INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO “AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO” INTRODUCCIÓN
INTERPRETACION DE RESULTADOS
Los plásmidos son moléculas de DNA extracromosomal los los cual cuales es está están n pres presen ente tes s en algu alguna nas s célu célula las s bacterianas, levaduras y hongos. Los mismos poseen DNA de doble hebra, mayormente son circulares pero tambié también n se han encont encontrad rado o plàsm plàsmido idos s lineal lineales. es. La replic replicaci ación ón de los plasm plasmido idos s es indepe independi ndient ente e de la replic replicaci ación ón del cromos cromosoma oma del huéspe huésped d ya ue ue los plasmidos poseen su propio origen de replicación.
*l recorrido de DNA en el gel de agarosa con aul de bromo% bromo%eno enoll puede puede ser de di%ere di%erente ntes s manera maneras, s, esto esto depe depend nder erá á de la calida calidad d con con ue ue se reali realió ó el procedimiento de aislamiento de DNA plasm"dico. *n el extrem extremo o in%eri in%erior or de la imagen imagen donde se observ observa a en corrimiento de DNA se pueden observar los %ragmentos de 3NA, los cuales via4an más rápido atravesando la malla ue crea la agarosa, de manera ascendente se pued puede e obse observ rvar ar la ona ona pert perten enec ecie ient nte e a el DNA DNA plasm"dico con con su estructura estructura s5per enrollada, después la estructura lineal, luego la rela4ada y en el extremo superior se encuentra la ona de aplicación 4unto con %ragmentos de DNA cromosómico.
Los plásmidos poseen un interés singular en !ngenier"a #enéti #enética ca por ser uno de los sistemas sistemas vectores vectores más más sencillos de usar. $n vector de clonación es un sistema ue permite introducir introducir en una célula hospedadora hospedadora un %ragm %ragment ento o de DNA ue se preten pretende de clonar clonar&& en esta esta célula hospedadora el vector se replica y expresa, en su caso. La molécula ue resulta de la unión de un DNA vector vector con el DNA de interés interés 'denominad 'denominado o entonces entonces (inserto() se denomina molécula de vector recombinante.
DISCUSION
La utiliación de bromuro de etidio es %undamental para poder colorear y observar el recorrido de DNA a través del soporte de agarosa, se pone de mani%iesto con lu $6, $6, aprovech aprovechando ando las propiedade propiedades s de irradiació irradiación n ue genera con el DNA. *l corrimiento de DNA plasm"dico ue obtuvimos %ue el pen5ltimo, se observa una mayor cantidad de 3NA, después de DNA con estructura s5per enrollada, seguida de la estructura lineal y por 5ltimo la rela4ada. La estructura s5per enrollada via4a más rápido a través del soporte de agarosa ya ue se mantiene intacta intacta su estructura. estructura. La estructu estructura ra lineal lineal de DNA se debe a ue una hebra del ADN se rompió haciendo ue su recorrido sea más lento ue el anterior mencionado y por 5ltimo la estructura rela4ada corresponde a ue el DNA se uedó muy da7ado y se %ragmenta ocasionando ue ue su reco recorr rrid ido o sea sea más más lent lento o ue ue las las otra otras s dos dos estructuras.
*xis *xiste ten n dive divers rsos os méto método dos s para para el aisl aislam amie ient nto o de plas plasmi mido dos. s. Las Las técn técnic icas as de +ini +inipr prep eps s o mini ini preparacio preparaciones nes de plasmidos, plasmidos, permiten la recuperac recuperación ión de plasmidos de DNA circular sobre el DNA cromosomal. *l tratamiento de las células con una base de p alto o un detergente interrumpe el apareamiento de las bases nitrogenadas, ocasionando ue el DNA cromosomal se desn desnat atur ural alic ice e y se sepa separe re.. -or -or el cont contra rari rio o la con%iguración superenrrollada del plasmido se mantiene establ estable. e. La lisis lisis alcali alcalina na es el método método mayorm mayorment ente e utiliado utiliado para el aislamiento aislamiento de plasmidos plasmidos circulares circulares proveniente de células bacterianas. OBJETIVOS • •
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/btener el DNA del plásmido p$012. 3ealiar una electro%oresis en gel de agarosa del plásmido obtenido. Discut Discutir ir acerc acerca a de las %ormas %ormas molecu molecular lares es obtenidas en el desarrollo experimental.
RESULTADOS
CONCLUSIONES
*n la siguie siguiente nte imagen imagen se observ observa a la elect electro% ro%ore oresis sis real reali iad ada a en un sopo soport rte e de agar agaros osa a y se ve el corrimiento del DNA plasm"dico ue obtuvimos.
*s posible aislar DNA plasm"dico y ponerlo de mani%iesto con bromuro de etidio y lu $6 en una placa de agarosa con aul de bromo bromo%en %enol, ol, mediante mediante el empleo empleo de la electro%oresis. 8e puede observar la calidad del aislamiento de DNA, debido a la observación de las onas de recorrido, este dependerá de la estructura del mismo, ue puede ser s5per enrollada, lineal y rela4ada. /btuvimos /btuvimos mayor recorrido recorrido de DNA conservand conservando o su estructura s5per enrollada, por lo ue se concluye ue el asilamiento %ue de buena calidad.
Ilustración 1.Corrimiento de DNA plasmídico en un soporte de agarosa.
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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS QUIMICO BACTERIOLOGO PARASITOLOGO “AISLAMIENTO DE DNA PLASMIDICO” PREGUNTA EXTRA
*structura 9romuro de *tidio. 8e trata de un compuesto intercalante, es decir, ue tiene a%inidad para unirse al DNA, pues se introduce entre sus bases apiladas. *sto se debe a su geometr"a plana y su estructura aromática, ue interacciona %avorablemente con el interior hidró%obo de la doble hélice. *n menor medida, interacciona también con DNA monocatenario. 8u utilidad deriva asimismo de su %luorescencia, exaltada al encontrarse en un entorno hidró%obo, es decir, al estar unido al DNA. 8e excita con lu ultravioleta de onda corta, :;< nm, y emite su %luorescencia como lu visible, de color rosado=anaran4ado. *n la electro%oresis, se utilia para (te7ir( el DNA, para revelar su posición en el gel. 8e puede ba7ar el gel tras la electro%oresis en una disolución de bromuro de etidio, o bien incorporar éste a la disolución de agarosa con la ue se prepara el gel.
BIBLIOGRAFÍA •
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Lenhinger AL, Nelson DL. -rincipios de 9iouimica. ;> *d.9arcelona? *diciones /mega& :@@; http?biomodel.uah.estecnicasel%oreactivosr eactivos.htm Bundamentos de biou"mica estructural& Cosé +ar"a ei4ón& *ditorial ebar. https?bacteriologiaclinica.EiFispaces.com
