Aislamiento de DNA Plasmidico 1

 AISLAMIENTO  AISLAMIENTO DE DNA DNA PLASMIDICO

-8;61/ <=7*

en el caso &E++)1N/ 4 de la

esche escheric richia hia coli coli

utili utilizad zada$ a$ era la

resistencia a los

INTRODUCCION

El term termin ino o DNA DNA reco recomb mbin inan ante te sign signif ifca ca la unió unión n o recombinación de dos piezas de DNA de dos dierentes especies. Muchas bacterias contienen también otras moléculas de DNA circular pequeño denominadas plsmidos que se encuentran separadas del cromosoma de la célula. El DNA del plsmido se replica de manera independiente al genoma bacteriano principal ! puede ser transerido de una cepa de una especie bacteriana a otra por contacto célula"célula. Aunque no son necesarios para la di#isión celular$ los pls plsmi mido doss norm normal alme ment nte e prop propor orci cion onan an a la célu célula la alguna #enta%a metabólica sobre las otras células que carecen de ellos. &e encuentran en los plsmidos segmentos de DNA que codifc codifcan an la resis resisten tencia cia a antibi antibióti ótico coss ! otras otras sust sustanc ancia iass to'i to'ica cass como como me meta tale les. s. Esta Estass célu célula lass contin(an creciendo ! reproduciéndose$ mientras que las células susceptibles mueren. OBJETIVOS o

o

Aislar DNA plasmidico bacteriano ! comprobar dicho aisl aislamie amiento nto mediante mediante electroo electrooresi resiss en gel de agarosa. )den )denti tifc fcar ar las las die dierrente entess orm ormas as de DNA DNA plas plasmi midi dicco obse bser#ad r#adas as en la plac placa a de electrooresis.

RESULTADOS

)magen *." Electrooresis en capa de agarosa

+on la practica pudimos obser#ar que la ma!or,a del ADN ADN plas plasmi midi dico co que que se logr logro o obte obtene nerr ue ue el ADN ADN plas plasmi midi dico co s(pe s(perr enro enroll llad ado o ! se obtu obtu#o #o en gran gran cantidad cantidad ADN ADN genómi genómico co por lo lo que esto nos indica indica que la técnica no se lle#o a cabo de una manera adecuada !a que la ma!or,a del ADN plasmidico se pudo pudo habe haberr per perdido dido en algu alguna na ase ase por por lo que que obtu#imos en ma!or cantidad ue ADN genómico el cual no conten,a la caracter,stica de importancia que

antibióticos pero de manera teórica para una buena separación lo que hubiéramos preerido obtener era el ADN ADN plasmi plasmidic dico o circula circularr !a que este tiene tiene mucha mucha aci acili lida dad d de se sepa para rars rse e me medi dian ante te la técn técnic ica a de electrooresis. &e prefere este ADN plasmidico por que como este es mu! cil de separar del ADN genómico ! cont contie iene ne la cara caract cter er,s ,sti tica ca dese desead ada a es este te ADN ADN plasmidico se podr,a separar de la capa de agarosa. El cual se puede implementar en otro culti#o para que la sepa de bacterias de  escherichia escherichia coli puedan adquirir esta caracter,stica. ANALISIS DE LA TECNICA

Medi Median ante te la solu soluci ción ón ) de -E resu resusp spen endi dimo moss las las bacterias. &olución ))/ &D& *0"Na12 3.4N El &D& es un detergente que desase las membranas ! libera el contenido de la célula. Na12 lle#ó a cabo la hidrólisis de DNA genómico. &olución )))/ Acetato de potasio 5M 6recipitación 6recipitación de prote,nas ! DNA genómico. +ent +entri riu uga gamo moss para para prec precip ipit itar ar comp comple leta tame ment nte e prote prote,na ,nass ! DNA DNA genómi genómico co los cuales cuales desech desechamo amoss posteriormente. &olución )7/ )sopropanol Disminu!e la constante dieléctrica para que precipite DNA plasmidico$ lo cual se a!udo con una agitación le#e. &i se agita uertemente se puede romper una de las cadenas cadenas o inclus incluso o ambas ambas.. &e requi requier ere e un DNA plasmidico con las dos cadenas intactas. &e centriugo para eliminar la ase acuosa que conten,a agua ! alcohol ! (nicamente nos quedamos con el DNA plasmidico. &olución 7/ 8egulador 9 *: 8egul 8egulado adorr de carga carga que contie contiene ne color colorant ante e el cual cual permite seguir la muestra ! glicerol el cual se intercala en el DNA plasmidico ! le da peso para que se #a!a al ondo del pozo. &e lle#o a cabo la electrooresis para comprobar que el aislamiento del DNA plasmidico se hizo correctamente. &e re#elo con bromuro de etidio$ el cual se parece mucho a las bases nitrogenadas del DNA por lo que se intercala con este ! produce una radiación que se #e con luz ;7.

DISCUSION DE RESULTADOS

&e sabe que la electrooresis es un método que permite la separación de moléculas en base a su tamaño. Esta separación se realiza en un gel$ que es una malla comple%a de moléculas poliméricas. El gel en este caso es de agarosa. >a agarosa es con#eniente para separar ragmentos de cidos nucle,cos. El undamento de esta separación est basado en que las moléculas de cidos nucle,cos estn cargadas negati#amente ?al p2 ! condiciones en que se encuentran@ ! al someterlas a un campo eléctrico migran hacia el polo positi#o a tra#és del gel$ a #elocidades que dependen de sus tamaños/ una molécula pequeña puede seguir su camino ms cilmente que una molécula grande. >a detección tras la migración se realiza cilmente gracias al empleo de un colorante intercalante$ bromuro de etidio que contiene el propio gel ! es #isualizado al emitir luz #isible cuando el gel se ilumina con luz ultra#ioleta. ;n actor a tener en cuenta para #alorar la migración de los cidos nucle,cos en el gel adems de su tamaño es la confguración espacial que adopte la molécula. El corrimiento ue a#anzando conorme la sucesión de los pozos$ esto indica que en los (ltimos pozos las moléculas ten,an menor peso molecular. ambién se obser#a que en los pozos se #en l,neas$ estas l,neas$ nos indican que se encuentra DNA bacteriano. &i se ubica en el pozo pen(ltimo ! antepen(ltimo obser#aremos tres l,neas dierentes$ la primera de esta ms gruesa que nos indica que se encuentra ma!or

DNA circular$ esto es$ se rompió un de las dos cadenas ! es por eso que se tiene un menor corrimiento. >a segunda l,nea tiene un menor ancho de la banda ! nos indica que las dos cadenas se rompieron ! que su corrimiento es intermedio se puede decir que pertenece al DNA lineal !a que tu#o un ma!or corrimiento que la anterior. 6or (ltimo la tercera mancha ! de ma!or corrimiento se puede suponer que es la de DNA comprimido aunque en nuestro caso se #e mu! ligera. >a mancha que se encuentra después de lo descrito anteriormente es el barrido de 8NA que tiene ma!or corrimiento !a que tiene menor peso molecular. CONCLUSIONES o

o

&e logro aislar ADN plasmidico bacteriano obteniendo ADN s(per enrollado en ma!or cantidad. &e obtu#o ADN genómico como subproducto el cual no es el ADN esperado.

BIBLIOGRAFIA

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