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Practica No.6 Cromatografía en capa fina. Introducción La cromatografía en capa fina se utiliza principalmente para la identificación de compuestos y la determinación de su pureza separando los colores basado en la adsorción. e basa en la preparación de una capa! uniforme! de un adsorbente mantenido sobre una placa de vidrio. La fase móvil es lí"uida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria ser# un componente polar y el eluyente ser# por lo general menos polar "ue la fase estacionaria! de forma "ue los componentes "ue se desplacen con mayor velocidad ser#n los menos polares.
Antecedentes a$ CONCEPTO DE CROMATOGRAFÍA. TIPOS DE CROMATOGRAFÍA DE ADSORCIÓN Y CROMATOGRAFÍA DE PARTICIÓN. La Cromatog Cromatograf rafía ía es un m%tod m%todoo de separa separació ciónn de sustan sustancia ciass de colore coloress basado basadoss en la adsorción. Consta de una fase móvil &mezcla de disolventes$! "ue arrastra a la muestra a trav%s de una fase estacionaria &silica gel o al'mina$ y un revelador &vapores de yodo! ()$. *ipos de cromatografía: cromatografía en papel! cromatografía en capa fina cromatografía de lí"uidos! cromatografía de gases! cromatografía de fluidos supercríticos. Cromatografía de adsorción. Permite separar físicamente los distintos componentes de una solución por adsorción selectiva de los constituyentes de la mezcla! se dice "ue el mecanismo "ue predomina es la adsorción delos compuestos en la superficie sólida. Cromatografía de partición. e da por la partición del soluto entre dos fases lí"uidas! es decir "ue se fundamente en las solubilidades relativas del compuesto en una fase con respecto a la otra! por tanto es "ue las sustancias se ven retenidas en la fase en la "ue presentan mayor solubilidad. b$ FENÓMENO DE ADSORCIÓN. L A PROPIEDAD DE RETENCIÓN. C ONCEPTO DE R F. La adsorción de una sustancia es su acumulación en una determinada superficie interfacial entre dos fases. +l resultado es la formación de una película lí"uida o gaseosa en la superficie de un cuerpo sólido o lí"uido. La constante ,f &,atio of -ront$ es una relación entre la distancia "ue recorre el eluyente y la distancia "ue recorre la muestra se define como ,f/ a0b siendo el rango de 12 ,f 2 3. CARACTERÍSTICAS Y Y APLICACIONES. +. n la cromatografía de c$ LA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. SUS CARACTERÍSTICAS capa fina! un adsorbente est# depositado formando una delgada capa sobre una placa de vidrio! papel de aluminio u otros materiales! por la "ue ascienden! arrastradas por un disolvente &eluyente$! una o m#s sustancias "ue se pretenden separar o identificar... La fase móvil es lí"uida y la fase estacionaria consiste en un sólido. La fase estacionaria ser# un componente polar y el eluyente ser# por lo general menos polar "ue la fase estacionaria! de forma "ue los componentes "ue se desplacen con mayor velocidad ser#n los menos polares. +l m%todo es simple y los resultados son f#cilmente reproducibles! lo "ue 4ace "ue sea un m%todo adecuado para fines analíticos. d$ ELUYENTES , SOPORTES Y REVELADORES MÁS COMUNES PARA CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA. +luyentes: %ter de petróleo 5 cloruro de metileno! metileno! n54eano 5 acetato de etilo! ciclo 4eano 7 acetona! tolueno 5 iso5 propanol! dietil5%teretanol! t5butil5%ter 7 metanol! cloroformo 5 #cido ac%tico.,eveladores m#s comunes: Luz ()! vapores de yodo! +l rocío con una solución de agua0 9;. e$ FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIÓN POR CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA . *emperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben m#s en la fase estacionaria! la cromatografía debe llevarse a cabo en un #rea sin corrientes corrientes de aire! limpieza limpieza de las placas ya "ue est#n contamina contaminadas das con grasa o agentes agentes plastificantes o ad4esivos.
Procedimiento experimental. Preparación de las cromatoplacas. e introdu
? en acetato de etilo y se de
Parte 1. Aplicación dela Muestra y Efecto de Concentración •
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e preparó una c#mara de elución! colocando un papel filtro dentro de ella! despu%s se agregaron ; mL de acetato de etilo con el fin de 4umedecer completamente el papel. (na vez "ue fue preparada la c#mara! se preparó la cromatoplaca 4aciendo tres aplicaciones en orden creciente de la sustancia problema &3! = y @ gotas$!
Parte 2. Polaridad de las sustancias y polaridad de los eluyentes. • •
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Para este proceso! se utilizaron las muestras 9a y =a! con diluyentes como 4eano! acetato de etilo y metanol. e prepararon dos c#maras de elución adicionales a la "ue ya se traba
Parte 3. Pureza de las sustancias. •
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Para determinar la pureza de las sustancias en este proceso se utilizaron las muestras ;a y >a! por lo "ue se preparó una cromatoplaca en la "ue se aplicó una gota de cada muestra. -inalmente se eluyó con acetato de etilo con lo "ue se comprobó la pureza de la sustancia ;a a trav%s de las marcas "ue se observaron al revelar con () y yodo.
Parte 4. a cromato!raf"a en capa #na como criterio parcial de identi#cación. •
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+l ob minutos aproimadamente para "ue pudiera sedimentar y poder tomar la muestra. e prepararon dos cromatoplacas con la muestra 9a y una gota de la solución de cafiaspirina! (na se colocó en la c#mara de elución de metanol y la otra en la c#mara de elución de acetato de etilo! posteriormente fueron reveladas en la c#mara de () y de yodo. +n el caso de la cromatoplaca "ue se eluyo con acetato si 4ubo corrimiento pero solo se observó una fase! en cambio en la cromatoplaca "ue se eluyo con metanol se observaron dos fases para la muestra de cafiaspirina y una sola de la muestra de cafeína.
An$lisis de resultados. En la primera parte se comprueba "ue la cantidad debe ser pe"ueAa &no m#s de 1!9 mL$ para obtener un analito "ue sea f#cil de medir! por lo "ue la primera aplicación es la ideal &figura 3$. En la segunda parte se eperimentó la polaridad de los eluyentes! con lo cual se pudo comprobar "ue si el eluyente no es polar &caso del 4eano$ el rf ser# igual a cero ya "ue el punto de aplicación no presenta movilidad! mientras "ue en su lado opuesto en un eluyente muy polar &metanol$ el rf es igual a uno! sin embargo esta propiedad no es adecuada para ser usada ya "ue tanta polaridad 4ar# "ue el analito suba demasiado r#pido 4asta el límite de la cromatoplaca! lo "ue genera una lectura de datos difusa. Por lo tanto el eluyente ideal ser# el "ue de8 cm. En la tercera parte eperimental se observó la pureza de las sustancias! al encontrar tres analitos en el componente >a dos "ue corresponden a las sustancias "ue conforman la muestra y uno el punto de aplicación con rf de 1.;> cm y 1.1> cm! la muestra ;a solo arro cm! por lo "ue se puede asegurar "ue la muestra ; a es m#s pura "ue la sustancia > a por la cantidad de componentes. Por ultimo en la cuarta parte del proceso se identificó la cafeína en una pastilla &cafiaspirina$ comparada con la sustancia cafeína! dando como resultado "ue con el eluyente de acetato de etilo no se pudo distinguir m#s de una sustancia a pesar de observar el corrimiento de los analitos 4asta la parte media de la cromatoplaca con un rf / 1.;B cm! mientras "ue en la cromatoplaca con el eluyente metanol se distinguen tres analitos para la muestra de cafiaspirina & dos analitos pertenecientes a sustancias en la mezcla y uno al punto de aplicación$! a diferencia de la muestra de cafeína 9 a donde se aprecian dos analitos & un analito "ue es el corrimiento de la sustancia y el segundo pertenece al punto de aplicación$ comprobando la pureza de las sustancias desde el punto de vista de la cafeína e identificando esta sustancia en ambas muestras! ya "ue el rf para la cafeína es de 1.;B cm en ambas muestras &figura 9 y =$.
Cabe destacar "ue en todo el proceso se utilizaron la fase móvil &disolvente$ el cual para su elección dependió de su polaridad! destacando el acetato de etilo y metanol *ambi%n la fase estacionaria &gel de sílice$! y los reveladores usando el () de 9>;nm &onda corta$ así como la c#mara de yodo & vapores de yodo$. Dlgunos polvos de al'mina y sílice est#n disponibles con materiales fluorescentes en ellos! en cuyo caso toda la placa es fluorescente ba; nm y a =6> nmE
Conclusión +n esta pr#ctica se comprendió y conoció la t%cnica de cromatografía por capa fina! así como sus características y los factores "ue influyen en la separación por cromatografía. Cada una de las partes en las "ue se encuentra divido este eperimento demostró la importancia de la t%cnica de separación y determinación de pureza de los compuestos! Ddem#s! la cromatografía en capa fina es francamente una 4erramienta barata de an#lisis! una característica con gran m%rito en tiempos de restricciones presupuestarias. Placas de *LC de alto rendimiento fabricado con gel de sílice o al'mina preparada con material de pe"ueAo tamaAo de las partículas para la fase estacionaria permite separaciones con ecelentes tiempos de elución cortoE. *ambi%n se calcularon los valores del factor de retención de las sustancias y con ello entender la relación "ue eiste entre la polaridad de las sustancias "ue se analizan y la de los eluyentes "ue se utilizan con ellas! así mismo poder aplicar un criterio para identificar la pureza de sustancias de acuerdo con la pigme ntac ión &es$ "ue estas presenten al realizar la cromatografía
%i&lio!raf"a
Drmarego F. L. -.! C4ai C.! Purification of laboratory c4emicals! seta edición! Gritis4! (D! 911@ pp. 3@! 91. Hynamics Ddsorbents Incs. 4ttp:00JJJ.dynamicadsorbents.com0spanis4Jeb0c4romatograp4ylipids.4tm ,evista de la escuela superior de conservación y restauración de bienes culturares de CataluAa 4ttp:00unicum.cat0es091330160cromatografia5en5capa5prima5tlc5una5eina5util5per5al5conservador5restaurador0
Anexo 1
Fig. 1 muestra de aplicaciones 1,3, 9 gotas respectivamente.
Fig. 2 Muestra con eluyente metanol.
Fig. 3 Muestra con eluyente Acetato de etilo. Fig. 3 Muestra con eluyente acetato.
