CONTROL DE CALIDAD BIOLOGIA BIOL OGIA MOLECULAR
EN
LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR El laboratorio de Biología Molecular es el encargado de realizar los ensayos de Determinación de ADN contaminante en muestras del ingrediente farmacéutico activo (IFA) y muestras de proceso de cada uno uno de los los prod produc ucto toss del del Ce Cent ntro ro.. Esto Estoss ensa ensayo yoss se real realiz izan an por por modernas técnicas de biología molecular entre las que se encuentran la hibridación de ácidos nucleicos y la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Este laboratorio se encarga además de realizar los análisis de estabilidad de los Bancos de Células Primario (BCP) y los Bancos de Células de Trabajo (BCT) de todas las producciones del Centro y también responsable de la certificación y custodia del BCP y de la ce cerrtifi tificcac ació ión n del del BCT. En este ste labo laborrato atorio se rea eali liza za la preparació preparación n de los los Bancos Bancos y chequeo chequeo de las cepas cepas microbiol microbiológica ógicass que intervienen en las producciones del CIGB.
CONTROL DE CALIDAD La Dirección de Control de la Calidad del CIGB, tiene como su principal recurso, a un colectivo de trabajadores dedicado a un conjunto de objetivos y tareas en función de lograr un Sistema de Control eficiente en nuestro Centro. El área está comprometida con todos sus clientes (ya sean internos o externos) con respecto a la eficiencia y eficacia en los resultados de su trabajo, como vía de mejoramiento continuo en todos sus procesos. La Dirección de Control de la Calidad se mantiene en búsqueda e investigación constante con respecto a las normas y regulaciones aplicables a la industria biofarmacéutica como necesidad imperiosa para la proyección de nuestro trabajo en función de lograr la calidad de los productos que oferta el CIGB así como la satisfacción y confianza de los clientes. La calidad será la imagen del CENTRO DE INGENIERÍA GENÉTICA Y BIOTECNOLOGÍA como organización comprometida con sus clientes y con la sociedad. La Direccion tiene entre sus funciones fundamentales las relacionadas con el muestreo, las especificaciones, los ensayos y la evaluación de la calidad de los productos que se generan en la empresa. Además debe comprobar y poner en práctica todos los procedimientos de control, evaluar, mantener y almacenar los materiales de referencia, asegurar que se controle la estabilidad de los ingredientes farmacéuticos activos y los productos terminados. La Direccion de Control de la Calidad es el responsable de autorizar o rechazar las materias primas y los productos intermedios. Para acometer estas funciones, la Dirección está compuesta por dos Departamentos y tres grupos de trabajo:
Departamento de Biológicos
En este Departamento es donde se ejecutan las técnicas analíticas relacionadas con la determinación de la actividad biológica in vivo e in vitro, cuantificación e identificación de proteínas contaminantes y proteínas de interés por métodos inmunológicos tipo ELISA, Western blot, Inmunodot, detección de ADN contaminante del hospedero por métodos de hibridización, reacciones en cadena de la polimerasa (PCR), almacenamiento y control de los Bancos de Células Primarios. Además cuenta con el laboratorio de microbiología encargado de todo el control y monitoreo microbiológico de los procesos, áreas y sistemas auxiliares de las plantas de producción. Departamento Físico-Químico
En el Departamento Físico-Química es donde se desarrollan los métodos de identificación y control de pureza mediante métodos cromatográficos de alta resolución, cromatografías gaseosas y electroforéticas. Métodos espectrofotométricos para la cuantificación de proteínas, aditivos y preservante en las preparaciones farmacéuticas y para el control de las propiedades físicas y químicas de los sistemas auxiliares Ase gu ra mi ent o Ana líti co
El grupo de Aseguramiento analítico tiene diversas funciones dentro de la Direccion de Control de la Calidad. Tiene la función del seguimiento de las Buenas de Prácticos de Laboratorio según el estado del arte y velar por el cumplimiento de las mismas mediante las auditorias internas a los laboratorios de control. Tiene la función de trazar la política relacionada con la validación de los métodos analíticos, confección de los programas de validación y revalidación de las tecnicas, así como la aprobación y discusión de los protocolos de validación.
En este laboratorio se realizan además otros ensayos moleculares como análisis de restricción, determinación de la concentración de ADN por D.O a 260 nm y la determinación de RNA contaminante y % de supercoil por electroforésis de agarosa a productos de ADN. En el presente control se envió a los participantes un tubo con suero en el que el laboratorio de referencia detectó la presencia del DNA virus de la hepatitis B (VHB) de forma cualitativa. La muestra se acompañaba de una historia clínica que correspondía a un paciente varón de 30 años de edad, con antecedentes de adicción a drogas por vía parenteral y cuyo consumo negaba desde hacía ocho años. Tenía anticuerpos frente al virus de la inmunodeficiencia humana (VIH), pero no seguía tratamiento porque sus niveles de células CD4+ eran elevados. Durante su época de adicción presentó un cuadro clínico de hepatitis B aguda que posteriormente evolucionó a hepatitis crónica con marcadores serológicos de replicación activa. En el último control se observó un ligero aumento de las transaminasas y se le planteó el inicio del tratamiento frente al VHB, para lo que fue necesario conocer su situación actual con respecto al VHB. Se solicitó a los participantes que procesaran el suero y realizaran la detección cualitativa del DNA del VHB, así como la formulación de los comentarios que considerasen oportunos.
ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS DE LA DETECCIÓN DE DNA VHB El suero problema fue enviado a 69 laboratorios de los cuales 46 remitieron hoja de respuesta, lo que supone un porcentaje de participación del 66,7%, inferior al de otros controles. Se aceptaron como válidas para el análisis de los resultados las respuestas que realizaron la detección cualitativa o cuantitativa del VHB. El número de resultados analizados fue de 43 (91,5%), ya que cuatro laboratorios no realizaron dichas pruebas, tres de ellos por no disponer de la técnica y uno por no realizar técnicas de biología molecular (lo que sorprende al estar inscrito en este control); por el contrario, un laboratorio llevó a cabo dos detecciones (cualitativa y cuantitativa). De estos 43 análisis, 39 fueron positivos, mientras que en los restantes casos no se detectó el genoma del VHB (tabla 1). En el caso de los laboratorios que realizaron la detección cuantitativa, la mayoría informó del número de copias de DNA del VHB, aunque este
aspecto no se analiza en el presente control, ya que la muestra había sido liofilizada y, por lo tanto, existía variación de un vial a otro en el número de copias.
Tabla 1. Resultados de la detección de DNA del VHB. Detección DNA Núme Porcentaje sobre de VHB ro Técnica Participa s ntes 39 90,7 90,4 Positiva 4 9,3 9,6 Negativa 43 100,0 100,0 Total La PCR fue el método más usado y, dentro de este grupo, una técnica de PCR anidada (Cobas-Amplicor, Roche), informada por el 60,5%. Le sigue en frecuencia un método de desarrollo propio (16,3%). Como método cualitativo los participantes utilizaron la hibridación, siendo el segundo método más frecuente (7 participantes) e informándose las marcas: Bayer (4,6%), DiaSorin (4,6%) y Digene (7,0%). Por último, en una ocasión se realizó una PCR en tiempo real de Roche (2,3%). El resto de los resultados se especifican en la tabla 2.
Tabla 2. Métodos y marcas utilizados en la detección del VHB Núme Método Marca % ro b-DNA, 2 4,6 Bayer Hibridación DiaSorin 2 4,6 Digene 3 7,0 Desarrollo 7 16,3 propio Cobas26 60,5 Amplicor PCR Need 1 2,3 No 1 2,3 informada PCR en Roche 1 2,3 tiempo real 43 100,0 Total Por lo que respecta a los laboratorios que obtuvieron resultados negativos, en dos ocasiones utilizaron la PCR anidada Roched CobasAmplicor, en otra una hibridación de Digene y en la otra una de DiaSorin.
COMENTARIOS DE LOS PARTICIPANTES
En el presente control se analizaron sólo 14 hojas de respuesta de participantes que efectuaban algún tipo de comentario, en una ocasión dos, por lo que el número total de comentarios fue de 15. En general, no fueron muy extensos pero hubo que sintetizar alguno por parte del Programa de Control de Calidad. Se han agrupado en la tabla 3. El comentario más frecuente realizado por los participantes se refiere al tipo de técnica de detección del DNA del VHB; la mayoría de los laboratorios no realizan la detección cualitativa que era lo que se solicitaba, sino la cuantitativa ya que según afirman algunos participantes, ésta es más sensible. En varias ocasiones los comentarios se refieren a la ampliación de los marcadores de hepatitis B o de otras infecciones relacionadas con el antecedente personal de drogadicción, existiendo varias posibilidades que se detallan en la tabla 3. En una ocasión un participante confirma la hepatitis crónica activa por VHB tras realizar dichos marcadores serológicos en la muestra remitida. Por último, un participante comenta que el tratamiento del paciente se debe realizar con interferón a o con lamivudina y otro que una vez instaurado se debe hacer un seguimiento a los tres meses mediante una PCR cuantitativa. Tabla 3. Comentarios microbiológicos realizados por los participantes. Comentario Sólo realizamos detección cuantitativa y no cualitativa La PCR cuantitativa es más sensible que la cualitativa Hibridación en el límite bajo y PCR in house positiva Marcadores HBsAg y HBeAg negativos Marcadores HBsAg y HBeAg positivos con IgM VHB negativa Infección crónica activa VHB confirmada Descartar VHC, VIH y superinfección por VHD al ser ex ADVP Antes del tratamiento hacer HBeAg, anti-HBe y
Número %a 3 20,0
2
13,3
1
6,7
1 1
6,7 6,7
2 2
13,3 13,3
1
6,7
cuantificar DNA Tratamiento y seguimiento de la PCR a los 3 meses Tratamiento con interferón a o lamivudina Total comentarios a Sobre las 14 hojas con comentarios.
1 1 15
6,7 6,7 107,1
UTILIZACIÓN DE LABORATORIO EXTERNO Por lo que respecta a la necesidad de utilizar un laboratorio externo para la detección del DNA del VHB, por parte de los laboratorios que informaron algún resultado (42), obtenemos los siguientes datos: 32 (76,2%) dicen no utilizarlo, ocho lo hacen (19,0%) y dos (4,8%) no ofrecen información acerca de este dato. Fuente: http://www.seimc.org/control/infdef2003/bmol103.htm
Control de calidad Sistema informatico:
El sistema informatico permite llevar una correcta administración de la información y de los resultados manejando la totalidad de los procesos administrativos y analiticos. Consta de una red integral de computación (nt-windows) provista de un server con pantalla y teclado y nueve puestos de trabajo con cpu, teclado, pantalla y mouse con conexión a internet por red a través de banda ancha fibertel con ip fija, cinco impresoras blanco y negro y color, dos impresoras laser y un centro de copiado (fotocopias, scanner e impresora ) blanco , negro y color. Con los siguientes software : windows 2000 , office 2000 , dos , internet microsoft outlook y un programa de gestion de centros de diagnostico datatech versión windows 2004 con atención a distancia via internet que cubre las areas:
Recepción y atención al publico:
Normativas de las obras sociales. Costo de los estudios . Instrucciones tanto para el paciente como para el técnico. Confeccion de planilla de trabajo. Impresión del informe con los datos obtenidos. Sistemas de alarmas para validación de datos. Controles internos . Calculo de presupuestos. Obtención de duplicados. Consulta alfabetica de pacientes . Antecedentes y evolucion . Historias clinicas. Procesos administrativos: Sistemas de facturación por nomenclador o por listas de precios. Modalidad de prestación , permitiendo el uso conjunto de varios nomencladores simultáneamente. Archivo de instituciones con datos y forma operativa de cada una de ellas.
Emisión de rendiciones y facturaciones de acuerdo a las normas impositivas vigentes. Cuentas corrientes . Caja . Listados de profesionales. Operadores y técnicos: Identificación de cada uno de los operadores autorizados . Visualizacion de tareas . Stock de reactivos . Estadísticas de determinaciones . Perfiles.
CONTROL DE CALIDAD:
PEEC: PROGRAMA DE EVALUACIÓN EXTERNA DE CALIDAD DE FABA EXTERNAL QUALITY ASSESSMENT SCHEME PREVECAL: INTERNACIONAL NORMAS: EL PRESENTE MANUAL RESPONDE A LAS NORMAS: ISO 25: EVALUACIÓN DE LABORATORIOS REQUICITOS GENERALES PARA LA COMPETENCIA DE LABORATORIOS DE CALIBRACIÓN Y ANÁLISIS. ISO 15.189: GESTION DE LA CALIDAD DEN LABORATORIOS CLINICOS ISO 9001: SISTEMAS DE GESTION DE LA CALIDAD ISO 10.013: MANUAL DE LA CALIDAD . AUDITORIA INTERNA ISO 80.058: TRANSPORTE DE MATERIAL BIOLOGICO
BIOLOGÍA MOLECULAR
El laboratorio BIO LAB siempre a la vanguardia en el desarrollo e implementación de nuevas tecnologías para el diagnostico y teniendo en cuenta los avances de la ciencia creo el área de biología molecular con el objetivo de abordar las nuevas metodologías de diagnostico. El descubrimiento de la estructura y función del ADN, la identificación del código genético y la comprensión del proceso de síntesis proteica , generaron un importante adelanto en el campo biomédico durante la década pasada. El desarrollo de la tecnología del ADN recombinante, donde se unen diversas técnicas de laboratorio con aplicaciones informáticas, brindan hoy un amplio espectro de posibilidades para la obtención de datos tanto para los fines diagnósticos como para el desarrollo y la investigación. Los patrones clínicos de diferentes patologías están basados en cambios detectables en el código genético que se traducen tanto en estructuras anómalas como funcionamiento erróneo de las proteínas involucradas en los procesos de síntesis.
Tienen ahora explicaciones basadas en cambios detectables en el código genético que se traducen en estructuras anormales y funcionamiento erróneo de las proteínas involucradas. El proyecto genoma humano que involucra la secuenciación completa de los tres mil millones de nucleótidos que forman el ADN constituye una enorme base de datos utilizados para el diagnostico medico y los tratamientos futuros. Esto genera un nuevo campo en la de la bioquímica clínica : el diagnostico biomolecular aplicado a la detección y monitoreo terapéutico de enfermedades infecciosas , oncológicas genéticas , neurológicas, metabólicas y autoinmunes. Esto requiere la utilización de instrumental diferente al de la practica bioquímica cotidiana y personal altamente especializado para la implementación de técnicas que requieren rigurosos procesos de control y validación.
Normas de bioseguridad
El correcto manejo y eliminación de material descartable y de residuos patogenicos se realiza según las normas legales vigentes y de acuerdo al manual de procedimientos de seguiridad e higiene del laboratorio . Las normas de seguridad en el laboratorio molecular son equivalentes al laboratorio clinico en lo que se refiere a manejo y decontaminacion como asi tambien a los cuidados orientados a preservar la integridad de los operadores y el medio ambiente. A efectos de evitar contaminaciones con material genético que alterarían los resultados obtenidos se pauta una circulación unidireccional para el procesamiento evitando los fenómenos de carry-over.
Fuente: http://www.biolab01.com.ar/Calidad.pdf
