Uji Efektivitas Pengawet Antimikroba <61> versi lengkap
Pengawet antimikroba adalah zat yang ditambahkan pada sediaan obat untuk melindungi sediaan terhadap kontaminasi mikroba. Pengawet digunakan terutama pada wadah dosis ganda untuk menghambat pertumbuhan mikroba yang dapat masuk secara tidak sengaja selama atau setelah proses produksi. Zat antimikroba tidak boleh digunakan semata-mata untuk menurunkan jumlah mikroba viabel sebagai pengganti cara produksi yang baik. Bagaimanapun juga dapat timbul keadaan yang memerlukan penggunaan pengawet untuk menekan perkembangan mikroba. Harus diakui bahwa adanya mikroba yang telah mati atau hasil metabolisme mikroba yang hidup dapat menimbulkan efek negatif pada orang yang peka. Setiap zat antimikroba dapat bersifat pengawet, meskipun demikian semua zat antimikroba adalah zat yang beracun. Untuk melindungi konsumen secara maksimum, pada penggunaan harus diusahakan diusahakan agar pada kemasan akhir kadar pengawet yang masih efektif lebih rendah dari kadar yang dapat menimbulkan keracunan keracunan pada manusia. Pengujian berikut dimaksudkan untuk menunjukkan efektivitas pengawet antimikroba yang ditambahkan pada sediaan dosis ganda yang dibuat dengan dasar atau bahan pembawa berair seperti produk-produk parenteral, telinga, hidung, dan mata, yang dicantumkan pada etiket produk yang bersangkutan. Pengujian dan persyaratan hanya berlaku pada produk di dalam wadah asli, belum dibuka yang didistribusikan oleh produsen. Mikroba Uji gunakan biakan mikroba berikut Candida Albicans, Aspergillus Niger, Pseudomonas aeruginosa dan Staphylococcus aureus. Selain mikroba yang disebut di atas dapat
digunakan mikroba lain sebagai tambahan terutama jika dianggap mikroba bersnagkutan dapat merupakan kontaminan selama penggunaan sediaan tersebut. Media untuk biakan awal mikroba uji, pilih media yang sesuai untuk pertumbuhan yang subur mikroba uji, seperti Soy bean casein digest agar medium yang tertera pada uji batas mikroba <51>. Pembuatan inokula sebelum pengujian dilakukan, inokulasi permukaan media agar bervolume yang sesuai, dengan biakan persediaan segar mikroba yang akan digunakan. Inkubasi biakan bakteri pada suhu 300-350 selama 18 jam – 24 jam, biakan Candida albicans pada suhu 200-250 selama 48 jam dan biakan Apergilus niger pada suhu 20-25 0 selama 1 minggu. Gunakan larutan natrium klorida P 0,9 % steril untuk memanen biakan bakteri dan Candida albicans dengan mencuci permukaan pertumbuhan dan hasil cucian dimasukkan ke
dalam wadah yang sesuai dan tambahkan larutan natrium klorida
P 0,9% secukupnya untuk
mengurangi angka mikroba hingga lebih kurang 100 juta /mL. Untuk memanen Aspergilus niger lakukan hal yang sama menggunakan larutan natrium klorida
P 0,9% steril yang mengandung
polisorbat 80 P 0,05% dan atur angka spora hingga lebih kurang 100 juta/mL dengan menambahkan menambahkan larutan natrium klorida P 0,9% steril.
Sebagai alternatif, mikroba dapat ditumbuhkan dalam media cair, dan penenan sel dilakukan dengan carr sentrifugasi, dicuci, disuspensikan kembali dalam larutan natrium klorida P 0,9% steril sedemikian rupa hingga mencapai angka mikroba atau spora yang dikehendaki. Tetapkan jumlah satuan pembentuk koloni tiap mL dari setiap suspensi, dan angka ini digunakan untuk menetapkan banyaknya inokula yang digunakan pada pengujian. Jika suspensi yang telah dilakukan tidak segera digunakan, suspensi dipantau secara berkala dengan metode lempeng Angka Mikroba Aeorb Total seperti yang tertera pada uji batas mikroba <51> untuk menetapkan penurunan viabilitas. Untuk memantau angka lempeng sediaan uji yang telah diinokulasi gunakan media agar yang sama seperti media untuk biakan awal mikroba yang bersangkutan jika tersedia inaktivator engawet yang khas tambahkan sejumlah yang sesuai ke dalam media lempeng agar. Prosedur jika wadah sediaan dapat ditembus secara aseptik menggunakan jarum suntik melalui sumbat karet, lakukan pengujian pada lima wadah asli sediakan jika wadah sediaan tidak dapat ditembus secara aseptik, pindahkan 20 mL sampai ke dalam masing-masing 5 tabung bakteriologik bertutup, berukuran sesuai dan steril. Inokulasi masing-masing wadah dengan tabuh atau salah satu suspensi mikroba baku, menggunakan perbandingan 0,10 mL inokula setara dengan 20 mL sediaan, dan campur. Mikroba uji dengan jumlah yang sesuai harus ditambahkan sedemikian rupa hingga jumlah mikroba di dalam sediaan uji segera setelah inokulasi adalah antara 100.000 dan 1.000.000/ mL. Tetapkan jumlah mikroba viabel di dalam tiap suspensi inokula dan hitung angka awal mikroba tiap mL sediaan yang diuji dengan metode lempeng. Inkubasi wadah atau tabung yang telah diinokulasi pada suhu 20-25 0. Amati wadah atau tabung pada hari ke-7,ke-14,ke-21, dan ke-28 sesudah inokulasi. Catat tiap perubahan yang terlihat dan tetapkan jumlah mikroba viabel pada tiap selang waktu tersebut dengan metode lempeng. Dengan menggunakan bilangan teoritis mikroba pada awal pengujian hitung perubahan kadar dalam persen tiap mikroba selam pengujian. Penafsiran hasil Suatu pengawet dinyatakan efektif di dalam contoh yang diuji, jika: a.
Jumlah bakteri viabel pada hari ke-14 berkurang hingga tidak lebih dari 0,1% dari jumlah awal.
b.
Jumlah kapang dan khamir viabel selama 14 hari pertama adalah tetap atau kurang dari jumlah awal.
c.
Jumlah tiap mikroba uji selama hari tersisa dari 28 hari pengujian adalah tetap atau kurang dari bilangan yang disebut pada a dan b.
Versi singkat
Uji efektivitas pengawet antimikroba (FI IV <61>, hal 854-855) Tujuan: Menunjukkan efektifitas pengawet antimikroba yang ditambahkan pada sediaan dosis ganda yang dibuat dengan dasar atau bahan pembawa berair seperti produk parenteral yang dicantumkan pada Prinsip: Pengurangan jumlah mikroba yang dimasukkan ke dalam sediaan yang mengandung pengawet dalam selang waktu tertentu dapat digunakan sebagai parameter efektifitas
pengawet dalam sediaan. Inokulasi mikroba pada sediaan dengan cara menginkubasi tabung bakteri
biologik
(Candida
Albicans,
Aspergillus
Niger,
Pseudomonas
aeruginosa
dan
Staphylococcus aureus ) yang berisi sampel dari inokula pada suhu 20-25 C dalam media
Soybean-Casein Digest Agar.
Syarat/penafsiran hasil: Suatu pengawet dinyatakan efektif di dalam contoh yang diuji, jika: d.
Jumlah bakteri viabel pada hari ke-14 berkurang hingga tidak lebih dari 0,1% dari jumlah awal.
e.
Jumlah kapang dan khamir viabel selama 14 hari pertama adalah tetap atau kurang dari jumlah awal.
f.
Jumlah tiap mikroba uji selama hari tersisa dari 28 hari pengujian adalah tetap atau kurang dari bilangan yang disebut pada a dan b.
