Facultad de Ciencias de la Educación Laboratorio de Microbiología Barranquilla 2015-2, 7o seestre
TECNICAS DE CULTIVO Y AISLAMIENTO DE BACTERIAS Olga Guzmán Sarmiento, Andres Marenco Martinez, Keyla Molina Rodriguez, Liceth Muñoz Rodelo (1, Antonio !nsignares (" (1)Estudiantes del programa de Licenciatura en Biología y Química, Grupo 16A (2) Docente laoratorio de !icroiología
RESUMEN Las bacterias están presentes en los diferentes ecosistemas, pero para su crecimiento requieren de condiciones óptimas las cuales les permitan vivir. En esta práctica se llevó a cabo el cultivo y el aislamiento de diferentes bacterias, para ello se empleó distintos medios de cultivo. Todo esto se realizó con la final finalid idad ad de iden identi tific ficar ar las las part partic icul ular arid idad ades es de crec crecim imie ient nto o de algu alguno nos s microorganismos dependiendo del medio de cultivo, los medios de cultivo se divi divide den n depe depend ndie iend ndo o del del prop propós ósit ito, o, en este este caso caso era era para para obse observ rvar ar que que bacterias pueden crecer en el agar nutritivo.
INTRODUCCIÓN Un material nutritivo preparado para el crecimiento de microorganismos en un laboratorio se denomina medio de cultivo. Algunas bacterias pueden crecer bien en casi cualquier medio de cultivo otras requieren medios especiales y otras no pueden crecer en ninguno de los medios inertes e!istentes "asta a"ora. a"ora. Los microb microbios ios que se introd introduce ucen n en un medio medio de cultiv cultivo o para para que que comiencen a crecer se denominan inoculo. Los microbios que crecen y se multiplican en un medio de cultivo se denominan cultivo. El cultivo cultivo de microorgan microorganismos ismos consiste consiste en proporcion proporcionarles arles las condicion condiciones es f#sica f#sicas, s, qu#mic qu#micas as y nutrit nutritiva ivas s adecua adecuada das s para para que puedan puedan multip multiplic licars arse e de forma controlada. En general, podemos distinguir cultivos l#quidos y sólidos en función de las caracter#sticas del medio y cultivos discontinuos y continuos en función de la disponibilidad de nutrientes en el medio. Un microorganismo necesita para crecer nutrientes que le aporten energ#a y elem elemen ento tos s qu#m qu#mic icos os para para la s#nt s#ntes esis is de sus sus cons consti titu tuy yente entes s celu celula lare res. s. $ependiendo de la fuente de carbono que utilizan, los microorganismos se
pueden clasificar en autótrofos si es el %&' atmosf(rico )microorganismos que fotosintetizan* y "eterótrofos si utilizan carbono orgánico. El aislamiento de bacterias a partir de muestras naturales se realiza, en la mayor#a de los casos, mediante la producción de colonias aisladas en cultivos sólidos. El crecimiento e!plosivo de las bacterias permite producir un gran n+mero de ellas a partir de una +nica c(lula inicial de forma que, tras un periodo de incubación en las condiciones ambientales adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por individuos iguales )un clon bacteriano*. La mayor parte de los estudios que se realizan sobre bacterias requieren que cada cepa bacteriana est( aislada de los restantes microorganismos que puedan acompaarla. Este aislamiento es un paso básico antes de emprender alg+n estudio serio con bacterias en el laboratorio. -e logra mediante t(cnicas sencillas de siembra en medios sólidos a partir de una mezcla bacteriana. El obetivo es, que tras la incubación de dic"o medio as# inoculado, aparezcan colonias separadas, cada una de las cuales procede de una sola bacteria correspondiente a una determinada cepa de las presentes en la mezcla original. A partir de cada colonia de cada tipo presente en ese medio sólido se puede aislar la cepa correspondiente, obteni(ndose un cultivo puro.
OBJETIVO GENERAL •
/dentificar m(todos eficaces para el aislamiento de microorganismos utilizando las distintas t(cnicas de cultivo.
OBJETIVOS ESPECIFICOS • •
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%onocer algunos m(todos para obtener un cultivo puro. E!plicar el fundamento de diferentes medios de cultivo y condiciones de incubación para el aislamiento de microorganismos Aplicar diferentes t(cnicas para el aislamiento de microorganismos.
METODOLOGIA Cultivo en pl! "e #$ En primer lugar se realizó una división de cuatro cuadrantes en una "oa, para luego tomar una muestra de cultivo de microorganismos realizado previamente en una caa 0etri, con la ayuda de un mec"ero y una caa 0etri con agar nutritivo se tomó un asa previamente flameada y fr#a, y se inoculo la muestra realizando de cuatro a cinco estr#as muy untas de lado a lado sobre el primer cuadrante de la caa y se cerró. En segundo lugar se flameo el asa de inoculación y se giró la caa en un cuarto para continuar con el siguiente cuadrante, se abrió la caa y se enfrió el asa en una esquina de este, se continuo rozando con el asa la superficie del primer cuadrante para seguir con el segundo cuadrante se volvió a cerrar la caa y se
repitió el procedimiento anterior con el tercer cuadrante y se efectuó la siembra en el +ltimo cuadrante sin flamear el asa y realizando estr#as más abiertas. 0or +ltimo se rotulo la caa con cinta y se encubo en el "orno durante de '1 a 12 "oras, para observar los cambios presentes en este.
RESULTADOS Mo$%olo#& !olonil "e !ultivo' (!te$ino') Ai'l*iento po$ e't$& !$u+" 3orma %olor Tamao )mm* 5orde Elevación
Mue't$ p$o(le* Amboide4circular 5lanco 6mm &ndulado %onve!a
CONCLUSIÓN En esta práctica se reconoció las t(cnicas de aislamiento para obtener cultivo puros, mediante estriado simple y compuesto puesto que las bacterias, "ongos y levaduras "an sido microorganismos muy estudiados en las +ltimas d(cadas por lo que se "a "ec"o necesario cultivarlos ya que resulta de forma indispensable conocer como cultivarlos para de esta forma realizar un posterior análisis de acuerdo a las necesidades del investigador. 0or lo que en esta práctica se aprendió los diferentes m(todos de cultivo analizando la estr#a compuesta en la que se logra diferenciar una muestra con l#neas perpendiculares que va disminuyendo su concentración en cuanto se fueron realizando las estr#as ya que los organismos fueron tomados de la estr#a anterior y se siguieron realizando las demás estr#as terminando con una estr#a simple permitiendo obtener la menor concentración de los microorganismos, una de las observaciones más importantes que se analizó al momento de sembrar fueron los cuidados y maneo de materiales de siembra puesto que el
asa debió ser enfriada correctamente y se desinfectó el asa a cada momento para evitar errores como contaminación e incluso causar un rompimiento en el agar
PREGUNTAS ,) -.u/ e' el A#$ 0 "e "on"e 'e o(tiene1 El agar es un agente solidificante utilizado en medios de cultivo bacteriológicos y en otras aplicaciones )cultivo de teido, difusión inmunológica, estudios nutricionales, etc.*. Es un poligalactosido )polisacárido formado por la mezcla de agarosa y agaropectina* que se obtiene a partir de algas roas marinas principalmente de los g(neros 7racilaria, 7elidium y Euc"ema.
2) -Po$ 3u/ el #$ nut$itivo e' un *e"io #ene$l p$ el !ultivo "e (!te$i'1 El agar es un medio general para el cultivo de bacterias pues estos microorganismos son incapaces de degradarlo, puesto que presenta una capacidad superior a la gelatina animal para resistir la capacidad licuadora de los microorganismos y mantenerse estables a una temperatura adecuada para la incubación de los mismos. 0or otra parte puede ser solidificado o convertido en gel con facilidad lo que permite que los microorganismos puedan mezclarse en (l fácilmente.
4) -Cu5le' 'on l' vent6' "e un !ultivo pu$o1 Un cultivo puro es aquel que se desarrolla a partir de una c(lula +nica y por lo tanto está formado por un solo tipo de microorganismo, entre sus ventaas están8 •
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-on esenciales para poder estudiar las caracter#sticas de los microorganismos /mportantes para poder identificarlos con seguridad. se "an diseado para conservar la pureza de los cultivos y evitar su contaminación con otros microorganismos que no nos interesan.
7) -Po$ 3u/ $+8n no "e(e' !o*p$ti$ el *e!9e$o "e (un'en1 En las prácticas de microbiolog#a no se debe compartir el mec"ero, ya que al ser este un mec"ero de gas al compartirlo se necesitar#a tenerlo apartado del lugar donde se est( trabaando y este es muy necesario para tener asepsia y tener el lugar esterilizado y los materiales, teniendo buen uso de este.
:) -Cu5l e' l $+8n p$ %l*e$ lo' tu(o' nte' 0 "e'pu/' "e !" t$n'%e$en!i1
En microbiolog#a es importante que en el material donde se va a inocular se flamee antes ya que as# se evitar#a que al momento de destaparlo se encuentre contaminado por alg+n microorganismo, y despu(s en caso de que el asa llena de inoculo accidentalmente toque a boca del tubo se debe flamear para que no queden restos de microorganismos en este.
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=) Cun"o to*' un ino!ulo "e un plto "e Pet$i) -Po$ 3u/ e' ne!e'$io to!$ un p$te e't/$il "el #$ !on el ' nte' "e to!$ el !$e!i*iento (!te$ino1 -e debe de tocar una parte est(ril para enfriar el asa que previamente se flameo ya que se encuentra caliente y es necesario que se enfri( para que en el momento de tomar el cultivo no se elimine los microorganismos que se van a inocular.
>) -Po$3ue el ' "e(e 'e$ %l*e" nte' 0 "e'pu/' "e to"o' lo'
p$o!e"i*iento' "e p$ue(1 El asa de siembra o asa bacteriológica es probablemente la "erramienta más usada por el microbiólogo. %onsiste en un filamento con un lazo en uno de sus e!tremos. El otro e!tremo está unido a un mango. El filamento suele ser de una aleación metálica que se calienta muy rápidamente. Esta "erramienta tan simple nos permite tomar un inóculo de un cultivo bacteriano y transferirlo a otro recipiente con medio de cultivo, o a un portaobetos para su observación microscópica. El asa de siembra debe de esterilizarse a la llama antes de usarla y despu(s de "aber sido usada. $ebe de esterilizarse antes para evitar la contaminación de los microorganismos en estudio con otros microorganismos que estuvieran presentes en el filamento metálico. $ebe de esterilizarse despu(s de su uso para evitar que los microorganismos que "emos tomado contaminen el laboratorio o sean incluso un riesgo biosanitario. 0ara esterilizar el asa de siembra ponerla lo más vertical posible y acercar el filamento a la llama del mec"ero 5unsen. %uando todo el filamento se "aya puesto al roo vivo se "abrá conseguido la esterilización. En ese momento retirarla y dear enfriar antes de tomar la muestra, para evitar que el calor destruya a los microorganismos.
-Po$ 3u/ l' pl!' "e #$ "e(en *ntene$'e inve$ti"' "u$nte l in!u(!i8n1 Una vez que se "a colocado la suspensión de bacterias en la placa, se debe dear que se evapore una parte antes de comenzar la incubación durante toda la noc"e. -in embargo, quedará una cantidad moderada de "umedad. -i la placa no es invertida durante la incubación, la bacteria no podrá colonizar el agar apropiadamente, lo que evitará que crezca y forme colonias adecuadamente, o estimulará el crecimiento de otros microorganismos. %ualquiera de estas dos consecuencias invalidará el e!perimento. Además, la condensación o "umedad puede causar vetas, lo que "ará que elegir y analizar colonias separadas sea muc"o más dif#cil. Una vez que la bacteria "a formado colonias, la placa tambi(n debe ser almacenada "acia abao para mantener los niveles de "umedad.
BIBLIOGRAF?A •
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