subsecuente destrucción intravascular. La clasificación fisiopatológica está basada en el mecanismo que conlleva al estado de anemia, diferenciándolas en:
Anemias mediadas por trastornos en la producción de glóbulos rojos o
Endocrinopatías
o
Proceso inflamatorio crónico
o
Fallo renal crónico
o
Anemia aplásica
Eritropoyesis inefectiva: o
o
o
Defecto en la síntesis de ácidos nucleicos: deficiencia de ácido fólico y cobalamina (anemia con macrocitosis: los reticulocitos no se dividen y de ahí el aumento de tamaño de los eritrocitos). Defecto en la síntesis del grupo hemo: anemia microcítica por déficit de hierro y anemia sideroblástica Defecto en la síntesis de las globinas: talasemia beta y anemia drepanocítica
Anemias por pérdida de sangre o
o
Pérdidas agudas (repentinas) Pérdidas crónicas (hemofilias, lesiones gastrointestinales, trastornos de la menstruación, etc.)
Anemias hemolíticas o
Talasemia alfa
o
Anemia drepanocítica o de células falciformes
o
Esferocitosis hereditaria
o
Anemia por déficit de la enzima G6FD
o
Anemia por hemoglobinopatías
o
Anemia por infecciones (paludismo)
o
o
Anemia por agresiones mecánicas (anemia microangiopática, coagulación intravascular diseminada, púrpuras trombocitopénicas, etc.) Anemias autoinmunes (anemia perniciosa, anemia paroxística nocturna, anemia inmunohemolítica)
Parte Experimental Determinación de hemoglobina
Materiales, reactivo y equipos • Tubos capilares de vidrio
• Cera o plastilina. • Microcentrifuga • Abaco o regla • Muestra: sangre con EDTA • Algodón • Alcohol
MUESTRA Sangre con anticoagulante o sangre tomada por punción cutánea en capilar heparinizado (2 UI).
Procedimiento I.- Mezclar la muestra por inversión (20 veces). 2.- Llenar por capilaridad el tubo hasta los 2/3 a 3/4, mínimo 2 capilares por paciente. 3.- Sellar un extremo con plastilina. 4.- Colocar los tubos en la centrífuga con el extremo sellado hacia fuera 5.- Centrifugar 5 minutos a 10 g. (aproximadamente 12. 000 r.p.m.) 6.- En hematocritos superiores a 60 % se debe centrifugar por 5 minutos más para disminuir el plasma atrapado.
LECTURA Si se usa la es ca la de le c t u r a (Abaco): se enrasa a 0 con la base de la columna (l ím it e con la pl as tili na) ya 100 con el tope de la muestra (plasma). Se lee el nivel superior de los eritrocitos, no se debe inc lui r la capa leuco plaquetaria.
Con la regla recta primero se debe enrasar el capilar a nivel 0 con el límite de la plastilina y con una line recta se pone al 100 con el final de la muestra y se lea dónde termina la capa eritrocitaria.
Recuento de eritrocitos
Material, reactivos y equipos.
Liquido de dilución para glóbulos rojos solución de Hayem
Pipetas dilutoras o para glóbulos rojos
Cámara de Neubauer
Porta Objetos
Gradillas
Tubos de hemolisis
Micropipetas de 20 ul y 400 ul
Pipetas
gasa
Microscopio
Procedimiento En tubo:
Depositar 3.980 ul de solución fisiológica en un tubo de ensayo. Absorber 20 microlitros de la muestra. Limpiar la superficie externa de la puntilla y depositar en la solución de tal manera que quede completamente limpia. Dilución 1/200. 1. Cargar la cámara con la mezcla, cuando se emplea pipeta dilutora desechar las tres primeras gotas, cuando se emplea dilución en tubo, mezclar muy bien para el cargado. 2. Dejar sedimentar 2 a 3 minutos. 3. Leer en microscopio con objetivo de 10 X se efectúa el recuento en los cuadrados grandes de las cuatro esquinas (1 mm2 cada uno) se incluyen las células que están dentro de estos y las que están en contacto con la primera línea.
Determinación de hemoglobina
Materiales, reactivo y equipos o o
Equipo: Espectrofotómetro o foto colorímetro. Material: Micro pipeta de 20 microlitros
tips Tubos de ensayo Gradillas para tubos Pipetas volumétricas de 10 ml Pro pipetas Algodón Alcohol Papel secante Reloj parafilm Reactivos: Solución de Drabkin modificada y estándar de o hemoglobina. MUESTRA .-Sangre venosa o capilar con anticoagulante o
Procedimiento • Colocar 5 ml de la solución de Drabkin en un tubo de 10ml • Mezclar bien la muestra (por inversión suave sin formar espuma) • Tomar 0.02 ml (20 microlitros) de la muestra, limpiar la parte externa de la
pipeta.
• Expulsar suavemente la muestra en la solución • Mezclar bien por inversión varias veces (o en vortex) esperar según tiempo
de Drankin. • Leer a 540 nm o con filtro amarillo-verde.
Una vez obtenidos los tres resultados realizamos los cálculos correspondientes con la ayuda de las fórmulas y analizamos cada caso.
Resultados Volumen Corpuscular medio
Se tiene una moderada microcitosis Hemoglobina corpuscular media
Se observa una leve hipocromía Concentración corpuscular de hemoglobina media
Se encuentra dentro de los parámetros normales. El paciente se encontraría con una anemia microcitica hipocrómica.
Esta es la patología más frecuente del mundo. Los siguientes datos son para que se hagan una idea de su importancia: • El 50% de las embarazadas tienen déficit de Fe • El 20% de las mujeres en edad fértil tienen déficit de Fe • Un 10-15% de los niños tienen un déficit de Fe
Conclusiones Se realizó los cálculos de índices eritrocitarios con los datos obtenidos de la determinación de la concentración de hemoglobina, hematocrito y recuento de eritrocitos según las formulas indicadas analizando y determinando los resultados según las diferentes patologías. Estas pruebas son muy importantes en un análisis especialmente para el área de hematología y conocer estas es fundamental.
Cuestionario 1. De qué factores depende una hemoglobina alta o baja. Hemoglobina alta
La hemoglobina alta es normalmente debido a un aumento del número o anormalidad de los glóbulos rojos. Las causas incluyen: Vivir en una gran altura Fumar Enfermedad cardíaca congénita El incumplimiento de la parte derecha de su corazón (cor pulmonale) Cicatrices y engrosamiento del tejido pulmonar (fibrosis pulmonar) Un raro trastorno de la médula ósea (policitemia vera) La deshidratación, como de la diarrea severa o sudoración excesiva La enfermedad renal El uso de esteroides anabolizantes
Hemoglobina Baja Los niveles de hemoglobina por debajo de los niveles normales pueden deberse a:
- Anemia (diversos tipos) - Sangrado - Deficiencia de eritropoyetina (por enfermedad renal, por ejemplo) - Intoxicación con plomo - Desnutrición - Deficiencias nutricionales de hierro, folato, vitamina B12 y vitamina B6 - Sobrehidratación - Destrucción de los glóbulos rojos asociada con una reacción a transfusión 2. ¿Qué puede provocar en la muestra un anticoagulante líquido en exceso qué y cómo influye en la determinación de hematocrito?
Empleo de una relación sangre/anticoagulante incorrecta. El exceso de EDTA en relación a la cantidad de sangre produce un falso descenso del hematócrito por retracción de los hematíes. La falta de suficiente anticoagulante puede producir una coagulación parcial. 3. ¿Cuándo hay retraso en la lectura del hematocrito con formación de pico de flauta que acciones deben realizarse?
Retraso en la realización de la determinación después de extraída la sangre (falso aumento del valor hematócrito). 4. ¿Qué indica el volumen corpuscular medio?
Es la media del volumen individual de los eritrocitos (glóbulos rojos). 5. Indique cuales son las interferencias para la determinación de CCMH.
La principal interferencia que se presenta en la determinación de CCMH es que los valores que se presentan para la realización de cálculos no estén correctos, no se encuentren en las unidades deseadas, y fallos en el cálculo matemático. 6. ¿Qué células se encuentran entre la columna de glóbulos rojos y plasma?
Se encuentra una capa de células de leucocitos y plaquetas.
Bibliografía Mabry-Hernandez IR. Screening for iron deficiency anemia--including iron supplementation for children and pregnant women. Am Fam Physician. 2009 May 15;79(10):897-8. Alleyne M, Horne MK, Miller JL. Individualized treatment for irondeficiency anemia in adults. Am J Med. 2008;121:943-948. Brittenham G. Disorders of Iron Metabolism: Iron Deficiency and Iron Overload. In: Hoffman R, Benz EJ, Shattil SS, et al, eds. Hematology: Basic *Principles and Practice. 5th ed. Philadelphia, Pa: Elsevier Churchill Livingstone; 2008:chap 36
