LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA SEMESTER GENAP 2015 – 2016
ANALISIS KUALITATIF KUALITATIF PROTEIN (XANTOPROTEIN) DAN ANALISIS KUANTITATIF KADAR PROTEIN TOTAL (METODE BIURET)
Hari / Jam Praktikum
: Senin / 13.00-16.00 WIB
Tanggal Praktikum
: 6 April 2016
el!mp!k
:"
A#i#ten
: 1. Al#$a %tami &a'a$u 2. (ulina (ulina Saragi'
LABORATORIUM BIOKIMIA FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS PADJADJARAN JATINANGOR
2016 I.
II.
TUJUAN 1.1. )engi*enti+ika#i pr!tein pa*a #uatu #ampel menggunakan pereak#i ,ant!pr!tein. 1.2. )enentukan ka*ar pr!tein *ari #uatu #ampel menggunakan ui iuret. PRINSIP 2.1. Anali#i# ualitati+ Anali# Anali#i# i# kualita kualitati+ ti+ merupa merupakan kan anali#i anali#i## untuk untuk melaku melakukan kan i*enti+ i*enti+ika ika#i #i
elemen #pe#ie# *an/atau #en$aa #en$aa $ang a*a *i *alam #ampel an*ar *an A*ul 2012. 2.2. Pereak#i 4ant!pr!teat Pereak#i ,ant!pr!teat a*ala' reagen $ang *igunakan *alam #ala' #atu met!* et!*ee peng peng'i 'itu tung ngan an uml umla' a' pr!t pr!tei ein n $ang $ang a*a a*a *i *ala *alam m laru laruta tan n menggunakan a#am nitrat 5'atterea 200. 2.3. Anali#i# uantitati+ Anali#i# kuantitati+ a*ala' pen$eli*ikan kimia mengenai ka*ar un#ur atau #en$aa i!n $ang ter*apat *alam #uatu 7at tunggal/8ampuran Sukar*! 19". 2.. )et!*e Biuret )et!*e iuret *i*a#arkan pa*a k!mplek#i#a#i i!n 5u 2; ter'a*ap gugu# +ung#i!nal pa*a ikatan pepti*e pr!tein epp$ an* )i8'ael 2009. 2.". !l!rimetri !l!ri !l!rimet metri ri a*ala' a*ala' met!*e met!*e peran peran*in *ingan gan menggu menggunak nakan an pere* pere*aan aan arn arna. a. )et! )et!*e *e k!l! k!l!ri rime metr trii
meng menguk ukur ur arn arnaa
peran*ingan Ba##ett *kk. 1991. 1991.
#uat #uatu u
7at 7at
#ea #eaga gaii
III.
REAKSI 3.1. Sampel ; H<= 3
Sun*in 200. 3.2. Sampel ;
Sun*in 200. 3.3. Sampel ; Pereak#i Biuret
Sun*in 200.
IV.
TEORI DASAR
ata pr!tein era#al *ari pr!t!# at au pr!te!# $ang erarti pertama atau utama. Pr!tein iala' ikatan pepti*a $aitu tera*i antara at!m 5 *ari gugu# > 5==H *engan at!m < *ari gugu#
pementuk tuu' kita maka pr!tein $ang ter*apat *alam
makanan er+ung#i #eagai 7at utama *alam pementukan *an pertumu'an tuu'. ita memper!le' pr!tein *ari makanan $ang era#al *ari 'ean atau tumu'an. Pr!tein $ang
era#al *ari 'ean *i#eut pr!tein 'eani
#e*angkan $ang era#al *ari tumu'an *i#eut pr!tein naati. Beerapa makanan #umer pr!tein a*ala' *aging telur #u#u ikan era# ka8ang ke*elai gan*um agung *an ua'-ua'an P!e*ia*i 199. Ber*a#arkan m!lekuln$a *ig!l!ngkan mena*i *ua $aitu pr!tein gl!ular *an pr!tein +ir!#a. Pa*a pr!tein gl!ular mempun$ai entuk ulat atau 'ampir ulat atau 'ampir ulat *an entuk m!lekul umumn$a mu*a' *itentukan. ?arut *alam larutan garam a#am a#a atau alk!'!l. 5!nt!'n$a antara lain alumin gl!ulin pr!te!n7im pr!te!'!rm!n. Pa*a pr!tein +ir!#a mempun$ai entuk memanang entuk am!rp'!u# *an entuk m!lekul #ukar *itentukan *an ti*ak larut *alam larutan garam a#am a#a *an alk!'!l. 5!nt!'n$a antara lain keratin *an ramut @ir!in *an #utra !lagen *an tulang Almat#ier 2001. A*a eerapa met!*e penguian pr!tein $aitu: 1. %i Biuret a*ala' #ala' #atu 8ara penguian $ang memerikan 'a#il p!#iti+ pa*a #en$aa-#en$aa $ang memiliki ikatan pepti*a. Penguiann$a *apat *ilakukan *engan 8ara erikut. ?arutan $ang mengan*ung pr!tein *itete#i larutan
ter'a*ap 8in8in en7ena. Jika *ipana#kan arna puti' ter#eut akan erua' mena*i kuning. 3. %i )ill!n Penguian ini memerikan 'a#il p!#iti+ ter'a*a pr!tein $ang mengan*ung a#am amin! $ang memiliki gugu# +en!l mi#aln$a tir!#in. Pereak#i )ill!n ter*iri ata#a larutan merkur! nitrat *an merkuri nitrat *alam a#am nitrat. Pr!tein *engan pereak#i )ill!n akan mementuk en*apan puti'. Jika *ipana#kan arnan$a erua' mena*i mera' ?e'ninger192. Pemagian tingkat !rgani#a#i pr!tein a*a empat $aitu: #truktur primer $aitu ikatan antar a#am amin! 'an$a ikatan pepti*a ikatan k!alen pa*a #truktur #ekun*er *imana rantai a#am amin! ukan 'an$a *i'uungkan !le' ikatan pepti*a tetapi uga *iperkuat !le' ikatan 'i*r!gen *an pa*a #truktur ter#ier terentuk karena tera*in$a p!lipepti*a +!l*ing *an $ang tera'ir pa*a #truktur kuartener uga terentuk ter#ier *an i#a ter*iri *ari pr!meter $ang #ama atau erlainan epp$ an* )i8'ael 2009. )elalui reak#i 'i*r!li#i# pr!tein tela' *i *apatkan 20 ma8am a#am amin! $ang *iagi er*a#arkan gugu# &-n$a erikut *iaarkan pengg!l!ngan ter#eut. A#am amin! n!np!lar *engan gugu# & $ang *i'i*r!+!lik antra lain: alanin alin leu#in i#!leu#in pr!lin +enilalanin tript!+an *an meti!nin. A#am amin! p!lar tanpa muatan pa*a gugu# & $ang erangg!takan: li#in #erin tre!nin #i#tein trir!#in a#paragin *an glutamin Sama*i 2012. a#ein a*ala' pr!tein $ang paling an$ak ter#e*ia *i #u#u. Pr!tein ini relati+ ti*ak i#a larut lamat *i8erna *an 8en*erung mementuk #truktur $ang *i#eut mi#el $ang meningkatkan kelarutann$a *i air. Pr!tein *alam #u#u ter*iriata# 0 ka#ein *an 20 'e$ )art!'ar#!n! 19C". a#ein terma#uk eni# p'!#p!r pr!tein ter*iri *ari eerapa unit a#am amin! $ang terikat *engan ikatan pepti*a. a#ein *i*alam #u#u merupakan partikel
$ang
e#ar.
!rganikmelainkan
Di*alamn$a mengan*ung
ti*ak
'an$a
7at-7at
ter*iri
*ari
an!rganik
7at-7at #eperti
kal#iump'!#p'!r*an magne#ium )art!'ar#!n! 19C". a#ein a*ala' pr!tein $ang k'u#u# ter*apat *alam #u#u. Dalam kea*aan murni ka#ein erarna puti' #eperti #alu ti*ak erau *an ti*ak mempun$ai
ra#a $ang k'a#. a#ein *apat *ien*apkan !le' a#am en7imerenner *an alk!'!l. =le' karena itu ka#ein *alam #u#u *apat *ik!agula#ikan atau *igumpalkan !le' a#am $ang terentuk *i*alam #u#u #eagai aktiita# *ari mikr!a. a#ein terma#uk enu# p'!#p!pr!teinter*iri *ari eerapa unit a#am amin! $ang terikat *engan ikatan pepti*a )art!'ar#!n! 19C". a#ein merupakan pr!tein $ang #tail ter'a*ap pemana#an *an ti*ak mengalami *enatura#i ila air #u#u *ipana#kan. a#ein *i *alam air merupakan m!lekul e#ar $ang ter*iri *ari 7at-7at an!rganik #eperti kal#ium +!#+!r *an #e*ikit magne#ium #erta #itrat. a#ein merupakan #uatu mi#el $ang mengan*ung kal#ium *an +!#+at $ang mementuk kal#ium ka#einat p'!#p'ata#e k!mplek#. Titik i#!elektri# ka#ein pH 6 > "0 *an pa*a titik ini ka#ein mu*a' #ekali mengen*ap. a#ein *apat pula mengen*ap *engan naikn$a kea#aman perua'an 5a *an P $ang larut mena*i mena*i ti*ak larut *an tera*in$a interak#i antara pr!tein $ang a*a. Anar 199. W!rtel merupakan tanaman *enganetakar!ten terka$a un#ur $ang mampu melin*ungi tuu' *ari keru#akan #el. Sementara itamin A *alam !rtel memantu menaga ke#e'atan mata kulit *an ramut #erta memperaiki #$#tem imun tuu'. al#iumn$a menaga ke#e'atan tulang *an gigi *an memantu kera eragai !t!t *an #ara+ Pertii *an Ari+ 200C.
Tael an*ungan
V.
ALAT DAN BAHAN 5.1. A!" Alat $ang *igunakan pa*a praktikum ini a*ala' ul eaker gla##
gela# ukur penanga# air penepit ka$u pipet tete# pipet ukur rak taung reak#i #pektr!+!t!meter %E-Ei# *an taung reak#i. 5.2. B!#!$ Ba'an $ang *igunakan pa*a praktikum kali ini a*ala' larutan aFua*e# ka#ein I larutan 5uS= 0" larutan H<=3 pekat larutan #ampel larutan
B' .8ae#arer$.8!m
B*!+* G!,, la#upplie#u#a.8!m
G*!, U+ #inarkimia.8!m
P*$!$-!, A .in*!tek'n!plu#.8!m
P*$/*" K! !neme*'ealt'8are.8!m
P*" T*"*, .ap!tikpintar.8!m
VI.
P*" U+ a#akalira#i.net
R!+ T!'$- R*!+, .!galaare.8!m
S*+"3"&*"* UV4V, .in*!tek'n!plu#.8!m
T!'$- R*!+, .al+akimia.8!m
PROSEDUR 6.1. P*!!, ,!&*
Sampel erupa !rtel *ip!t!ng mena*i agian agian $ang ke8il. P!t!ngan !rtel *itimang #eerat 100 mg. W!rtel 100 mg *ilen*er *engan *itama'kan
Sampel #ean$ak 1
ml
*i*apatkan *i*alam taung
reak#i
*itama'kan H<=3 3 tete#. Dipana#kan *alam penanga# air $ang #u*a' men*i*i'. Sampel *iiarkan pa*a #u'u ruangan #ampai #u'u n!rmal. Ditama'kan
1"0 mg 5uS= . "H2= *an 600 mg
a#ein *itimang 10 mg lalu *ilarutkan *alam aFua*e# #ean$ak 10 ml pa*a lau ukur. Dima#ukkan aFua*e# #ean$ak "0 Gl pa*a k!l!m 1 *an 2. a#ein *iamil "0 Gl *ima#ukkan ke*alam k!l!m B1 *an B2. )elakukan pengen8eran *engan *iamil "0 Gl *ari k!l!m B1 *an B2 *an *ima#ukkan ke *alam k!l!m 51 *an 52. Dilakukan pengen8eran ertingkat 'ingga k!l!m H1 *a H2. Ditama'kan iuret #ean$ak 1"0 Gl ke*alam tiap k!l!m. Diinkua#i #elama 30 menit pa*a #u'u ruangan. Diamati
a#!ran#in$a
pa*a
gel!mang "30 nm.
Dili'at
*ata
a#!ran#in$a. ?alu *iuat kura aku *an regre#i linearn$a. Sampel $ang #u*a' *i#entri+uga#i #ean$ak " ml *ima#ukkan ke*alam lau ukur 100 ml. ?alu *itama'kan aFua*e# 'ingga ata# !lume lau ukur. Dima#ukkan aFua*e# #ean$ak "0 Gl pa*a k!l!m 1 2 *an 3. Sampel *iamil "0 Gl *ima#ukkan ke*alam k!l!m 1 2 *an 3. Ditama'kan iuret #ean$ak 1"0 Gl ke*alam tiap k!l!m. Diinkua#i #elama 30 menit pa*a #u'u ruangan. Diamati a#!ran#in$a pa*a gel!mang "30
nm.
Dili'at *ata a#!ran#in$a.?alu *itentukan
k!n#entra#i pr!tein. VII.
DATA PENGAMATAN .1. D!"! P*$-!&!"!$ K!"!"3
Perlakuan )emipet 1 ml #ampel
Ha#il Di*apatkan 1 ml #ampel
menggunakan pipet !lum.
*i*alam piper !lum.
@!t!
2.
)ema#ukkan
#ampel
ke*alam taung reak#i.
3.
)enam'ankan
3
Di*apatkan
*i*alam taung reak#i.
tete#
larutan H<=3 pekat.
Di*apatkan
air
*engan
eaker gla##.
".
6.
ter8ampur
H<=3
larutan )emana#kan
#ampel
$ang tela' *engan
.
#ampel
*an
ter*apat
en*apan puti'. Di*apatkan air
pana#
*i*alam eaker gla##.
)ema#ukkan taung reak#i Di*apatkan
#ampek
ke*alam eaker gla##.
erarna kuning.
)en*inginkan
Di*apatkan
#ampel
#ampel
*i*alam eaker gla## $ang *engan #u'u ruangan. eri#i air.
C.
)enete#kan
Di*apatkan
#ean$ak 10 tete# ke*alam erarna taung reak#i.
#ampel kuning
tua
*an en*apan !ran$e.
.2. D!"! P*$-!&!"!$ K!$""!"3
Perlakuan
Ha#il
@!t!
1.
)emipet
"
ml
#ampel
Di*apatkan
#ampel
*i*alam pipet !lum.
menggunakan pipet !lum. 2.
)ema#ukkan
Di*apatkan
#ampel
ke*alam lau ukur *i*alam lau ukur 100
3.
.
100 ml.
ml.
)enama'kan
Di*apatkan #ampel $ang
aFua*e#
tela'
'ingga
*ien8erkan
tan*a ata#.
#ean$ak 100 ml.
)engi#i mikr!plate
Di*apatkan "0Gl aFua*e#
*engan
"0Gl pa*a mikr!plate k!l!m
aFua*e# pa*a k!l!m
123.
12 *an 3. ".
)enama'kan "0Gl #ampel
B2 B3.
)engen8erkan mengamil
*an "0Gl
kemu*ian
515253.
Di*apatkan #ean$ak "0G 51 52 53.
mema#ukkan ke*alam
#ampel
ke*alam #ean$ak "0Gl pa*a B1
B1B2B3.
6.
Di*apatkan
k!l!m
#ampel *ik!l!m
C.
)elakukan
Di*apatkan
pengen8eran
$ang #emakin ke8il.
ertingkat k!!m .
k!n#entra#i
'ingga
H1H3
*an
H3. )enama'kan iuret
Di*apatkan
iuret
#ean$ak #ean$ak 1"0Gl pa*a tiap
1"0Gl ke*alam tiap
k!l!m .
k!l!m . 9.
)elakukan inkua#i #elama
30
menit ereak#i *engan iuret.
pa*a #u'u ruangan. 10. )engganti a#!ran#i
Di*apatkan #ampel $ang
Di*apatkan *ata erupa
*engan angka.
panang gel!mang "30 nm. 11.
)engi#i mikr!plate *engan
Di*apatkan "0Gl aFua*e#
"0Gl pa*a mikr!plate.
aFua*e# pa*a k!l!m 1 *an 2. 12.
13.
)enama'kan "0Gl
Di*apatkan
ka#ein pa*a k!l!m
#ean$ak "0Gl pa*a B1
B1 *an B2.
*an B2.
)engen8erkan mengamil ka#ein
*an "0Gl
ke*alam k!l!m 51
#ampel
#ean$ak "0Gl *ik!l!m
kemu*ian 51 *an 52.
mema#ukkan
*an 52.
Di*apatkan
#ampel
1.
)elakukan
Di*apatkan
pengen8eran
$ang #emakin ke8il.
ertingkat
k!n#entra#i
'ingga
k!l!m H1 *an H2. 1".
)enama'kan iuret
16.
Di*apatkan
iuret
#ean$ak #ean$ak 1"0 Gl pa*a tiap
1"0Gl ke*alam tiap
k!l!m.
k!l!m. )elakukan inkua#i
Di*apatkan #ampel $ang
#elama
30
menit ereak#i *engan iuret.
pa*a #u'u ruang. 1C. )engamati a#!ran#i
Di*apatkan *ata erupa
*engan angka.
panang gel!mang "30 nm. 1.
)emuat
aku. 19. )en8ari 20.
kura
Di*apatkan kura aku.
regre#i Di*apatkan regre#i linear
linear *an & 2. )eng'itung
#ee#ar 09C9. Di*apatkan k!n#entra#i
k!n#entra#i pr!tein.
pr!tein
#ee#ar
3050,952381 µg / ml .
.%. D!"! A','!$, K!,*$
A#!ran#i
!n#entra#i 100 "0 2" 12" 62" 312" 1"62"
1 02"0 01"0 0092 0093 006 003 0091
2 010 006 011C 00 0101 010" 0106
A#!ran#i -Blank! 1 012C 00C2 001 001" -001 000" 0013
2 003 -0006 0039 001 0023 002C 002
&ata-rata a#!ran# i 00C" 00330 0026" 0012" 000" 0016 0020"
.. D!"! A','!$, S!&*
Per8!aan
A#!ran#i
1. 2. 3.
1 2 3
032 029 021
A#!ran#i
!n#entra#i
lank! 026 022 0163
Gg/ml 3C12"C1 3112"C13 229"C129
.5. K7! S"!$8!
KURVA BAKU
f(x) = 0x + 0 R² = 0.97 Linear ()
.6. P*#"$-!$
A#!ran#i Blank! 000 *an 00C6 0,080 + 0,076
&ata-rata A#!ran#i Blank!
2
=0,078
P*#"$-!$ +$,*$"!, ,!&*
$ a, ; A#!ran#i Sl!pe K ; Inter#ep 1. A#!ran#i 026 $ 00000C, ; 00021 026 00000C, ; 00021 , 3C12"C1 Gg/ml 2. A#!ran#i 022 $ 00000C, ; 00021 022 00000C, ; 00021
, 3112"C13 Gg/ml 3. A#!ran#i 0163 $ 00000C, ; 00021 0163 00000C, ; 00021 , 229"C129 Gg/ml &ata-rata ka*ar 3741,428571 + 3112,857143 + 2298,571429
VIII.
3
= 3050,952381 µg / ml
PEMBAHASAN 9.1. A$!,, K!"!"3
Pr!tein merupakan unit pen$u#un utama tuu'. Pr!tein uga merupakan #uatu p!limer $ang mempun$ai m!n!mer #uatu a#am amin!. A#am amin! #en*iri merupakan #en$aa kimia $ang mengan*ung 2 gugu# +ung#i $ang ere*a.
)aka
*ari
itu *!+, i*enti+ika#i
#uatu
pr!tein
ti*ak
au'
*ari *!+, ke*ua gugu# +ung#i ter#eut. A#am amin! merupakan unit pemangun pr!tein $ang *i'uungkan melalui ikatan pepti*a pa*a #etiap uungn$a. Pr!tein ter#u#un *ari at!m 5 H = *an < #erta ka*ang-ka*ang P *an S. Dari ke#eluru'an a#am amin! $ang ter*apat *i alam 'an$a 20 a#am amin! $ang $ang ia#a *iumpai pa*a pr!tein. Dari #truktur umumn$a a#am amin! mempun$ai *ua gugu# pa*a tiap m!lekuln$a $aitu gugu# amin! *an gugu# kar!k#il $ang *igamarkan #eagai #truktur i!n *ip!lar. ugu# amin! *an gugu# kar!k#il pa*a a#am amin! menunukkan #i+at-#i+at #pe#i+ikn$a. Anali#i# pr!tein kali ini menggunakan te#t ,ant!pr!tein $ang pa*a *a#arn$a te#t ini memiliki tuuan $ang #ama $aitu untuk menganali#i# pr!tein $ang a*a pa*a #ampel $ang *i amati #ampel $ang *igunakan $aitu !rtel. %ntuk
anali#i#
pr!tein
$ang
pertama
kami
menggunakan
met!*e
,ant'!pr!tein. Pa*a ui kualitati+ *ilakukan penama'an a#am a#etat 1 < lalu *ia*uk '!m!gen *an *i*iamkan #elama 10 menit. Penga*ukan ini ertuuan agar a#am a#etat *apat ter*i#triu#i #e8ara merata *alam #ampel *an pen*iaman
ertuuan agar penge*apan *apat erlang#ung #e8ara mak#imal. Penama'an a#am mengakiatkan penama'an i!n H ; $ang kemu*ian akan menga*akan reak#i *engan muatan negati+ pr!tein $ang era#al *ari gugu# 'ir!k#il ea#n$a Semakin an$ak k!n#entra#i H ; $ang *itama'kan maka #emakin an$ak pula penurunan pH *ari #u#u #e'ingga titik i#!elektrikn$a #emakin *ekat #e'ingga akan menetralkan pr!tein *an menuu ter8apain$a pH i#!elektrik. Titik i#!elektri# a*ala' #aat *imana pa*a pH ter#eut a#am amin! era*a pa*a entuk 7itter i!n *an pa*a #aat titik i#!elektri# ini kelarutan pr!tein menurun *an men8apai angka teren*a' *an akan men$eakan pr!tein mengen*ap *an menggumpal. Pa*a #aat titik i#!elektri# ini umla' kati!n *an ani!n $ang terentuk #ama an$akn$a. Pa*a titik i#!elektri# ini ka#ein er#i+at 'i*r!+!ik ka#ein akan erikatan antar muatann$a #en*iri mementuk lipatan ke *alam #e'ingga tera*i pengen*apan $ang relati+ 8epat. Titik i#!elektri# ka#ein pH 6 > "0 *an pa*a titik ini ka#ein mu*a' #ekali mengen*ap. Dalam k!n*i#i a#am atau pH $ang ren*a' ka#ein akan mengen*ap karena memiliki kelarutan $ang ren*a' pa*a k!n*i#i a#am. Penama'an a#am *apat meng'ilangkan muatan li#trik *ari partikel ka#ein karena a#am akan mengikat kal#ium *an kal#ium ka#einat #e'ingga ka#ein mena*i terlepa# *an terentuk en*apan. Pertama kita melakukan peng'an8uran pa*a #ample. Sample *ima#ukkan #ean$ak 1ml ke*alam taung reak#i. Sampel *itama'kan 3 tete# H<=3 pekat. ?alu *i k!8!k *an 'a#iln$a $aitu a*an$a en*apan erarna kuning *i *in*ing taung reak#i namun ti*ak terlalu kuning karena kan*ungan pr!tein *alam !rtel ren*a'. Hal ini karena pr!tein mengalami *enatura#i *engan *engan 8ara nitrita#i pa*a gugu# ar!matikn$a. Selain itu uga a#am uga merua' #truktur pr!tein *engan 8ara memerikan H; pa*a gugu# ><;H2-. &eak#i ini p!#iti+ untuk pr!tein $ang mengan*ung tir!#in +enilalanin *an tript!+an. Warna $ang terentuk *alam ui ini *i#eakan !le' nitra#i inti en7ene !le' a#am nitrat pekat. Pa*a ui ,'ant'r!pr!tein umumn$a apaila mengan*ung pr!tein tinggi erua' arna mena*i kuning pekat *an pa*a ui a#am a#a ter*apat en*apan. Ber*a#arkan
'a#il pengamatan perua'an arna $ang tera*i pa*a larutan #ampel #emuan$a erarna pu*ar *an tera*in$a en*apan lama *ikarenakan ka*ar pr!tein *i *alamn$a #angat ren*a'.
&eak#i antara tir!#in *engan a#am nitrat pekat Tuuan *ari penama'an H<=3 a*ala' untuk mereak#ikan #ampel agar tera*i perua'an arna. Ha#il $ang terentuk erupa k!mplek# arna kuning *engan #e*ikit en*apan arna kuning pula #etela' *ipana#kan #ampel ter#eut mena*i larutan kuning. Setela' mengalami pemana#an larutan $ang mulan$a memiliki arna kuning *engan #e*ikit gumpalan/en*apan arnan$a mena*i #emakin kuning *an #e*ikit en*apan $ang a*a kemu*ian larut mena*i larutan. Warna larutan mena*i #emakin kuning #etela' *ipana#kan *i#eakan karena pr!#e# pemana#an $ang mena*ikan reak#i nitrita#i #emakin 8epat *an #empurna #e'ingga nitrita#i pa*a gugu# ar!matikn$a #emakin an$ak. Pr!tein $ang mengan*ung re#i*u a#am amin! *engan ra*ikal +enil *alam #truktur kimian$a pr!tein $ang mengan*ung a#am amin! +enilalanin atau tir!#in ika *itama'kan *engan a#am nitrat pekat akan terentuk gumpalan arna puti'. Pa*a pemana#an arna gumpalan puti' ter#eut akan erua' mena*i kuning $ang ak'irn$a erua' mena*i ingga ika *itama' *engan larutan a#a. Seenarn$a pr!#e# ini a*ala' pr!#e# nitra#i inti en7ene pa*a a#am amin! pen$u#un pr!tein ter#eut. Pr!#e# ini *apat tera*i ika kulit terkena a#am nitrat pekat $ang #egera mena*i kuning karena tera*in$a pr!#e# nitra#i inti en7ene pa*a a#am amin! pen$u#un kulit. Sumar*! 19C. Pr!tein er#i+at ti*ak #tail *an mempun$ai #i+at *apat erua' *enatura#i *engan erua'n$a k!n*i#i lingkungan. Apaila larutan pr!tein ter#eut *ia#amkan 'ingga
men8apai pH "-" maka
akan tera*i
pengen*apan atau #alting !ut. Sealikn$a apaila *ipana#kan #eperti *alam pema#akan atau pengg!rengan pr!tein menggumpal atau terk!agula#i. Pr!tein uga *apat mengalami *enatura#i apaila *ilakukan pengurangan kan*ungan air aik #elama pengeringan maupun pemekuan. Denatura#i *apat *iartikan #uatu pr!#e# terpe8a'n$a ikatan Hi*r!gen interak#i 'i*r!+!ik ikatan garam *an terukan$a lipatan atau in m!lekul. A*a *ua ma8am *enatura#i $aitu pengemangan rantai pepti*a *an peme8a'an
pr!tein
mena*i
unit
$ang
lei'
ke8il
tanpa
*i#ertai
pengemangan m!lekul ikatan. Ikatan $ang *ipengaru'i !le' pr!#e# *enatura#i a*ala' : a.
Ikatan Hi*r!gen
.
Ikatan 'i*r!+!ik
8.
Ikatan i!nik
*.
Ikatan intram!lekuler.
Denatura#i pr!tein a*ala' m!*i+ika#i k!n+!rma#i #truktur ter#ier *an kuartener. Denatura#i #truktur merupakan +en!mena *imana terentuk k!n+!rma#i
atu
*ari
#truktur
$ang
tela'
a*a. Denatura#i
pr!tein
mengakiatkan turunn$a kelarutan 'ilangn$a aktiia# i!l!gi peningkatan i#k!#ita# *an pr!tein mu*a' *i#erang !le' en7im pr!te!litik. ita *apat memper!le' pr!tein *ari a'an makanan $ang an$ak mengan*ung pr!tein mi#aln$a pa*a 'ean terkan*ung pr!tein 'eani #e*angkan pa*a tumu'an terkan*ung pr!tein naati eerapa pr!tein $ang terkan*ung *alam makanan $aitu:
@enilalanin @enilalanin an$ak ter*apat pa*a ragi l!ak telur keu alpukat
Tir!#in Tir!#in an$ak ter*apat a$am ikan tuna
Tript!+an Tript!+an an$ak ter*apat #u#u pi#ang *aging #eperti kaming a$am *an kalkunL $!g'urt ikan telur era# mera' 9.2. A$!,, K!$""!"3
%i kuantitati+ $ang *ilakukan ertuuan untuk mengukur k!n#entra#i pr!tein t!tal $ang ter*apat pa*a #ampel. Penguian *ilakukan *engan menggunakan in#trument microplate reader *imana in#trument ini mengikuti 'ukum
?amer
Beer
#eperti
$ang
uga
ter*apat
pa*a
in#trument
#pektr!+!t!meter %E. Ber*a#arkan 'ukum ?amer Beer nilai a#!ran#i #uatu 7at akan eran*ing luru# *engan ketealan #el k!n#entra#i *an uga panang linta#an. Pa*a per8!aan kali ini ariale $ang akan *iukur a*ala' nilai k!n#entra#i $ang akan *ian*ingkan *engan a#!ran#i $ang *i*apat. Pengukuran k!n#entra#i pr!tein $ang ter*apat pa*a #ampel #eagai tuuan ak'ir *ari reak#i ini *iper!le' *engan menggunakan per#amaan $ang *i*apat *ari ui aku *an kemu*ian mengek#trap!la#ikan nilai a#!ran#i #ampel ter'a*ap gra+ik aku ataupun per#amaan aku $ang *imiliki.
Pa*a ui $ang *ilakukan *igunakan aku ka#ein #e*angkan pr!tein #ampel *i*apat *ari #upernatant 'a#il #entri+uga#i !rtel. Peran*ingan nilai a#!ran#i $ang *imiliki #ampel !rtel ter'a*ap aku ka#ein akan meng'a#ilkan kura $ang ere*a 'al ini *i#eakan a*an$a +a8t!r pr!tein pr!tein variation. @a8t!r ini menerangkan a'a #etiap pr!tein atau a#am amin! memiliki ikatan kimia $ang ere*a *engan #eua' reagen *imana pa*a ak'irn$a akan meng'a#ilkan nilai a#!ran#i $ang ere*a. =le' #ea itu *iperlukan pemili'an #tan*ar $ang #e8ara gari# e#ar memiliki #i+at $ang #ama *engan #ampel. Pa*a umumn$a 'al ini *ilakukan *engan memli' aku #tan*ar *alam 'al ini pr!tein $ang melimpa' pa*a an$ak #ampel *an memiliki eni# ikatan $ang #ama antara reagen-#ampel aku *an reagen#ampel $ang *iui.. Pa*a ui kuantitati+ *engan met!*e iuret ikatan $ang tera*i a*ala' k!mplek# k'ela#i antara i!n 5u 2; *engan ikatan pepti*e $ang *imiliki pr!tein. Hal ini menunukkan a'a ui *engan met!*e iuret men8erminkan ui $ang er#i+at umum untuk #emua eni# pr!tein #ea #emua pr!tein memiliki ikatan pepti*e antar a#am amin!n$a. =le'
karena itu pemili'an #tan*ar
ka#ein #eagai aku *i'arapakan ti*ak memengaru'i 'a#il *ari ek#trap!la#i untuk penentuan k!#entra#i pr!tein pa*a #ampel !rtel nantin$a. Prin#ip *a#ar ui iuret a*ala' pementukan k!mplek# antara reagen iuret *engan i!n 5u2;. =le' karena pr!tein memiliki ikatan pepti*e $ang mirip *engan ikatan pa*a reak#i iuret maka pr!tein uga *apat mementuk k!mplek# *engan i!n 5u2;.
Pemuatan kura #tan*ar ka#ein pa*a per8!aan kali ini menggunakan prin#ip pengen8eran ertingkat *imana pemuatan aku ka#ein untuk tiap k!n#entra#i *i tiap langka' *iper!le' *engan mengen8erkan ka#ein $ang #eelumn$a tela' *ien8erkan pa*a langka' #eelumn$a. Selanutn$a #etela' *i*apat aria#i k!n#entra#i $ang *iinginkan maka *ilakukan penama'an reagen iuret. Penama'an reagen ini 'aru# *ilakukan *engan 8epat agar reak#i $ang tera*i pa*a #ampel *alam aktu inkua#i $ang tela' *itentukan mena*i #ama atau *engan kata lain ke#empatan *alam pementukan k!mplek# untuk tiap k!n#entra#i #ampel erlang#ung *alm aktu $ang #ama. Pr!#e# inkua#i *ilakukan pa*a #u'u ruang #elama 30 menit. ?!ui# &!#en+el* pa*a ta'un 192 mengatakan a'a ui iuret *engan #u'u inkua#i $ang *inaikkan #ekitar 200 'ingga 00 'an$a akan erpengaru' ter'a*ap a#!ran#i #ee#ar 1. Di lain 'al penggunaan aria#i temperature uga memungkinkan untuk meningkatkan re#ik! ke#ala'an. Penguian
ka*ar
pr!tein
pr!tein
#ampel
*engan
reagen
iuret
menggunakan in#trumen microplate reaaer *imana panang gel!mang *iatur pa*a "30nm. Pemili'an panang gel!mang ini *i*#aarkan pa*a #uatu prin#ip arna k!mplementer *imana ika #uatu 8a'aa m!n!kr!mati# *iteru#kan pa*a #uatu a'an erarna maka #eumla' panang gel!mang *ari 8a'a$a itu akan *i#erap !le' a'an *an #i#an$a akan *itran#mi#ikan ataupun *ire+lek#ikan ke mata pengamat. Dalam 'aln$a reagen iuret arna $ang
*apat *ili'at #e8ara ka#at mata a*ala' i!let 'a#il peentukan k!mplek# k'ela#i antara reagen iuret *engan ikatan pepti*e *imana panang gel!mang $ang *imiliki arna iru a*ala' 00-30nm. Selanutn$a *engan penemankan 8a'a$a m!n!kr!mati# maka panang gel!mang mak#imal $ang *apat *ia#!r#i era*a pa*a rentan lei' kurang "60nm $ang meng'a#ilkan arna k!mplementer kuning. Selanutn$a *ilakukan pema8aan nilai a#!ran#i *engan in#truen microplate reader. Ha#il untuk a#!ran#i lank! *engan reagen iuret $aitu ernilai 0.0 *an 0.0C6. Hal ini menunukkan a'a raegen iuret *engan air lank! uga *apat menga#!r 8a'a$a $ang *ierikan. =le' karena itu untuk per'itungan nilai a#r!an#i ka#ein tanpa *ipengaru'i a#!r#i 8a'a$a $ang *ilakukan reagen iuret maka nilai a#!ran#i $ang *itunukkan untuk ka#ein *ikurangi *engan nilai a#!ran#i $ang a*a pa*a lank!. ura nilai rata-rata a#!ran#i aku ka#ein $ang *ipl!t ter'a*ap k!n#entra#i ka#ein menunukan a'a #emakin e#ar k!n#entra#i maka #emakin pula nilai a#!ran#i $ang *i'a#ilkan. Hal ini #e#uai *engan prin#ip ?amert Beer $ang uga men*a#ari per8!aan kali ini $aitu niai a#!ran#i eran*ing luru# *engan nilai k!n#entra#i.
terli'at *ari nilai inter#ep $ang *i*apat *ari per#amaan gari# luru#
kura.
inter#ep $ang *iperlukan erki#ar 0.2 #e*angkan range a#!ran#i #ampel pa*a umumn$a era*a pa*a rentang 0.2 'ingga 0.. Hal ini menunukkan a'a #ampel ka#ein terlalu en8er #e'ingga perlu *ipekatkan kemali. Ber*a#arkan ek#trap!la#i $ang *ilakukan antara nilai a#!ran#i #ampel !rtel *engan gra+ik kura aku ka#ein maka *apat *itentukan nilai k!n#entra#i pr!tein t!tal $ang ter*paat pa*a #ampel. Sampel !rtel menunukkan nilai rata-rata pr!tein t!tal #ee#ar 26.03CC Gg/ml.
IX.
KESIMPULAN 1. Pr!tein *apat *ii*enti+ika#i *engan menggunakan pereak#i ,ant!pr!tein. Sampel erupa !rtel p!#iti+ mengan*ung pr!tein. 2. a*ar pr!tein *apat *itentukan *engan menggunakan met!*e iuret. a*ar pr!tein *alam #ampel erupa !rtel a*ala' #ee#ar 3050,952381 µg / ml .
DAFTAR PUSTAKA
Almat#ier. 2003. Prinsip Dasar Ilmu Gizi. Jakarta : rame*ia. Anar 5. 199. Pengantar Praktikum Kimia Organik . Dep*iku* Diren Pen*i*ikan Tinggi: (!g$akarta. Ba##et *kk. 1991. Buku Ajar Vogel : Kimia Analisis Kuantitati Anorganik. Jakarta : e*!kteran 5. 5'atterea. 200. !e"t#ook o Bioc$emistr% or Dental& 'ursing& P$armac% (tudent . In*ia : Ja$pee Br!t'er#. an*ar *an A*ul. 2012. Kimia )armasi Analisis. (!g$akarta : Pu#taka Pelaar. epp$ an* )i8'ael. 2009. Struktur *an @ung#i al!gen. *urnal ). Develomental Biologi +,- / 012,1. ?e'ninger. 192. Dasar2dasar Biokimia *ilid 0. Jakarta : rlangga. )art!'ar#!n! S. 19C". Biokimia. (!g$akarta : a*a' )a*a %nier#it$ Pre##. Pertii A.@. *an Ari+ ?.. 200C. ,3 4esep Ola$an 5ortel )avorit Anak . Jakarta : PT rame*ia Pu#taka %tama. P!e*ia*i Anna. 199. Dasar2dasar Biokimia. Jakarta : %nier#ita# In*!ne#ia Pre##. &!#en+el* ?. 192. Origins o 6linical 6$emistr%: !$e 7volution o Protein Anal%sis. %nite* State# !+ Ameri8a : A8a*emi8 Pre## In8. Sama*i. 2012. !n#ep I*eal Pr!tein A#am amin! @!ku# Pa*a Ternak A$am Pe*aging. *urnal 0,+,-:8,289. Sukar*!. 19". Kimia Organik. (!g$akarta : Bima Ak#ara. Sumar*! D. 2009. Pengantar Kimia : Buku Panduan Kulia$ a$asis;a Kedokteran dan Program (trata I )akultas Bioeksakta. Jakarta : Penerit Buku e*!kteran 5.
