Bioquimica 11 Masa Proteica

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESINAL DE MEDICINA HUMANA

MASA PROTEICA Y VICERAL

OBJETIVOS Objetivo General: Dete Deterrmina minarr los los mé méto todo doss par para a eval evalua uarr las las prot proteí eína nass compar compartim timien iento to viscer visceral al median mediante te los nivele niveless BIOQUIMICA Y NUTRICION

del del de


Transferrin Transferrina, a, Prealbúmina, Prealbúmina, Proteínas Proteínas totales y Albúmina en suero, que por su relativamente corto tiempo de vida y las prot proteí eína nass del del co comp mpar arti timi mien ento to so som mátic ático o ò es esqu quel elét étic ico o la evalua evaluare remos mos median mediante te la la re relac lación ión entr entre e la ecr ecreci eción ón de la creatinina urinaria en !" #oras y la talla de la persona,así mismo mediante el Peso y la Talla se evaluará la masa corporal total$

Objetivos Espe!"os: 

Apren prende derr la impo imporrtan tancia cia de la masa protei oteica ca visc viscer eral al y esqu es quel elét étic ica, a, y rec econ onoc ocer er en qué qué co cons nsis iste te en relac elació ión n a la bioquímica$



Aplica Aplicarr adecua adecuadam dament ente e los react reactivo ivoss que interv intervien ienen en en la práctica$



%eali&ar y veri'car correctamente observaciones que actúen en nuestras muestras, así como dic#o instrumento$

I#TRO$%CI&#: (as prot (as proteí eína nass so son n co comp mpue uest stos os or)á or)áni nico coss ma macr crom omol olec ecul ular ares es,, ampliamente distribuidos en el or)anismo y esenciales para la vida$ Actúan como elementos estructurales y de transporte y aparecen ba*o la forma de en&imas, #ormonas, anticuerpos, factores de coa)ulación, etc$ (a proteína más abundante en plasma es la albúmina$ +na de sus funciones más importantes es la de permitir el transporte de ácidos )rasos, #ormonas esteroides, esteroides, bilirrubina, catecolaminas, que en forma libre son insolubles en medio acuoso$ (a concentración de albúmina en plasma inuye notablemente en el mantenimiento de la presión coloidosmótica, lo que estaría relacionado con su relativamente ba*o BIOQUIMICA Y NUTRICION


peso molecular y su )ran car)a neta$ -n condiciones patoló)icas como pérdidas renales, desnutrición, infecciones prolon)adas, etc$, suelen presentarse #ipoproteinemias, mientras que en otras como mieloma múltiple, endocarditis bacteriana y #emoconcentraciones de diversos orí)enes, se observan #iperproteinemias$ -n )eneral, ambas situaciones se ven acompa.adas también por #ipoalbuminemias$ (os aumentos anormales de albúmina son ocasionales y se relacionan casi siempre con des#idratación que produce el consecuente aumento en el contenido proteico del plasma$ -l análisis del nivel de proteínas en san)re es un análisis que se reali&a por separado o en una petición )eneral de bioquímico en la san)re$ /ide la cantidad de proteínas presentes en el suero$ (as proteínas son un constituyente muy importante de las células y los te*idos del cuerpo #umano$ 0e componen de aminoácidos$ 1ay diferentes tipos de proteínas con diferentes funciones, son así proteínas los en&imas, al)unas #ormonas, la #emo)lobina, el (D( 2transportadora de colesterol3, el 'brinó)eno, el colá)eno, las inmuno)lobulinas, etc$ (as proteínas totales del suero se pueden separar en dos )randes )rupos la Albúmina y las )lobulinas$ (a albúmina es la proteína de más concentración en la san)re$ (a albúmina transporta muc#as moléculas peque.as 2bilirrubina, pro)esterona, y medicamentos3, y tiene también la función de mantener la presión san)uínea ya que favorece la presión osmótica coloidal para mantener líquidos en el torrente san)uíneo y que no pasen a los te*idos, manteniendo un equilibrio

EVAL%ACIO# $E LA MASA PROTEICA VICERAL Y ES'%ELETICA: -valuar el estado nutricional de un individuo consiste en síntesis en el conocimiento de en qué )rado las demandas bioquímicas, 'sioló)icas y metabólicas están siendo cubiertas por la in)estión de nutrientes, por lo que ree*ará, si la in)estión, absorción y utili&ación de los mismos son adecuadas a las necesidades del or)anismo teniendo en cuenta su biodisponibilidad, pérdidas y las reservas$ -s tal la preocupación que eiste de unos a.os a esta parte por el estado nutricional de los individuos, como un indicador de salud, que desencadenó en la búsqueda de parámetros que siendo fáciles de BIOQUIMICA Y NUTRICION


medir y de cálculo simple, especí'cos, 'ables, no invasivos y pocos costosos, puedan utili&arse como indicadores nutricionales de forma rutinaria en la práctica diaria$ -s fácil entender que muy pocos parámetros van a cumplir todas las condiciones anteriormente epuestas, por ello es indispensable un profundo conocimiento de su metodolo)ía e interpretación para que puedan ser utili&ados de la forma más conveniente$

(a más de

manera adecuada abordar la evaluación del estudio del estado nutricional es reali&arlo en forma )radual, donde el primer paso sería conocer si eiste al)ún problema nutricional, para en caso a'rmativo proceder a una valoración más especí'ca, determinando que compartimentos corporales pueden estar afectados$ -l primer compartimento que debe ser evaluado es el compartimento )raso, ya que las )rasas son las primeras reservas que el or)anismo va a BIOQUIMICA Y NUTRICION


utili&ar para aprovisionarse de ener)ía, y en un se)undo nivel recurrirá a otros sustratos como las proteínas, pudiendo establecerse 'nalmente el dia)nóstico nutricional$ (a primera etapa abordable de estos estudios será la evaluación del estado nutricional )lobal, que se basa en determinar mediante medidas indirectas si las necesidades del or)anismo están siendo cubiertas, pero como comentamos anteriormente, no identi'caremos la parte del cuerpo que puede encontrase afectada$ Para este tipo de evaluación recurriremos al análisis de la dieta, la determinación del peso y a la capacidad de la repuesta inmune del or)anismo$

BIOQUIMICA Y NUTRICION


MARCO TEORICO: MÉTODOS DE DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES Los ()to*os para (e*ir la onentrai+n *e prote!nas totales ,PT- p.e*en lasi"arse en4

/0 1!sios: 5 Absorbancia del enlace peptídico a 678 nm4 se basa en la propiedad que tiene el enlace peptídico de absorber a esa lon)itud de onda$ 5 Absorbancia de los aminoácidos aromáticos a !98 nm4 su principal limitación es que no todas las proteínas tienen la misma proporción de estos aminoácidos, lo que le resta eactitud$ 5 %efractometría4 método de elección, pero #oy en día en la práctica clínica se está de*ando de usar$

2. Químicos: %eacción de :*elda#l4 considerado #istóricamente como el método referencia$ /étodo de (o;ry4 se basa en la reducción del reactivo de iocalteau provocada por el comple*o unión peptídico= >u!? en medio alcalino con la participación de restos fenólicos 2tirosilos3$ %eacción de @iuret4 se fundamenta en la formación de un comple*o, en medio alcalino, entre el >u!?y los enlaces peptídicos 2absorción a "8 nm3$ -n la práctica clínica, es una de las metodolo)ías más usada para el dosa*e de PT$ /étodos turbidimétricos 2precipitación con ácido tricloroacético=T>A o sulfosalicílico3 /étodo de @radford

-n el Traba*o Práctico se determinará la concentración de proteínas por el /étodo de @radford$ BIOQUIMICA Y NUTRICION


oomasie @lue B=!83 cuando éste se une a las proteínas 2absorbiendo asía 7 nm3$ -sta unión se reali&a a través de )rupos ioni&ados y se comprueba proporcionalidad con la concentración de proteínas contenidas en la muestra$ (a determinación del contenido proteico de una muestra requiere la comparación del valor de absorbancia de la muestra con los obtenidos a partir de cantidades conocidas de proteínas, con los que se construye una curva de calibración4 a mayor cantidad de proteínas, mayor color desarrollado y por lo tanto,mayor absorbancia$ %ecordar que esta proporcionalidad es sólo lineal #asta un cierto límite de concentración$

La .rva *e alibrai+n 0e requiere contar con un solución testi)o de proteína de concentración conocida 2)eneralmente se utili&a albúmina sérica bovina o inmuno)lobulina B3$ 0e preparan por lo menos " tubos testi)os con distintas cantidades de proteínas 2T6, T!, TC y T"3 y otro tubo denominado blanco 2en el cual el volumen de la solución de proteínas se reempla&a por a)ua3$ -n forma simultánea, se procesan las muestras incó)nitas$ (ue)o se a)re)a la misma cantidad del reactivo de @radford a cada tubo 2dado que en de'nitiva se compara el color desarrollado evidenciado por la absorbancia de la solución en cada tubo, sus volúmenes 'nales deben ser i)uales3$

Protoolo eje(plo *e *eter(inai+n *e prote!nas porel ()to*o *e Bra*2or*: +na ve& preparados los tubos, se lee la absorbancia de cada uno de ellos a la lon)itud de onda de 7 nm$ (a absorbancia obtenida en el tubo blanco debe ser restada a cada uno de los tubos restantes$ +na opción es calibrar el equipo con el tubo blanco4 esto consiste en asi)nar a la absorbancia del blanco, una lectura i)ual a cero$ De esta manera, automáticamente esta lectura es restadaE por el fotocolorímetro a todas las muestras posteriormente leídas en el equipo$ (os resultados obtenidos se vuelcan en una tabla como la que si)ue$ BIOQUIMICA Y NUTRICION


>on las absorbancias de los tubos testi)os obtenidas en el fotocolorímetro, se construye el )rá'co de Absorbancia a 7 nm en función de la cantidad de proteína 2m)3$ -n el e*emplo, los tubos conteniendo testi)os " y muestran una desviación de la &ona lineal de cumplimiento de la (ey de (ambert= @eer, motivo por el cual no se consideran al tra&ar la recta promedio$ Para determinar la concentración de proteínas en la muestra 2F3, se interpolan en la curva de calibración las absorbanciaGs correspondientes a elGlos tuboGs que contenían la muestra$ Así, sabiendo la cantidad de proteína 2F3 contenida en el volumen de muestra utili&ado en la medición, puede

calcularse la concentración proteica$

Bases *e (.estra :

l!nias

Ban*as prinipales *el proteino3ra(a: 1. Pre!"#$mi%!: BIOQUIMICA Y NUTRICION


o o

o

o

Halor normal4 8,C )G688 ml, incluye a la transtiretrina$ (a visuali&ación depende de que todas las condiciones técnicas sean las óptimas$ 0u disminución es un marcador sensible del estado nutricional reacción inamatoria$ (a presencia de esta banda no se informa$

40 Alb5(ina: o o

o

o

o

Halor normal4 C,=,8 )G688 ml$ -s la proteína más peque.a y con mayor número de )rupos car)ados ne)ativamenteI esta característica le permite mi)rar con mayor rapide&$ >onstituye una banda #omo)énea, puesto que se trata de una única proteína, actúa como trasportador activo de diferentes compuestos tales como ácidos )rasos, pi)mentos biliares, #ormonas esteroides, fármacos y otros$ -s un reactante de fase a)uda ne)ativo, por lo que en estados infecciosos a)udos está disminuida$ -stados asociados con #ipoalbuminemia4 estados de malnutrición o malabsorción, enfermedad #epática severa 2por fallas en su síntesis3 o aumento de su catabolismo, no se conoce un estado patoló)ico con #iperalbuminemia$

60 A/73lob.lina: o o

o

o

o

Halor normal4 8,6=8,C )G688 ml$ @anda formada principalmente por4 J6=antitripsina 2mayoritaria3, )lucoproteína ácida J6 u orososeromucoide, transcortina y )lobulina '*adora de tirosina$ +n aumento o disminución de esta banda se debe a un aumento o disminución de J6=antitripsina 2predomina en la fracción J63 = J6=antitripsina4 >umple con el 78K de la acción antiproteásica del or)anismoI es el in#ibidor bioló)ico de las en&imas proteolíticas de los lisosomas3$ -s un reactante de fase a)uda positivo$ Aumento de J6=antitripsina4 estrés, reactante de fase a)uda, tumoresI



o

Disminución de J6=antitripsina4 estados de malnutriciónGmalabsorción, enfermedad #epática severa, o aumento de su catabolismo 2procesos relacionados con la disminución de cualquier proteína3$ Blucoproteína ácida J64 in#ibe o inactiva a la o pro)esterona, es un reactante de fase a)uda positivo$ o Transcortina4 transporta !GC del cortisol y otros corticoides$ -l cortisol circulante se une también 2minoritariamente3 a la albúmina$ (a transcortina se sinteti&a en el #í)ado$

Proteína '*adora de tiroina4 une TC 2triyodotironina3 y T" 2tiroina3$ (as #ormonas tiroideas circulantes se unen también a la prealbúmina$ o

Tanto la transcortina como la proteína '*adora detirosina aumentan en el embara&o y tras la administración de estró)enos$

80 A473lob.lina: o o

-s una fracción #etero)énea, valor normal4 8,=8,L )G688 ml$ -stá inte)rada por4 #apto)lobina, J!=macro)lobulina y ceruloplasmina$ = #apto)lobina4

o

o

o

o

0u función es captar #emo)lobina 21b34 (a formación del comple*o 1b=#apto)lobina impide que la peque.a cantidad de 1b liberada por #emólisis normal intravascular sea ecretada por orina, evitando así el efecto tóico de la 1b libre y la pérdida de

o

o

Participa en el metabolismo del #ierro y el >u??, ya que una molécula puede '*ar #asta 9 átomos de >u??, es un reactante de fase a)uda positivo, y aumenta en tumores y leucemias$ (a de'ciencia con)énita de ceruloplasmina desarrolla la enfermedad de Milson$

90 73lob.linas: o o o o o

o

o

o o

Halor normal4 8,N=6,6 )G688 ml O6=)lobulina4 incluye a la transferrina y la #emopeina$ O!=)lobulina4 incluye a >C = transferrina4 -s una proteína que '*a C4 Participa del sistema del complemento$ +n reactante de fase a)uda positivo y disminuye 2además de las situaciones )enerales3 y en enfermedades autoinmunes 2(-0, A%3$

;0 <73lob.linas: o o

o

-s una &ona #etero)énea 0i la muestra es plasma, aparece en esta re)ión 2post=O! o )=rápida3 una banda #omo)énea que corresponde al 'brinó)eno 28,C )G688 ml3, esto constituye una interferencia y debe pedirse nueva muestra 2suero3I -stá constituido mayoritariamente por inmuno)lobulinas 2sin embar)o es importante recordar en la búsqueda de al)ún componente BIOQUIMICA Y NUTRICION


o

o

o

monoclonal que éstas proteínas pueden mi)rar desde J! #asta el punto de siembra3, incluye4 )B4 monómero de 6N8 QDa, se reconocen " subclases, es la mayoritaria, puede atravesar la placenta y es la principal inmuno)lobulina en la respuesta inmune secundariaI )A4 se puede encontrar como monómero, dímero o trímero, media la inmunidad de mucosasI )/4 es una inmuno)lobulina pentamérica, asimétrica, de P/ #asta 6888 QDa, no atraviesa la placenta y es la inmuno)lobulina que media la respuesta inmune primariaI



$esarrollo e=peri(ental : MATERIALES o o o o

o

o

-spectrofotómetro$ Tubos de ensayo Pipetas$ A)ua destilada$%eactivo -DTAG>u4 comple*o -DTAG>u 6C mmolGl en RaS1 9L mmolGl y alquil aril politer 2AAP3$ 5%eactivo @><4 solución de @romo >resolsulfon
M>TO$O

0e procede por administrar las determinadas cantidades su)eridas para cada uno de los tubos de reactivo que son dos, continuación se aplicaran distintas cantidades que variaran de acuerdo a la indicación del cuadro representado, el cual se distin)ue debido a las ecepciones que se acentúan dependiendo de las sustancias tanto en suero como en orina$ 0e procede a me&clar cada sustancia aplicada en los diferentes tubos, y, se lleva a ba.o maría a CL V> durante 66 minutos y C8 se)undos y se leerá ante el espectrofotométro a N88 nm colocando en la celda cada determinada muestra de cada uno de los tubos en el caso del eperimento A que consta de suero, a diferencia del eperimento @ que traba*amos con orina el cual se incuba a temperatura ambiente y durante !8 minutos$ 5 %econocer cada uno de los materiales a utili&ar$ 5 0e)uir de manera ri)urosa las cantidades establecidas por el profesor en el cuadro de la pi&arra, de lo contrario puede afectar a la eperiencia$ 5 (os estudiantes se turnan ante todos los miembros de la mesa para reali&ar éste procedimiento$ 5 >on ayuda de la otra pipeta empe&amos a utili&ar cada una de las soluciones a.adiéndola de forma eacta para que cada uno de los tubos que ocuparan las muestras$ 5 0e lleva a cabo el proceso de determinar la diferencia ante el reconocimiento de masa visceral y esquelética en ambos eperimentos$



Res.lta*os : -perimento A $ETERMI#ACI&# $E PROTEI#AS TOTALES Y ALB?MI#A E# S%ERO

1.n*a(entos *el ()to*o: $eter(inai+n *e Prote!nas Totales: (os enlaces peptUdicos de las proteínas reaccionan con el ión cWprico, en medio alcalino, para dar un comple*o color violeta con máimo de absorción a "8 nm, cuya intensidad es proporcional a la concentración de proteínas totales en la muestra$ $eter(inai+n *e Alb5(ina4 (a albúmina reacciona especí'camente 2sin separación previa3 con la forma aniónica de la @romo >resolsulfon <3, en presencia de un eceso de colorante, en medio tamponado a p1 C,9$ -l aumento de absorbancia a N! nm respecto al blanco de reactivo, es proporcional a la cantidad de albúmina presente en la muestra$

Procedimientos4 DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES Blanco

Standard

Muestra

3ml

3ml

3ml

30uL

-

-

Standard

-

30uL

-

Muestra

-

-

30uL

Reactivo Agua destilada

Mezclar por agitacin! Incu"ar por ##$in % &' s! Leer en espectro(ot$etro a )*+n$!



Calculo ⋮

0.573 0.448

×

A muestra A stardard

× n

6 =7.67

DETERMINACIÓN DE AL,-MINA ,lanco

Standard

Muestra

Reactivo

3.1ml

3.1ml

3.1ml

Agua destilada

10uL

-

-

Standard

1.83uL

20uL

-

Muestra

-

-

20uL

Mezclar por agitacin! Incu"ar por .) s! Leer en espectro(ot$etro a +''n$!

Calculo ⋮

1.948 1.83


× n

× 5 =3.32



-perimento @ $ETERMI#ACI&# $E CREATI#I#A %RI#ARIA
Procedimiento4 DETERMINACIÓN DE CREATININA /RINARIA

,lanco

Standard

Muestra

Standard

-

0.5ml

-

Orina Diluida

-

-

0.5ml

1ml

0.5ml

0.5ml

Reactivo #

2ml

2mL

2ml

Reactivo.

0.5ml

0.5ml

0.5ml

Agua destilada

Mezclar por agitacin! Incu"ar por .' $in! Leer en espectro(ot$etro a )#'n$! Calculo ⋮

0.093 0.174

×


× n

2=1068.96



Res.lta*os: (as proteínas totales se solicitan frecuentemente en una analítica rutinaria$ Proporcionan una información )eneral sobre el estado nutricional, por e*emplo si se #a sufrido una pérdida de peso in*usti'cable recientemente$ También se solicita *unto con otras pruebas para proporcionar información si se presentan síntomas su)estivos de alteración #epática o renal, o si se sospec#a la eistencia de un trastorno de la médula ósea o para investi)ar la causa de una retención anormal de líquido en los te*idos 2edema3$ (os resultados de las proteínas totales se suelen interpretar *unto con los de otras pruebas y pueden porporcionar al médico información acerca del estado )eneral del individuo en relación a la nutrición yGo a la eistencia de trastornos que afecten a ór)anos vitales como el #í)ado y el ri.ón$ 0i los niveles de proteínas totales están alterados, será necesario reali&ar otras pruebas para alcan&ar el dia)nóstico$+nos niveles ba*os de proteínas pueden su)erir una enfermedad #epática, una enfermedad renal o un trastorno en el que las proteínas no se di)ieren o no se absorben adecuadamente a nivel intestinal$ Pueden observarse concentraciones disminuidas de proteínas en malnutrición severa y en trastornos que causan malabsorción, como enfermedad celíaca o enfermedad inamatoria intestinal Pueden observarse niveles elevados de proteínas totales en procesos inamatorios o infecciosos crónicos como #epatitis víricas o infección por el H1$ Riveles elevados de proteínas también pueden asociarse a trastornos de la médula ósea como el mieloma múltiple

C.estionario : BIOQUIMICA Y NUTRICION


/07 Con los *atos obteni*os en los e=peri(entos@ realiar la valorai+n n.triional *e *ia persona sabien*o .e es var+n@ pesa ;D 3@ s. talla es /@9; ( F s. vol.(en .rinario en 48 oras 2.e *e /DDD (l0 1ombre4 = Peso4 N8 Q) = Talla4 6$N m = >  +4 6888 ml %elación >  + !"#GTalla •

1000 =

1.56

641.02

D-0R+T%>XR •

%elación PesoGTalla 60 1.56

=38.46

RS%/A( •

Proteínas totales

0.573 0.448

×

6 =7.67

RS%/A( •

Albúmina 1.948 1.83

×

5 =5.32

RS%/A(



407 C+(o .biera si*o la valorai+n n.triional en el aso .e la persona .biera si*o (.jerH /u*er4 = Peso4 N8 Q) = Talla4 6$N m = >  +4 6888 ml %elación >  + !"#GTalla •

1000 =

1.56

641.02

@AYS •

%elación PesoGTalla 60 1.56

=38.46

-(-HADS •

Proteínas totales

0.573 0.448

×

6 =7.67

RS%/A( •

Albúmina 1.948 1.83

×

5 =5.32

RS%/A(



607 Menione las arater!stias 3enerales *e las prote!nas F s. lasi"ai+n0 (as proteínas deben su importancia bioló)ica al número de funciones que desempe.an, entre las que podemos citar4

A0 Catal!tias la práctica totalidad de las re)iones bioló)icas están catali&adas por en&imas especí'cas, de las que eisten unas !$888 distintas en cada célula$ Todas ellas son proteínas$ B0 Re3.la*oras #ormonas peptídicas como la insulina 2que re)ula el metabolismo de la )lucosa3, la #ormona del crecimiento o paratiroidea 2que re)ula el metabolismo del calcio y del fósforo3$ C0 Estr.t.rales forman parte de las membranas celulares, los microtúbulos, cilios, etc$ 0on parte importante de las u.as, piel, etc$ $0 Transporte como la #emo)lobina que transporta oí)eno por la san)re$ E0 A.(.lai+n *e s.stanias como la ovoalbúmina de la clara del #uevo y la caseína de la lec#e, que actúan como proteínas de reserva$ 10 Movi(iento la contracción muscular se debe a la interacción de 'lamentos proteicos de actina y miosina$ G0 $e2ensa in(.nitaria las inmuno)lobulinas dan lu)ar a los anticuerpos, que se forma como respuesta a la presencia de sustancias etra.as o antí)enos, a los que a)lutinan o precipitan$ (as proteínas pueden clasi'carse en tres )rupos, en función de su forma y su solubilidad$ 



Prote!nas "brosas4 las proteínas 'brosas tienen una estructura alar)ada, formada por lar)os 'lamentos de proteínas, de forma cilíndrica$ Ro son solubles en a)ua$ +n e*emplo de proteína 'brosa es el colá)eno$ Prote!nas 3lob.lares4 estas proteínas tienen una naturale&a más o menos esférica$ Debido a su distribución de aminoácidos 2#idrófobo en su interior e #idró'lo en su eterior3 que son muy BIOQUIMICA Y NUTRICION


solubles en las soluciones acuosas$ (a mio)lobina es un claro e*emplo de las proteínas )lobulares$ -stas se clasi'can en4 









)lie al2a: esta estructura se desarrolla en forma de espiral sobre sí misma debido a los )iros producidos alrededor del carbono beta de cada aminoácido$ (a mio)lobina es un claro e*emplo de proteína de #élice alfa$ oja ple3a*a beta: cuando la cadena principal se estira al máimo, se adopta una con')uración conocida como cadena beta$ (a tenascina es un e*emplo de las proteínas #o*a ple)ada beta$ Al2aKbeta: (as proteínas que contienen una estructura secundaria que alterna la #élice alfa y la #o*a ple)ada beta$ +n e*emplo de proteína alfaGbeta es la triosa fosfato isomerasa$ -sta estructura es conocida como un barril T/$ (a #elicoidal alterna y los se)mentos de #o*a ple)ada beta forman una estructura de barril cerrado$ Al2a  Beta: -n estas proteínas, la #élice alfa y la #o*a ple)ada beta se producen en re)iones independientes de la molécula$ (a ribonucleasa A es un e*emplo de proteína alfa ? beta

Prote!nas *e (e(brana4 son proteínas que se encuentran en asociación con las membranas lipídicas$ -sas proteínas de membrana que están embebidas en la bicapa lipídica, poseen )randes aminoácidos #idrófobos que interactúan con el entorno no polar de la bicapa interior$ (as proteínas de membrana no son solubles en soluciones acuosas$ +n e*emplo de proteína de membrana es la rodopsina$ Debes tener en cuenta que la rodopsina es una proteína inte)ral de membrana y se encuentra incrustada en la bicapa$ (a membrana lipídica no se muestra en la estructura presentada$

807 '.) son las 3lob.linas F .les son s.s lasesH BIOQUIMICA Y NUTRICION


(as )lobulinas son un )rupo de proteínas insolubles en a)ua que se encuentran en todos los animales y ve)etales$ -ntre las )lobulinas más importantes destacan las4 • • • • • •

0ero)lobulinas 2de la san)re3$ (as lacto)lobulinas 2de la lec#e3$ (as ovo)lobulinas 2del #uevo3$ (a le)umina$ -l 'brinó)eno$ (os anticuerpos 2)amma=)lobulinas3$

907 $esriba los ()to*os *e *osaje tanto .!(ios o(o eni(tios para prote!nas totales@ alb5(ina@ 3lob.lina F reatinina0 (os métodos para medir la concentración de proteínas totales 2PT3 pueden clasi'carse en4

/0 1!sios: Absorbancia del enlace peptídico a 678 nm4 se basa en la propiedad que tiene el enlace peptídico de absorber a esa lon)itud de onda$ Absorbancia de los aminoácidos aromáticos a !98 nm4 su principal limitación es que no todas las proteínas tienen la misma proporción de estos aminoácidos, lo que le resta eactitud$ %efractometría4 método de elección, pero #oy en día en la práctica clínica se está de*ando de usar$

40 '.!(ios: •

•

%eacción de :*elda#l4 considerado #istóricamente como el método referencia$ /étodo de (o;ry4 se basa en la reducción del reactivo de iocalteau provocada por el comple*o unión peptídico=>u!? en medio alcalino con la participación de restos fenólicos 2tirosilos3$



•

•

•

%eacción de @iuret4 se fundamenta en la formación de un comple*o, en medio alcalino, entre el >u!? y los enlaces peptídicos 2absorción a "8 nm3$ -n la práctica clínica, es una de las metodolo)ías más usada para el dosa*e de PT$ /étodos turbidimétricos 2precipitación con ácido tricloroacético= T>A o sulfosalicílico3 /étodo de @radford

M)to*o *e Bi.ret •

0e basa en la formación de un comple*o coloreado entre el >u!?y los )rupos R1 de los enlaces peptídicos en medio básico$ 6>u!?seacomple*a con " R1$ (a intensidad de coloración es directamente proporción a la cantidad de proteínas 2enlaces peptídicos3 y la reacción es bastante especí'ca, de manera que pocas sustancias inter'eren$ (a sensibilidad del método es muy ba*a y sólo se recomienda para la cuanti'cación de proteínas en preparados muy concentrados 2por e*emplo en suero3$

M)to*o *e Bra*2or* •

0e basa en la unión de un colorante, >omassie @lue B=!8 2también 0erva @lue3 a las proteínas$ -l colorante, en solución ácida, eiste en dos formas una a&ul y otra naran*a$ (as proteínas se unen a la forma a&ul para formar un comple*o proteína=colorante con un coe'ciente de etinción mayor que el colorante libre$ -ste método es sensible 26=6 Z)3, simple, rápido, barato y pocas sustancias inter'eren en su determinación$ -ntre las sustancias que inter'eren están los deter)entes y las soluciones básicas$


Bioquimica 11 Masa Proteica

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