LAPORAN PRAKTIKUM BIOKIMIA DASAR ACARA VII URIN KUALITATIF
Disusun Oleh : Kelompok IX Harwanto
: PT/ 05474
Ikhsan Tri Wahyudi
: PT/ 05477
Rosallina Vivi
: PT/ 05498
Usnida Mubarokhah
: PT/ 05507
Sofia Nanti W
: PT/ 05543
Asisten
: Dilla Mareistia Fassah
LABORATORIUM BIOKIMIA NUTRISI BAGIAN NUTRISI DAN MAKANAN TERNAK FAKULTAS PETERNAKAN UNIVERSITAS GADJAH MADA YOGYAKARTA 2009
ACARA VII URINE KUALITATIF
Tujuan Praktikum Tujuan dari praktikum ini adalah untuk mengetahui adanya zat-zat yang terkandung di dalam urine yaitu senyawa organik dan anorganik serta keadaan abnormalitas urine. Tinjauan Pustaka Urin adalah suatu cairan esensial dari hasil metabolisme nitrogen dan sulfur,garam-garam
anorganik
dan
pigmen-pigmen.
Biasanya
berwarna
kekuning-kuningan, meskipun secara normal banyak variasinya. Mempunyai bau yang khas untuk speciesyang berbeda. Jumlah urin yang diekskresikan tiap harinya bervariasi, tergantung pada pakan, konsumsi air, temperatur lingkungan, musim dan faktor-faktor lainnya (Ganong, 2003). Urine merupakan keluaran akhir yang dihasilkan ginjal sebagai akibat kelebihan urine dari penyaringan unsur-unsur plasma. Ginjal merupakan bagian organ dalam tubuh yang terletak pada bagian dorsal dari rongga abdominal (Frandson, 1992). Ginjal manusia merupakan tipe metanephros, berwarna merah gelap, berbentuk seperti biji kacang sekitar 4 inchi terletak di bagian belakang rongga tubuh sedikit ke bawah lambung pada garis media dorsalis (Girinda, 1989). Proses pembentukan urine dalam ginjal meliputi proses penyaringan (filtrasi), penyerapan kembali (reabsorbsi), dan penambahan zat – zat (augmentasi). Proses filtrasi terjadi di glomerulus dan kapsula bowman. Proses reabsorbsi terjadi di tubulus proksimal, dan augmentasi terjadi di tubulus distal. Ginjal kira-kira mengandung 1,3 x 10 6 nefron yang beroprasi secara paralel. Tiap nefron terdiri dari suatu glomerulus yang dibekali dengan darah dalam sistem kapiler arteri sedemikian sehingga terjadi tekanan filtrasi yang memadai untuk mempengaruhi ultrafiltrasi material berberat molekul rendah dalam plasma. (Roberts, 1993).
Sistem urinary bertanggung jawab untuk berlangsungnya ekskresi bermacam-macam produk buangan dari dalam tubuh. Sistem ini juga penting sebagai faktor untuk mempertahankan homeokinesis (homeositasis), yaitu suatu keadaan relatif konstan dari lingkungan internal di dalam tubuh. Hal tersebut mencakup faktor-faktor yang beragam seperti keseimbangan air, pH, tekanan osmotik,
tingkat
elektrolit,
dan
konsentrasi
banyak
zat
di
dalam
plasma.pengendalian itu dilaksanakan dengan penyaringan sejumlah besar plasma dan molekul-molekul kecil melalui glomerolus (Frandson, 1992). Hasil-hasil pemecahan metabolisme, paling banyak dikelurkan dari tubuh lewat ginjal bersama urine, terutama berlaku untuk akhir metabolisme protein yang mengandung nitrogen. Pada keadaan sakit metabolisme terganggu, ginjal mengeluarkan hasil-hasil pemecahan metabolisme yang terganggu tersebut asalkan fungsi ginjal cukup baik, juga banyak racun-racun dan obat-obat yang dikeluarkan oleh urine baik dalam keadaan tidak diubah maupun dalam hasilhasil pemecahanya. Zat warna urin barasal dari metabolisme endogen yang dijabarkan dari zat warna empedu. Urin segar yang normal mempunyai warna sitrum sampai kuning batu ambar (Dawiesah, 1989). Senyawa-senyawa yang terdapat dalam urine yaitu senyawa organik, senyawa anorganik, dan zat-zat lain. Urea adalah hasil akhir utama dari metabolisme protein. Ekskresi berhubungan langsung dengan intake protein. Biasanya urea merupakan 80-90% dari nitrogen urine total. Ekskresi urea meningkat ketika katabolisme protein meningkat, seperti pada diabetes dan aktivitas korteks jaringan yang berlebihan. Asam urat adalah hasil akhir terpenting dari oksidasi purin dalam tubuh. Asam urat berasal tidak hanya dari nukleoprotein makanan, melainkan juga dari pemecahan nukleoprotein sel dalam tubuh. Asam urat sangat sukar larut dalam air, tetapi membantuk garamgaramyang larut dalam urine bila asam dibiarkan). Asam urat ditemukan dalam urine normal sekitar 0,5-1,0 gram perhari, tetapi jumlah ini dapat bervariasi yang besar Kreatinin adalah anhidrid dari kreatin ( methyl guanidino acatic acid ) dan benda yang konstan dari urine. Kreatinin dapat diukur dengan memberi alakali
pikrat pada urine, dengan adanya kreatin campuran memberi warna ambar. Warnanya dicocokkan dengan standar yang juga telah diberi larutan alkalikiprat. Kreatin ditemukan peningkatan jumlahnya pada malnutrisi dan disintegrasi jaringan otot. Kreatin juga ditemukan dalam keadaan patologis seperti kelaparan, gangguan metabolisme karbohidrat, hipertiroidi, dan miopatia tertentu dan infeksi-infeksi. Terdapatnya kreatin dalam urine disebut kreatinuria Variasi khlorida menentukan bagian dari bahan padat dalam urine. Ekskresi Cl tergantung pada partikel, diet alami, tetapi rata-ratanya sekitar 10-15 gram sehari. Khlorida diekskresikan sebagai natrium khlorida adalah yang utama karena sebagian khlorida adalah yang utama. Fosfat dalam urine merupakan gabungan dari natrium dan kalium fosfat (alakali fosfat) serat kalsium dan magnesium fosfat (fosfat tanah). Ekskresi fosfat pada urine dapat bervariasi secara ekstrim, tetapi rata-rata dalam sehari adalah 1,1 g. Ion fosfat dalam urine dapat berwujud dua bentuk, yaitu asam fosfat nonbasic
dan asam fosfat dibasic. Rasio keduanya mempengaruhi pH dan
buffer urine Sulfur urine terutama berasal dari protein karena terdapatnya asam-asam amino yang mengandung sulfur, metionin, dan sistin dalam molekul protein. Sulfur urine total biasanya memiliki tiga bentuk, yaitu sulfat anorganik, sulfat terkonjugasi, dan sulfat netral. Pada kondisi normal, sekitar satu gram sulfat dieliminasi setiap hari, sekitar 75-85 % tetap dalam sulfat. Sekitar 90% dari ekskresi sulfat adalah dalam bentuk anorganiksulfat dan 10 % dalam bentuk sulfat konjugasi dan sulfat netral Proteinuria adalah senyawa albumin dan globulin dalam urine pada konsentrasi yang abnormal. Pada keadaan normal tidak lebih dari 30-200 mg protein diekskresikan setiap hari melalui urine. Albumin dapat ditemukan dengan pemanasan urine, kemudian ditambah sedikit asam asetat encer. Terdapat endapan putih yang menetap setelah penambahan asam menunjukkan bahwa terdapat protein dalam urine Selain terdapat pada nefritia, darah juga terdapat dalam urine (hematuria) yang dapat disebabkan karena kerusakan pada ginjal atau saluran urine. Hemaglobin bebas (hemaglobinuria) terdapat dalam urine setelah
hemolisis
yang cepat misalnya pada kompilasi dari malaria atau setelah kebakaran yang hebat Urine yang mengandung pigmen empedu akan berwarna kunig kehijauan samapi coklat. Pigmen empedu dalam urine jumlahnya sanagat kecil. Daxar untuk uji pigmenempedu adalah oksidasi reagen dengan berbagai bentu seri tingkatan warna. Dengan uji gmelin yang positif, akan menghasilkan bermacammacam warna mulai dari warna hijau, biru merah, dan kuning kemerah-merahan. Didapatnya indoxyl sulfuric acud (indikan) dalam urine menunjukkan derajat katabolisme jaringan dan material protein adalah tidak benar, tetapi merupakan bagian besar dari organisme putrefektif usus dlama triptofan. Pengeluaran indikan dapat diambil sebagai petunjuk dini proses putrefektif dalam usus dan secara klinis hal yang penting dari asam sulfat terkonjugasi. Dalam kondisi normal, 10-20 gram indikan diekskresikan setiap harinya
Materi dan Metode
Materi Alat Alat-alat yang digunakan pada praktikum urine kualitatif ini adalah .
tabung reaksi, api spirtus, penjepit, penangas air, pipet tetes, kaca, cawan porselin, kertas saring, mangkuk, dan gelas ukur. Bahan. Bahan-bahan yang digunakan pada praktikum urine kualitatif ini adalah sampel urine sapi Peranakan Ongole (PO), sampel urine PO abnormal, ureum padat, air suling, larutan NaOH encer, larutan Na 2CO3 2 %, Na2CO3 padat, asam asetat, tepung kedelai, CuSO 4, fenol merah, pereaksi Benedict, Na 2SO3 20 %, HNO3 pekat, asam urat padat, amoniak, larutan AgNO 3, NaOH 10 %, asam pikrat, fenolftalein, HCl encer, BaCl 2, kalium okasalat, amonium molibdat, Benzidin, larutan H 2O2, HNO3 pekat, serbuk belerang, pereaksi obermeyer, dan khloroform. Metode Senyawa Organik Dalam Urine Uji Biuret Terhadap Ureum . Sebanyak 1 sendok kecil ureum padat dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan dipanaskan dengan api kecil sampai menjadi cair. Kemudian ditambah 1 ml larutan NaOH encer dan 1 ml CuSO 4. Setelah itu, warna yang terjadi dicatat. Uji Enzimatik Terhadap Ureum . Sebanyak 2 tabung disiapkan, pada tabung 1 dimasukkan 2 ml urin dan pada tabung 2 dimasukkan 2 ml air. Pada kedua tabung, masing-masing tabung ditambahkan beberapa tetes fenol merah, 1 ml larutan Na 2CO3 2 %, dan 1 ml asam asetat. Kemudian dipanaskan pada penangas air dengan suhu 60ºC selama 10 menit. Setelah itu, ditambahkan tepung kedelai dan digojog. Perbedaan warna yang terjadi antara kedua tabung diamati. Uji Benedict Terhadap Garam Urat . Sebanyak 2 ml urine ditambahkan 2 ml larutan Benedict dan sedikit Na 2CO3 padat. Kemudian dipanaskan dengan api spirtus selama 5 menit. Setelah itu, warna yang timbul dicatat.
Uji Murexida. Ke dalam cawan porselin dimasukkan 3 tetes HNO 3 pekat dan 1 sendok asam urat padat. Kemudian dipanaskan pada penangas air sampai menjadi kering. Setelah itu, ditambahkan amoniak. Warna yang terjadi dicatat. Uji Daya Mereduksi Asam Urat . Asam urat dilarutkan dalam 1 ml larutan Na2CO3. Kemudian larutan diteteskan ke atas kertas saring yang telah dibasahi dengan larutan AgNO 3. setelah itu, warna yang terjadi dicatat. Uji Pikrat. Sebanyak 1 ml asam pikrat jenuh ditambahkan 0,5 ml larutan NaOH 10 %. Larutan dibagi ke dalam 2 tabung. Pada tabung 1, ditambahkan 3 ml air, sedangkan pada tabung 2 ditambahkan 3 ml urine. Kemudian perbandingan warnanya diamati dan dicatat. Uji Terhadap Garam Amonium. Sebanyak 2 ml urine ditambahkan indikator fenolptalin dan sedikit larutan Na 2CO3 2 % sampai warna merah, lalu dipanaskan dengan menggunakan api spirtus sampai timbul uap. Kemudian uap tersebut ditampung dengan kaca yang telah dibasahi dengan fenolftalin. Warna yang terdapat pada kaca diamati dan dicatat. Zat-Zat Anorganik Dalam Urine Uji Khlorida. Sebanyak 1 ml urine ditambahkan beberapa tetes HNO 3 dan 1 ml AgNO3, lalu warnanya dicatat. Kemudian larutan tersebut ditambahkan amoniak berlebihan dan perubahan yang terjadi dicatat . Uji Fosfat dan Kalsium. Sebanyak 10 ml urine ditambahkan 3 ml amoniak dan dididihkan dengan menggunakan water bath pada suhu 100ºC selama 10 menit, lalu disaring. Endapan yang didapat dicuci dengan air dan ditambah 5 ml asam asetat 2 %, lalu dipanaskan dengan menggunakan api spirtus sampai endapannya menjadi banyak. Kemudian larutan dibagi ke dalam 2 tabung. Pada tabung 1, larutan ditambahkan 1 tetes HNO
3
pekat dan 3 tetes
amonium molibdat, lalu dipanaskan. Pada tabung 2, larutan ditambahkan 3 tetes kalium oksalat dan diamati. Uji Sulfat. Sebanyak 1 ml urine ditambahkan beberapa tetes HCl encer dan 1 ml BaCl 2. kemudian dicatat apa yang terjadi.
Keabnormalan Urine Uji Benedict Terhadap Urine Abnormal . Sebanyak 0,5 ml urine abnormal
ditambahkan
3
ml
larutan
Benedict.
Kemudian
dididihkan
menggunakan api spirtus, lalu didinginkan. Haisl peercobaan diamati dan dicatat. Uji Heller . Sebanyak 1 ml HNO 3 pekat ditambahkan urine yang dialirkan melalui dinding tabung. Lapisan yang terbentuk diamati dan dicatat apa yang terjadi. Uji Benzidin Terhadap Pigmen Darah. Sebanyak 1 ml Benzidin ditambahkan 1 ml H 2O2. Kemudian larutan dibagi dua. Pada tabung 1, larutan ditambahkan 1 ml urine normal, sedangkan pada tabung 2, ditambahkan 1 ml urine abnormal. Warna yang terjadi dibandingkan antara keduanya. Uji Gmelin Terhadap Pigmen Empedu. Sebanyak 1 ml HNO3 ditambahkan 1 ml urine abnormal. Hasil percobaan diamati. Uji Hay Untuk Garam Kholat. Sebanyak 2 tabung disiapkan, pada tabung 1 dimasukkan 1 ml urine abnormal, sedangkan pada tabung 2 dimasukkan 1 ml air. Kemudian ditambahkan serbuk belerang ke dalam masingmasing tabung. Warna yang terjadi dan serbuk belerangnya diamati. Uji Obermeyer Terhadap Indikan. Sebanyak 4 ml urine abnormal ditambahkan 5 ml pereaksi Obermeyer dan 2 ml khloroform, lalu digojog dan dibiarkan. Warna yang timbul diamati dan dicatat.
Hasil dan Pembahasan
Senyawa Organik Dalam Urine Uji Biuret Terhadap Ureum. Dari hasil pencampuran antara ureum, NaOH, dan CuSO 4 ke dalam tabung reaksi, maka dihasilkan perubahan warna larutan dari kuning bening menjadi biru keunguan. Hal ini terjadi karena adanya ikatan antara Cu2+ dengan N yang berasal dari ureum menjadi CuN yang menyebabkan warna larutan berwarna ungu. Hal ini menandakan bahwa pada senyawa ureum dalam urine terdapat ikatan peptida. Ureum merupakan hasil akhir metabolisme protein yang berasal dari asam amino yang telah dipindah amoniaknya di dalam hati dan mencapai ginjal, sertadiekskresikan rata-rata 30 gram setiap hari. Kadar ureum darah yang normal adalah 30 mg tiap 100 cc darah, namun hal ini juga tergantung dari jumlah normal protein yang dimakan dan fungsi hati dalam pembentukan ureum (Evelyn, 1993). Uji Enzimatik Terhadap Ureum. Uji enzimatik pada ureum dilakukan pada dua sampel yang berbeda, yaitu urine pada tabung 1 dan air pada tabung 2. Hasil percobaan pada tabung 1 yang berisi urine menunjukkan terjadinya warna merah muda saat penambahan fenol merah dan Na 2CO3 2 %, namun setelah ditambahkan asam asetat 2 % warna larutan tersebut berubah menjadi kuning, kemudian saat larutan dipanaskan menggunakan penangas air pada suhu 60ºC warnanya berubah menjadi kuning kemerah-merahan. Setelah ditambah dengan tepung kedelai, lalu digojog, warna larutan berubah menjadi merah dan terdapat endapan tepung kedelai. Sedangkan pada tabung 2 yang berisi air, warna larutan berubah menjadi warna merah muda ketika ditambahkan fenol merah dan Na 2CO3 2 %, namun setelah ditambahkan asam asetat 2 % warna larutan tersebut berubah menjadi kuning, kemudian saat larutan dipanaskan menggunakan penangas air pada suhu 60ºC warnanya tidak berubah (tetap berwarna kuning) begitu juga pada saat penambahan tepung kedelai warnanya juga tetap kuning. Dari percobaan ini, terlihat adanya perbedaan antara tabung 1 dan tabung 2. Pada tabung 1 saat penambahan tepung kedelai terjadi peubahan warna dari merah menjadi kuning. Hal ini
dikarenakan tepung kedelai yang mengandung enzim urease bereaksi dengan urea yang terdapat pada urine. Sehingga terjadi reaksi enzimatik, yaitu hidrolisis urea
dalam
urine
oleh
urease
yang
terdapat
pada
tepung
kedelai
(Poedjiadi,1994). Reaksi yang terjadi tabung 1, urin NH2 urease
C =O
2NH2 + CO2
(NH4)2CO3
NH2(H2O) (urea) (Poedjiadi,1994) Sedangkan pada tabung 2 setelah penambahan tepung kedelai tidak mengalami perubahan warna karena di dalam air tidak terkandung urea sehingga tidak ada reaksi enzimatik antara urease pada tepung kedelai dengan air. Pada percobaan ini digunakan suhu 60ºC karena suhu ini merupakan suhu optimum dari enzim urease
(Poedjiadi,1994).
Uji Benedict Terhadap Garam Urat. Setelah urine ditambah dengan larutan Benedict dan Na 2CO3 padat, lalu dipanaskan, warna larutan berubah menjadi warna coklat kekuningan dan di dalam tabung terdapat endapan putih, bukan endapan merah bata, namun hal ini telah menandakan bahwa uji Benedict positif karena hasil akhir warna larutan telah berubah, bukan warna biru (warna benedict). Urine mengandung garam urat. Benedict dapat digunakan untuk menguji K\kemampuan mereduksi garam urat karena Benedict mengandung CuSO4. Cu2+ dari CuSO4 direduksi menjadi Cu +, kemudian membentuk Cu 2O dan mengendap. Endapan Cu 2O berwarna merah bata (Poedjiadi,1994). Uji Murexida. Pada uji ini dilakukan penambahan HNO 3 pekat ke dalam asam urat padat dan dianaskan akan berwarna merah. Setelah ditambahkan amoniak warnanya berubah menjadi warna violet kemerah-merahan. Hal ini menandakan bahwa terdapat murexida di dalam asam urat. Asam urat dioksidasi oleh HNO3 pekat mengahsilkan asam dialurat dan alloxan. Asam dialurat dan alloxan akan berkondensasi membentuk alloxantin. Alloxantin akan berubah
menjadi amonium purparat (murexida) setelah ditambah dengan amoniak (Poedjiadi,1994). Uji Daya Mereduksi Asam Urat . Uji daya mereduksi asam urat dilakukan dengan melarutkan asam urat menggunakan larutan Na 2CO3 sehingga terjadi endapan putih. Setelah larutan tersebut diteteskan di atas kertas saring yang telah dibasahi dengan larutan AgNO 3, kertas saring akan berwarna hitam. Hal ini menunjukkan bahwa asam urat mampu mereduksi Ag + dari AgNO3 menjadi Ag. Kadar normal asam urat dalam darah adalah 2-3 mg tiap 100 cc, sedangkan yang diekskresikan ke dalam urine adalah 1,5-2 mg (Ganong, 2003). Uji Pikrat. Pungujian ini dilakukan dengan membandingkan air dengan urine. Pada tabung 1 diisi dengan air dan tabung 2 diisi dengan urine, kemudian pada masing-masing tabung ditambah asam pikrat jenuh dab NaOH 10 %. Dari percobaan ini diperoleh pada tabung 1 terbenuk larutam berwarna kuning dan pada tabung 2 menunjukkan warna larutan merah jingga. Hal ini menunjukkan bahwa di dlama air tidak mengandung kreatinin, sedangkan pada urine mengandung kreatinin. Warna merah jingga pada urine menunjukkan adanya kreatinin pikrat yang terjadi karena kreatinin berikatan dengan pikrat jenuh. Pengujian ini dilakukan untuk mengetahui adanya kreatinin dalam urine. Kreatin adalah hasil buangan kreatinin dalam otot. Produk metabolisme lain mencakup benda-benda purine, oxalat, fosfat, dan sulfat (Ganong, 2003). Uji Terhadap Garam Amonium. Pengujian terhadap garam amonium ini dilakukan untuk mengetahui adanya garam amonium dalam urine. Berdasarkan percobaan diperoleh hasil timbul uap warna merah yang terdapat pada kaca yang telah dibasahi dengan fenolftalin. Warna merah ini menunjukkan adanya garam amonium atau gas NH 3 yang mudah menguap (Ganong, 2003). Zat-Zat Anorganik Dalam Urine Uji Khlorida. Setelah urine dicampur dengan HNO 3 dan AgNO3, pada tabung terbentuk endapan putih (AgCl) dan setelah larutan tersebut ditambah dengan amoniak berlebihan, endapan putih tadi larut kembali. HNO 3 pada percobaan ini berfungsi untuk mencegah terjadinya perak fofat Terbentuknya endapan AgCl (endapan putih) menunjukkan adanya ion Cl - yang berasal dari
urine diikat oleh Ag+ dari AgNO 3. Penambahan amoniak akan mengurangi endapan AgCl (Ganong, 2003). AgCl + NH 4OH
AgOH + NH4Cl
(Ganong, 2003)
Uji Fosfat dan Kalsium. Berdasarkan dari percobaan, endapan yang telah ditambah dengan asam asetat haslnya menunjukkan warna hijau dengan tidak ada endapan. Setelah larutan dibagi dua, pada tabung 1 ditambah amonium molibdat dan HNO 3 pekat lalu dipanaskan maka warnanya menjadi kuning keruh. Warna yang keruh pada tabung menandakan adanya endapan. Endapan ini merupakan amonium fosfo molibdat. Sedangkan pada tabung 2 ditambah kalium oksalat. Warna larutan akan menjadi putih keruh. Warna yang keruh pada tabung menandakan adanya endapan kalsium oksalat. Terbentuk endapan pada tabung 1 disebabkan warna kuning dari urine dengan HNO 3 pecah dan ada unsur fosfor yang terikat oleh amonium molibdat menjadi amonium fosfo molibdat. Terbentuknya endapan pada tabung 2 karena urine pecah bertemu dengan kalium oksalat, oksalat mengikat kalsium yang ada pada urine sehingga menjadi kalsium oksalat (Ganong, 2003). Uji Sulfat. Uji sulfat dilakukan dengan mencampurkan antara urine, HCl encer, dan BaCl 2. Dari hasil percobaan terbentuk endapan putih. Endapan putih ini adalah endapan BaSO 4. Hal ini menunjukkan adanya kandungan SO 4- di dalam urine. Jika urine direaksikan dengan HCl dan BaCl 2 maka sulfat yang terdapat di dalam urine akan dilepas oleh HCl dan sulfat tersebut akan diikat oleh Ba sehingga membentuk endapan BaSO 4 (Ganong, 2003). Keabnormalan Urine Uji Benedict Terhadap Urine Abnormal . Setelah urine sapi PO abnormal
dicampurkan
dengan
larutan
Benedict,
larutan
menjadi
biru
kekuningan kemudian dididihkan sehingga terbentuk endapan berwarna kuning kecoklatan (merah bata). Hal ini menandakan bahwa uji Benedict terhadap urine abnormal adalah positif. Adanya gugus reduksi dari urine yang terikat dengan Cu2+ dari Benedict akan membentuk endapan merah bata (Cu 2O). Gugus reduksi mampu mengubah ion Cu2+ menjadi ion Cu+ berupa endapan Cu2O yang berwarna merah bata (Poedjiadi,1994).
Uji Heller . Uji ini dilakukan degan mencampurkan urine PO abnormal dengan HNO3 pekat sehingga hasilnya terbentuk cincin yang berwarna putih pada permukaan larutan. Hal ini menandakan bahwa di dalam urine terkandung albumin (protein). Urine pecah kemudian mengalami denaturasi oleh HNO 3. Protein albumin jika terkena asam pekat (HNO 3) akan terjadi denaturasi protein di permukaan, tetapi jika berlangsung lama, denaturasi akan berlangsung terusmenerus sampai cincin putih menghilang (Ganong, 2003). Uji Benzidin Terhadap Pigmen Darah . Uji Benzidin terhadap pigmen darah dilakukan dengan mencampurkan Benzidin dengan H 2O2. Ketika larutan tesebut ditambahkan dengan urine normal, warna larutan menjadi putih bening, sedangkan jika ditambahkan urine abnormal, warna larutan berubah menjadi biru tua pekat. Saat ditambahkan urine normal, warna larutan tidak berwarna biru karena pada urine normal tidak mengandung pigmen darah. Warna biru pada penambahan urine abnormal menandakan bahwa adanya pigmen darah. Urine akan terpecah oleh H 2O2. Jika terdapat Hb maka O 2 akan diikat membentuk HbO2 dan bereaksi dengan Benzidin sehingga akan membentuk warna biru (Poedjiadi,1994). Uji Gmelin Terhadap Pigmen Empedu. Setelah urine PO abnormal ditambahkan dengan HNO 3 pekat, maka warna larutan akan berubah menjadi kuning keruh. Warna kuning pada larutan menandakan bahwa di dalam urine PO abnormal mengandung pigmen bilisianin . Uji Hay Untuk Garam Kholat . Uji hay pada tabung 1 yang berisi urine PO abnormal dihasilkan endapan belerang (belerang mengendap), sedangkan pada tabung 2 yang berisi air tidak terdapat endapan belerang. Belerang pada tabung 2 tetap berada di atas permukaan air. Mengendapnya belerang di sini menandakan bahwa di dalam urine abnormal terdapat garam kholat. Garam kholat berfungsi untuk
menurunkan tegangan permukaan pada larutan
(Poedjiadi, 1994). Uji Obermeyer Terhadap Indikan . Dari hasil percobaan didapatkan hasil adanya dua lapisan, yaitu coklat dan bening. Di tengah lapisan tersebut terdapat terdapat endapan berwarna coklat. Pada percobaan ini tidak terdapat indikan.
Seharusnya pada lapisan bawah berwarna biru yang menunjukkan adanya indikan. Indikan yang larut dalam khloroform akan berubah menjadi indigo blue yang berwarna biru dengan penambahan Obermeyer (Ganong, 2003).
Kesimpulan
Pengujian mengenai senyawa organik dalam urine dapat dilakukan dengan melakukan uji biuret pada ureum, uji enzimatik terhadap senyawa ureum, uji Benedict terhadap garam urat, uji daya mereduksi asam urat, uji pikrat, dan uji terhadap garam amonium. Pada uji biuret terhadap ureum dihasilkan warna ungu yang menunjukkan bahwa terdapat ikatan peptida pada ureum. Uji enzimatik terhadap ureum yang menggunakan urine terjadi hidrolisis urea dalam urine oleh enzim urease dari tepung kedelai, sedangkan jika menggunakan air tidak terjadi hidrolisis urea karena di dalam air tidak terdapat urea. Pada uji Benedict terhadap garam urat menunjukkan hasil positif terhadap uji Benedict, yaitu ditemukannya gugus reduksi pada garam urat. Pengujian Murexida bertujuan untuk mengetahui adanya murexida (amonium purparat) pada asam urat. Uji pikrat dilakukan untuk menunjukkan adanya kreatinin di dalam urine. Pengujian terhadap garam amonium menunjukkan bahwa adanya garam amonium dala urine yang ditandai dengan adanya gas NH 3. Pengujian mengenai zat-zat anorganik yang terkandung di dalam urine dilakukan dengan uji khlorida, uji fosfat dan kalsium, dan uji sulfat. Pada uji khlorida didapat endapan putih (AgCl). Pada uji fosfat dan kalsium pada tabung 1 dihasilkan endapan kuning (amonium fosfo molibdat) dan pada tabung 2 dihasilkan endapan putih (kalsium oksalat). Pda uji sulfat dihasilkan endapan BaSO4. Pengujian keabnormalan urine dilakukan dengan uji Benedict terhadap urine abnormal, uji Heller, uji Benzidin terhadap pigmen darah, uji Gmelin terhadap pigmen empedu, uji hay untuk garam kholat, dan uji Obermeyer terhadap indikan. Pada uji Benedict hasilnya positif dengan ditemukannya endapan merah bata yang menunjukkan adanya gugus reduksi dalam urine abnormal. Uji Heller ditandai dengan terbentuknya cincin putih di permukaan larutan yang menandakan adanya albumin dalam urine abnormal. Uji Benzidin menunjukkan bahwa di dalam urine abnormal masih ditemukan pigmen darah. Uji Gmelin menunjukkan adanya pigmen empedu dalam urine abnormal. Pada uji
hay terbentuk endapan belerang yang menandakan adanya garam kholat yang dapat menurunkan tegangan permukaan. Uji Obermeyer menunjukkan hasil negatif yang menandakan bahwa tidak ditemukannya indikan di dalam urine abnormal. Percobaan mengenai kualitas dalam urine ini dilakukan pada dua sampel urine sapi yang berbeda, yakni sapi Peranakan Friesian Holdstein (PFH) dan sapi Peranakan Ongole (PO). Pada percobaan ini hampir semua pengujian mendapatkan hasil yang sama.
Daftar Pustaka
Blakely, J and David Bade. 1985. Ilmu Peternakan Edisi 4. Gadjah Mada University Press. Yogyakart Dawiesah I, S. 1989. Penentuan Nutrien Dalam Jaringan Dan Plasma Tubuh . Gadjah Mada University Press. Yogyakarta Evelyn, C.P. 1993. Anatomi dan Fisiologi Untuk Paramedis. PT Gramedia, Jakarta. Frandson, R. D. 1992. Anatomi dan Fisiologi Ternak edisi keempat. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. Ganong. 2003. fisiologi Kedokteran. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. Girinda, A. 1988. Biokimia Dasar-dasar Patologi Hewan. LSI IPB. Bogor. Poedjiadi, A. 1994. Dasar-Dasar Biokimia. Penerbit Universitas Indonesia, Jakarta. Roberts, M. 1993. Biology Princeple and Processes, 1 sted. Thomas Nelson and Sons Ltd. London .
