LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA KLINIK “ PEMERIKSAAN URIN ATAS INDIKASI BILIRUBIN “
Oleh : Femmy Andrifianie (!"""# $el%m&%$ ' an)il
Tan* Tan**a *all Pra$ Pra$+i +i$, $,m m :
"! A&ri A&rill '"' '"'
D%-en D%-en Pemim. Pemim.in* in*
Dra/ Dra/ Syilfi Syilfia a 0a-+i/ 0a-+i/ M/ Farm1/ Farm1/ A&+
:
A-i-+en : "/ Mela Af Afryyanna '/ 2elfi Ra+mi
Pr%*ram S+,di S" Farma-i Se$%lah Tin**i Farma-i Ria,
Pe$an.ar, '"' PEMERIKSAAN URINE ATAS INDIKASI BILIRUBIN
I/
TU3UAN
Untuk menentukan adanya bilirubin dalam urine
II/
PRINSIP
Percobaan Harrison
BaCl2 bereaksi dengan sulfat dalam urine membentuk endapan BaSO 4 dan bilirubin menempel pada molekul tersebut FeCl 3 mengoksidasi bilirubin menadi!
Bili"ardin
#arna $iau
Bilicyanin
#arna biru
C$oletelin
#arna kuning
Percobaan Ha#kinson
Untuk mengeta$ui adanya indikasi dalam urin dengan peruba$an #arna yang suda$ di tentukan%
III/
TIN3AUAN PUSTAKA
Bilirubin berasal dari pemeca$an $emoglobin yang teradi dalam sel&sel '(S dan sel&sel poligonal $ati% Bilirubin yang teradi tidak larut dalam plasma) ole$ karena itu
untuk memungkinkan teradinya transportasi ke dalam $epar maka pigmen tersebut berikatan dengan protein plasma terutama albumin% Bilirubin yang berasal dari sel&sel '(S dilepas kedalam peredaran dara$ untuk kemudian memasuki $epar% Bilirubin merupakan produk yang bersifat toksik dan $arus dikeluarkan ole$ tubu$% Sebagian besar bilirubin tersebut berasal dari degradasi $emoglobin dara$ dan sebagian lagi dari $em bebas atau proses eritropoesis yang tidak efektif% Pembentukan bilirubin tadi dimulai dengan proses oksidasi yang meng$asilkan bili"erdin serta beberapa *at lain% Bili"erdin inila$ yang mengalami reduksi dan menadi bilirubin bebas% Pembentukan bilirubin pada keadaan fisiologis) masa $idup erytrosit manusia sekitar +2, $ari)eritrosit mengalami lisis +&2-+,. setiap amnya pada seorang de#asa dengan berat badan /, kg) dimana diper$itungkan $emoglobin yang turut lisis sekitar 0 gr per $ari% Sel&sel eritrosit tua dikeluarkan dari sirkulasi dan di$ancurkan ole$ limpa% 1poprotein dari $emoglobin di$idrolisis menadi komponen asam&asam aminonya% atabolisme $eme dari semua $emeprotein teradi dalam fraksi mikrosom sel retikuloendotel ole$ sistem en*im yang kompleks yaitu $eme oksigenase yang merupakan en*im dari keluarga besar sitokrom P4,% angka$ a#al pemeca$an gugus $eme iala$ pemutusan embatan 5 metena membentuk bili"erdin) suatu tetrapirol linier% Besi mengalami beberapa kali reaksi reduksi dan oksidasi) reaksi&reaksi ini memerlukan oksigen dan 617PH% Pada ak$ir reaksi dibebaskan Fe38 yang dapat digunakan kembali) karbon monoksida yang berasal dari atom karbon embatan metena dan bili"erdin% Bili"erdin) suatu pigmen ber#arna $iau akan direduksi ole$ bili"erdin reduktase yang menggunakan 617PH se$ingga rantai metenil menadi rantai metilen antara cincin pirol 999 : 9; dan membentuk pigmen ber#arna kuning yaitu bilirubin% Peruba$an #arna pada memar merupakan petunuk reaksi degradasi ini%
Bilirubin bersifat lebi$ sukar larut dalam air dibandingkan dengan bili"erdin% 7alam setiap + gr $emoglobin yang lisis akan membentuk 3 mg bilirubin dan tiap $ari dibentuk sekitar 2,:3, mg pada seorang de#asa) berasal dari pemeca$an $emoglobin) proses erytropoetik yang tidak efekif dan pemeca$an $emprotein lainnya% Bilirubin dari aringan retikuloendotel adala$ bentuk yang sedikit larut dalam plasma dan air% Bilirubin ini akan di ikat nonko"alen dan diangkut ole$ albumin ke $epar% 7alam +,, ml plasma $anya lebi$ kurang 2 mg bilirubin yang dapat diikat kuat pada albumin% Bilirubin yang melebi$i umla$ ini $anya terikat longgar $ingga muda$ lepas dan berdifusi ke aringan% Bilirubin yang sampai di$ati akan dilepas dari albumin dan diambil pada permukaan sinusoid $epatosit ole$ suatu protein pemba#a yaitu ligandin% Sistem transport difasilitasi ini mempunyai kapasitas yang sangat besar tetapi penggambilan bilirubin akan tergantung pada kelancaran proses yang akan dile#ati bilirubin berikutnya% Bilirubin nonpolar akan menetap dalam sel ika tidak diuba$ menadi bentuk larut% Hepatosit akan menguba$ bilirubin menadi bentuk larut yang dapat diekskresikan dengan muda$ kedalam kandung empedu% Proses peruba$an tersebut melibatkan asam glukoronat yang dikonugasikan dengan bilirubin) dikatalisis ole$ en*im bilirubin glukoronosiltransferase%
Hati
mengandung
sedikitnya
dua
isoform
en*ym
glukoronosiltransferase yang terdapat terutama pada retikulum endoplasma% 'eaksi konugasi ini berlangsung dua ta$ap) memerlukan U7P asam glukoronat sebagai donor glukoronat%
) bilirubin diikat ole$ 2 protein intraseluler utama dalam sitoplasma) protein sitosolik @ =misalnya) ligandin atau glutat$ione Stransferase B> dan protein sitosolik * =dikenal uga sebagai fatty acid:binding protein>% 7idalam $ati bilirubin dilepaskan dari albumin dan selanutnya mengalami konugasi dengan 1sam glukoronat membentuk ester Bilirubin monoglukoronat atau Bilirubin diglukoronat =B7A> yang dikenal dengan nama Conugated Bilirubin =CB>%
Aambar 2%+% etabolisme bilirubin pada neonatus Proses ini berlangsung karena pengaru$ en*im Urind$yn di&P$osp$ate Alukoronil % CB ini bersifat sangat muda$ larut di air dan merupakan pigmen utama dari empedu% Bilirubin dikonugasi =CB> disekresikan ke dalam saluran empedu dan mele#ati usus% etika direct bilirubin =CB> ini sampai di usus besar kolon ole$ bakteri & bakteri usus direduksi menadi urobilinogen dimana sebagian urobilinogen tersebut direabsorpsi melalui mukosa usus masuk dalam dara$% Sebagian *at ini diekskresi ole$ $ati dan kembali masuk kedalam usus kemudian sekitar D diekskresi ole$ ginal melalui urine% Setela$ urine tersebut kena udara maka urobilinogen teroksidasi menadi Urobilin sedangkan pada faeces sterkobilinogen teroksidasi menadi sterkobilin% Secara normal) bilirubin tidak diumpai di urin% Bilirubin terbentuk dari penguraian $emoglobin dan ditranspor ke $ati) tempat bilirubin berkonugasi dan diekskresi dalam bentuk empedu% Bilirubin terkonugasi =bilirubin direk> ini larut dalam air dan diekskresikan ke dalam urin ika teradi peningkatan kadar di serum% Bilirubin tak terkonugasi =bilirubin indirek> bersifat larut dalam lemak) se$ingga tidak dapat diekskresikan ke dalam urin% Bilirubin adala$ suatu pigmen empedu yang diproduksi ole$ sel : sel $epar bersama dengan garam empedu sebagai cairan empedu%dalam urin berdasarkan reaksi antara garam dia*onium dengan bilirubin dalam suasana asam) yang menimbulkan #arna biru atau ungu tua% Aaram dia*onium terdiri dari p&nitroben*ene
dia*onium dan p&toluene sulfonate) sedangkan asam yang dipakai adala$ asam sulfo salisilat% 1danya bilirubin ,),&+ mgdl urin akan memberikan $asil positif dan keadaan ini menunukkan kelainan $ati atau saluran empedu% $asil positif palsu dapat teradi bila dalam urin terdapat mefenamic acid) c$lorproma*ine dengan kadar yang tinggi sedangkan negatif palsu dapat teradi bila urin mengandung metabolit pyridium atau serenium%
I4/
ALAT DAN BA0AN
9%+%
4/
1lat : alat
9%2% Ba$an : ba$an
•
•
Urin se#aktu
•
Corong
•
arutan BaCl2 +,D
•
Pinset
•
'eagen fauc$et
•
Pipet tetes
•
Pipet takar ml
•
ertas saring
PROSEDUR PER5OBAAN
a% etode Harrison
•
•
7itamba$ ml BaCl 2 +,D) dicampur kemudian disaring dengan kertas saring
•
Presipitat pada kertas saring dibiarkan kering
•
b% etoda Ha#kinson
•
ertas saring di rendam dengan BaCl 2 enu$ lalu keringkan sampai benar&benar kering%
•
Potong kertas saring berukuran 4 E inci%
•
alu berikan beberapa tetes urin pada kertas saring tersebut
•
Biarkan selama 3, detik sampai 2 menit
•
4I/
0ASIL DAN PEMBA0ASAN
;9%+% a%
Hasil pengamatan etoda Harrison
Hasilnya negatif =&> #arna pada kertas saring yang di dapatkan kuning tidak ada timbul #arna $iau atau biru ke$iauan% b%
etoda Ha#kinson
Hasilnya negatif =&> #arna pada kertas saring yang di dapatkan kuning tidak ada timbul #arna $iau
;9%2%
Pemba$asan Fungsi reagen fouc$et pada pemeriksaan $arrison untuk mengoksidasi
bilirubin menadi bili"erdin% omposisi reagen fouc$et ! o
1sam tric$orasetat 2 gram Fungsi ! mengendapkan protein
o
arutan FeCl3 +,D sebanyak +, ml Fungsi !engoksidasi bilirubin menadi bili"erdin
o
1Guades +,, ml Fungsi ! Sebagai pengencer% Pada bilirubin mengindikasi pada gangguan $ati atau saluran empedu) seperti pada $epatitis infeksma toksi $epar kanker $ati% Urin yang mengandung bilirubin tinggi tampak ber#arna kuning pekat dan ika digoyang : goyang akan timbul busa%
Peningkatan
ekskresi
ika
fungsi
$epar
menurun
atau
kelebi$an
urobilinogen% Hasil = 8 > ika setela$ ola$raga minum ataupun kelela$an sembelit% ika menurun diumpai pada kanker pankreas) penyakit $ati% Hasil
percobaan yang di dapat ba$#a negati"e yang berarti tidak adanya gangguan dari organ dalam tubu$ dan $asilnya normal dalam umla$ urin yang sedikit% 1dapun metabolisme bilirubin menyebabkan teradinya ikterus Syarat pemeriksaan !
Urin segar) karena bilirubin belum terksidasi menadi bili"erdin ) se$ingga menyebabkan $asil pemeriksaan bilirubin menadi =&> palsu%
Botol
penampung
urin
coklat)
karena
untuk
meng$indari
pengaru$
sinaroksidasi) se$ingga bilirubin belum teroksidasi menadi bili"erdin
epekaan tes $ori*on ter$adap bilirubin dalam urin ! ,%,,&,%+ mgdl
Penyebab =8> palsu pemeriksaan $ori*on!
onsentrasi urobilin tinggi
obat&obatan =acrifla"in dan pyridium> Penyebab =&> palsu pemeriksaan $ori*on !
Urin lama ) bilirubin suda$ teroksidasi menadi bili"erdin ) se$ingga $asil menadi =&> palsu)
ertas saring belum kering) bilirubin tidak dapat bereaksi dengan fouc$et) maka bilirubin tidak dpat teroksidasi menadi bili"erdin) se$ingga teradi =&> palsu
Pengaru$ ca$aya sinar) disebabkan botol penampung urin tidak gelap) maka bilirubin akan teroksidasi menadi bili"erdin se$ingga menyebabkan $asil =&> palsu%
4II/
KESIMPULAN
Faktor yang dapat mempengaru$i temuan laboratorium !
o
akan malam yang mengandung tinggi lemak sebelum pemeriksaan dapat mempengaru$i kadar bilirubin%
o
Iortel dan ubi alar dapat meningkatkan kadar bilirubin%
o
Hemolisis pada sampel dara$ dapat mempengaru$i $asil pemeriksaan%
o
Sampel dara$ yang terpapar sinar mata$ari atau terang lampu) kandungan pigmen empedunya akan menurun%
o
Obat&obatan tertentu dapat meningkatkan atau menurunkan kadar bilirubin%
o
'eaksi negati"e palsu teradi bila bilirubin teroksidasi menadi bili"erdin akibat penundaan pemeriksaan%
4III/ DAFTAR PUSTAKA $ttp!karimaesesaselatan%blogspot%com2,+++,pemeriksaan&air&seni&urine&analysis%$tml $ttp!karimaesesaselatan%blogspot%com2,+2,+pemeriksaan&bilirubin&dan&urobilinogen%$tml $ttp!edi&kurnianto%blogspot%com2,++,Jpemeriksaan&bilirubin%$tml $ttp!c$aterinaryan%blogspot%com2,++,4pemeriksaan&bilirubin&metode&$ori*on%$tml $ttp!persemba$antosemua%blogspot%com2,,J,+pemeriksaan&laboratorium%$tml
LAPORAN PRAKTIKUM
BIOKIMIA KLINIK “ PEMERIKSAAN URIN ATAS INDIKASI UROBILIN “
Oleh : Femmy Andrifianie (!"""# $el%m&%$ ' an)il
Tan**al Pra$+i$,m :
"! A&ril '"'
D%-en Pemim.in*
Dra/ Syilfia 0a-+i/ M/ Farm1/ A&+
:
A-i-+en : "/ Mela Afryyanna '/ 2elfi Ra+mi
Pr%*ram S+,di S" Farma-i Se$%lah Tin**i Farma-i Ria, Pe$an.ar,
'"' PEMERIKSAAN URIN ATAS INDIKASI UROBILIN
I/
TU3UAN
Untuk menentukan adanya urobilin dalam urin
II/
PRINSIP
Urobilin dengan reagen sc$lesinger membentuk suatu kompleks dengan memberikan fluoresensi $iau%
III/ TIN3AUAN PUSTAKA Pembentukan urobilin teradi pada Bilirubin terkonugasi yang mencapai ileum terminal dan kolon di$idrolisa ole$ en*ym bakteri K glukoronidase dan pigmen yang bebas dari glukoronida direduksi ole$ bakteri usus menadi urobilinogen) suatu senya#a tetrapirol tak ber#arna%Aeta$ empedu di$asilkan dari $asil perombakan sel dara$ mera$% Aeta$ ini ditampung di dalam kantung empedu kemudian disalurkan ke usus +2 ari% Aeta$ empedu pada dasarnya terdiri atas dua komponen yaitu garam empedu dan *at #arna empedu% Aaram empedu berfungsi dalam proses pencernaan makanan yaitu untuk mengemulsi lemak% Sedangkan *at #arna empedu tidak berfungsi se$ingga $arus diekskresikan% Lat #arna empedu yang diekskresikan ke usus +2 ari) sebagian menadi sterkobilin) yaitu *at yang me#arnai feses dan beberapa diserap kembali ole$ dara$ dibuang melalui ginal se$ingga membuat #arna pada urine yang disebut urobilin% edua *at ini mengakibatkan #arna feses dan urine kuning kecoklatan%
Bilirubin dapat mengganggu pada percobaan ini% Bila ada bilirubin $arus di$ilangkan dulu dengan cara menamba$kan calcium $idroksida padat dalam urin) lalu filtrate $asil saringan dipakai untuk pemeriksaan%umla$ urobilin dalam urin karena itu adala$ *at penting dalam metabolisme) produksi urin%
o
Obstruksi saluran empedu
(kstra $epata
9ntra $epata
o
Flora usus
o
Produksi Bilirubin
o
onstipasi
o
Aangguan faal $ati
o
7iare
o
Aangguan faal ginal
o
1rti penting pada penderita ikterus urobilin =&> obstruksi% 7alam urin segar tidak ada uribilin) *at itu baru akan teradi ole$ oksidasi
urobilinogen% Pada pemeriksaan ter$adap urobilin sengaa ditamba$kan sedikit yodium sebagai larutan lugol untuk menalankan oksidasi itu% @ang dipakai untuk menyatakan urobilin iala$ reagens Sc$lesinger) yaitu larutan *ink asetat atau *ink klorida yang enu$ dalam alko$ol J D%9ndikasi atau indoksilsulfat ikut bereaksi dengan reagens Iallace dan 7iamond) tetapi tidak bereaksi dengan reagens Sc$lesinger ter$adap urobilin%ika ada indikasi klinik atau bila tersangka ba$#a #arna mera$ kuat pada reaksi ter$adap urobilinogen disebabkan ole$ deri"at indol) maka lakukanla$ test menurut Obermayer untuk membedakannya% 'eagens ini mengoksidasi indikasi menadi indigobiru =atau indigomera$ ika oksidasi beralan lambat>%Bilirubin yang dapat diumpai dalam urine adala$ bilirubin direk =terkonugasi>) karena tidak terkait dengan albumin) se$ingga muda$ difiltrasi ole$ glomerulus dan diekskresikan ke dalam urine bila kadar dalam dara$ meningkat% Bilirubinuria diumpai pada ikterus parenkimatosa =$epatitis infeksiosa) toksik $epar>) ikterus obstruktif) kanker $ati =sekunder>) CHF disertai ikterik% Urin se#aktu adala$ urin yang dikeluarkan pada satu #aktu yang tidak ditentukan dengan k$usus) urin se#aktu cukup baik untuk pemeriksaan rutin% Urin pagi adala$ urin yang pertama&tama dikeluarkan pada pagi $ari setela$ bangun tidur) urin ini lebi$ pekat dari urin yang dikeluarkan pada siang $ari) urin pagi baik untuk pemeriksaan sedimen) protein) dan berat enis% Urin post prandial adala$ urin yang pertama kali dikeluarkan +&3 am setela$ makan) urin ini baik untuk pemeriksaan ter$adap glukosuria% Urin 24 am adala$ urin yang dikumpulkan selama 24 am% Urin 24 am dapat digunakan untuk pemeriksaan kuantitatif semua *at dalam urin% Selain itu) dikenal uga urin siang +2 am) urin malam +2 am) urin 2 am) urin 3 gelas) dan urin 2 gelas%
Urin di$asilkan ole$ ginal melalui proses filtrasi plasma dara$ ole$ glomeruli) reabsorpsi ole$ tubulus) sekresi ole$ sel tubulus) pertukaran ion $idrogen) dan pembentukan amonia% Sifat&sifat urin normal yaitu "olumenya .,,&2,, m$ari) berat enis +),,3&+),3,) pH asam dengan pH rata&rata 0 =4)/&.>) #arna kuning pucat sampai kuning% Lat #arna yang terkandung di dalamnya adala$ urokrom) urobilin) dan $ematoporfirin% Lat normal dalam urin adala$ urea yang merupakan $asil ak$ir utama dari katabolisme protein% Se$ari diekskresikan 2 g) tergantung intake proteinnya% (kskresi naik pada saat demam) penyakit kencing manis) akti"itas $ormon adrenokortikoid yang berlebi$an% 7i $epar) urea di bentuk dari siklus urea =ornitin dari CO2 dan 6H 3>% Pembentukan urea menurun pada penyakit $epar dan asidosis% 1monia dikeluarkan dari sel tubulus ginal) pada asidosis pembentukan amonia akan naik% reatinin merupakan $asil katabolisme kreatin% oefisien kreatinin adala$ umla$ mg kreatinin yang diekskresikan dalam 24 amkg berat badan% 6ilai normal pada laki&laki adala$ 2,&20 mgkg berat badan% Sedang pada #anita adala$ +4&22 mgkg berat badan% (kskresi kreatinin meningkat pada penyakit otot% 1sam urat adala$ $asil oksidasi purin di dalam tubu$% elarutannya dalam air kecil tetapi larut dalam garam alkali% (kskresinya meningkat pada leukimia) penyakit $epar) dan gout% Penamba$an arsenofosfotungstat dan natrium sianida memberi #arna biru% 9ni merupakan dasar penetapan asam urat secara kolometri ole$ folin% (n*im urikase akan menadi allantoin% 1sam amino pada de#asa kira&kira diekskresikan +,&2,, mg 6$ari% 1llantoin merupakan $asil oksidasi asam urat% lorida dikeluarkan dalam bentuk 6aCl) tergantung intake&nya) ekskresi J&+0 g$ari% Fosfat di urin berikatan dengan natrium) kalsium) magnesium) dan kalsium% Oksalat pada metabolisme $erediter tertentu) ekskresinya naik% ineral) kationnya =6a) ) Ca) g>% Lat abnormal dalam urin yaitu protein) glukosa) fruktosuria) galaktosuria) laktosuria) pentosuria) benda & benda keton)
bilirubin) garam &garam kolat) dara$) porfirin) dan indikan% Protein tidak bole$ lebi$ dari 2,, mg$ari% (kskresinya naik berarti teradi proteinuria misal teradi glomeluronefritis se$ingga ginalnya bocor%
I4/
ALAT DAN BA0AN
9;%+%
1lat : alat
•
•
'ak tabung
•
Corong
•
Pipet takar ml
•
Aelas ukur +, ml
•
Pipet tetes
9;%2%
Ba$an : ba$an
•
'eagen Sc$lesinger
•
arutan lugol
•
Urin se#aktu
•
4/
1Guadest
PROSEDUR PER5OBAAN
Cara pemeriksaan ! a% ml urin di tamba$ 2 tetes larutan lugol b%
4I/
0ASIL DAN PEMBA0ASAN
;9%+%
Hasil Pengamatan
Hasil yang di dapat negatif = & > #arnanya kuning pucat tidak di dapatkan fluoresensi $iau pada filtrat% ;9%2%
Pemba$asan
Hasil yang di dapat pada pemeriksaan urine pada praktikum ini untuk mengindikasikan beberapa penyakit sangat penting% pemeriksaan urine tidak $anya dapat memberikan fakta&fakta tentang ginal dan saluran urine tetapi uga mengenai faal berbagai organ dalam beberapa tubu$ seperti $ati) saluran empedu) pankreas dan korteks adrenal% Pada praktikum sampel urin se#aktu filtrat yang disaring tidak berfluorosensi artinya sampel negatif ter$adap urobilin dan tidak ada penyakit pada tubu$ orang tersebut% Hal ini teradi karena dalam urine segar praktis tidak ada urobilin) *at ini kemudian timbul ika ada oksidasi ole$ urobilinogen% arena itu ditamba$kan larutan lugol yang mengandung iodium dan kalium iodida untuk menalankan
oksidasi
tersebut% Urin
gelap
tidak selalu merupakan tanda
penyakit% urangnya asupan air) misalnya setela$ tidur atau de$idrasi) mengurangi kadar air urin) se$ingga berkonsentrasi urobilin dan meng$asilkan #arna yang lebi$
gelap dari urin%
4II/ KESIMPULAN 1pabila #arna filtrat mera$ muda maka di dalam filtrat ada bilirubin ole$ karena itu $arus di keluarkan dengan CaCl2 dan 6a2CO3 karena filtrat pada bilirubin tidak dapat mengidentifikasi pada urobilin% Pada pemeriksaan urobilin) urobilinogen dan bilirubin sebaiknya tidak diberikan obat yang memberi #arna pada urin) seperti "itamin B2 =ribofla"in>) pyridium dan lain & lain% Untuk pemeriksaan urobilin dipergunakan urin segar karena *at&*at ini bersifat labil) pada su$u kamar bila kena ca$aya% Banyak tes urin =urinalisis> yang memantau umla$ urobilin dalam urin karena merupakan *at penting dalam metabolisme produksi urin%
%$4III/ DAFTAR PUSTAKA $ttp!karimaesesaselatan%blogspot%com2,+2,+pemeriksaan&bilirubin&dan&urobilinogen%$tml $ttp!ml%scribd%comdoc./+4++.Pemeriksaan&Urine&engkap $ttp!tarisblogger%blogspot%com2,+2,+pemeriksaan&urobilin%$tml $ttp!a*$ardia*$ar%#ordpress%comcategorykimia
$ttp!en%#ikipedia%org#ikiUrobilin
