+N!+(- -L+/0N+0- NA0+-NAL 1!0(1LA NA0+-NAL D1 0+1N0+A! 2+-L34+0A! PRACTICA “AISLAMIENTO DE DNA PLÁSMIDICO”
56+LA LA4(NA LA4(NA N1LL7 N1LL7 A+D11
2+-8(9:+0A 41N1;AL
4(1;;1;- <1;N5ND1= AND;1A
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INTRODUCCIÓN
Los plásmidos son moléculas de DNA ext extracro cromosómico cap capace aces de replicar autónomamente. La replicación en plásmidos depe depend nde, e, en mayo mayorr o meno menorr exte extens nsió ión n de proteínas, codificadas por genes de la bacteria.
OBJETIVO •
Aislar DNA plásmidico electroforesis en gel agarosa
mediante
RESULTADOS
Las molécul moléculas as de ADN ADN plasmí plasmídic dico, o, adopta adoptan n una conformación tipo doble hélice al igual ue el ADN de los los crom cromos osom omas as,, aunu unue, e, por por definición, se encuentran fuera de los mismos. !e han encontrado plásmidos en casi todas las bacterias. A diferencia del ADN cromosomal, los plásmidos no tienen proteínas asociadas. Los plásmidos pueden utili"arse como #ectores de clona$e y amplificación de fragmentos de DNA ue se hayan insertado en los mismos mediante técnicas, estos fragmentos replican y se transmiten a las células hi$as con$untamente en el resto del plásmido. Los plásmidos contienen con frecuencia genes ue codifican en"imas %tiles para la bacteria hospedadora como genes de resistencia o la producción de antibióticos de degradación de compuestos orgán gánicos, os, de toxi oxinas y de prod produc ucci ción ón de en"i en"ima mass de rest restri ricc cciión y modificación, entre otros. La mayorí mayoría a está están n const constititui uido doss por por un DNA DNA bicate bicatenari nario o circul circular ar cerrado cerrado de tama&o tama&o muy #ariable, ue se puede aislar de la bacteria en una gran #arieda #ariedad d de especie especiess bacteri bacterianas anas,, pero pero suel suele e tene tenerr un rang rango o de hosp hosped edad ador or estrecho.
!e enco encont ntró ró el DNA DNA rena renatu tura ralili"a "ado do de las las bact bacter eria iass tran transf sfor orma mada dass con con un plás plásmi mido do 'p(c 'p(cl) l)** en la form orma supe supere renr nro ollad llada, a, sin sin
embargo, no se pudieron obser#ar las tres isoformas $untas. •
DISCUSIÓN
!e obser#ó en el transiluminador, la electroforesis lle#ada a cabo, en la cual solo se logró identificar la isoforma de la molécula de DNA superenrollada, sin embargo también buscábamos obser#ar las otras dos isoformas, las cuales eran circular rela$a, siendo la primera en obser#arse debido a ue se rompe una de las cadenas y por ello su corrimiento es muy poco, la segunda isoforma ue se esperaba obser#ar, después de la circular rela$ada, era la lineal, la cual nos indica ue ambas cadenas se rompieron y por ello su corrimiento es intermedio, por %ltimo la isoforma ue si logramos obser#ar, aunue muy poco, es la superenrollada la de mayor corrimiento. ambién la larga cadena de corrimiento ue se obser#a es la del ;NA la cual tu#o el mayor corrimiento ya ue es la de menor peso molecular. CONCLUSIONES •
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Del plásmido obtenido, la isoforma ue se obtu#o en mayor proporción fue DNA superenrollado. 1l DNA plasmídico de acuerdo a sus diferentes conformaciones puede correr a diferentes #elocidades en un gel durante la electroforesis. Los plásmidos pueden ser modificados para utili"arse como #ectores de clonado @para amplificar un fragmento de ADN de interés, o como #ectores de expresión
@donde el fragmento de ADN insertado codifica para alguna proteína de interés. De acuerdo al método empleado ':+N+B ;1* o 'Lisis alcalina*, cuanto más chico sea el plásmido, me$or es el resultado obtenido, ya ue a medida ue se incrementa el tama&o, sus propiedades se aseme$an cada #e" más a las del ADN cromosómico.
REFERENCIAS •
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Alberts 2., 2ray D., LeCis ., ;aff :., ;oberts E., Fatson .D. 2iología molecular de la célula @?))G -mega. httpsHIIibcmun.files.Cordpress.comIJK? KIKItp>.pdf . 0onsultadoH ?MIKIJK?O
