Guía de prácticas de Farmacologia y Bioquímica I
Escuela de Medicina
DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA y HEMATOCRITO EN SANGRE.
PRÁCTICA N° 2
COMPETENCIA: El alumno al termino de la practica estará en condiciones de conocer el fundamento y la técnica del procedimiento del análisis de hemoglobina y hematocrito en sangre I.
INTRODUCCIÓN A. HEMOGLOBINA: La hemoglobina es una proteína que contiene hierro y que le otorga otor ga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxígeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. La hemoglobina también transporta el dióxido de carbono, que es el producto de desecho del proceso de producción de energía, lo lleva a los pulmones desde donde es exhalado al aire. El análisis de la hemoglobina se realiza normalmente en un estudio completo de hematimetría, con el recuento de glóbulos rojos o hematíes. La hemoglobina se halla en el interior de los glóbulos rojos, salvo en determinadas patologías en que puede aparecer hemoglobina en plasma (hemoglobinemia), por ej. infecciones graves, ciertas intoxicaciones, etc. Generalmente un aumento de los valores de hemoglobina por encima de los normales es tan solo aparente. Debido a un aumento del número de hematíes, por ejemplo en la adaptación a un cambio de altitud, o bien en los casos en que la sangre sufre una concentración por pérdida de líquido plasmático (por ejemplo, al sufrir el cólera). Un descenso en los valores de hemoglobina por debajo de los normales es, sin embargo, muy común y un síntoma característico de las anemias, hemorragias repetidas y leucemia. B. HEMATOCRITO: Se define, como el volumen de los glóbulos rojos en la sangre en comparación al volumen de sangre total; se expresa como un porcentaje. En el hemograma completo se determina deter mina el balance biológico gracias a una muestra de sangre. Los valores normales de hematocrito están comprendidos entre 40 % y 55 % en los hombres, mientras que en las 1
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mujeres varía entre 33 % y 50 %. Cada tipo de variación puede destacar una patología. La disminución del hematrocito puede indicar anemia en la mayoría de los casos (disminución de los glóbulos rojos o hemoglobina). Puede estar relacionada con diferentes causas, como la deficiencia de hierro, la mala absorción desde el intestino, la anemia perniciosa (enfermedad de Biermer) o pérdida excesiva de sangre. La anemia causa palidez cutánea, fatiga, aumento del ritmo cardiaco, dolor de cabeza, dificultad para respirar o respiración rápida. Un valor alto de hematocrito, por el contrario, indica una policitemia (aumento en el número de glóbulos rojos). La policitemia puede indicar una etapa de la enfermedad de Vaquez-Osler, una patología que afecta también a la médula ósea, el centro donde se sintetizan los glóbulos rojos de la sangre. Un valor alto de glóbulos rojos en la sangre puede estar relacionado, de manera secundaria, con alguna enfermedad del corazón, tumores, cáncer o aumento de la síntesis de las hormonas que estimulan la producción de estas células sanguíneas.
Estructura de Hemoglobina
II.
MATERIAL Y MÉTODO: 2
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2.1.
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MATERIAL: MATERIAL DE LABORATORIO: Tubos de ensayo Gradillas Micropipetas Pipetas graduadas Guantes esteriles MUESTRA BIOLOGICA Sangre Humana REACTIVOS Y EQUIPO
2.2.
Centrifuga Baño Maria Espectrofotometro Reactivo Drabkin Ferrocianuro de potasio Cianuro de potasio Bicarbonato de potasio Solución estándar de cianometahemoglobina Capilares heparinizados
MÉTODO: 2.2.1. MÉTODO COLORIMÉTRICO DE LA CIANMETAHEMOGLOBINA O CIANHEMIGLOBINA (CNHi): Fundamento:
Consiste en hacer reaccionar la sangre con un reactivo que contiene cianuro y ferrocianuro potásico (reactivo de Drabkins), que oxida la hemoglobina a metahemoglobina (de Fe2+ se oxida a Fe3+), la cual a su vez pasa a cianometahemoglobina. La intensidad de color de este compuesto se mide espectrofotométricamente a 540 nm. Los resultados se llevan a una curva estándar realizada con soluciones de cianometahemoglobina comercial, donde se extrapolan las concentraciones de hemoglobina de las muestras problema. Hemoglobina + ferricianuro de K metahemoglobina (Hi) →
Hi + cianuro de K cianmetahemoglobina (HiCN) →
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2.2.2. METODO a MICROESCALA:
Fundamento
El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados como un porcentaje de volumen de sangre total existente en una muestra Mide la fracción que comprende a los globulos rojos(masa globular), respectoal volumen totalde la muestra de sangre venosa o capilar.Puede expresarse en porcentaje o como valor decimal. 2.2.3. CASO CLINICO - ANEMIA Paciente MUJER de 45 años acude a consulta por presentar astenia de un mes de evolución aproximadamente. No refiere anorexia ni perdida de peso. ANTECEDENTE PERSONALES: No alergias
no fuma.
no HTA
no diabetes
no dislipidemias
ANTECEDENTE FAMILIARES: Madre fallecida por cáncer gástrico a los 70 años.
EXPLORACIÓN FISICA:
consciente y orientada obesa
PA:130/80mmHg
Pulso: 80Lpm
Palidez cutáneo-mucosa
Diagnóstico:Hemoglobina : 8 gr/dl
Hematocrito: 25%
Hematies :
2,800.000/ml
VCM : HCM :
55 Fl/h 28 pc
III. PROCEDIMIENTO: 4 Prof. German Narro Cabezas
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3.1 Hemoglobina : Homogenizar perfectamente la muestra antes de usar. En dos tubos S(Estándar) y D (Desconocido), colocar.
Tubos
Componentes Reactivo Drabkin Estándar Muestra
de
S(Estándar)
D (Desconocido)
B(Blanco)
5 mL
5 mL
5 mL
20 uL
20uL -
-
Estabilidad del color rojo transparente al menos 24 horas. Leer en absorbancia con espectrofotometro a 540 nm, llevando a cero con agua destilada / Drabkin.
3.2. Hematocrito:
Llevar las ¾ partes del tubo, taponar el tubo asegurando bien la muestra, colocarlo en forma vertical, colocar en la centrifuga, el extremo del tubo tamponado deberá apuntar hacia afuera lejos del centro, centrifugar a alta velocidad. Luego al finalizar se obtendrá 3 capas: SUPERIOR (columna del plasma), MEDIA (globulos blancos), INFERIOR (globulos rojos).
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IV.
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Se lleva amedir con escala teniendo en cuenta que el fondo de la columna de globulos rojos quede al mismo nivel que la línea horizontal correspondiente. Desplazar el tubo hasta que la línea marcada con el numero 1 quede al nivel del tope de la columna del plasma, el fondo de la columna de globulos rojos debe continuar sobre la línea cero. Leer la línea que pasa al nivel del tope d ela columna de GR, que indicara el hematocrito de la muestra.
RESULTADOS: 4.1 Hemoglobina: FACTOR = (S)Estandar g/dl Abs.S Hemoglobina g/dl = D(Desconocido) X FACTOR
VALORES NORMALES DE HEMOGLOBINA: Condicion Mujer Hombre Niño
4.2
V Ref. 11-15 g/dl 13-16 g/dl 10-12 g/dl
Hematocrito: Hcto= =
Resultado
Long de columna de GR Longitud de toda la columna
VALORES NORMALES DE HEMATOCRITO: Condicion Mujer Hombre Niño
Resultado
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V Ref. 37-42% 40-50% 38-45%
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4.3. Anemia Tipo de anemia: Esquematice terapia:
V.
DISCUSIÓN (Sea claro y conciso)
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VI.
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CONCLUSIONES
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS CONSULTADAS: (Ordénalas según formato Vancouver) ------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------CUESTIONARIO: 1. Cuantos tipos de anemias existen, fundamente su respuesta. 2. Fundamente que es suero y plasma , concreto. 3. Averigue el valor de hematocrito de lactante de 3 meses. Fundamenta tu respuesta. 4. Averigue el valor de hematocrito del recién nacido. Fundamenta tu respuesta. 5. ¿Qué es la talasemia? 6. Define la carboxihemoglobina y oxihemoglobina y que función cumplen en el ser humano. 7. Vaso sanguíneo que saca sangre oxigenada del corazón y la reparte por todo el organismo es: 8. Defina hemograma completo. 9. La anemia es una enfermedad fundamente su respuesta 10. Que evalua la CHGM. fundamente su respuesta 11. Cuales son los síntomas de una anemia 12. Cuales son las causas básicas de una anemia. 8 Prof. German Narro Cabezas
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