ANALISIS ANTIBOTIK Analisis Farmasi
ANTIBIOTIK Antimicrobial
• a substance that kills or inhibits the growth of microorganisms such as bacteria, fungi, or protozoans, as well as destroying viruses. Antimicrobial drugs either kill microbes (microbicidal) or prevent the growth of microbes (microbistatic). (micro bistatic).
Antibiotic
• a substance or compound (also called chemotherapeutic agent) that kills or inhibits the growth of bacteria. Antibiotics belong to the group of antimicrobial compounds used to treat infections caused by microorganisms, including fungi and protozoa
• antimicrobial substances that are applied to living Antiseptics tissue/skin to reduce the possibility of infection, sepsis, or putrefaction. 2
ANTIBIOTIK Pengelompokan antibiotik
• • •
•
Penetapan potensi
Penetapan kadar
•
Penisilin Aminoglikosida Sefalosporin Tetrasiklin Makrolida dan Linkomisin dll dilakukan dengan metode hayati menggunakan bakteri, dan ini merupakan pilihan metode yang cocok untuk antibiotika dilakukan dengan metode kimia untuk tujuan kontrol kualitas, monitoring di lingkungan dan atau plasma. 3
Contents
ANALISIS: 1
KLORAMFENIKOL
2
TETRASIKLIN
3
PENISILIN, SEFALOSPORIN
4
STREPTOMISIN
Analisis Kloramfenikol Sediaan: •
Kapsul 250 mg
•
Sirup 125 mg (tiap 5 ml)
•
Salep Mata 1%
•
Tetes Mata 0,5% dan 1%
•
Tetes Telinga 1%
KLORAMFENIKOL •
Nama kimia: 2,2-Dichloro- N -[(1 -[(1R ,2 ,2R )-2 )-2 hydroxy 1-(hydroxymethyl)2-(4 nitrophenyl)ethyl]acetamide –
–
–
•
C11H12Cl2N2O5 = 323.1
Sinonim
Chloranfenicol
Cloranfenicol
Laevomycetinum
Nama Dagang Albucetin, Cendofenicol, Colme, Fenicol, Kemicort, Ribocin, Solacort, Suprachlor , dll
Fisikokimia Kloramfenikol • Fine, white to greyish– greyish–white or yellowish– yellowish– white crystals. • M.p. 149° to 153°. •
•
Kelarutan kloramfenikol dalam air adalah 2,5 mg per ml, larut dalam etanol, aseton dan etil asetat. Bentuk ester dari kloramfenikol kloramfenikol sedikit larut dalam air dan secara umum larut dalam pelarut organik
Fisikokimia Kloramfenikol •
•
Kloramfenikol mempunyai rasa yang sangat pahit, oleh karena itu sediaan sirup selalu menggunakan kloramfenikol bentuk ester palmitat atau suksinat agar tingkat pahitnya berkurang. Dalam larutan air, gugus amida dari kloramfenikol dapat terurai/ terhidrolisis. Selain itu juga peruraian dapat terjadi pada ikatan karbon dengan atom klor.
Hidrolisis kloramfenikol •
Hidrolisis pada gugus amida
•
Hidrolisis pada ikatan karbon dengan atom klor
Fotodegradasi kloramfenikol • Kloramfenikol dapat mengalami kerusakan oleh cahaya (fotodegradasi) karena proses oksidasi, reduksi, dan kondensasi. • Reaksi: Kloramfenikol
4-nitro 4-nitro benzaldehid (…………)
Asam 4-nitroso 4-nitroso benzoat (…….)
O OH
Asam-4,4’ Asam-4,4’-asoksi -asoksi benzoat HO N
N
10
Penetapan Kadar Kloramfenikol 1. Titr Titra asi be bebas bas ai air 2. Nitrimetri 3. Bromometri 4. Argentometri 5. Spek Spektr trof ofot otom omet etri ri UV dan dan Vis Vis 6. HPLC
Titrasi bebas air Prinsipnya berdasarkan hasil degradasi dari kloramfenikol dalam suasana asam yang menghasilkan amina primer melalui gugus amida. Sifat basa cukup kuat untuk dititrasi oleh asam, namun lebih baik titrasinya dilakukan dalam suasana bebas air. • Prosedur: •
+ 150mg kloramfenikol yang ditimbang seksama, dilarutkan dalam 2ml alkohol 90%, tambahkan 5ml asam klorida pekat, panaskan sampai kering. Keringkan pada suhu 105C selama 15’ 15’. Setelah dingin larutkan dalam 10ml asam asetat glasial. Tambahkan 5ml raksa (II) asetat 5% dalam asam asetat dan 20ml dioksan serta 5 tetes indikator kristal violet. Titrasi dengan asam perklorat
Nitrimetri •
Prinsipnya berdasarkan keberadaan atau bisa didapatkannya gugus amin aromatik primer dari kloramfenikol. Untuk mendapatkan gugus amin aromatik primer maka gugus nitro direduksi dengan serbuk seng, atau yang lainnya.
• Prosedur: Timbang seksama 500mg, tambahkan 20ml asam klorida P, 5g debu seng sedikit demi sedikit. Tambahkan 15ml asam klorida P, biarkan 1jam. Saring melalui kapas, cuci 3kali, tiap kali dengan 5ml air. Dinginkan sampai 15 . Titrasi pelan-pelan dengan natrium nitrit 0,1 M hingga 1 tetes larutan segera menghasilkan warna biru pada kertas kanji iodida P. Titrasi selesai jika titik akhir dapat ditunjukkan lagi setelah larutan dibiarkan 5’ 5 ’. 1 ml natrium nitrit 0,1 M setara dengan 32,31 mg C 11H12Cl2N2O5
Reaksi nitrimetri Zn/HCl NO2
CH
CH
CH2OH
OH
NH
C
CHC l2
O
NH2
CH
CH
CH2OH
OH
NH
C
O
.............
H2O
CHCl 2
HNO2
HCl
Bromometri •
Gugus nitro dari kloramfenikol terlebih dahulu harus dirubah menjadi amin aromatik primer. Kemudian dua atom brom akan masuk ke inti benzen pada posisi orto. Sehingga kesetaraannya adalah satu molekul kloramfenikol memerlukan 4 atom Br -.
Argentometri •
Prinsipnya berdasarkan pada keberadaan atom klorida yang dapat bereaksi dengan perak nitrat dalam suasana asam. –
–
Sebelumnya atom klorida harus didapatkan dengan cara didestruksi kering. Sejumlah serbuk kloramfenikol didestruksi bersamaan dengan natrium karbonat dan kalium karbonat, diakhir pembakaran akan didapatkan serbuk putih yang merupakan NaCl/ KCl.
Prosedur: • + 300mg yang ditimbang seksama, pijarkan bersama 500mg natrium karbonat dan 500mg kalium karbonat hingga tak ada warna hitam. Pindahkan secara kuantitatif dengan bantuan 25ml air. Netralkan dengan asam nitrat encer, tambahkan 15ml asam nitrat encer lagi dan 25ml perak nitrat 0,1 N. Titrasi dengan amonium tiosianat 0,1 N dengan indikator besi (III) amonium sulfat 1ml.
Spektrofotometri UV •
•
Kloramfenikol 1% dalam pelarut air memberikan absorbansi 298 pada panjang gelombang 278 nm. (A11=298). Bentuk ester kloramfenikol palmitat pada media alkohol memberikan (E1%, 1cm ) absorbansi 178 pada panjang gelombang 271 nm.
Spektrofotometri Vis (1)
• Gugus nitro diazotasi
amin aromatis primer + N-(1-naftil)-etilendiamin
HN
H2
H2
C
C
NH2
Spektrofotometri Vis (2) •
•
Metode ini didasarkan reduksi kloramfenikol dalam campuran asam asetat glacial, air dan TiCl3 pada suhu kamar selama 10 menit. Produk hasil degradasinya kemudian dipanaskan dengan p-dimetilaminobenzaldehid p- dimetilaminobenzaldehid dan memberikan warna hijau kekuningan yang dideteksi pada panjang gelombang maksimal 440 nm.
•
Reaksi reduksi kloramfenikol dengan Titan (III)
•
Reaksi kompleks dengan p-dimetilaminobenzaldehid p -dimetilaminobenzaldehid
HPLC •
Contoh sistem kromatografi yang dipakai adalah
ANALISIS TETRASIKLIN
TETRASIKLIN •
Nama kimia: [4S -(4 -(4α ,4a ,4aα ,5a ,5aα ,6 ,6 β,12aα )]-4)]-4(dimethylamino)-1,4,4a,5,5a,6,11,12aoctahydro 3,6,10,12,12a-pentahydroxy 6 methyl-1,11 dioxo 2 naphthacenecarboxamide –
–
•
–
–
C22H24N2O8=444.4
–
–
TETRASIKLIN • A yellow, crystalline, amphoteric powder which darkens in moist air on exposure to strong sunlight. • Soluble 1 in 2500 of water and 1 in 50 of ethanol; practically insoluble in chloroform and ether; freely soluble in dilute acids and, with decomposition, in solutions of alkali hydroxides.
24
HO
N(CH3)2
CH3
OH
D
C
A
B
CONH2 OH OH
O
OH
O
• Tetrasiklin
BM = 444,43
• Klortetrasiklin
7-klortetrasiklin
BM = 478,88
• Oksitetrasiklin
5-hidroksi tetrasiklin BM = 460,43
25
TETRASIKLIN • Spektrofotometri UV-VIS
• Fluorometri • TBA
26
TETRASIKLIN SPEKTROFOTOMETRI UV
• Aqueous acid— acid—270 nm (A11=417), 356 nm.
27
TETRASIKLIN KOLORIMETRI Oksitetrasiklin + besi (III) klorida
Warna coklat jingga,
= 490nm
28
TETRASIKLIN Campuran tetrasiklin dan klortetrasiklin Tetrasiklin HCl = -54,8 A268 + 67,70 A380 + 63,32 A440 Klortetrasiklin HCl = 65,4 A268 – 78,47 A380 + 13,85 A440 Oksitetrasiklin HCl = 61,07 A268 + 5,27 A380 – 77,5 A440
29
TETRASIKLIN FLUOROMETRI Klortetrasiklin
isoklortetrasiklin,
Fluoresensi biru
30
TETRASIKLIN TBA +
250mg tetrasiklin hidroklorid yang ditimbang seksama, larutkan dalam 30ml asam asetat glasial. Tambahkan 10ml raksa (II) asetat 5% b/v dalam asam asetat glasial dan 20ml dioksan. Titrasi dengan asam perklorat 0,1 N dengan 3 tetes kristal violet sampai warna hijau 31
HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROM. •
Contoh: menggunakan metode HPLC deteksi dengan PDA panjang gelombang 355 dan 368 nm. Sistem kromatografi yang dipakai adalah kolom C18 Bondapak dan fase gerak asam oksalat 0,0025 Masetonitril (4:1) dengan laju alir 1 ml/menit. . 32
Thank You!
