3 Glucosa Post Prandial

Guía Practica 3

[GLUCOSA_POST_PRANDIAL]

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD BIOQUÍMICA CLINICA II GUÍA PARA PRÁCTICA DE LABORATORIO No.3 1. TEMA: Determinación Determinación cuantitativa de glucosa basal y postprandial en suero sanguíneo. 2. OBJETIVOS: 2.1.

OBJETIVO GENERAL: Determinar las concentraciones de glucosa en suero en condiciones de ayuno y postprandial con el método enzimático colorimétrico punto final.

2.2.

OBJETIVO ESPECÍFICO: -

Explicar claramente como se debe preparar el paciente para realizarse esta prueba. Conocer los valores referenciales de glucosa postprandial en suero sanguíneo. Identificar las condiciones pre-analíticas y post analíticas necesarias para la determinación de Glucosa Postprandial. Calcular la concentración de glucosa basal y postprandial en la muestra de suero obtenido. Interpretar los resultados obtenidos de su paciente y correlacionarlos con su importancia biomédica. Interpretar los términos linealidad y límite de detección para estas determinaciones. determinaciones.

3. MATERIALES, MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS: -

Temporizador. 1 Gradilla 10 Tubos de ensayo pequeños, perfectamente limpios y secos Pipeta automática automática de 10 µL y 1000µL y puntas Tapa roja Tubos vacutainer Tapa Espectrofotómetro Espectrofotómetro con compartimiento compartimiento de Medición termostatado termostatado a 37°C para leer a (500±20nm). Centrifuga Calculadora (individual) Frasco ámbar de 25mL perfectamente limpio y seco

ant ecedentes dentes (Obtener los SUEROS días antes de la practica) de un compañero con obesidad y/ o antece f amil iar es de diabetes diabetes..  

Suero del estudiante en ayunas ayunas uno por grupo, Suero del mismo estudiante después de dos horas de haber i ngerido un desayuno habitual.

Obtener suero suero correctamente correctamente para inhibir al al máximo la glucolisis y codificar codificar correctamente. correctamente.

REACTIVOS: -

Agua destilada, Solución salina

-

GLUCOSA R1. MONOREACTIVO: Tampón fosfato pH 7.5, glucosa Oxidasa, peroxidasa, 4aminoantipirina, Fenol. -

CAL. PATRÓN DE GLUCOSA O STANDARD: Glucosa 100mg/dL (5.55mmol/L).

ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD Analizar las muestras de suero de inmediato o refrigerarlas. Estables una semana a Temperatura de refrigeración 4-8ºC. 4-8ºC. Lic. Franklin Ramos, Ramos, guardará en refrigeración refrigeración los sueros entregados, entregados, previa a su cordial solicitud verbal.

BIOQUÍMICA CLINICA II

Dra. Rosa Elisa Cruz T.

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4. FUNDAMENTO TEORICO Las determinaciones de glucosa son fundamentales en el diagnostico y tratamiento de las enfermedades relacionadas con el metabolismo de los carbohidratos y se realizan en sangre total, plasma, suero, LCR, liquido pleural y orina. La sangre venosa es la muestra de elección para el análisis de glucosa. A temperatura ambiente en la muestra obtenida, la glucosa se metaboliza a una velocidad de 7mg/dL/h (0.4mmmol/L/h), y a 4ºC la pérdida es aproximadamente 2mg/dL/h. el índice de metabolización es mayor en presencia de contaminación bacteriana o leucocitosis. Una muestra de suero es válida para el análisis de glucosa si es separado de las células en un plazo de 30 minutos; no obstante para tiempos superiores, debe añadirse un conservante como el fluoruro sódico (tubo tapa gris) para inhibir la glicolisis. En muestras de suero sin bacterias contaminantes o leucocitosis, un retraso superior a 90 minutos en la separación del suero aun puede proporcionar resultados clínicamente aceptables. El diagnostico de diabetes se establece cuando la concentración plasmática en ayunas es mayor o iguala 126mg/dL (7.0mmol/L) al menos en dos ocasiones; la prueba debe realizarse tras 8 horas de ayuno y menor de 140mg/dL (7.8 mmol/L) dos horas postprandial. Es suficiente para el diagnostico de diabetes la detección de niveles ocasionales de glucosa plasmática mayores o iguales a 200mg/dL(11.1 mmol/L) asociados a síntomas de hiperglucemia (p.ej., poliuria, polidipsia, polifagia, pérdida de peso inexplicable). En la prueba de tolerancia a la glucosa oral se utiliza una sobrecarga de glucosa de 75 gramos y considera como diagnostico de diabetes un nivel de glucosa superior o igual a 200mg/dL. Para la detección precoz de la diabetes gestacional se recomienda una prueba de sobrecarga con 50 gramos de glucosa oral, si la concentración de glucosa tras una hora es igual o superior a 140mg/dL se aconseja la realización de una prueba completa de t olerancia con 100gramos de glucosa oral durante tres horas. El diagnostico de diabetes gestacional se establece cuando la mujer iguala o supera al menos dos de los cuatro niveles de glucosa plasmáticos siguientes: en ayunas 105mg/dL, después de una hora190mg/dL, a las dos horas 165mg/dL y a las tres horas 145mg/dL. Antes de realizar la prueba de tolerancia oral a la glucosa los sujetos deben ingerir al menos 150 gramos diarios de Carbohidratos durante los t res días anteriores, el análisis debe realizarse en ayunas, los sujetos en estudio en el transcurso de la noche no pueden comer, beber té, café o alcohol , hacer ejercicios violentos o fumar cigarrillos. Es preferible recoger las muestras de sangre venosa en tubos de tapón gris (Fluoruro de sodio +EDTA). Los niveles de hemoglobina glucosilada (HbA 1C) son útiles en la monitorización del control de la glucemia. (Henry, 2005)

DIABETES MELLITUS INSULINO DEPENDIENTE (DMID) Usualmente aparece en personas jóvenes, con mayor frecuencia entre los 15 y los 20 años, aunque puede comenzar antes de los 40 años. Se trata de personas no obesas que abruptamente presentan los síntomas y signos clásicos manifiestos y pérdida de peso. En no pocos casos se presenta con episodios de cetoacidosis diabética (CAD).

LA CETOACIDOSIS DIABÉTICA (CAD) En inglés Diabetic Ketoacidosis, DKA, hace referencia a una descompensación de la diabetes mellitus que, junto con el estado hiperosmolar y la hipoglicemia secundaria, son las tres principales complicaciones agudas de la diabetes mellitus. A diferencia de las complicaciones crónicas, esta complicación se desarrolla en cuestión de horas y pone en peligro la vida del paciente, por lo que se considera una urgencia médica. Los cuerpos cetónicos son el ácido acetoacético (acetoacetato) y el ácidobetahidroxibutírico (βhidroxibutirato); una parte del acetoacetato sufre descarboxilación dando acetona (una cantidad insignificante en condiciones normales); los dos primeros son ácidos y el tercero, una cetona.

SINTOMATOLOGÍA Inicialmente los síntomas son poliuria, polifagia y polidipsia, a


los propios de los que se


una Diabetes Mellitus descontrolada: le añade malestar general, cefalea,

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debilidad, astenia y adinamia. Conforme la deshidratación y la alteración hidroelectrolítica se acentúan, se añade desorientación y sopor (especialmente en pacientes debilitados o ya enfermos), así como naúsea, vómito y dolor abdominal. La exploración física muestra datos típicos de deshidratación (boca y conjuntivas secas, ojos hundidos, piel seca, pulso débil, hipotensión, respiración superficial), junto con datos de gravedad (hipotensión severa, pulso no detectable, falta de reacción a estímulos) y algunos más específicos como la respiración de Kussmaul (respiración rápida, profunda, irregular) provocada por la acidosis metabólica y el "aliento cetónico" o aliento con olor a frutas ácidas, provocado por la salida de acetona a través del aliento.

DATOS DE LABORATORIO El elemento más destacable es la hiperglucemia que, casi invariablemente, se encuentra en niveles por encima de los 250 mg/dL. El grado de acidosis metabólica se evalúa a través de la medición del pH sanguíneo y la concentración de bicarbonato. En casos leves el pH fluctúa entre 7.25 a 7.30, y el bicarbonato entre 15 a 18 mEq/L; sin embargo en casos graves pueden descender hasta <7.00 y <10 mEq/L respectivamente, concentraciones que se asocian con estupor y coma.

DIAGNÓSTICO La CAD se caracteriza por hiperglucemia, cetosis y acidosis metabólica (con aumento del anion gap). Es frecuente que el bicarbonato sérico sea <10 mmol/L, y el pH arterial oscile entre 6.8 y 7.3, dependiendo de la gravedad de la acidosis. El ascenso del nitrógeno de la urea sanguínea (BUN) y de la creatinina sérica refleja el decremento de volumen intravascular. Aunque las determinaciones de creatinina sérica pueden estar falsamente elevadas por el acetoacetato (uno cuerpo cetónico). Se encuentra a menudo leucocitosis, hipertrigliceridemia e hiperlipoproteinemia. El sodio sérico está disminuido a consecuencia de la hiperglicemia, porque la hiperglicemia hace que salga agua de las células y terminan diluyendo el sodio sérico. (Wikipedia, 2013)

DIABETES MELLITUS NO INSULINODEPENDIENTE (DMNID) Habitualmente comienza en la edad media, después de los 40 años; generalmente se trata de sujetos obesos o con sobrepeso. La sintomatología es gradual y moderada, pero si no es detectada puede conducir a un coma hiperosmolar. Con frecuencia, el diagnóstico se realiza en un individuo asintomático al que se le detectan cifras de glicemia elevadas en un examen corriente de laboratorio. Es excepcional que estos pacientes presenten CAD. En la primera visita, el médico debe realizar una cuidadosa evaluación del paciente que incluya una historia completa de los antecedentes familiares y personales. Se debe hacer énfasis en los factores de riesgo, infecciones previas, hábitos dietéticos, consumo de medicamentos, así como efectuar una detallada descripción de los síntomas referidos por el paciente, incluidos aspectos psíquicos relacionados con la afección. De igual forma, el médico debe realizar un examen físico integral y prestar especial atención a los sistemas afectados por la diabetes, para detectar complicaciones precoces o daños iniciales en los ojos, la cavidad oral, tiroides, aparato musculo esquelético, sistema cardiovascular, abdomen, piel, pies, sistema nervioso (central y periférico), entre otros. También deben medirse el peso y la talla para calcular el índice de masa corporal (IMC). (Batista, Ortega, & Fernández, 1998) El índice de masa corporal (IMC) es una medida de asociación entre el peso y la talla de un individuo

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La información obtenida luego de este examen clínico permitirá hacer una evaluación inicial del estado del paciente, la que determinará la conducta y el seguimiento que se le debe dar, así como la necesidad de su valoración por otros especialistas y los estudios de laboratorio que será necesario realizar en lo adelante. Los análisis de laboratorio tienen la finalidad de evaluar el estado de control metabólico y la presencia de complicaciones. En ese sentido, debe efectuarse la determinación de la glucosa plasmática en ayunas y posprandial de 2 horas, los niveles de hemoglobina glicosilada (HbA1), las cifras de lípidos en ayunas (colesterol total, LDL-colesterol, HDL-colesterol y triglicéridos), de la creatinina sérica, proteinuria, glucosuria y cetonuria, los niveles de TSH (en pacientes con DMID), realizarse un electrocardiograma (EKG) y otros exámenes que se requiera indicar.

ETIOPATOGENIA DEL PIE DIABÉTICO: (Mecanismos integrados en su patogenia)



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MÉTODO DE ANALISIS: Enzimático Colorimétrico, Punto Final CONDICIONES DE REACCION: Color proporcional a la concentración VALORES DE REFERENCIA (SUERO) 

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GLUCOSA EN AYUNAS Adultos

70-105 mg/dL (3,89-5,83mmol/L)

Niños

60-110mg/dL (3,33-6,11mmol/L)

Neonatos

40-60mg/dL (2,22-3,33mmol/L)

GLUCOSA POSTPRANDIAL -

65-139 mg /dl valores normales de glucosa post – prandial. En la persona no diabética, los valores de glucosa postprandial tras dos horas no exceden de 140 mg/dl. 140-200 mg/ dL Indica tolerancia alterada de la glucosa. >200 mg / dL es Diagnostica de Diabetes Mellitus. Los niveles aumentan moderadamente en personas mayores de 50 años

5. DISEÑO EXPERIMENTAL -

Equilibrar reactivos y muestras a temperatura ambiente

-

Pipetear en los tubos rotulados: TUBOS Reactivo Standard muestra 1 muestra 2

BLANCO 1mL -

STANDARD 1mL 10µL -

MUESTRA 1 1mL 10µL

MUESTRA 2 1mL 10 µL

MUESTRA 1 = suero obtenido en ayunas MUESTRA 2 = suero obtenido después de 2 horas del ingesta del desayuno habitual -

Mezclar y reposar los tubos 10 minutos a temperatura ambiente ó cinco minutos a 37ºC. Leer la absorbancia (A) del patrón y de la muestra frente al blanco del reactivo. El color es estable 2 horas protegido de la luz (glucosa). Calcular la concentración de glucosa, Para expresar los resultados en unidades SI aplicar: mg/dL*0.0555=mmol/L Muestras con concentraciones superiores a 500mg/dL deben diluirse 1:4 con solución salina y repetir el ensayo. Multiplicar los resultados por 4. Limite de detección=0.63mg/dL Linealidad= hasta 500mg/dL

6. CALCULOS    

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7. CUESTIONARIO 7.1.

Explique los mecanismos involucrados en la patogenia de las complicaciones crónicas de la Diabetes Mellitus, tomando en cuenta los siguientes organizadores gráficos.

7.2.

Utilizando organizadores gráficos e imágenes describa las complicaciones agudas y crónicas (microangiopatía, macroangiopatia y neuropatía) de la Diabetes Mellitus. Describa los factores predisponentes, precipitantes y agravantes en la aparición y evolución del Pie Diabético. ¿En qué situaciones el médico solicita las pruebas de laboratorios, curva de tolerancia oral a la glucosa y hemoglobina glicosilada? En que fluidos biológicos se dosifican cada una de ellos. ¿En qué fluido biológico se dosifica Hemoglobina glicosilada y método de análisis es usado? ¿Qué es un bypass gástrico metabólico? ¿En qué casos se utiliza? ¿En qué pacientes se utiliza? Pros y Contra de su utilización. Realizar un glosario de los siguientes términos: poliuria, polifagia, polidipsia, etiopatogenia, astenia, adinamia, cefalea, sopor, estupor, coma, cetosis, leucocitosis, hemoglobina glicosilada, proteinuria, glucosuria y cetonuria.

7.3. 7.4.

7.5. 7.6. 7.7.

BIBLIOGRAFÍA Batista,

R., Ortega, L., & Fernández, G. (1998). http://www.bvs.sld.cu/revistas/res/vol11_1_98/res02198.htm

Revistas

medicas

Cubanas.

Obtenido

de

Henry, J. (2005). El Laboratorio en el Diagnostico Clínico. Madrid: Marbán. Wikipedia, O. (05 de 2013). Cetoacidosis diabética. Obtenido de http://es.wikipedia.org/wiki/Cetoacidosis_diab%C3%A9tica



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