LAPORAN PRAKTIKUM BAKTERIOLOGI PEMERIKSAAN TOTAL PLATE COUNT (TPC)..
Disusun oleh : A.A. Ayu Ti!"#"" NIM P$%&'$&$% Se#es!e III
Dis"#*"i+"n +e*"," : Dosen Pe#-i#-in P"+!i+u# B"+!eioloi
KEMENTERIAN KESE/ATAN REPUBLIK INDONESIA POLITEKNIK KESE/ATAN KESE/ATAN DENPASAR DIII 0URUSAN ANALIS KESE/ATAN $&'
Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
1
BAB I PENDA/ULUAN
&.& L"!" L"!" Bel"+" Bel"+"n n Bahan Bahan makana makanan, n, selain selain merupa merupakan kan sumber sumber gizi gizi bagi bagi manusi manusia, a, juga juga merupa merupakan kan
sumber sumber makana makanan n bagi bagi mikroo mikroorg rgani anisme. sme.Per Pertum tumbuh buhan an mikroo mikroorg rganis anisme me dalam dalam bahan bahan pangan dapat menyebabkan perubahan yang menguntungkan seperti perbaikan bahan pangan secara gizi, daya cerna ataupun daya simpannya.Selain itu pertumbuham mikroorganisme dalam bahan pangan juga dapat mengakibatkan perubahan fisik atau kimia imia
yang ang
tida tidak k
diing iingin ink kan, an,
seh sehing ingga
bah bahan
pan pangan gan
ters terseb ebut ut
tid tidak
lay layak
dikomsumsi.Kejadian ini biasanya terjadi pada pembusukan bahan pangan. Bahan pangan dapat bertindak bertindak sebagai perantara atau substrat substrat untuk untuk pertumbuhan pertumbuhan mikroorga mikroorganisme nisme patogenik patogenik dan organism organismee lain penyebab penyebab penyakit. penyakit. Penyakit Penyakit menular menular yang cukup berbahaya seperti tifus, kolera, disentri, atau tbc, mudah tersebar melalui bahan makanan. angguan!gangguan kesehatan, khususnya gagguan perut akibat makanan disebabkan, antara lain oleh kebanyakan makan, alergi, kekurangan zat gizi, keracunan langsung oleh bahan!bahan kimia, tanaman atau he"an beracun# toksintoksin yang dihasilkan bakteri# mengkomsumsi pangan yan mengandung parasit!parasit he"an dan mikroorganisme. angguan!gangguan ini sering dikelompokkan menjadi satu karena memiliki gejala yang hampir sama atau sering tertukar dalam penentuan penyebabnya. $pab $pabila ila terjad terjadii kont kontam amina inasi si makan makanan an yang yang berle berlebi biha han n di tenga tengah h % teng tengah ah masyarakat secara otomatis gangguan kesehatan masarakat akan pula menigkat karena adany adanyaa pening peningkat katan an kontam kontamina inasi si makana makanan n yang yang tinggi tinggi.. &ntuk &ntuk mencega mencegah h terjadi terjadinya nya peningkatan kontaminasi makanan
yang tinggi sebaiknya yang sangat utama adalah
kebersihan higiens dan sanitasi yang perlu di tingkatkan, karena dengan program tersebut angka kontaminasi makanan yang ada dapat menurun. Banyaknya penjual makanan yang instan serta pedagang makanan yang memerlukan bahan makanan yang tidak berstandar taraf kesehatan, ini memicu juga angka kontaminasi makanan akan tinggi. 'al tersebut yang melatar belakangi penulis untuk mengangkat permasalahan tersebut sebagai bahan yang akan dibahas dalam laporan praktikum dengan judul 1Penen!u"n An+" Ku#"n *"," T"hu2. (enghitung atau menentukan banyaknya mikroba dalam suatu bahan )makanan,
minuman, dan lain!lain* dilakukan untuk mengetahui sampai seberapa jauh bahan itu tercema tercemarr oleh oleh mikrob mikroba.+ a.+eng engan an menget mengetahu ahuii jumlah jumlah mikrob mikroba, a, maka maka dapat dapat diketa diketahui hui kualitas mikrobiologi dari bahan tersebut.Bahan yang dapat dikatakan baik jika jumlah mikroba yang terkandung dalam bahan tersebut masih di ba"ah jumlah standar yang Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
ditentukan oleh suatu lambaga.Kandungan mikroba pada suatu bahan juga sangat menentukan tingkat kerusakannya, serta dapat ditentukan oleh tingkat kelayakan untuk dikonsumsi. &. Ru#us"n M"s"l"h +ari latar belakang yang dipaparkan di atas, rumusan masalah dalam praktikum dan
penulisan laporanpraktikum ini adalah sebagai berikut 1. Bagaimana prosedur pengolahan sampel untuk pemeriksaan angka kuman pada tahu . $pa saja yang perlu diperhatikan dalam pengolahan sampel tahu untuk pemeriksaan angka kuman /. Bagaimana teknik isolasi bakteri menggunakan media P0$ untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu . $pa saja yang perlu diperhatikan dalam penanaman bakteri menggunakan media P0$ untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu 2. $pakah ada koloni yang tumbuh pada media P0$ yang digunakan sebagai kontrol dan penanaman sampel untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu 3. 4ika ada, bagaimana ciri!ciri koloni bakteri yang tumbuh pada media P0$ dalam pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu 5. Berapa jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada media P0$ dalam pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu 6. $pa saja yang perlu diperhatikan dalam perhitungan angka kuman sampel bahan makanan 7. Berdasarkan hasil pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu, apakah sampel tahu yang diperoleh memenuhi kualitas higienitas bahan makanan secara bakteriologis
&.' Tu3u"n +ari rumusan masalah di atas, tujuan dalam praktikumdan penulisan laporan
praktikum ini adalah sebagai berikut 1. &ntuk mengetahui prosedur pengolahan sampel untuk pemeriksaan angka kuman pada tahu. . &ntuk mengetahui hal!hal yang perlu diperhatikan dalam pengolahan sampel tahu untuk pemeriksaan angka kuman. /. &ntuk mengetahui teknik isolasi bakteri menggunakan media P0$ untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu. . &ntuk mengetahui hal!hal yang perlu diperhatikan dalam penanaman bakteri menggunakan media P0$ untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu. 2. &ntuk mengetahui ada8tidaknya koloni yang tumbuh pada media P0$ yang digunakan sebagai kontrol dan penanaman sampel untuk pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu. Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
/
3. &ntuk mengetahui ciri!ciri koloni bakteri yang tumbuh pada media P0$ dalam pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu. 5. &ntuk mengetahui jumlah koloni bakteri yang tumbuh pada media P0$ dalam pemeriksaan angka kuman pada sampel tahu. 6. &ntuk mengetahui hal!hal yang perlu diperhatikan dalam perhitungan angka kuman sampel bahan makanan. 7. &ntuk mengetahui kualitas bahan makanan )tahu* secara bakteriologis. &.' M"n4""! (anfaat dari praktikum yang telah dilakukan dan penulisan laporan praktikum ini
adalah sebagai berikut. 1. Bagi (ahasis"a 9aporan praktikum ini dapat menambah "a"asan mahasis"a tentang Pemeriksaan $ngka Kuman, sehingga dapat mengatahui prosedur pemeriksaan angka kuman pada makanan dan minuman, dan dapat mengoalh sampel, serta dapat menghitung angka kuman pada makanan dan minuman. . Bagi +osen Pembimbing 9aporan praktikum ini dapat dijadikan sebagai bahan e:aluasi dalam proses perkulihan dan dapat dijadikan acuan dalam memberikan penilaian serta laporan ini dapat digunakan sebagai bahan ajar.
Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
BAB II TIN0AUAN PUSTAKA
.& 5"+!o64"+!o y"n #e#*en"uhi hiieni!"s -"h"n #"+"n"n
Setiap bahan pangan selalu mengandung mikroba yang jumlah dan jenisnya berbeda.Pencemaran mikroba pada bahan pangan merupakan hasil kontaminasi langsung atau tidak langsung dengan sumber!sumber pencemar mikroba, seperti tanah, air, debu, saluran pencernaan dan pernafasan manusia atau he"an.+alam batas!batas tertentu kandungan mikroba pada bahan pangan tidak banyak berpengaruh terhadap ketahanan bahan pangan tersebut. $kan tetapi, apabila kondisi lingkungan memungkinkan mikroba untuk tumbuh dan berkembang lebih cepat, maka bahan pangan akan rusak karenanya )+"idjoseputro ;;2*. (enurut
Buckle
)1765*,
suhu
dapat
mempengaruhi
pertumbuhan
mikroorganisme dengan dua cara yang berla"anan yaitu )1* apabila suhu mengalami kenaikan sekitar suhu optimalnya, kecepatan metabolisme naik dan pertumbuhan dipercepat sedangkan bila suhu turun sekitar suhu optimalnya, kecepatan metabolisme akan menurun dan pertumbuhan juga diperlambat. Selanjutnya, >inarno );;* menyebutkan bah"a setiap penurunan suhu 6?0 akan membuat kecepatan reaksi berkurang menjadi setengahnya. )* bila suhu naik hingga diatas suhu maksimal atau turun diba"ah suhu minimal, maka pertumbuhan mungkin akan terhenti, komponen sel menjadi tidak aktif dan sel!sel mengalami kematian. /. @ilai p' Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
2
Setiap organisme memiliki kisaran p' tertentu yang masih memungkinkan bagi pertumbuhannya dan juga mempunyai p' optimum. Pada umumnya, mikroorganisme dapat tumbuh pada kisaran suhu 3,3!6,; dan nilai p' luar pada kisaran ,;!1,; sydah bersifat merusak )Buckle 1765*. (ikroorganisme juga memerlukan p' tertentu untuk pertumbuhannya, namun pada umumnya bakteri memiliki kisaran p' yang sempit, yaitu sekitar p' 3,2!5,2 atau pada p' netral. . $ktifitas $ir 4umlah air yang terkandung didalam bahan makanan atau larutan disebut sebagai akti:itas air )"ater acti:ity*. 4enis mikroorganisme yang berbeda membutuhnkan jumlah air yang berbeda pula untuk pertumbuhannya. Bakteri umumnya memerlukan media yang memiliki nilai a" tinggi );,71*, khamir membutuhkan nilai a" ;,65!;,71 sedangkan kapang membutuhkan nilai a" yang lebih rendah lagi, yaitu ;,6;!;,65 )Buckle 1765*. 2. Ketersediaan Aksigen (asing!masing organisme membutuhkan jumlah oksigen yang berbeda untuk metabolismenya. $da organisme yang tidak membutuhkan oksigen sama sekali untuk pertumbuhannya )anaerob*, ada yang membutuhkan sedikit oksigen )mikroaerofil* dan ada yang dapat tumbuh dan berkembang biak pada kondisi lingkungan yang cukup oksigen maupun tidak ada oksigen sama sekali )anaerob fakultatif*. 3. Senya"a penghambat Pertumbuhan bakteri juga dipengaruhi oleh senya"a!senya"a dalam bahan makanan yang bersifat antimikroba yang secara ilmiah ada didalam bahan makanan tersebut maupun yang sengaja ditambahkan seperti asam benzoat dan asam sorbat. 5. >aktu (enurut
pertumbuhannya
menyebabkan
perbedaan
dalam
kecepatan
pertumbuhan. &mumnya, semakin komplek dalam sifat!sifat sel suatu organisme, maka "aktu yang dibutuhkan oleh sel untuk membelah semakin lama.Bakteri membelah lebih cepat dari pada khamir, sedangkan khamir lebih cepat dari pada kapang. Bakteri membelah secara cepat dan tumbuh maksiimal dalam "aktu 2 menit, khamir baru membelah dengan cepat dalam "aktu 7; menit, kemudian kapang membelah dalam "aktu 16; menit. 6. Potensial eduksi Aksidiasi ) edoks * Potensial
reduksi
oksidasi
menunjukkan
kemampuan
substrat
untuk
melepaskan elektron )oksidasi* atau menerima elektron )reduksi*.Potensial redoks Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
3
sangat berpengaruh terhadap kehidupan mikroba.(ikroba memerlukan potensial redoks positif )teroksidasi*, sedangkan pada mikroba anaerob memerlukan potensial redoks negatif )tereduksi*. 7. Struktur Biologi Struktur biologi seperti kulit pada telur, kulit kacang!kacangan dan kulit buah berperan mencegah masuknya mikroba ke dalam bahan pangan tersebut. 1;.
. Pe#ilih"n #e,i" *e#-i"+"n un!u+ *e#ei+s""n "n+" +u#"n -"h"n #"+"n"n
(ikroorganisme dibiakan di laboratorium yang terdiri dari bahan nutrient. Biasanya pemilihan medium yang dipakai bargantung pada banyak faktor seperti apa jenis mikroorganisme yang akan ditumbuhkan. Perbenihan untuk pertumbuhan bakteri agar dapat tetap dipertahankan harus mengandung sema zat makanan yang diperlukan oleh mikroorganisme tersebut.
.' Pesi"*"n u"n"n un!u+ *e#ei+s""n "n+" +u#"n -"h"n #"+"n"n uang tempat penanaman bakteri harus bersih dan keadannya harus steril agar tidak
terjadi kesalahan dalam pengamatan atau percobaaan .dalam labotarium pembuataan serum :aksin dan sebagainya.Cnokulasi dapat dilakukan dalam sebuah kotak kaca )encast* udara yang le"at dalam kotak tersebut dile"atkan saringan melalui suatu jalanagar tekena sinar ultra:iolet )Pelczar, 1763*.
Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
5
. Te+ni+ isol"si -"+!ei un!u+ *ehi!un"n "n+" +u#"n s"#*el *","! (-"h"n #"+"n"n) &. Te+ni+ *e*""si s"#*el *","! ,en"n 7"" *enen7e"n ( Dilution)
Salah satu jenis preparasi sampel adalah dengan caramaseration )pengancuran*, sampel yang berbentuk padat dapat ditumbuk dengan mortar dan pestle sehingga mikroba yang ada dipermukaan atau di dalam dapat terlepas kemudian dilarutkan ke dalam air.Dujuan dari teknik ini pada prinsipnya adalah melarutkan atau melepaskan mikroba dari substratnya ke dalam air sehingga lebih mudah penanganannya. 0ontoh sampelnya antar lain bakso, tahu, biji, dll. Perbandingan antar berat sampel dengan pengenceran pertama adalah 1 - 7 )"8:*. Deknik
dilusi
sangat
penting
dalam
analisa
mikrobiologi karena hampir semua metode penelitian dan perhitungan jumlah sel mikroba menggunakan teknik ini, seperti DP0 )Dotal Plate 0ount*. Pada proses dilusi dapat dilakukan teknik pengenceran bertingkat. Dujuan dari pengenceran bertingkat yaitu memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam cairan.Penentuan besarnya atau banyaknya tingkat pengenceran tergantung kepada perkiraan jumlah mikroba dalam sampel. +igunakan perbandingan 1 - 7 untuk sampel dan pengenceran pertama dan selanjutnya, sehingga pengenceran berikutnya mengandung 181; sel mikroorganisma dari pengenceran sebelumnya. G"#-" !e+ni+ *enen7e"n -e!in+"!
Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
6
. Te+ni+ Pour Plate ("" !u"n)
Deknik
penanaman
ini
merupakan
lajutan
dari
pengenceran
bertingkat.Pengambilan suspensi dapat diambil dari pengenceran mana saja tapi biasanya untuk tujuan isolasi )mendapatkan koloni tunggal* diambil beberapa tabung pengenceran terakhir, sedangkan pada perhitungan angka kuman suatu bahan makanan, suspensi diambil dari setiap sampel pada tabung pengenceran. Deknik ini memerlukan agar yang belum padat )E2o0* untuk dituang bersama suspensi bakteri ke dalam ca"an petri lalu kemudian dihomogenkan dan dibiarkan memadat. 'al ini akan menyebarkan sel!sel bakteri tidak hanya pada permukaan agar saja melainkan sel terendam agar )di dalam agar* sehingga terdapat sel yang tumbuh dipermukaan agar yang kaya A dan ada yang tumbuh di dalam agar yang tidak banyak begitu banyak mengandung oksigen. G"#-" !e+ni+ isol"si -"+!ei ,en"n #e!o,e *ou *l"!e
+alam pour plate, ca"an petri yang telah berisi campuran media dan sampel tersebut kemudian diputar dengan lembut untuk memastikan bah"a media dan sampel bercampur secara merata.
G"#-" *e-e,""n !e+ni+ s*e", *l"!e ,en"n !e+ni+ *ou *l"!e
Spread plate adalah teknik menanam dengan menyebarkan suspensi bakteri di permukaan agar yang telah memadat, sedangkan pada metode pour plate suspensi bakteri dicampurkan terlebih dahulu pada media yang belum memadat sebelum dituangkan ke ca"an petri. $lasan diteteskannya bakteri sebanyak ;,1 m9 untuk spread plate dan 1 m9 untuk pour plate karena spread plate ditujukan untuk menumbuhkan bakteri hanya pada permukaan media saja, sedangkan pour platedigunakan untuk menumbuhkan Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
7
bakteri pada permukaan dan bagian tengah media sehingga membutuhkan ruang yang lebih luas untuk penyebarannya maka diberikan lebih banyak suspensi sampel daripada spread plate. . C"" Menhi!un 0u#l"h Mi+o-" ,"n Pen"uh 5"+!o Penen7e"n
Pada teknik isolasi dengan pour plate memungkinkan mikroorganisme untuk tumbuh baik di permukaan dan di dalam media. Sebagian besar dari koloni tumbuh dalam media dan dalam ukuran kecil dan mungkin konfluen. Beberapa daerah koloni yang tumbuh di permukaan dapat berupa ukuran yang sama. Suspensi bakteri yang telah ditanam pada media agar )P0$F Plate Count Agar *, setelah inkubasi pada suhu /5?0 selama !6 jam dihitung jumlah koloni yang tumbuh. Satuan perhitungan jumlah mikroba dikenal dengan istilah Colony Forming Units )0<&s* untuk perhitungan bakteri dan kapang. $nalisis mikroorganisme digunakan mikroorganisme
yang
terdapat
dalam
untuk
bahan
mengetahui jenis
pangan.
$nalisis
dan
tersebut
jumlah dapat
menggunakan standar yang disebut Standar Plate Count )SP0*, menjelaskan mengenai cara menghitung koloni pada ca"an serta cara memilih data yang ada untuk menghitung jumlah koloni di dalam suatu bahan pangan yang dianalisis. 0ara menghitung koloni adalah sebagai berikut1. 0a"an yang dipilih dan dihitung adalah yang mengandung jumlah koloni antara /; sampai /;;. . Beberapa koloni yang bergabung menjadi satumerupakan suatu kumpulan koloni yang besar dimana jumlah koloninya diragukan dapat dihitung sebagai 1 koloni. /. Suatu deretan )rantai* koloni yang terlihat sebagai suatu garis tebal dihitung sebagai 1 koloni. $dapun rumus untuk menghitung jumlah koloni per ml adalah sebagai berikut4umlah koloni per ml F jumlah koloni per ca"an G )18
Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
1;
BAB III METODE
'.& 8"+!u ,"n Te#*"!
Praktikum pemeriksaan DP08angka kuman makanan dan minuman ini dilakukan pada a* 'ari, tanggal
- Kamis, 1/ 4uni ;1/
b* Dempat
- 9aboratorium Bakteriologi 4urusan $nalis Kesehatan Politeknik Kesehatan +enpasar
'. Al"! ,"n B"h"n A. ALAT
1. . /. . 2. 3. 5. 6. 7.
(ortir steril Dabung reaksi ak tabung reaksi elas ukur 2; ml Pipet ukur 1 ml, 1; ml Bola hisap Petridish steril @eraca analitik Hrlenmeyer 1;;, 2;, 2;; ml
B. 1. . /. . 2. 3.
BA/AN Kristal @a0l Serbuk media P0$ $Iuades steril Kapas berlemak $luminium foil Dahu
1;. $pi spiritus8Bunsen 11. Pinset 1. Cnkubator 1/. Kertas label 1. Spatel 12. Batang pengaduk 13. Kompor listrik 15. Benang pulung8 tali 16. Botol semprot
C. MEDIA9REAGENSIA 1. 9arutan garam fisiologis8Pz . (edia P0$
Pemeriksaan angka kuman pada tahu |
11
'.' C"" Ke3" '.'.& Pe*""si s"#*el *","! (!"hu) 1. Sampel tahu dihancurkan dengan blender, apabila tidak ada blender bisa
dengan mortir steril. . (emasukkan 1; g sampel tersebut ke dalam labu erlenmeyer8botol steril. /. (enuangkan 7; ml aIuades steril ke dalamnya. . Bahan dengan pengencer tersebut siap digunakan untuk pemeriksaan angka kuman, (P@ dan pemeriksaan biakan. '.'. Pe#ei+s""n "n+" +u#"n 1. (enyiapkan 3 buah tabung reaksi steril, disusun dalam rak tabung. (asing! masing tabung secara berurutan diberi tanda 1; !1,1;!,1;!/,1;!,
1;!2, 1;!3 dan
seterusnya sebagai kode pengenceran. . (enyiapkan 5 buah petridish steril, pada 3 buah petridish diberi tanda pada bagian belakangnya sesuai dengan kode pengenceran dan tanggal pemeriksaan seperti butir a, satu petridish diberi tanda control. /. Pada tabung kedua sampai enam diisi 7 ml larutan garam fisiologis atau aIuades steril atau larutan buffer phosfat. &ntuk pemeriksaan Bacillus cereus harus menggunakan buffer phosfat. . (engocok bahan di atas sampai homogen )J2 kali* kemudian ambil 1; ml dimasukkan pada tabung ke satu. 2. (emindahkan 1 ml bahan dari tabung kesatu ke tabung kedua dengan pipet kemudian dikocok hingga homogen. 3. (emindahkan 1 ml bahan dari tabung kedua ke tabung ketiga dengan pipet kemudian mengocok hingga homogen. 5. +emikian selanjutnya dilakukan hal yang sama sampai tabung keenam sehingga diperoleh pengenceran tabung 1; !1,1;!,1;!/,1;!, 1;!2, 1;!3 atau sesuai dengan kode pengenceran yang telah dibuat sebelumnya. +ari masing!masing tabung di atas, dimulai dari tabung keenam diambil 1 ml. +engan pipet steril dimasukkan ke dalam masing!masing petridish steril sesuai dengan kode pengenceran yang sama. 6. Kemudian ke dalam masing!masing petridish ini dituangi media plat count agar )P0$* yang telah dipanaskan dalam "aterbath 2 ;0 sebanyak 12!; ml. +an masing!masing petridish digoyang perlahan!lahan sehingga tercampur merata kemudian dibiarkan dingin dan membeku. 7. (emasukkan ke dalam inkubator suhu /5;0 selama !6 jam dalam posisi terbalik. 1;. Kontrol media dibuat dengan media P0$ tanpa diberi sampel. Kontrol ruangan dibuat dengan memakai P0$ dengan cara membuka tutup petridish selama 2 menit. 11. Pembacaan dilakukan setelah 16! jam dengan cara menghitung jumlah koloni yang tumbuh pada setiap petridish.
'.'.' Pe#ei+s""n h"sil ,"n *el"*o"n A. Pe#-"7""n /"sil 1. (enghitung koloni yang tumbuh pada masing!masing petridish. . Koloni!koloni yang bergabung menjadi satu atau membentuk satu
deretan8koloni yang terlekat sebagai garis tebal atau jumlah koloni yang meragukan, dihitung sebagai satu koloni kuman. /. (enghitung jumlah koloni yang tumbuh pada petridish control. $pabila jumlah koloni pada petridish control lebih besar dari 1;, maka pemeriksaan harus menggunakan P0$ dari pembuatan yang lain. B. Pel"*o"n Pelaporan hanya dilakukan pada petridish yang menghasilkan jumlah koloni antara /;!/;; koloni serta apabila jumlah pada petridish kontrol kurang dari 1; koloni, jumlah koloni pada masing!masing petridish ini harus dikurangi terlebih dahulu dengan jumlah koloni pada petridish kontrol.
BAB I PEMBA/ASAN
.& /"sil *en"#"!"n *e*""si s"#*el !"hu G"#-"
Ke!e"n"n
Sebelumnya tahu ditimbang terlebih dahulu dengan neraca analitik sebanyak 1; gram lalu di hancurkan sampai halus dengan pestle dalam mortir steril dalam keadaan steril dengan cara bekerja didekat api bunsen.
9arutan Pz yang telah disterilisasi di takar dengan labu ukur sebanyak 7; ml. Pengerjaan selalu dalam keadaan steril yaitu di daerah api bunsen yang menyala.
Setelah bahan halus dituangkan sedikit demi sedikit larutan pz steril yang telah ditakar ke dalam mortir.
G"#-"
Ke!e"n"n
Hrlenmeyer yang telah steril tutupnya dibuka di daerah steril yaitu di daerah api bunsen agar kesterilannya terjaga.
9arutan pz yang telah bercampur dengan bahan dituangkan ke dalam Hrlenmeyer tadi. 9alu dibilas sisa!sisa tahu dalam mortir dengan larutan pz sampai larutan pz yang telah ditakar tadi habis.
Bahan telah siap digunakan untuk pemeriksaan angka kuman. 9alu diberi label 1; !1 sebagai tanda sampel a"al.
. Pe*""si s"#*el !"hu ,en"n *enen7e"n -e!in+"! G"#-"
Ke!e"n"n
Sampel a"al dengan label 1; !1 dipipet dengan pipet ukur sebanyak 1 ml. Pengerjaan dari a"al sampai akhir tetap didaerah api bunsen agar tetap steril.
9alu 1 ml larutan tadi dimasukkan dalam tabung dengan label 1;! yang sebelumnya telah berisi larutan pz steril sebanyak 7 ml. Kemudian dikocok hingga homogen.
9alu dipipet larutan dalam tabung 1; ! sebanyak 1 ml dan dimasukkan dalam tabung 1; !/, dikocok hingga homogen. Begitu seterusnya sampai tabung dengan label 1; !3. 'al ini disebut dengan pengenceran bertingkat. Setelah dilakukan pengenceran bertingkat terlihat bah"a dari tabung dengan label 1; !1 ke tabung 1; !3 larutannya semakin jernih.
Setelah itu dipipet larutan dari tabung 1; !3 sebanyak 1 ml.
Kemudian larutan sebanyak 1 ml tadi dimasukkan dalam petridish steril dengan label 1;!3 dengan tutup petridish dibuka sedikit untuk menjaga kesterilan. 9alu dipipet 1 ml larutan dari tabung 1; !2 kedalam petridish dengan label 1;!2 begitu seterusnya sampai semua petridish dari 1;!1 sampai 1;!3 terisi larutan. Kemudian petridish yang telah terisi larutan tadi ditambahkan dengan larutan media P0$ sampai merata sebanyak 12!; ml. 9alu ditunggu hingga membeku. ambar disamping menunjukkan keenam petridish yang berisi label 1;!1 sampai 1;!3 berisi media yang telah membeku. 9alu dimasukkan dalam incubator suhu /5;0 selama !6 jam dalam keadaan terbalik. ambar disamping menunjukkan kontrol media yang dibuat dengan media
P0$ namun tanpa diberi sampel lalu dimasukkan dalam incubator dengan perlakuan yang sama.
Setelah jam media dikeluarkan dari inkubator. &ntuk pemeriksaannya yang pertama kali harus kita amati dan dihitung jumlah koloninya adalah kontrol media. Derapat 1 koloni bakteri dalam kontrol media. Pemeriksaan dapat dilanjutkan.
.' G"#-" h"sil *e#ei+s""n "n+" +u#"n *"," s"#*el !"hu G"#-"
Ke!e"n"n
Pada petridish 1;! terdapat 1/ koloni bakteri.
Pada petridish 1;!/ terdapat 1; koloni bakteri.
Pada petridish 1;! terdapat 6 koloni bakteri.
Pada petridsh 1;!2 terdapat 5 koloni bakteri.
Koloni bakteri Pada petridish 1;!3 terdapat 2 koloni bakteri. 'asilnya dicatat dan dilakukan pelaporan jika jumlah koloni antara /;!/;; koloni bakteri. @amun dari hasil praktikum ini tidak terdapat jumlah koloni antara /;!/;; koloni bakteri. . Pe#-"h"s"n#enen"i *e*""si s"#*el !"hu Sampel tahu termasuk ke dalam sampel padat, sehingga digunakan teknik preparasi
sampel dengan caramaseration )pengancuran*, saat sampel tahu yang berbentuk padat ditumbuk hingga halus dengan menggunakan mortar dan pestle, kemudian dilakukan proses dilution dengan menggunakan larutan P= )garam fisiologis* steril. Pada proses dilution mikroba yang ada di permukaan atau di dalam sampel tahu dapat terlepas kemudian akan tersuspensi pada larutan P= steril. Dujuan dilakukannya dilution terhadap sampel tahu adalah untuk melarutkan atau melepaskan mikroba dari sampel tahu ke dalam P= steril sehingga lebih mudah penanganannya. Proses dilusi )dilution* yang dilakukan pada pemeriksaan ini adalah teknik pengenceran bertingkat yang bertujuan untuk memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam larutan P= steril. 'al!hal yang perlu diperhatikan selama proses maseration dan dilution adalah a. Selalu mengunakan alat dan bahan yang steril, sebab alat yang tidak steril dapat menyebabkan sampel yang diuji terkontaminasi oleh bakteri yang berasal dari alat dan bahan yang tidak steril. 'al tersebut dapat menyebabkan hasil pemeriksaan yang tidak sesuai dengan kondisi angka kuman pada sampel yang sebenarnya. (aka dari itu, sebelum dilakukan preparasi sampel telah dilakukan proses sterilisasi alat dan bahan yang digunakan, seperti - sterilisasi ca"an petri, mortar dan pestle, tabung reaksi yang berisi larutan P=, sterilisasi pipet ukur, sterilisasi larutan media P0$ ) Plate Count Agar *. b. Praktikan tidak boleh menyentuh sampel )tahu* dengan tangan. Dujuannya dalah untuk menghindari kontaminasi oleh bakteri yang berasal dari tangan praktikan.
c. Proses maseration selalu dilakukan pada zona steril, misalnya - di dekat api spiritus yang menyala. 'al ini untuk meminimalisir kontaminasi oleh bakteri yang berasal dari udara. d. +iusahakan agar sampel yang dihancurkan harus sehalus mungkin, agar nantinya ampas sampel tahu tidak mengganggu pengamatan saat mengitung jumlah koloni yang tumbuh pada media. e. Saat membuka tabung reaksi )tempat pengenceran sampel* untuk melakukan pengenceran bertingkat harus dilakukan pada zona steril, kemudian tabung segera difiksasi saat ingin menutup tabung. .; Pe#-"h"s"n#enen"i *e#ei+s""n "n+" +u#"n *"," !"hu ,en"n #e!o,e pour plate
Pada pemeriksaan angka kuman pada tahu digunakan media P0$ sebab media ini baik untuk pertumbuhan semua jenis mikroba karena di dalamnya mengandung komposisi casein enzymic hydrolisate yang menyediakan asam amino dan substansi nitrogen komplek lainnya serta ekstrak yeast mensuplai :itamin B kompleks yang dibutuhkan oleh bakteri. Pada pemeriksaan angka kuman sampel tahu digunakan metode pour plate sebab tidak semua bakteri dapat tumbuh pada permukaan media, ada pula bakteri yang tumbuh pada bagian tengah media, sehingga media pour plate adalah yang paling cocok digunakan, sebab sampel yang terdiri dari suspensi bakteri pada tahu dapat menyebar pada seluruh bagian media. 'al!hal yang perlu diperhatikan saat pemeriksaan angka kuman dengan metode pour plate adalah a. (edia P0$ yang digunakan harus masih dalam keadaan cair )belum membeku* agar dapat dilakukan homogenisasi campuran media dan sampel. b. (edia P0$ yang belum membeku dituang pada ca"an petri pada suhu 2!2;?0 setelah penuangan sampel pada ca"an petri. 'al tersebut bertujuan untuk memperkecil kontaminasi oleh air kondensasi yang dapat timbul apabila media dituang pada suhu yang sangat tinggi. c. 'omogenisasi campuran media dan sampel pada ca"an petri harus dilakukan secara perlahan dan jangan terlalu lama, sebab jika media telah setengah padat, hal tersebut dapat merusak penampilan8bentuk permukaan media.
.< Pe#-"h"s"n h"sil *ehi!un"n 3u#l"h +oloni -"+!ei *e 7"="n *e!i
Pada perhitungan angka kuman pada media kontrol ditemukan 1 buah koloni kuman dengan bentuk bulat dan ber"arna putih yang tumbuh pada permukaan media.(edia kontrol yang terdiri dari campuran media P0$ dan P= )garam fisiologis*
steril tanpa diberi suspensi sampel )tahu*, seharusnya tidak ditumbuhi koloni bakteri, karena alat dan bahan yang digunakan sudah disterilisasi. 'al!hal yang menyebabkan tumbuhnya koloni kuman pada media kontrol adalah a. Kurangnya proses sterilisasi alat )ca"an petri dan pipet ukur* b. Kurang optimalnya proses sterilisasi pada media P0$ dan larutan P= yang dibuat, sehingga bahan!bahan tersebut tidak dalam keadaan steril c. Kontaminasi oleh bakteri di udara akibat proses isolasi bakteri yang tidak dilakukan pada zona steril. Pada media P0$ yang ditanami sampel tahu )hasil pengenceran bertingkat*, koloni yang tumbuh pada masing!masing ca"an petri berjumlah kurang dari /; koloni, maka tidak perlu dilakukan perhitungan angka kuman per m9, sampel tahu yang diuji dapat dinyatakan layak untuk dikonsumsi karena memenuhi persyaratan kualitas bahan makanan secara bakteriologis.Semakin tinggi faktor pengenceran sampel, jumlah koloni yang tumbuh pada media P0$ adalah semakin sedikit.Ctu berarti hasil yang didapat tidak menyimpang, dalam arti tidak terdapat kesalahan dalam teknik isolasi, karena telah sesuai dengan dasar teori yaitu pengenceran berikutnya mengandung sel mikroorganisme yang lebih sedikit dibandingkan dengan pengenceran sebelumnya. 'al!hal yang perlu diperhatikan saat melakukan perhitungan jumlah koloni yang tumbuh pada media, yaitu harus dibedakan antara bentuk yang termasuk koloni bakteri dan bentuk yang termasuk ampas tahu, terutama pada pengenceran 1; !1 dimana ampas tahu masih sangat banyak terlihat.
BAB PENUTUP
;.&. Kesi#*ul"n
+ari praktikum yang telah dilakukan, dapat disimpulkan bah"a 1. Pengolahan sampel pada pemeriksaan angka kuman pada makanan dan minuman dilakukan dengan menggerus sampel tahu dengan mortar dan pastel kemudian dilarutkan dengan Pz steril. . Dujuan dari pengenceran sampel pada pemeriksaan angka kuman untuk memperkecil atau mengurangi jumlah mikroba yang tersuspensi dalam larutan P= steril. /. 'al!hal yang perlu diperhatikan dalam pengolahan sampel untuk pemeriksaan angka kuman Selalu mengunakan alat dan bahan yang steril, sebab alat yang tidak steril dapat menyebabkan sampel yang diuji terkontaminasi oleh bakteri yang berasal dari alat dan bahan yang tidak steril, praktikan tidak boleh menyentuh sampel dengan tangan, proses maseration selalu dilakukan pada zona steril, misalnya - di dekat api spiritus yang menyala, diusahakan agar sampel yang dihancurkan harus sehalus mungkin, agar nantinya ampas sampel tahu tidak mengganggu pengamatan saat mengitung jumlah koloni yang tumbuh pada media, saat membuka tabung reaksi )tempat pengenceran sampel* untuk melakukan pengenceran bertingkat harus dilakukan pada zona steril, kemudian tabung segera difiksasi saat ingin menutup tabung. . Deknik penanaman sampel pada media P0$ untuk pemeriksaan angka kuman pada makanan dan minuman dilakukan dengan menanam sampel berdasarkan teknik pengenceran bertingkat. 2. Lang perlu diperhatikan dalam penanaman sampel pada media (edia P0$ yang digunakan harus masih dalam keadaan cair )belum membeku* agar dapat dilakukan homogenisasi campuran media dan sampel. (edia P0$ yang belum membeku dituang
pada ca"an petri pada suhu 2!2;?0 setelah penuangan sampel pada ca"an petri. 'al tersebut bertujuan untuk memperkecil kontaminasi oleh air kondensasi yang dapat timbul apabila media dituang pada suhu yang sangat tinggi. 'omogenisasi campuran media dan sampel pada ca"an petri harus dilakukan secara perlahan dan jangan terlalu lama, sebab jika media telah setengah padat, hal tersebut dapat merusak penampilan8bentuk permukaan media. 3. Deknik perhitungan koloni kuman pada media dilakukan secara :isual dengan menghitung jumlah koloni yang terlihat. 5. 0ara menentukan angka kuman pada makanan dan minuman melalui jumlah koloni yang ada dilakukan dengan mengamati kumpulan koloni dimana kumpulan koloni tersebut berbentuk bulat sempurna dan muncul kepermukaan. 6. 'al!hal yang perlu diperhatikan dalam menghitung koloni kuman serta penentuan angka kuman dalam makanan dan minuman yaitu harus dibedakan antara bentuk yang termasuk koloni bakteri dan bentuk yang termasuk ampas tahu, terutama pada pengenceran 1;!1 dimana ampas tahu masih sangat banyak terlihat. ;.. S""n
(ungkin inilah yang dapat di"acanakan pada laporan kelompok ini meskipun penulisan laporan ini jauh dari kata sempurna minimal kita mengimplementasikan tulisan ini. (asih banyak kesalahan dari penulisan kelompok kami, karena kami manusia yang tidak luput dari kesalahn dan kami juga butuh saran8 kritikan agar bisa menjadi moti:asi untuk masa depan yang lebih baik daripada masa sebelumnya. Kami juga mengucapkan terima kasih atas dosen pembimbing mata kuliah Bakteriologiyang telah memberi kami tugas kelompok demi kebaikan diri kita sendiri dan untuk negara dan bangsa.
DA5TAR PUSTAKA
1. $frianti 9'. ;;. 0ara menga"etkan makanan. http-88""".pikiranrakyat.com8cetak8;/;828cakra"ala8lainnya;.htm. +iakses tanggal 12 4uni ;1/ . $khiarif. ;11. +efinisi mikroorganisme. http-88id.sh:oong.com8"riting!and! speaking811723!definisi!mikroorganisme8MiGzz1(f(ootton. 1765. Ilmu Pangan. Penerjemah'ari Purnomo dan $diono. 4akarta- &ni:ersitas Cndonesia Press. 2. +"idjoseputro. ;;2. Dasar-Dasar Mikroiologi. 4akarta- +jambatan. 3.
11. >idodo L. ;;. 'ubungan Dingkat Pengetahuan Penjamah (akanan (engenai 'ygiene +an Sanitasi (akanan +engan Kualitas Bakteriologis (akanan Pada umah (akan +i Kota (agelang NskripsiO- ijayanti . ;11. Kerusakan bahan pangan. http-88foodsciencetech3."ordpress.com8;118;188kerusakan!bahan!pangan8. +iakses tanggal 12 4uni ;1/ 1/. >inarno, ;;. !imia Pangan Dan 'i(i. 4akarta- PD. ramedia Pustaka &tama. 1. Ludhabuntara +. ;1;. Pengendalian mikroorganisme dalam bahan pangan. http-88milkordie.blogspot.com8;;68;28pengendalian!mikroorganisme!dalam! bahan.html. +iakses tanggal 12 4uni ;1/
