HEMOGRAMA COMPLETO (Recuento celular, Hematocrito, Hematocrito, Frotis sanguíneo) sanguíneo) s anguíneo EVIDENCIA DE HACER : Recuento celular, Hematocrito, Frotis sanguíneo EVIDENCIA DE PRODUCTO: Reporte de interpretación diagnóstica. INTRODUCCIÓN El hemograma consiste en un conteo de los elementos celulares de la sangre como son las células rojas, blancas y plaquetas. Este análisis incluye los índices o sea el contenido de hemoglobina de la célula roja, diámetro de las células. El diferencial o el porcentaje de cada tipo (5) de células blancas se refiere a las diferentes células blancas que se encuentran normalmente en la sangre expresado en porcentaje del total de células blancas. El valor principal, valor de este análisis, nos permite dar una información general del organismo, prognosis, respuesta a tratamiento y recuperación. El número total de células blancas es una guía útil para conocer la severidad del proceso de la enfermedad. Un número elevado de células blancas puede ser la respuesta del organismo para defenderse de una infección, o en otros casos patológicos, el aumento de células anormales o inmaduras de células blancas puede ser el caso de leucemia o cáncer en la sangre. El número total de células rojas es una medida importante para la evaluación de anemias. Los valores de hemoglobina complementan el tamizaje para la evaluación de las enfermedades que causan anemias. Por ejemplo, una disminución del contenido de hemoglobina en la célula roja con una disminución en el diámetro de la misma, nos indica que la anemia es microcítica, posiblemente por una deficiencia de hierro.Según Minsa (Hospital Cayetano Heredia) Perú Heredia) Perú los valores de Hemoglobina son:
I.- PROBLEMAS 1.1 ¿Existirá alguna alteración el Hematocrito en los alumnos del Grupo de Laboratorio de 4:30pm a 7:10 pm en la UCV? (Escuela de Medicina)? II.- HIPÓTESIS 2.1 Según los datos del Libro de Balcells (21° Edición), mediremos medi remos el rango normal de Hematocrito Hematocrit o de dos compañeros, deberían ser normales, ya que ellos no han presentado ninguna sintomatología 2.2 Calculamos que existe al menos un caso en la alteración en el Hematocrito. III.- OBJETIVOS A. Objetivo General:
Aprender a realizar los Exámenes Hematológicos: Hemograma-Hematocrito-Frotis sanguíneo. B. Objetivos Específicos:
Conocer, determinar, los elementos formes de la sangre
Conocer, determinar, comprender la realización del Hematocrito.
Interpretar los Valores Normales de las Pruebas Hematimétricas mencionadas, según su especificidad y sensibilidad.
Toma de muestra 1. TOMA DE MUESTRA SANGUÍNEA 2. DEFINICIÓN: Procedimiento que permite acceder al torrente sanguíneo para extraer una pequeña muestra de sangre, que será utilizada en diversas pruebas. 3. TOMA DE MUESTRA SANGUINEA Podemos obtener muestras de sangre venosa y/o de sangre arterial. SANGRE ARTERIAL Útil en medir pO2, pCO2 y pH del plasma. SANGRE VENOSA Las sustancias ha analizar están adecuadamente solubles y dispersas. 4. TOMA DE MUESTRA SANGUINEA Para extraer una muestra sanguínea se pueden usar diversos métodos, así como seguir varias etapas. 5. PREPARACIÓN DE LOS MATERIALES GUANTES MASCARILLA GAFAS PROTECTORAS GRADILLAS CAMPO ESTERIL ALCOHOL AL 70% ALGODÓN O TORUNDAS DE GASA ESPARADRAPO JERINGAS DE 5mL AGUJAS (TIPOS) BANDA ELASTICA, TORNIQUETE O LIGADURA TUBOS AL VACIO CON ANTICOAGULANTE EDTA (K3), EDTA (Na2) U OTRO ANTICOAGULANTE 6. PREPARACIÓN DE LOS MATERIALES VIALES CON ANTICOAGULANTE EDTA 1,5% VIALES CON CITRATO DE SODIO AL 3.8% TUBOS DE VIDRIO DE 13x100 CONTENEDOR PARA AGUJAS PUNZANTES FRASCO CON SOLUCIÓN DE LEJÍA 3-5% CUADERNO DE REGISTRO IMPRESO DE PETICIÓN DE ANÁLISIS 7. PREPARACIÓN DE LOS MATERIALES AGUJAS: 8. PREPARACIÓN DE LOS MATERIALES EDTA (K2) EDTA (Na2) CITRATO DE SODIO AL 3.8% HEPARINA DE LITIO TUBOS AL VACIO CON ANTICOAGULANTE EDTA (K2), EDTA (Na2) U OTRO ANTICOAGULANTE 9. PREPARACIÓN DEL PACIENTE Ayuno del paciente Sobre el ejercicio muscular Preparación psicológica Posición del paciente 10. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUINEA Pasos a realizar: 1.- Identificar al paciente (preguntar su nombre) .- Verificar si corresponde el nombre .- Extremar precauciones .- Un error aquí podría conllevar la anulación de toda la serie analítica. 2.- Revisar petición de análisis y comprobar, número de determinaciones, datos del paciente y servicio solicitante. 11. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUINEA Constatar que el paciente esté preparado para la toma de muestra (anímica y biológicamente). 4.- Anotar al reverso de la solicitud del examen, si el paciente está tomando medicamento. 5.- Explicar al paciente en que consistirá la toma de muestra sanguínea. 6.- Verificar que los materiales a usar estén listos y que el paciente esté cómodo. 12. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUINEA Seleccionar el sitio de la vena donde se realizará la punción. Considerar: Cicatrices extensas. Hematomas. Terapia intravenosa. Adultos: venas de fosa cubital del brazo. Niños: venas de la fosa cubital. venas del dorso de la mano. venas del tobillo del pie. Otro lugar: vena yugular externa.
13. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUINEA Ligar el brazo aprox. 4 dedos por encima de la flexión del codo o a 10 cm. de él. .- Ajustar bien alrededor del brazo del paciente. .- No dejar ligado el brazo más de 1 ó 2’ 14. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUINEA Palpar la vena con el dedo, escoger aquella que se pueda palpar, el paciente deberá cerrar la mano ayudando a visualizar las venas superficiales. 10.- Limpiar la zona con alcohol al 70% en un área de 2 pulgadas con movimientos circulares, desde el centro de la zona hacia afuera y dejar secar la piel. 15. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUINEA No tocar el área una vez desinfectada. 16. Introducir la aguja, formando ángulo aprox. 15° brazo-aguja y con bisel hacia arriba. La aguja de calibre adecuado. Este paso es variable pues hay varias maneras de colectar una muestra sanguínea, las cuales se mencionan a continuación. 16. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUINEA VENA COLAPSADA EL BISEL DE LA AGUJA NO HA ENTRADO EN LA VENA LA AGUJA TRASPASA LA PARED POSTERIOR CAUSAS DE CESE DE FLUJO DE SANGRE DURANTE LA VENIPUNCIÓN ÓPTIMO 17. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUINEA USANDO LA JERINGA Eliminar el protector de la aguja y pinchar la vena localizada. Tirar suavemente del émbolo hasta conseguir el volumen de sangre deseado. Tan pronto como la sangre comience a fluir en la jeringa no hay que volver a mover la aguja. OBTENCIÓN DE LA MUESTRA SANGUINEA USANDO AGUJA LIBRE Eliminar el protector de la aguja, forme un solo sistema con el tubo, poniendo dicho sistema entre su dedo pulgar e índice. Pinchar la vena localizada. Sujetar el tubo y cambiarlo, si lo desea, por un vial u otro tubo, pero hacerlo muy rápido. Esperar hasta obtener el volumen deseado. MUESTRA REQUERIDA: Sangre venosa tomada directamente en tubos con antigoagulante EDHTA. MATERIAL: Pipeta de glóbulos rojos (De Thoma) o pipeta Pipeta de glóbulos blancos (De Thoma) o automática (de 0-100 ml). pipeta automática (de 0 a 100 ml). Diluyente de glóbulos rojos: Cloruro de Sodio Turk al 1%.
EQUIPOS: Microscopio.
Hemocitómetro
(Cámara
de
Neubauer).
RECUENTO LEUCOCITARIO (glóbulos blancos) Procedimiento Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del dedo, proceda a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos hasta la marca de 0,5 y a limpiar la punta con papel absorbente. Introduzca la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorba hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas). Tape ambos extremos y proceda a mezclar manualmente o en un rotador automático por 2 ó 3 minutos. Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y seca.
Agite la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota pequeña de esta solución en la cámara. Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten. Enfoque con objetivo de 10X y cuente en 4 cuadrados grandes angulares.
Cuando se usa la pipeta automática, se toma 20 ml (0,02 ml) de sangre total con anticoagulante o sangre capilar con anticoagulante y se diluye en un tubo que contenga 380 ml de solución de Turk (aquí tenemos una dilución 1:20).
La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9 como está indicado en la figura. Además de los leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes, se deben contar todos los leucocitos que se encuentren adheridos en la línea horizontal superior y vertical exterior, o de lo contrario, todos los leucocitos, adheridos a la línea horizontal inferior y vertical interior. Resultados Nº de leucocitos x mm 3 = Leucocitos contados en 4 campos Altura x dilución x área Reemplazando = Leucocitos contados en 4 campos 1/10 x 1/20 x 4 = Leucocitos contados en 4 campos 4/200 = X/1 = Nº leucocitos contados x 50 200 Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el líquido de dilución, por lo tanto pueden observarse al realizar el recuento leucocitario y confundirse con los leucocitos, de tal manera que se debe emplear la siguiente fórmula: Cálculo: La concentración del número de normoblastos (por litro) es:
Número de normoblatos contados x concentración o número de leucocitos 100 + Nº de normoblastos contados Ejemplo: Si se cuentan 50 normoblastos y la concentración del número de leucocitos es 16 x 10 9/l, la concentración del número de normoblastos será: 50
x 16 = 5,3 x 109/l
100 + 50 y la concentración de leucocitos corregida será: 16 - 5,3 = 10,7 x 10 9/l En unidades tradicionales las concentraciones de normoblastos y leucocitos se expresan por milímetro cúbico. En tales unidades el cálculo correspondiente al ejemplo que se ha dado sería: 50
x 16 000 = 5300 / mm 3
100 + 50 Recuento corregido de glóbulos blancos o leucocitos = 16 000 - 5300 = 10 700 / mm
3
DETERMINACIÓN DEL VOLUMEN GLOBULAR (Microhematocrito) - Método de Centrifugación PROCEDIMIENTO: Tome la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del pulpejo del dedo, o utilice capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante de Wintrobe o EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70% - 80% del capilar. Ocluya (tape) un extremo del capilar con plastilina. Coloque el capilar sobre la plataforma del cabezal de una centrífuga de microhematocrito, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma. Centrifugue por 5 minutos entre 10 000 rpm.
Uso de la escala
Sostenga el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de eritrocitos (no el extremo inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel de la línea horizontal correspondiente al cero. Desplace el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el número 1,0 quede al nivel del tope de la columna de plasma. Vigile que el fondo de la columna de eritrocitos continúe sobre la línea cero. El tubo debe encontrarse completamente en posición vertical. La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicará la fracción de volumen de éstos.
Leer siempre en la dirección de la numeración ascendente cuantos ml. de empacados de eritrocitos tiene la muestra. FORMA DE REPORTE: Se reporta el volumen de eritrocitos empacados en porcentaje del volumen total. RELACION HEMATOCRITO – HEMOGLOBINA:
Hb:
Hto
.
3.0 - 3.3 HEMATOCRITO a) Desinfectar con alcohol la zona donde se extraerá la muestra de sangre capilar. b) Colocar la muestra de sangre en un tubo capilar. c) Colocar los tubos ordenadamente en una base de plastilina para identificar a que alumno le pertenece la muestra. d) Centrifugar el tubo capilar colocado en un tubo de ensayo. e) Utilizar la carta de lectura del microhematocrito donde se encuentran los parámetros normales del hematocrito con cada tubo capilar de los alumnos. f) Registrar los resultados obtenidos de cada alumno. RESULTADOS
En el tubo realizado por mi persona se encontró un Hematocrito de 39%
Frotis sanguíneo: es la extensión de sangre realizada sobre un portaobjeto y a partir de la cual se observarán, al microscopio, las características de las células sanguíneas. Usos: Es un análisis rutinario que acompaña a todo hemograma, ya sea en forma manual o automatizado. En este último caso, cuando hay normalidad en todos los elementos sanguíneos, se obtienen los datos gráficamente y es opcional verificarlo, esto dependerá de cada laboratorio. Este preparado entrega valiosa información en casos como las leucemias, deficiencias de hierro, trastornos genéticos de la forma de los eritrocitos, posibles deficiencias de vitamina B12. CONCLUSIONES. Los resultados del presente trabajo muestran que el hematocrito fue de 39% encontrándose entre los valores normales, y hemoglobina fue de 13,1, también encontrándose en el rango normal; es decir en la muestra de sangre, no presenta ninguna alteración. El recuento celular fue normal, tanto de Glóbulos Rojos, como para la fórmula diferencial de Glóbulos Blancos BIBLIOGRAFÍA 1.
BECKER K., Ana. Interpretación del hemograma (en español). Rev. chil. pediatr. [online]. 2001, vol.72, n.5 [citado 2010-01-18], pp. 460-465. ISSN 0370-4106.
2.
Miale, J (1985) (en español). Hematología: medicina de laboratorio. Reverte.
Informe de
Reacción en cadena de la polimerasa
Gel de agarosa teñido con bromuro de etidio que muestra varios productos de PCR obtenidos mediante distintoscebadores, con un bajo nivel de especificidad.
La reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés ( p olymerase c hain r eaction), es una técnica de biología molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis,1 cuyo objetivo es obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, partiendo de un mínimo; en teoría basta partir de una única copia de ese fragmento original, o molde. Esta técnica sirve para amplificar un fragmento de ADN; su utilidad es que tras la amplificación resulta mucho más fácil identificar con una muy alta probabilidad, virus o bacterias causantes de una enfermedad, identificar personas (cadáveres) o hacer investigación científica sobre el ADN amplificado. Estos usos derivados de la amplificación han hecho que se convierta en una técnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del equipo necesario para llevarla a cabo.
Fundamento: Inicialmente la técnica era lenta, ya que las polimerasas se desnaturalizaban al realizar los cambios de temperatura y era necesario agregar nuevas polimerasas en cada ciclo. Puesto que las temperaturas del ciclo (95 °C en las fases de desnaturalización del ADN) suponen la inmediata desnaturalización de toda proteína, se emplean ADN polimerasas termoestables, extraídas de microorganismos adaptados a vivir a esas temperaturas, restrictivas para la mayoría de los seres vivos. Dichos microorganismos, generalmente arqueas, son: Thermus aquaticus(polimerasa Taq), Pyrococcus furiosus (Pfu), Thermococcus litoralis (Vent) y Thermus thermophilus (Tth). Generalmente se emplean mezclas de polimerasas muy procesivas (Taq) con otras capaces de h acer corrección de errores (Pfu, Vent). Termociclador: aparato en el que se efectúa la PCR convencional.
Hoy, todo el proceso de la PCR está automatizado mediante un aparato llamado termociclador , que permite calentar y enfriar los tubos de reacción para co ntrolar la temperatura necesaria para cada etapa de la reacción. Muchos termocicladores modernos hacen uso del efecto Peltier , que permite tanto calentar como enfriar los tubos simplemente invirtiendo la corriente eléctrica. Los tubos usados para PCR tienen una pared muy fina, lo que favorece una buena conductividad térmica, permitiendo que se alcance rápidamente el equilibrio térmico. Casi todos los termocicladores tienen un sistema que calienta la tapa de cierre con el fin de evitar la condensación sobre los tubos de reacción. Los termocicladores más antiguos carecían de este sistema y solucionaban e l problema de la condensación con una capa de aceite en la parte superior de la mezcla de reacción o con un poco de cera dentro de los tubos. Por lo general, la PCR es una técnica común y normalmente indispensable en laboratorios de investigación médica y biológica para una gran variedad de aplicaciones. Entre ellas se incluyen la clonación de ADN para lasecuenciación, la filogenia basada en ADN, el análisis funcional de genes, el diagnóstico de trastornos hereditarios, la id entificación de huellas genéticas (usada en técnicas forenses y test de paternidad) y la detección y diagnóstico de enfermedades infecciosas.
Conceptos de la PCR [editar ]
Sensibilidad: se refiere a la cantidad mínima de ADN necesaria para que se produzca la amplificación, es decir, para obtener una banda. Se relaciona con los falsos negativos, ya que puede que una muestra sea positivas pero sea dada como negativa porque no se ha amplificado por no tener suficiente cantidad de ADN.
Especificidad: se refiere a la obtención de un solo producto amplificado. Viene determinada por los oligos y la especificidad con la que se unen al ADN molde. De esta forma, si los oligos tienen más de un sitio al que se pueden unir aparecerá más de un producto amplificado.
Eficiencia: se refiere a la amplificación máxima que se puede obtener en un número determinado de ciclos.
Fidelidad: se refiere a los errores que comete la ADN polimerasa durante la amplificación. Este concepto es de especial importancia en la secuenciación, pero en otros casos no es tan importante. Una buena fidelidad permite evitar falsos positivos y/o negativos.
Aplicaciones[editar ] La técnica de la PCR tiene multitud de aplicaciones: ya en ciencia b ásica, como herramienta de detección y/o generación de acervos de fragmentos de ADN de interés; ya en ciencia aplicada, como el emento resolutivo en sí mismo, por ejemplo en diagnóstico clínico. En medicina, la PCR se emplea fundamentalmente como herramienta dediagnosis (Coleman y Tsongalis, 2006):
Permite el genotipar la especie o especies que provocan un determinado cuadro infeccioso: para ello, se amplifica una zona del genoma bacteriano cuyo producto de PCR posea unas características de tamaño o temperatura de fusión que permitan identificarlo de forma inequívoca. En el caso de infecciones virales que implican la integración del genoma del patógeno en el ADN del hospedador, como es el de la infección por VIH, la PCR cuantitativa posibilita la determinación de la carga viralexistente y por tanto, del estadio de la enfermedad.6
La PCR también se puede usar en revisiones médicas rutinarias, como en los servicios de donantes de sangre, para test de rutina. A través de esta técnica se pueden detectar infecciones en el donante (como VIH o HepatitisB) mientras aún están en el periodo de incubación. Dada la sensibilidad de los test de PCR se pueden tomar muestras colectivas o "pools" (por ejemplo, 96 pruebas individuales). Si una de estas muestras colectivas da positivo, se toman a partir de ella muestras progresivamente menores hasta que se encuentra el causante.
El diagnóstico de enfermedades hereditarias presentes en el genoma es un proceso largo y complicado que puede acortarse significativamente gracias a la PCR. Cada uno de los genes prueba se pueden amplificar mediante sus correspondientes cebadores y posteriormente secuenciar para detectar la existencia de mutaciones.
