Biología Molecular
LABORATORIO N° 1. RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS DEL LABORATORIO DE BIOLOGIA MOLECULAR Y NORMAS DE BIOSEGURIDAD Angie Solandy Con!e!a" 1#1$#%%& Paola Balle"e!o" 1#1$#'1& ()li""a G)i*!!e+ 1#1$1,11 1
Estudiantes de Biología Molecular, Programa Ingeniería Biotecnológica, facultad de ciencias agrarias y del ambiente, Universidad Francisco de Paula Santander!"1#, $%cuta, $olombia
----------------------------------------------------------------------- ----------------------------------------------------------------------RESUMEN El laboratorio de Biología Molecular es el es&acio físico donde se e'ecutan actividades &ro&ias asociadas al ti&o de investigación (ue se realice Para (ue estas actividades se lleven a cabo sin ning%n contratiem&o, se deben tener en cuenta las reglas mínimas &ara garanti)ar la integridad física del investigador, ale'*ndose de cual(uier situación riesgos a (ue sea foco de eventos &er'udiciales +Sandoval, !"1- El siguiente traba'o .ace referencias a las normas de bioseguridad b*sicas (ue debe cum&lir el &ersonal (ue desee traba'ar en el laboratorio, tambi/n es el reconocimiento e identificación de los e(ui&os utili)ados en el laboratorio de biología molecular 0000000000000000000000000000000000000000000000000000000 0000000000000000
INTRODUCCION a bioseguridad com&rende un con'unto de medidas &reventivas, destinadas a mantener el control de factores de riesgo laborales &rocedentes de agentes biológicos, físicos o (uímicos, logrando la &revención de im&actos nocivos, asegurando (ue el desarrollo o &roducto final de dic.os &rocedimientos no atenten contra la salud y seguridad de los estudiantes y todo el &ersonal (ue realice &r*cticas en el laboratorio El nivel de bioseguridad asignado a un traba'o de&ender* de la evaluación del riesgo (ue re&resente re&resente la e'ecución e'ecución de dic.o traba'o traba'o y estos abarcan desde la utili)ación utili)ación de agentes &atógenos .asta el dise2o y construcción de las instalaciones 3dem*s de velar &or la seguridad del individuo, atienden a la &recaución y cuidado de los diferentes materiales (ue se utilicen dentro del *rea de traba'o +Sandoval, !"1-
Biología Molecular
OB(ETIOS
Inculcar en los estudiantes la mentalidad &reventiva (ue minimice la &robabilidad de accidentes en el laboratorio de bilogía molecular 4 tambi/n disminuir riesgos derivados de la generación de residuos &eligrosos Promover criterios uniformes alrededor del mane'o de los riesgos &ara la salud y ambientales asociados con las &r*cticas e5&erimentales (ue se reali)an en los laboratorios de la universidad $oncienti)ar en los estudiantes (ue se deben tener en cuenta todas las recomendaciones y consideraciones indicadas &or el docente Identificar los diferentes e(ui&os necesarios &ara las &racticas a reali)ar en el laboratorio de biología molecular Informar y motivar a los estudiantes sobre &rinci&ios y normas de bioseguridad &ara su a&licación activa en el traba'o de laboratorio
MATERIALES Y METODOS • • •
$*mara fotogr*fica &or gru&o de laboratorio Bata ibreta &ara notas
E/)i0o" EQUIPO
DESCRIPCION
a balan)a analítica es un instrumento utili)ado en el laboratorio, (ue sirve &ara medir la masa Su característica m*s im&ortante es (ue &oseen muy &oco margen de error, lo (ue las .ace ideales &ara utili)arse en mediciones muy &recisas
Biología Molecular
EQUIPO
DESCRIPCION
6ES7I3689
En numerosos an*lisis de laboratorio, tanto de Biología molecular como de otras *reas, es &reciso utili)ar agua en la medida de lo &osible libre de sólidos disueltos y sus&endidos, ya (ue &odrían interferir en diferentes &rocesos 3sí, es necesario a menudo controlar el &: en diferentes reactivos, conocer e5actamente la &ro&orción de iones &ara la correcta reali)ación de una electroforesis o eliminar el 36; de diferentes microorganismos (ue &udieran interferir en una P$9
3U78$3
as autoclaves funcionan &ermitiendo la entrada o generación de va&or de agua &ero restringiendo su salida, .asta obtener una &resión interna de 1" =Pa, lo cual &rovoca (ue el va&or alcance una tem&eratura de 1!1 grados $elsius Un 7iem&o tí&ico de esterili)ación a esta tem&eratura y &resión es de 1#>!" minutos as autoclaves son am&liamente utili)adas en laboratorios, como una medida elemental de esterili)ación de material
B3?8 M39I3
El ba2o de María es un e(ui&o (ue se utili)a en el laboratorio &ara reali)ar &ruebas serológicas y &rocedimientos de incubación, aglutinación, inactivación, biom/dicos, farmac/uticos y .asta industriales. Por lo general, se utili)an con agua, &ero tambi/n &ermiten traba'ar con aceite os rangos de tem&eratura en los cuales normalmente son utili)ados est*n
Biología Molecular
entre la tem&eratura ambiente y los @" A$ 7ambi/n se &ueden seleccionar tem&eraturas de 1"" A$, utili)ando una ta&a de características es&eciales
EQUIPO P3;$:3
DESCRIPCION as &lacas calefactoras se utili)an generalmente &ara calentar el material de vidrio o su contenido Poseen un selector de &otencia (ue &ermite a'ustar la emisión t/rmica y el tiem&o necesario &ara calentar un determinado reci&iente Sus a&licaciones son muy variadas, aun(ue &redomina el calentamiento de reci&ientes con lí(uidos como vasos de &reci&itados, matraces de fondo &lano
$E;79IFU3 a centrífuga se .a dise2ado &ara utili)ar la fuer)a centrífuga &ara se&arar sólidos sus&endidos en un medio lí(uido &or sedimentación o &ara se&arar lí(uidos de diversa densidad. os movimientos rotacionales &ermiten generar fuer)as muc.o m*s grandes (ue la gravedad, en &eriodos controlados de tiem&o
Biología Molecular
MI$98PIPE73S a micro&i&eta es un instrumento de laboratorio em&leado &ara succionar y transferir &e(ue2os vol%menes de lí(uidos y &ermitir su mane'o en las distintas t/cnicas analíticas Es de destacar (ue el uso de micro&i&eta &ermite em&lear distintos lí(uidos sin tener (ue lavar el a&aratoC &ara ello, se em&lean &untas desec.ables, de &l*stico, (ue .abitualmente son est/riles
EQUIPO 793;SIUMI;3689 U<
DESCRIPCION El transiluminador es un e(ui&o necesario (ue usa en &rinci&io lu) U< con diferentes longitudes de onda como recurso &ara observar, anali)ar y tomar fotografías de &roteínas, amino*cidos, &/&tidos, *cidos nucleicos en geles de agarosa con colorantes como el bromuro de etidio
EE$$798F89ESIS
a electroforesis es una t/cnica &ara la se&aración de mol/culas seg%n la movilidad de un cam&o el/ctrico a se&aración &uede reali)arse sobre la su&erficie .idratada de un so&orte sólido, a trav/s de una matri) &orosa +electroforesis
Biología Molecular
en gel-, o bien en disolución +electroforesis libre- 6e&endiendo de la t/cnica (ue se use, la se&aración obedece en distinta medida a la carga el/ctrica de las mol/culas y a su masa
<897ED Un agitador ti&o vórte5 o me)clador de vórtice es un dis&ositivo sim&le (ue se usa com%nmente en los laboratorios &ara agitar &e(ue2os tubos o frascos de lí(uido os agitadores ti&o vórte5 son bastante comunes en los laboratorios de ciencias biológicas En los laboratorios de cultivos celulares y de microbiología se &ueden utili)ar &ara sus&ender las c/lulas En un laboratorio de bio(uímica o de an*lisis &uede ser utili)ado &ara me)clar los reactivos de un ensayo o &ara me)clar una muestra e5&erimental y un diluyente
EQUIPO
DESCRIPCION
$3BI;3 6E FU8 3MI;39 $*mara de flu'o laminar o cam&ana de flu'o laminar es un recinto (ue em&lea un ventilador &ara for)ar el &aso de aire a trav/s de un filtro :EP3 o UP3 y &ro&orcionar aire lim&io a la )ona de traba'o libre de &artículas de .asta "1 micras Estas cabinas est*n dise2adas
Biología Molecular
&ara &ro&orcionar un aire lim&io y constante a una velocidad de &aso de aire de "" a "#" metros &or segundo
MI$98$E;79IFU3 Microcentrífuga es una m*(uina centrífuga es&eciali)ada utili)ada en el laboratorio clínico sta &one en rotación una muestra m*s &e(ue2a &ara se&arar &or fuer)a rotatoria sus com&onentes o fases +generalmente una sólida y una lí(uida-, en función de su densidad
7E9M8$I$3689
CUESTIONARIO
Un termociclador, tambi/n conocido como m*(uina de P$9 o reciclador t/rmico de P$9 es un a&arato usado en Biología Molecular (ue &ermite reali)ar los ciclos de tem&eraturas necesarios &ara una reacción en cadena de la &olimerasa de am&lificación de 36; o &ara reacciones de secuencia con el m/todo de Sanger El modelo m*s com%n consiste en un blo(ue de resistencia el/ctrica (ue distribuye a trav/s de una &laca una tem&eratura .omog/nea durante tiem&os (ue &ueden ser &rogramables, normalmente con rangos de tem&eratura de G A$ a H@ A$
Biología Molecular
1 consultar otras sustancias to5icas (ue se utilicen en el laboratorio de biología molecular
Biología Molecular
Tala. ESPECI2ICACIONES DE LOS REACTIOS M3S USADOS EN EL LABORATORIO DEBIOLOGIA MOLECULAR +.tt&sCbiologiamolecularinteractivafilesJord&resscom!"1"1&ractica>no> 10bioseguridad&df4. consultar el uso de los siguientes e(ui&os y menciónelosC termociclador de tiem&o real, foto documentador de geles, secuenciador automatico y microarreglos.
Biología Molecular
TERMOCICLADOR DE TIEMPO REAL5 a P$9 a tiem&o real &ermite cuantificar de forma relativa la e5&resión de nuestro gen de inter/s en determinadas condiciones Princi&ioC utili)ar un gen de referencia cuya e5&resión es constante durante las condiciones del e5&erimento +gen constitutivo- El &roceso consta de dos &artesC a e5&resión del gen de inter/s ser* normali)ada con la e5&resión del gen constitutivo a e5&resión del gen de inter/s en las condiciones e5&erimentales ser* relativi)ada con la e5&resión del mismo gen en las condiciones control
2OTO DOCUMENTADOR DE GELES5 os científicos tienen la ca&acidad de secuenciar la mol/cula de 36;, en otras &alabras, &ueden determinar el orden de las bases de nucleótidos en cual(uier mol/cula dada a secuenciación de la mol/cula de 36; &uede ser el &rimero de una serie de &asos necesarios &ara averiguar cómo los nucleótidos es&ecíficos en una mol/cula de 36; interact%an unos con otros y codifican características diferentes en un organismo
Biología Molecular
SECUENCIADOR AUTOMATICO5 os científicos tienen la ca&acidad de secuenciar la mol/cula de 36;, en otras &alabras, &ueden determinar el orden de las bases de nucleótidos en cual(uier mol/cula dada a secuenciación de la mol/cula de 36; &uede ser el &rimero de una serie de &asos necesarios &ara averiguar cómo los nucleótidos es&ecíficos en una mol/cula de 36; interact%an unos con otros y codifican características diferentes en un organismo El &roceso de secuenciación del 36; est* bastante im&licado, &ero los secuenciadores autom*ticos de 36; est*n minimi)ando la intervención .umana necesaria durante al menos &arte del &roceso
MICROARREGLOS. Microarray es una su&erficie sólida a la cual se une una colección de fragmentos de 36; os c.i&s de 36; se usan &ara anali)ar la e5&resión diferencial de genes, y se monitorean de manera simult*nea los niveles de miles de ellos Su funcionamiento consiste, b*sicamente, en medir el nivel de .ibridación entre la sonda es&ecífica +&robe, en ingl/s-, y la mol/cula diana +target-, y se indican generalmente mediante fluorescencia y a trav/s de un an*lisis de imagen, lo cual indica el nivel de e5&resión del gen
Biología Molecular
6. 7on")la! a7e!7a de la" "e8ale" /)e "e deen en el lao!ao!io de gen*i7a y iolog9a :ole7)la!.
Biología Molecular
Tala de "e8ali+a7i;n y ei/)eado. +Maria elisa Baelo 3lvare), !"1-
CONCLUSIONES
Biología Molecular
el laboratorio cuenta con unos buenos &ar*metros aun(ue falta m*s se2ali)ación, en el caso de alg%n accidente En lo observado el laboratorio no cuenta con un adecuado boti(uín de seguridad En el laboratorio de Biología molecular se debe conocer y ser consiente de cada una de las normas de bioseguridad con el fin de evitar accidentes $uando estamos traba'ando dentro del laboratorio, debemos tener las &rendas adecuadas &ara la labor (ue estamos reali)ando a .igiene es un factor im&ortante, del cual de&ende el buen desem&e2o de las actividades (ue se reali)an durante la &r*ctica El conocimiento de soluciones &ara reali)ar lim&ie)a antes y des&u/s de la &r*ctica, nos concienti)a del &eligro (ue &odemos correr si no lo .acemos de la forma correcta Prestar la debida atención a cada e5&erimento o &r*cticas (ue se llevara a cabo, estar concentrados
BIBLIOGRA2IA
Biología Molecular
.tt&CJJJe.oJenes&anolcomfunciona>secuenciador>automatico>adn> info0!K"!L .tt&CJJJc.emagilentcomibraryslide&resentationPublic3&licaciones0de0la0 P$90a0tiem&o0real0con0el0termociclador0M5""#P0y0M5P98&df .tt&Cserviciosunileonesgestion>de>residuosJ&> contentblogsdirGfiles!"1G"guia>de>seguridad>y>buenas>&racticas>en>el> laboratorio&df .tt&CJJJconicytclfondecytfiles!"1!"Harticles>"###0recurso01&df .tt&sCJJJs&rlu&ves&dfmanualbiotecnologia&df
.tt&CJJJfbioyfunreduarevirtual&luginfile&.&!HK1mod0resourcecontent"@0 Bioseguridad0y0Biologia0molecular0&rotegido&df .tt&sCJJJacademiaeduGK!!G#73E906E0BI8SEU9I636 .tt&CJJJgenomicauasl&m5ProtocolosBioseguridadMBIB>v#&df
Trabajos citados https://biologiamolecularinteractiva.fles.wordpress.com/2013/01/practica-no1_bioseguridad.pd. (s.f.).
Maria elisa Baelo Alvare! ". #. (1$ de 12 de 201%). universidad de leon . &btenido de 'tt**servicios.unileon.es*gestion-de-residuos*+content*blogs.dir*%,*les*201,*0%*guia-de-seguridad--buenas-racticasen-el-laboratorio.df /andoval! . #. (201%). !""#$ %# &'()#*+$'%!% #, #" "!&($!($'( %# &'("(*'! ("#+"!$. Barranuilla.
