ALT (Angka Lempeng Total) ALT TPC (Total Plate Count)
Tujuan
Menghitung jumlah koloni bakteri pada suatu bahan pangan Mengetahui mutu mikrobiologis suatu bahan pangan
Prinsip
Jika mikroorganisme ditumbuhkan pada suatu media agar, maka mikroorganisme tersebut akan tumbuh dan berkembang biak dengan membentuk koloni yang dapat dilihat langsung dengan mata serta dapat dihitung jumlahnya.
Metode agar a!an merupakan ara yang paling sensiti" untuk menentukan jumlah mikroorganisme karena beberapa hal# $. %anya sel yang masih hidup yang dihitung &. 'eberapa jenis mikroorganisme dapat dihitung sekaligus . apat digunakan untuk mengisolasi dan mengidenti"ikasi mikroorganisme karena
'eberapa kelemahan metode agar a!an
%asil perhitungan mungkin tidak menunjukkan hasil $ yang sebenarnya Media dan kondisi inkubasi yang berbeda mungkin menghasilkan nilai yang berbeda Mikroorganisme yang ditumbuhkan harus dapat tumbuh pada media padat dan membentuk koloni yang kompak, jelas dan tidak menyebar Membutuhkan persiapan dan !aktu inkubasi yang relati" lama
Penentuan ALT dapat dilakukan dengan & ara #
Metode agar a!an tuang ( pour plate) yaitu memasukkan ontoh terlebih dulu, kemudian menambahkan media agar Metode agar a!an sebar ( spread plate) yaitu memasukkan terlebih dulu media agar ke dalam a!an petri, setelah agar membeku ontoh diratakan pada permukaan agar dengan menggunakan batang gelas bengkok
Peralatan
Timbangan dengan ketelitian *.***$ gram Autola+e nkubator Ca!an petri 'otol pengener - tabung reaksi 'lender yang dapat disterilkan - stomaher stomaher Pipet 'atang gelas bengkok Alat penghitung koloni
Media dan pengener
Media # Plate Count Agar Pengener # Larutan 'utter"ield/s Phosphate atau Larutan 0aCl *,123 atau Larutan Pepton *,$3
Preparasi ontoh
'erat ontoh yang akan diuji diambil dengan ketentuan sebagai berikut # Contoh dengan berat < $ $ kg # ontoh diambil seara aak dan dipotong keilkeil hingga beratnya menapai $** gram Contoh dengan berat $ 4 5,2 kg # ontoh diambil seara aak dan dipotong keilkeil hingga beratnya menapai ** gram. Contoh dengan berat > 5,2 5,2 kg # ontoh diambil dan dipotong keilkeil hingga beratnya menapai 2** gram
Prosedur Timbang &2 g ontoh, tambahkan &&2 ml pengener, hanurkan dengan blender atau stomaher > pengeneran $* $ Ambil $ ml larutan dengan pengeneran $* $, masukkan ke dalam 6 ml pengener > pengeneran $* & Pipet $ ml dari setiap pengeneran yang dikehendaki, masukkan ke dalam a!an petri steril, tuangi dengan $& 4 $2 ml ml PCA, putarputar supaya rata 7etelah beku, balik, inkubasikan pada suhu 2 ±$oC selama 51 ± & & jam
Pembaaan dan perhitungan koloni pada a!an petri. Ca!an dengan jumlah koloni &2 4 &2* dan bebas
spreader # atat pengeneran yang digunakan dan hitung jumlah koloni. 8ntuk perhitungan koloni yang menggunakan metode agar a!an sebar, jumlah koloni yang dihitung dikalikan $*, kemudian dikalikan pengeneran yang digunakan. Ca!an dengan jumlah koloni > &2* &2* # bila jumlah koloni pada setiap a!an > &2* &2* pada seluruh pengeneran maka laporkan hasilnya sebagai jumlah tak terhingga atau T'8 (tak bisa untuk dihitung). Ca!an tanpa koloni atau < &2 &2 # bila a!an dari semua pengeneran tidak menghasilkan koloni atau < &2, &2, lapor kan jumlah nya < &2 &2 dikalikan pengeneran terendah yang digunakan.
Pelaporan
8ntuk menghasilkan perhitungan yang akurat dan teliti, maka laporkan hasilnya dengan dua angka (digit) pertama sebagai hasil pembulatan. 'ulatkan keatas dengan ara menaikkan angka kedua menjadi angka yang lebih tinggi bila angka ketiga adalah 9, :, 1 dan 6 dan gunakan angka * untuk masingmasing angka berikutnya. 'ulatkan ke ba!ah bila angka ketiga adalah $, &, dan 5. 'ila angka ketiga 2, bulatkan keatas. 'ila angka kedua ganjil bulatkan keatas dan bulatkan keba!ah bila angka kedua genap. Contoh # %asil perhitungan ALT $*. 9** $$.*** $*. 5** $*.*** $. 2** $5.*** $&. 2** $&.***
Jumlah koloni
&59 dan &1
;umus # Σ
0 <
5 dan &6
Contoh Perhitungan Pengeneran Jumlah koloni 0<
< < <
$ # $** &59 dan &1
(&59?&1?5?&6) =($>&) ? (*,$>&)@ > $* .& 25: # *,*&& &5.19 &2.***
$ # $*** 5 dan &6
