ANALISIS BAKTERI Coliform (FEKAL DAN NON FEKAL) PADA (FEKAL AIR SUMUR DI DESA PAMIJEN KECAMATAN SOKARAJA KABUPATEN BANYUMAS
Proposal Penelitian untuk Skripsi
Diajukan Oleh : MITHA MAULIDYA G1F009008
UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN FAKULTAS KEDOKTERAN DAN ILMU-ILMU KESEHATAN JURUSAN FARMASI PURWOKERTO 2013
Proposal Penelitian untuk Skripsi ANALISIS BAKTERI Coliform (FEKAL DAN NON FEKAL) PADA AIR SUMUR DI DESA PAMIJEN KECAMATAN SOKARAJA KABUPATEN BANYUMAS
Yang diajukan oleh: Mitha Maulidya G1F009008
Telah disetujui dan disahkan pada tanggal ..........
Pembimbing I
Pembimbing II
Iskandar Sobri, M. Biotech., Apt.,
Drs. Sunarto, MS., MP
NIP. 19800901 19800901 200501 1 001 001
NIP. 19580709 19580709 19703 1 002
Mengetahui, Fakultas Kedokteran dan Ilmu-Ilmu Kesehatan Universitas Jenderal Soedirman
Pembantu Dekan I,
dr. Agung S. Dwi Laksana, M.Sc, PH NIP. 19670905 19670905 200012 1 001
PRAKATA Assalamu’alaikum Assalamu’alaikum warahmatullahi warahmatullahi wabarakatuh
Puji syukur kepada Allah SWT atas rahmat, hidayah, dan karunia-Nya kepada kita semua sehingga kami dapat menyelesaikan proposal skripsi dengan judul Coliform
“ANALISIS
BAKTERI
(FEKAL DAN NON FEKAL) PADA AIR SUMUR DESA PAMIJEN
KECAMATAN SOKARAJA KABUPATEN BANYUMAS”. Proposal skripsi ini disusun
sebagai salah satu syarat untuk mengerjakan skripsi pada program Strata-1 di Jurusan Farmasi, Fakultas Kedokteran dan Ilmu-Ilmu Kesehatan, Universitas Jenderal Soedirman, Purwokerto. Penulis menyadari dalam penyusunan proposal skripsi ini tidak akan selesai tanpa bantuan dari berbagai pihak. Oleh karena itu pada kesempatan ini kami ingin mengucapkan terima kasih kepada : 1. Iskandar Sobri, M. Biotech., Apt., selaku dosen pembimbing I yang telah sabar dan ikhlas meluangkan waktu memberikan bimbingan, dukungan, nasehat, serta kritik dan saran yang membangun dalam penyusunan skripsi. 2. Drs. Sunarto, MS., MP., selaku dosen pembimbing II yang telah sabar dan ikhlas meluangkan waktu memberikan bimbingan, dukungan, nasehat, serta kritik dan saran yang membangun dalam penyusunan skripsi. 3. Keluarga besar farmasi Universitas Jenderal Soedirman, atas semua dukungan, semangat, serta kerjasamanya. Penulis menyadari sepenuhnya bahwa dalam Proposal Penelitian ini terdapat banyak sekali kekurangan-kekurangan baik dari segi penggunaan kata dan bahasa yang belum memenuhi kaidah yang tepat, maupun dari isi penelitian ini sendiri. Oleh karena itu penulis sangat mengharapkan bantuan, kritik dan saran yang membangun dari berbagai pihak yang membaca Proposal Penelitian ini.
Purwokerto, Desember 2013
Penulis
DAFTAR ISI Halaman
PENGESAHAN............................................................. ................................................................................... .................................. ............ ii PRAKATA.......................................................... ................................................................................ ............................................ ........................ iii DAFTAR ISI ..................................... ........................................................... ............................................ ......................................... ................... iv DAFTAR GAMBAR ...................................... ............................................................ ............................................. ........................... .... vi INTISARI ........................................... ................................................................. ............................................ ...................................... ................ vii ABSTRACT............................................................ .................................................................................. ......................................... ................... viii BAB I. PENDAHULUAN ......................................... ............................................................... ...................................... ................ 1 A. Latar Belakang ............................................ .................................................................. .................................. ............ 1 B. Perumusan Masalah ........................................ .............................................................. .............................. ........ 2 C. Tujuan Penelitian ............................................ .................................................................. .............................. ........ 3 D. Manfaat Penelitian ............................................. .................................................................... ........................... .... 4 E. Keaslian Penelitian .......................................... ................................................................ .............................. ........ 4 BAB II. TINJAUAN PUSTAKA .......................................... ................................................................ .......................... .... 6 A. Air Sumur................................................ ....................................................................... .......................................6 ................6 B. Kualitas Air ................................................................ ....................................................................................7 ....................7 C. Bakteri Coliform ......................................... ............................................................... ...................................8 .............8 D. Metode MPN...................................................... ............................................................................. ............................9 .....9 E. Landasan Teori .......................................... ................................................................ ...................................11 .............11 BAB III. METODE PENELITIAN ............................................................. ................................................................. .... 13 A. Waktu dan Lokasi Penelitian ............................................ ........................................................ ............ 13 B. Bahan dan Alat Penelitian .......................................... ............................................................. ................... 13 C. Rancangan Penelitian ............................................. ................................................................... ........................ 14 D. Jalannya Penelitian .......................................... ................................................................ .............................. ........ 16
E. Analisis Data ........................................... .................................................................. ...................................... ............... 24 F. Jadwal Penelitian.................................................... Penelitian.......................................................................... ........................ 24 DAFTAR PUSTAKA ........................................... ................................................................. ......................................... ................... 25
DAFTAR GAMBAR Halaman
Gambar 2.1 Tabel MPN ............................................. .................................................................... .................................... ............. 10 Gambar 3.1 Skema Tahapan Penelitian ......................... ............................................... ................................ .......... 15
ANALISIS BAKTERI Coliform (FEKAL DAN NON FEKAL) PADA AIR SUMUR DI DESA PAMIJEN KECAMATAN SOKARAJA KABUPATEN BANYUMAS
INTISARI
Air sumur yang bersih adalah air yang yang tidak terkontaminasi oleh bakteri. Syarat mikrobiologis dengan parameter total Coliform total Coliform untuk untuk air bersih sesuai peraturan Menkes No. 416/Menkes/per/IX/1990 adalah 10 jumlah per 100ml (untuk air perpipaan) dan 50 jumlah coliform per 100ml (untuk air bukan perpipaan). Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui keberadaan dan jumlah bakteri Coliform pada Coliform pada air sumur warga di Desa Pamijen Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas serta mengidentifikasi jenis bakteri tersebut. Pemilihan sampel menggunakan judgmental menggunakan judgmental sampling. Pengujian Coliform terdiri dari uji pendugaan, uji konfirmasi, dan uji kelengkapan. Media LB dengan seri tabung 333 digunakan untuk melihat kekeruhan dan terbentuknya gas, media EMBA digunakan untuk mengkonfirmasi pertumbuhan bakteri gram negatif sedangkan media TSIA digunakan untuk identifikasi bakteri. Perhitungan jumlah bakteri Coliform menggunakan tabel MPN ( Most Probable Number ). ). Analisis data ditampilkan secara deskriptif. Kata kunci: air sumur, bakteri Coliform, metode MPN
BAB I PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
Air bersih memiliki beberapa kriteria yaitu air yang jernih, tidak berwarna, berasa tawar, dan tidak berbau (Onny, 2004). Sanitasi lingkungan yang kurang baik dapat menyebabkan air terkontaminasi oleh bakteri. Departemen kesehatan memberikan batasan bahwa yang dimaksudkan dengan air minum dan air bersih adalah sesuai peraturan menteri kesehatan No. 416/Menkes/per/IX/1990 tentang syarat-syarat dan pengawasan kualitas air menyebutkan bahwa syarat-syarat mikrobiologis untuk air bersih adalah 10 jumlah per 100 ml (untuk air perpipaan) perpipaan) dan 50 50 jumlah per 100 ml (untuk air bukan perpipaan) dengan parameter total Coliform Coliform (MPN), dan menurut standar WHO semua sampel tidak boleh mengandung E. mengandung E. coli dan bebas dari bakteri Coliform (AOAC,2000). Bakteri Coliform Coliform adalah golongan bakteri intestinal, yaitu hidup dalam saluran pencernaan manusia. Bakteri Coliform Coliform merupakan bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik dan masuk dalam golongan mikroorganisme yang lazim digunakan sebagai indikator, di mana bakteri ini dapat menjadi sinyal untuk menentukan suatu sumber air telah terkontaminasi oleh patogen atau tidak. Bakteri Coliform ini Coliform ini menghasilkan zat etionin yang dapat menyebabkan kanker. Selain itu bakteri pembusuk ini juga memproduksi bermacammacam racun seperti indol dan skatol yang dapat menimbulkan penyakit bila jumlahnya berlebih didalam tubuh. Bakteri Coliform Coliform dapat digunakan sebagai indikator karena densitasnya berbanding lurus dengan tingkat pencemaran air. Jadi, Coliform adalah Coliform adalah indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan Coliform Coliform artinya kualitas air semakin baik (Mirna,2012). Dalam jangka pendek, kualitas air yang telah tercemar bakteri dapat mengakibatkan muntaber, diare, kolera, tipus, atau disentri. Menurut data statistik penyakit menular dan
kejadian luar biasa (KLB) di Kabupaten Banyumas tahun 2009, Desa Pamijen Kecamatan Sokaraja merupakan desa dengan angka KLB diare paling tinggi. Ditetapkan status kejadian luar biasa (KLB) diare di wilayah ini karena diare di wilayah tersebut telah menyebabkan enam orang warga meninggal dalam sepekan (Dinkes banyumas, 2010). Berdasarkan latar belakang tersebut perlu dilakukan penelitian untuk mengetahui jumlah cemaran bakteri Coliform pada Coliform pada sampel air sumur di daerah pemukiman warga Desa Pamijen Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas serta mengidentifikasi jenis bakteri Coliform tersebut. Coliform tersebut. B. Perumusan Masalah
Perumusan masalah dalam penelitian uji ini adalah : 1.
Apakah terdapat bakteri Coliform yang Coliform yang mencemari air sumur warga di Desa Pamijen Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas ?
2.
Berapakah jumlah koloni bakteri Coliform yang Coliform yang mencemari air sumur tersebut ?
3.
Jenis bakteri Coliform Coliform apakah yang ditemukan pada air sumur yang digunakan sebagai sampel ? C. Tujuan Penelitian
Tujuan dilakukannya penelitian uji ini adalah : 1.
Untuk mengetahui ada tidaknya bakteri Coliform Coliform pada air sumur di Desa Pamijen Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas.
2.
Untuk mengetahui jumlah bakteri Coliform pada air sumur
di Desa Pamijen
Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas. 3.
Untuk mengetahui jenis bakteri Coliform Coliform apa yang terdapat pada air sumur di Desa Pamijen Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas. D. Manfaat Penelitian
Penelitian analisis bakteri Coliform (fekal dan non fekal) pada air sumur di Desa Pamijen Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas diharapkan dapat menjadi informasi mengenai kualitas air sumur di Desa Pamijen secara mikrobiologis dilihat dari keberadaan bakteri Coliform dan Coliform dan jenis bakterinya. E. Keaslian Penelitian
1.
Feliatra (1999) telah melakukan penelitian identifikasi bakteri patogen (vibrio ( vibrio sp) sp) di perairan nongsa Batam Provinsi Riau. Jenis bakteri yang dianalisa adalah bakteri genus vibrio dengan menggunakan medium selektif Thiosulfate citrate bile salt sucrose (TCBS) agar. Air laut diambil dari permukaan, pertengahan, dan dasar perairan. Dari hasil penelitian ini, terdapat enam dari tiga belas spesies bakteri yang dijumpai di perairan pantai Nongsa Batam yaitu V. Anguillarum, V. Alginolyticus, V. Cholerae, V. Salmonicida, V. Vulnificus, dan V. Parahaemolyticus. Parahaemolyticus. Adanya jenis bakteri vibrio sp tersebut sp tersebut disebabkan karena adanya kontak aktifitas manusia dengan perairan tersebut.
2.
Desweri marosa (2012) melakukan penelitian yang berjudul Analisis Bakteri Patogen Pada Air sumur Warga : Studi kasus Di Pemukiman Kumuh Kecamatan Semampir Surabaya. Sampel diambil dari air sumur di setiap kelurahan di Kecamatan Semampir yaitu Wonokusumo, Pegirian, Ampel, Sidotopo, dan Ujung. Pada setiap kelurahan diambil 3 lokasi sumur yang berbeda kemudian dilakukan pengkulturan pada media EMB ( Eosin Eosin Methylen Blue), Blue), SSA (Salmonella (Salmonella Shigella Agar ), ), dan TCBS (Thiosulfate Citrate Salt Sucrose). Sucrose ). Selanjutnya dilakukan uji fisiologis dengan menggunakan beberapa media seperti media TSIA (Triple ( Triple Sugar Iron Agar ), ), Tryptone broth untuk uji indol, MR-VP, Urea Broth, Broth, dan semi solid agar. Berdasar hasil uji fisiologis ditemukan bakteri patogen Escherichia coli pada setiap lokasi sampel,
bakteri genus Salmonella ditemukan di kelurahan Wonokusumo dan Ujung, dan genus Vibrio ditemukan di kelurahan Pegirian dan kelurahan Ujung. 3.
Mirna sari R (2012) telah melakukan penelitian mengenai analisis bakteri Coliform (fekal dan non fekal) pada air sumur di komplek Roudi Manokwari. Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode deskriptif dengan menggunakan teknik survei dan wawancara tidak terstruktur. Hasil penelitian ini menunjukkan bahwa sampel air sumur di komplek Roudi tercemar dan terdeteksi memiliki rata-rata total Coliform Coliform sumur 1 adalah 35/100ml, sumur 2,3,4,5,7 adalah >1100, sumur 6 adalah 460/100ml, sumur 8 dan 10 adalah 36/100ml, dan sumur 9 adalah 150/100ml, dan didapatkan 4 isolat bakteri Fekal yaitu C.amalonatictus, C.diversus, P.vulgaris, dan E.coli. Berdasarkan penelitian-penelitian tersebut, maka perlu dilakukan penelitian analisis
bakteri Coliform (fekal dan non fekal) pada sampel air sumur warga Desa Pamijen Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas.
BAB II TINJAUAN PUSTAKA
A. Air Sumur
Sumur merupakan salah satu penampungan air yang utama bagi penduduk perkampungan. Dengan demikian air dalam sumur tersebut harus memenuhi syarat air yang baik untuk dikonsumsi. Agar air dalam sumur tersebut berkualitas baik maka sebaiknya jarak sumur dan septitank kurang lebih 10 meter. Menurut Setyawati (2007) dalam penelitianya menjelaskan bahwa kandungan bakteri yang terdapat dalam air sumur dipengaruhi oleh konstruksi sumur, aktivitas domestik sekitar sumur, cara penggunaan sumur, dan pemeliharan sumur. Berdasarkan hasil penelitian tersebut konstruksi sumur paling berpengaruh terhadap kandungan bakteri di dalam air sumur Menurut Dwidjoseputro (1989), air tanah mangandung zat-zat anorganik maupun zatzat organik yang merupakan tempat yang baik bagi pertumbuhan dan perkembangan mikroorganisme (kehidupan mikroorganisme). Mikroorganisme yang autotrof merupakan penghuni pertama dalam air yang mangandung zat-zat anorganik. Sel-sel yang mati merupakan bahan organik yang memungkinkan kehidupan mikroorganisme yang heterotrof. Temperatur juga ikut menentukan populasi mikroorganisme di dalam air. Pada temperature sekitar 30oC merupakan temperatur yang baik bagi kehidupan bakteri pathogen yang berasal dari hewan maupun manusia. Sinar matahari (terutama sinar ultraviolet) memang dapat mematikan bakteri, akan tetapi daya tembus sinar ultraviolet ke dalam air tidak maksimal. Air yang berarus deras kurang baik bagi kehidupan bakteri. Hal ini berkaitan dengan tidak maksimalnya
perkembangbiakan
bakteri,
karena
kebanyakan
bakteri
memerlukan
media/substrat yang tenang untuk perkembangbiakannya (Dwijoseputro, 1989). Air sumur pada umumnya lebih bersih daripada air permukaan, karena air yang merembes ke dalam tanah itu telah difiltrasi (disaring) oleh lapisan tanah yang dilewatinya.
Namun kebersihan air secara kasat mata belum tentu mengindikasikan terbebasnya air tersebut dari kontaminasi bakteri, kebersihan dan kontaminasi bakteri pada air sumur sangat berkaitan erat dengan lingkungan sekitar sumur (Nurdin, 2007). B. Kualitas Air
Pengadaan air bersih untuk kepentingan rumah tangga harus memenuhi persyaratan yang sudah ditentukan sesuai peraturan Internasional (WHO dan APHA). Kualitas air bersih di Indonesia sendiri harus memenuhi persyaratan yang tertuang di dalam peraturan Menteri Kesehatan RI No. 173/Men. Kes/Per/VIII/77. Menurut Suriawiria (2008), kualitas tesebut menyangkut: 1.
Kualitas Fisik, meliputi kekeruhan, temperatur, warna, bau, dan rasa.
2.
Kualitas Kimia, yaitu yang berhubungan dengan adanya ion-ion senyawa ataupun logam yang membahayakan dan pestisida.
3.
Kualitas Biologi yaitu berhubungan dengan kehadiran mikroba patogen (penyebab penyakit), pencemar, dan penghasil toksin. C. Bakteri Coliform
Bakteri Coliform Coliform adalah bakteri indikator keberadaan bakteri patogenik lain. Lebih tepatnya, bakteri Coliform fekal Coliform fekal adalah bakteri indikator adanya pencemaran bakteri patogen. Penentuan Coliform fekal Coliform fekal menjadi indikator pencemaran dikarenakan jumlah koloninya pasti berkorelasi positif dengan keberadaan bakteri patogen. Selain itu, mendeteksi Coliform jauh Coliform jauh lebih murah, cepat, dan sederhana daripada mendeteksi bakteri patogenik lain. Jadi, Coliform adalah indikator kualitas air. Makin sedikit kandungan Coliform, Coliform, artinya, kualitas air semakin baik (Friedheim, 2001). Banyaknya kontaminan dalam air memerlukan standar tertentu untuk menjamin kebersihannya. Air yang terkontaminasi oleh bakteri patogen saluran cerna sangat berbahaya untuk diminum. Hal ini dapat dipastikan dengan penemuan organisme yang ada dalam tinja
manusia atau hewan dan yang tidak pernah terdapat bebas di alam. Terdapatnya bakteri Coliform Coliform dalam air minum dapat menjadi indikasi kemungkinan besar adanya organisme patogen lainnya. Bakteri Coliform dibedakan Coliform dibedakan menjadi 2 tipe, yaitu fekal Coliform dan Coliform dan nonfekal Coliform (Gause, Coliform (Gause, G. F. 1946 dalam A. Tamyis Ali Imron, 2008) Bakteri Coliform merupakan Coliform merupakan parameter mikrobiologis terpenting kualitas air minum. Jenis bakteri ini berupa gram negatif, tidak berspora serta memfermentasi laktosa dengan menghasilkan asam dan gas apabila di inkubasi pada 35-37°C. Bakteri ini sangat banyak terdapat pada feses organisme berdarah panas, dapat juga ditemukan di lingkungan perairan, di tanah dan pada vegetasi. Oleh karena itu, dapat disimpulkan bahwa apabila terdapat bakteri Coliform Coliform pada badan air maka badan air tersebut sudah tercemar oleh feses. Genus yang termasuk dalam kelompok bakteri Coliform Coliform antara lain Citrobacter, Enterobacter, Escherichia, Hafnia, Klebsiella, Serratia. Meskipun jenis bakteri ini tidak menimbulkan penyakit tertentu secara langsung, keberadaannya keber adaannya di dalam air minum menunjukkan tingkat sanitasi rendah. Oleh karena itu, air minum harus bebas dari semua jenis Coliform. Coliform. Semakin tinggi tingkat kontaminasi bakteri Coliform, Coliform, semakin tinggi pula risiko kehadiran bakteri bakteri patogen lain yang biasa hidup dalam kotoran manusia dan hewan (Official Chemical Method, 1979) D. Metode MPN
Metode MPN terdiri dari tiga tahap, yaitu uji pendugaan (presumtive test), uji konfirmasi (confirmed test), dan uji kelengkapan (completed test). Dalam uji tahap pertama, keberadaan Coliform masih Coliform masih dalam tingkat probabilitas rendah atau masih dalam dugaan. Uji ini mendeteksi sifat fermentatif Coliform dalam Coliform dalam sampel. Karena beberapa jenis bakteri selain Coliform juga Coliform juga memiliki sifat fermentatif, diperlukan uji konfirmasi untuk mengetes kembali kebenaran adanya Coliform Coliform dengan bantuan medium selektif diferensial. Uji kelengkapan kembali meyakinkan hasil tes uji konfirmasi dengan mendeteksi sifat fermentatif dan
pengamatan mikroskop terhadap ciri-ciri Coliform: Coliform: berbentuk batang, Gram negatif, tidak berspora (Fardiaz,1993). MPN adalah suatu metode enumerasi mikroorganisme yang menggunakan data dari hasil pertumbuhan mikroorganisme pada medium cair spesifik dalam seri tabung yang ditanam dari sampel padat atau cair cai r yang ditanam berdasarkan jumlah sampel atau diencerkan menurut tingkat seri tabungnya sehingga, dihasilkan kisaran jumlah mikroorganisme yang diuji dalam nilai MPN/satuan volume atau massa sampel. Sebagai contoh, misal data yang didapat adalah : 3 tabung positif dari pengenceran 10 ml, 2 tabung positif dari pengenceran 1 ml dan 1 tabung positif dari pengenceran 0,1 ml. Kemudian dicocokkan dengan tabel MPN, menghasilkan nilai : 150 MPN/100 ml (Ali,2008). Nomor tabung yang positif 10 ml 0 0 1 1 1 1 1 2 2 2 2 2 2 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3
1 ml 0 1 0 0 1 1 2 0 0 1 1 2 2 0 0 0 1 1 1 2 2 2 3 3 3
0,1 ml 1 0 0 1 0 1 0 0 1 0 1 0 1 0 1 2 0 1 2 0 1 2 0 1 2
Indeks MPN Per 100ml
3 3 4 7 7 11 11 9 14 15 20 21 28 23 39 64 43 75 120 93 150 210 240 460 1100
95% batas kepercayaan terendah tertinggi < 0,5 9 < 0,5 13 <0,5 20 1 21 1 23 3 36 3 36 1 36 3 37 3 44 7 89 4 47 10 150 4 120 7 130 15 380 7 210 14 230 30 380 15 380 30 440 35 470 36 1300 71 2400 150 4800
Gambar 2.1 Tabel MPN E. Landasan Teori
Air sumur adalah air tanah dangkal sampai kedalaman kurang dari 30 meter, umumnya terletak pada kedalaman 15 meter dan dinamakan juga sebagai air tanah bebas karena lapisan air tanah tersebut tidak berada di dalam tekanan. Untuk memenuhi kebutuhan air sumur yang bersih terdapat tiga parameter, yaitu parameter fisik yang meliputi bau, rasa, warna dan kekeruhan. Parameter kedua adalah parameter kimia yang meliputi kimia organik dan kimia anorganik yang mengandung logam, seperti Fe, Cu, Ca, dan lain-lain. Parameter ketiga adalah parameter bakteriologi yang terdiri dari Coliform Coliform fekal dan Coliform total (Waluyo, 2004). Pengadaan air bersih untuk kepentingan rumah tangga harus memenuhi persyaratan yang sudah ditentukan sesuai peraturan Internasional (WHO dan APHA). Kualitas air bersih di Indonesia sendiri harus memenuhi persyaratan yang tertuang di dalam peraturan Menteri Kesehatan RI No. 173/Men. Kes/Per/VIII/77. Sumur gali merupakan salah satu sarana penyediaan air bersih yang perlu mendapat perhatian, karena mudah sekali mendapatkan pencemaran dan pengotoran yang berasal dari luar terutama jika konstruksi sumur gali tersebut tidak memenuhi syarat. Hal ini akan mengakibatkan terjadinya penurunan kualitas air secara fisik dan mikrobiologi, sehingga memerlukan perbaikan konstruksi maupun lokasi (Prajawati,2008) Penyebaran kotoran yang tidak terkontrol dalam lingkungan perairan sumur dapat menyebar pada lingkungan tanah, dan bahkan terbawa pada bahan makanan untuk manusia. Lingkungan tercemar oleh bakteri Coliform Coliform menentukan apakah kualitas air layak untuk dikonsumsi atau tidak. Untuk mengujinya dapat menggunakan suatu test dengan metode jumlah perkiraan terdekat atau Most Probable Number atau MPN (Novel dkk, 2010).
Metode MPN merupakan uji deretan tabung yang menyuburkan pertumbuhan Coliform sehingga Coliform sehingga diperoleh nilai untuk menduga jumlah Coliform dalam Coliform dalam sampel yang diuji. Jumlah Coliform ini Coliform ini bukan perhitungan yang tepat namun merupakan angka yang mendekati jumlah sebenarnya (Lay,2001). Prinsip pengerjaan metode MPN ini adalah dengan melakukan uji penduga atau Presumtive Test dengan menggunakan set tabung 3-3-3 atau 5-5-5 kaldu laktosa, dilanjutkan Uji penguat atau Confirmed Test, dan yang terakhir dilakukan uji pelengkap atau Completed Test (Novel dkk,2010). Untuk mengetahui jumlah bakteri Coliform umumnya Coliform umumnya digunakan tabel Hopkins atau tabel MPN yang dpat digunakan untuk memperkirakan jumlah bakteri di dalam 100 ml air sampel yang diteliti (Suriawiria, 2008).
BAB III METODE PENELITIAN
A. Waktu dan Lokasi Penelitian
Penelitian ini dilaksanakan selama 4 bulan di Laboratorium Mikrobiologi Jurusan Kedokteran Fakultas Kedokteran dan Ilmu-Ilmu Kesehatan Universitas Jenderal Soedirman Purwokerto. B. Bahan dan Alat Penelitian
1.
Bahan Penelitian Sampel air sumur yang diperoleh dari daerah pemukiman warga Desa Pamijen
Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas, media Laktose Broth (LB), larutan iodin, kristal ungu, larutan safranin, reagen kovac, larutan alfa naftol, KOH 40%, etanol 95%, alkohol 70%, citrat, media EMB ( Eosin Metilen Blue), Blue), NA (nutrient agar), media TSIA (triple (triple sugar iron agar ), ), tryptone broth untuk uji indol, MR-VP, Urea Broth, laktosa, Broth, laktosa, aquades steril. 2.
Alat Penelitian Alat yang digunakan dalam penelitian ini adalah mikroskop, aluminium foil, alat
pengaduk, autoklaf, botol sampel, bunsen, cawan perti, erlenmeyer, gelas ukur, gunting, hot plate, plate, inkubator, jarum ose, kaca objek, kapas, karet, keranjang keranjang alat, kertas label, kertas pembungkus, kertas saring, masker, oven, pipet tetes, rak tabung reaksi, refrigerator atau kulkas, sarung tangan, sendok sampel, stirer, tabung reaksi, timbangan, water bath dan alat tulis. C. Rancangan Penelitian
Metode yang digunakan dalam penelitian ini adalah metode observasional dengan menggunakan teknik survei. Pengambilan sampel menggunakan judgmental sampling . Sampel air sumur dipilih berdasarkan penilaian peneliti. Tahapan penelitian ini adalah sebagai berikut :
1.
Tahap pertama yang dilakukan dalam penelitian ini adalah pengambilan sampel. Sampel yang digunakan adalah sampel air sumur yang masih digunakan oleh warga. Sampel diambil sebanyak 10 sampel dari rumah-rumah warga yang mempunyai sumur dengan kriteria yang diinginkan peneliti. Sampel dipilih secara Judgmental Sampling.
2.
Sampel air sumur yang didapat dimasukan ke dalam botol steril dan diberi label. Labelisasi berdasarkan nomer urut pengambilan sampel, nama warga pemilik sumur.
3.
Tahap selanjutnya dilakukan uji pendugaan (presumtive test) pada sampel air sumur menggunakan media LB, uji konfirmasi (confirmed test) dengan media EMB, uji kelengkapan (completed test) pada media LB dan NA kemudian diinokulasikan pada media TSIA.
4.
Jumlah bakteri Coliform Coliform didapatkan dengan cara mencocokan jumlah tabung positif pada tabel MPN ( Most Most Probable Number ) dan dilakukan identifikasi bakteri berdasarkan dari hasil pengujian uji morfologi dan uji biokimia untuk bakteri Coliform.
Pengambilan sampel Judgmental sampling Uji Penduga ( presumptive test ) dengan medium LB
Diinkubasi 1x24 jam suhu 35-37 0C
Terbentuk gas
tidak terbentuk gas
Positif (+) coliform
Negatif (-) coliform
Perhitungan total coliform Hasil positif dicocokan dengan tabel MPN Diinokulasikan
Uji Penguat (confirmed (confirmed test ) dengan media EMB
Diinkubasi 1x24 jam suhu 37 0C
tumbuh
tidak tumbuh
Bakteri gram (-)
Bakteri gram (+)
Uji Pelengkap (completed (completed test ) dengan medium LB dan NA
Diinkubasi 1x24 jam suhu 35-37 0C
Inokulasi bakteri ada media TSIA
diinkubasi 24 jam suhu 37 0C Identifikasi Coliform
Uji morfologi : pewarnaan gram
Uji biokimia : uji utilisasi sitrat, mortilitas, indol, VP,MR
Gambar 3.1 Skema Tahapan Penelitian
D. Jalannya Penelitian
1.
Tahap persiapan 1.1. Preparasi alat Alat-alat gelas yang digunakan dalam penelitian ini meliputi cawan petri, tabung
reaksi, labu erlenmeyer, gelas ukur, pipet ukur 10 ml dan 1 ml, terlebih dahulu dibersihkan selanjutnya dilakukan sterilisasi terhadap alat-alat tersebut. 1.2. Pembuatan medium penelitian 1.2.1. Pembuatan medium LB ( Lactose Broth) Medium Lactose Broth untuk pembuatannya terdiri dari 2 yaitu LBDS dan LBSS dengan komposisi 3 gr/L beef ekstrak, 5 gr/L pepton, 5 gr/L laktosa, untuk LBDS komposisinya sama tetapi kadar laktosa pada LBDS 10 gr/L. Untuk pembuatan media LBSS semua bahan dituang pada beaker glass kemudian ditambahkan aquades hingga 1000 ml sambil dipanaskan diatas hotplate hotplate hingga semua bahan larut. Setelah larut dan homogen, medium dipindahkan kedalam 3 tabung reaksi yang masing-masing berisi 9 ml untuk LBDS dan 6 tabung reaksi yang masing-masing berisi 9 ml untuk LBSS dan kedalam tabung reaksi tersebut dimasukan tabung durham yang diletakan dengan posisi terbalik, ditutup dengan aluminium foil. Medium disterilisasi dalam autoklaf dengan dengan temperatur 1210C tekanan 1 atm selama 15 menit, kemudian medium siap digunakan atau disimpan didalam refrigerator sebelum digunakan. 1.2.2. Pembuatan medium EMB Sebanyak 10 gram Pepton, 2 gram Dikalium Hidrogen fosfat, 5 gram Laktosa, 5 gram Sukrosa, 0,4 gram Eosin yellowish, 0,07 0,07 gram Metilen blue dan 13,5 gram agar dilarutkan dalam 1000 ml akuades. Selanjutnya pH medium diatur pada kondisi pH 7 dengan cara menambahkan HCl 0,1 N atau NaOH 0,1 N. Larutan dipanaskan di atas hotplate dan hotplate dan diaduk hingga bahan larut semua. Medium kemudian disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu
121°C, tekanan 1 atm selama 15 menit. Media yang telah disterilkan kemudian dituang ke dalam cawan petri dan didinginkan. 1.2.3. Pembuatan medium TSIA (Triple ( Triple Sugar Iron Agar ) Sebanyak 65 gram serbuk media Triple Sugar Iron Agar dilarutkan dengan 1 liter air suling, kemudian dipanaskan hingga mendidih. Selanjutnya dimasukan ke dalam tabung reaksi sebanyak 10 ml, kemudian disterilkan selama 15 menit pada 121 0 C selama 15 menit dan dibiarkan membeku pada posisi miring 1.2.4. Pembuatan medium NA Sebanyak 3 gram beef extract , 5 gram pepton, dan 15 gram agar dilarutkan dalam 1000 ml akuades. Selanjutnya pH medium diatur pada kondisi pH 7 dengan cara menambahkan HCl 0,1 N atau NaOH 0,1 N. Larutan dipanaskan di atas hot plate dan plate dan diaduk hingga bahan larut semua. Medium kemudian disterilkan menggunakan autoklaf pada suhu 121°C, tekanan 1 atm selama 15 menit. 1.2.5. Pembuatan medium Metil medium Metil Red-Voges Proskauer (MR-VP) (MR-VP) Sebanyak 17 gram serbuk media MR-VP dilarutkan dalam 1 liter air suling. Kemudian dimasukan kedalam tabung reaksi sebanyak 10 ml. Selanjutnya disterilkan dengan autoklaf selama 15 menit pada suhu 121 0C. 2.
Tahap Pelaksanaan Penelitian 2.1. Teknik Pengambilan Sampel Menurut Harijoto dan Widjowati (1996) metode pengambilan sampel air dilakukan
dengan modifikasi sebagai berikut : a. Sebelum disterilkan, botol sampel dibersihkan dan dibungkus dengan kertas aluminium foil b. Air sumur diambil dengan cara ditimba menggunakan alat penimba c. Sampel air dimasukan kedalam botol sampel yang sudah disterilkan sebelumnya
d. Kemudian botol sampel ditutup kembali dengan aluminium foil dan dimasukkan kedalam coolbox dan dibawa ke Laboratorium mikrobiologi untuk dilakukan analisis lanjut. 2.2. Isolasi 2.2.1. Isolasi bakteri Coliform Menurut Dwidjoseputro (1998) untuk menguji kehadiran bakteri Coliform pada Coliform pada suatu sampel air dilakukan beberapa tahap yaitu : a. Uji Dugaan ( Presumptive Test )
Sampel air terlebih dahulu dikocok sebanyak 25 kali dengan tujuan sampel air tersebut homogen.
Disiapkan 9 tabung reaksi steril yang berisi tabung durham dengan medium LB.
10 ml sampel air diisolasikan ke dalam 3 tabung reaksi yang berisi 9 ml medium LBDS.
Hal yang sama dilakukan untuk 1 ml dan 0,1 ml sampel air yang diisolasikan pada LBSS.
Semua tabung diinkubasikan pada suhu 35-37º selama 1x24 jam. Tabung durham yang menunjukkan positif ditandai dengan terbentuknya gas pada tabung durham dan adanya perubahan warna.
b. Uji Kepastian (Confirmed (Confirmed Test ) Sampel air yang menunjukan hasil positif selanjutnya diinokulasikan pada media (EMB Agar) dengan menggunakan ose bulat dan diinkubasi pada suhu 35ºC selama 24 jam. Pada pembenihan ini bakteri yang dapat tumbuh hanya bakteri Gram-negatif, sedangkan bakteri Gram-positif tidak dapat tumbuh atau tumbuh dengan tidak subur. c. Uji Pelengkap (Completed (Completed Test )
Untuk memastikan kemurniannya koloni dipindah ke lactose broth (LB) untuk mengamati adanya pembentukan gas, dan ke media miring Nutrient Agar (NA) untuk mengamati adanya bakteri berbentuk batang, Gram negatif, dan tidak membentuk spora yang merupakan ciri-ciri spesifik kelompok bakteri coliform. Koloni dipindahkan ke media LB dan NA secara aseptik, dan diinkubasi pada suhu 370C selama 1x24 jam. d. Inokulasi Bakteri pada media selektif (completed (completed test ) Media
TSIA
merupakan
medium
deferensial
untuk
bakteri
Gram-negatif.
Kemampuan bakteri menfermentasi dekstros dan laktosa serta kemampuan memproduksi hydrogen sulfida adalah merupakan dasar untuk mengetahui jenis bakteri tertentu dari pertumbuhannya dalam medium ini. Cara kerja: Pertumbuhan bakteri diambil sedikit dengan menggunakan ose lancip steril kemudian diinokulasi ke dalam dasar agar dan keseluruh permukaannya selanjutnya diinkubasi pada suhu 35º-37º selama 18-24 jam. Hal-hal yang dinilai:
Dasar : Merah (K: Alkali) /kuning (A: acid)
Lereng : Merah (K: alkali) /kuning (A: acid)
H2S : Warna hitam antara dasar dan lereng
Gas : Agar bagian dasar pecah/ada gelembung Perubahan pH karena adanya fermentasi menyebabkan terjadinya warna kuning,
dengan adanya indikator phenol red. Jika hanya dekstros yang difermentasi maka dasarnya saja yang berwarna kuning, tetapi jika dekstros maupun laktosa keduanya difermentasi maka dasar dan lerengnya akan berwarna kuning. Terbentuknya H 2S adalah berasal dari natrium tiosulfat dan ferrik ammonium citrat sebagai sumber sulfur. 2.3.Identifikasi bakteri Koloni yang tumbuh selanjutnya dilakukan pengamatan secara makroskopik dan mikroskopik dengan pewarnaan gram serta dilakukan uji biokimia. Pengamatan karakter
makroskopik koloni bakteri meliputi ukuran, pigmentasi (warna koloni), dan bentuk. Karakter mikroskopis meliputi ukuran, warna, bentuk bakteri. Uji biokimia bakteri meliputi uji indol, uji methyl red, uji voges-proskauer, uji utilisasi sitrat dan uji motilitas. 2.3.1. Pewarnaan gram Pewarnaan Gram digunakan untuk melihat bentuk atau morfologi dan sifat pewarnaan dari mikroorganisme. Cara : kaca objek dibersihkan dengan alkohol sehingga bebas dari lemak, difiksasi di atas lampu spiritus sampai kering, beri satu tetes akuades steril. Kultur bakteri diambil dengan jarum ose, diletakkan pada tetesan akuades steril, campur hingga merata. Biarkan mengering diudara sebentar dan fiksasi diatas api. Tetesi 2-3 tetes larutan Kristal violet, biarkan selama 1 menit, bilas dengan air mengalir. Tetesi larutan lugol satu tetes dan dibiarkan selama 1 menit, dibilas dengan air mengalir dan dikeringkan, preparat dibilas dengan alkohol 96% selama 30 detik, cuci dengan air mengalir dan keringkan. Terakhir ditetesi dengan safranin dan dibiarkan selama 1 menit lalu dibilas dengan air mengalir dan dikeringkan. Amati di bawah mikroskop. Warna ungu untuk bakteri gram positif dan warna merah untuk bakteri gram negatif. negatif. 2.4. Uji Biokimia Bakteri (Mirna,2012) 2.4.1. Uji Indol Uji ini bertujuan untuk mendeteksi kemampuan mikroba mendegradasikan asam amino tryptophan. Pembentukan indol dari mikroorgamisme dapat diketahui dengan menumbuhkannya menumbuhkannya dalam media biakan yang kaya akan triptofan. Untuk melihat adanya indol digunakan reagen kovac yang memberikan reaksi warna apabila tes positif. Cara kerja : Diambil bakteri biakan pada media TSIA sebanyak 1 ose dan diinokulasikan pada media tripton dan diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 35º-37ºC. Setelah 24 jam biakan tadi ditambahkan dengan larutan kovac sebanyak 0,2 ml, dimana larutan ini digunakan untuk
melihat kehadiran indol yang ditandai dengan terbentuknya cincin merah pada lapisan atas media. 2.4.2. Uji metil red (MR) Uji Metil Red digunakan untuk menentukan adanya fermentasi asam campuran. Beberapa bakteri memfermentasikan glukosa dan menghasilkan berbagai produk yang bersifat asam sehingga akan menurunkan pH media pertumbuhan menjadi 5,0 atau lebih rendah. Penambah indikator pH “methyl red” dapat menunjukkan adanya perubahan pH menjadi asam. Dilakukan dengan cara : Biakan bakteri dari media TSIA diinokulasi pada media MR dan diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 35ºC-37ºC. Pertumbuhan bakteri pada biakan MR selanjutnya ditetesi dengan 2-3 tetes reagen Methyl Red. Terjadinya Terja dinya warna merah berarti tes positif dari warna dasar media yaitu putih bening. 2.4.3. Uji Voges Proskauer (MR-VP) Uji ini bertujuan untuk mendeteksi adanya acethyl methyl carbinol yang diproduksi oleh bakteri tertentu dalam pembenihan VP. Adanya bekteri tertentu yang dapat memproduksi acethyl methyl carbinol dapat diketahui dengan penambahan reagen voges prouskauer (reagen VP). Dilakukan dengan Cara: Biakan bakteri deri media TSIA diinokulasikan pada media VP dan diinkubasi selama 18-24 jam pada suhu 35º-37 oC. Selanjutnya tambahkan 0,6 ml larutan alpha naftol dan 0,2 ml KOH 40% kemudian dikocok pelan hingga tercampur dan dibiarkan selama 15 menit, terjadinya warna orange berarti tes positif dari warna dasar media yaitu putih bening. 2.4.4. Uji Utilasi Sitrat Tujuan dari uji ini adalah untuk mengetahui jenis bakteri yang mengutilisisasi sitrat. Bakteri yang memanfaatkan sitrat sebagai sumber karbon akan menghasilkan natrium karbonat yang bersifat alkali, sehingga dengan adanya indikator brom thymol blue menyebabkan warna biru pada media.Cara kerja :
Koloni bakteri pada media TSIA diambil dengan ose dan diinkubasi pada media simon citrat, selanjutnya diinkubasi pada suhu 35-37ºC selama 18-24 jam. Terjadi warna biru pada media berarti tes positif dari warna dasar media yaitu hijau. E. Analisis Data
Data yang diperoleh dari hasil analisis bakteri Coliform (fekal dan non fekal) pada fekal) pada air sumur warga Desa Pamijen Kecamatan Sokaraja Kabupaten Banyumas dikumpulkan kemudian ditabulasikan dalam bentuk tabel serta gambar dan dianalisis secara deskriptif. F. Jadwal Penelitian No
Kegiatan
Bulan 1
1
Pembuatan Proposal
2
Pelaksanaan a. Pengambilan sampel air b. Uji keberadaan bakteri Coliform c. Hitung jumlah bakteri Coliform d. Identifikasi jenis bakteri Coliform
3 4
Analisis Data Laporan Penelitian
2
3
4
DAFTAR PUSTAKA
Ali, Tamyis, 2008, Pengukuran 2008, Pengukuran oliform Fecal dengan MPN , diakses tanggal 27 Maret 2013, http://id.scribd.com/doc/53769349/Laporan-Praktikum-KesehatanLingkungan.. Lingkungan
Association of Official Analytical Chemistry (AOAC), 2000,Official 2000, Official Methods of Analysis. Analysis. Mc Graw Hill Press. Canada Departemen Kesehatan RI, 1990, Peraturan Menteri Kesehatan Republik Indonesia Nomor
416/Menkes/Per/IX/1990
Kualitas Air , Depkes RI, Jakarta
Tentang Syarat-syarat
dan
Pengawasan
Desweri, Marosa, 2012, Analisis Bakteri Patogen Pada Air Sumur Warga : Studi Kasus Di Pemukiman Kumuh Kecamatan Semampir Surabaya,
Skripsi,
Departemen Biologi, Fakultas Sains dan Teknologi, Universitas Airlangga Dinas Kesehatan Kabupaten Banyumas, 2010, “ Profil “ Profil Kesehatan Kabupaten Banyumas Tahun 2009”, 2009 ”, Dinas Kesehatan Kabupaten Banyumas, Banyumas, Purwokerto Purwokerto Dwijoseputro. 1998. Isolasi Bakteri Coliform. Gramedia. Jakarta Entjang, I., 2000, Ilmu Kesehatan Masyarakat, PT. Citra Aditya Bakti, Bandung Fardiaz, S., 1993, Analisis 1993, Analisis Mikrobiologi Pangan, Pangan, Jakarta: PT. Raja Grafindo Persada. Feliatra, 1999, Identifikasi bakteri patogen (Vibrio (Vibrio sp) sp) di Perairan Nongsa Batam Propinsi Riau, J Riau, J Natur Indones, Indones, Vol.2, 28-33. Food and Drug Administration (FDA), 1998, Bacteriological Analytical Manual. 8th Edition,. Friedheim, E., Michaelis, L., L., 2001, Journal Biology Chemistry., 91,55-368. Cit. PORTER, J. R. Gause, G.F., 1946, Litmocidin a new antibiotic substance produced by roactinomyces cyaneus, Journal Bacteriol., 51 Harijoto,Widjowati. 1996. Metode Pengambilan Sampel Air dan Pemeriksaan Bakteriologi Air. Jakarta Lay, B., 1994, Analisis Mikroba Di Laboratorium, Raja Grafindo Persada, Jakarta Mirna, Sari, R., 2012, Analisis Bakteri Coliform (Fekal dan Non Fekal) Pada Air Sumur Di Komplek Roudi Manokwari, skripsi, skripsi, Jurusan Biologi, Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam, Universitas Negeri Papua, Manokwari. Novel., S. S., Wulandari, A.P., dan Safitri, R., 2010. Praktikum Mikrobiologi Dasar, Dasa r, Trans Info Media, Jakarta. Nurdin, Harto.2007. Stuktur dan Persebaran Penduduk, Penduduk, Jakarta:FE UI. Official Chemical Method, 1979, Fish Inspection Branch Fisheries And Ocean, Science Press, Canada. Onny Untung, 2004, Menjernihkan Air Kotor, Jakarta : Puspa Swara. p 6 Prajawati, R., 2008. Hubungan Konstruksi dengan Kualitas Mikrobiologi Air Sumur Gali. Ruwa Jurai Vol (2). Suriawiria, Unus, 2008, Mikrobiologi Umum, Umum, Departemen Biologi FMIPA-ITB, Bandung. Waluyo, 2004. Mikrobiologi Umum. Universitas Muhammadiyah Malang. Malang
