TUGAS MIKROBIOLOGI (Identifikasi Mikroba Berdasarkan Sifat Kimiawi)

TUGAS MIKROBIOLOGI LAUT IDENTIFIKASI MIKROBA BERDASARKAN SIFAT KIMIAWI

Disusun Oleh : KELOMPOK 10 Indriati Sari Kusmayani Wida Hanayasashi S. MA. Faisal Datu Sefa

230210090092 230211090001 230210080039

PROGRAM STUDI ILMU KELAUTAN FAKULTAS PERIKANAN DAN ILMU KELAUTAN UNIVERSITAS PADJADJARAN JATINANGOR 2010 Mikrobiologi Laut | Identifikasi Mikroba Berdasarkan Sifat Kimiawi

1

KATA PENGANTAR

Puji syukur kita panjatkan kehadirat Allah SWT karena atas rahmat dan hidayah-Nya

yang dilimpahkan kepada kami untuk menyelesaikan makalah

tentang Mikrobiologi Laut mengenai salah satu cara dalam pengindentifikasian mikroba yaitu apabila dilihat dari sifat kimiawinya, dimana termasuk juga bakteri gram positif dan bakteri gram negatif. Dan akhirnya dapat diselesaikan tepat pada waktunya. Makalah ini dibuat berdasarkan hasil diskusi dan kerjasama dari masing-masing anggota kelompok hingga makalah ini terselesaikan. . Kami menyadari bahwa makalah ini sangatlah jauh dari sempurna, hal ini tidak lepas dari kurangnya pengetahuan serta pengalaman dari kami dalam penyusunan makalah ini. Untuk itu kami dengan terbuka menerima segala kritik dan saran. Kami berharap semoga makalah ini dapat bermanfaat dan menambah wawasan bagi kita semua khususnya bagi teman-teman mahasiswa program studi Ilmu kelautan Fakultas Perikanan dan Ilmu Kelautan Universitas Padjadjaran.

Jatinangor, 25 April 2010

Penyusun

Mikrobiologi Laut | Identifikasi Mikroba Berdasarkan Sifat Kimiawi

2

DAFTAR ISI

HALAMAN DEPAN...............................................................................................1 KATA PENGANTAR ............................................................................................2 DAFTAR ISI............................................................................................................3 BAB I : PENDAHULUAN......................................................................................4 1.1 Latar Belakang ..................................................................................4 1.2 Tujuan Penulisan ..............................................................................5 1.3 Manfaat Penulisan.............................................................................5 BAB II : TINJAUAN PUSTAKA............................................................................6 2.1. Teknik Pewarnaan Dalam Pengamatan Bakteri...............................6 2.2. Metode Gram....................................................................................7 2.3. Ciri-ciri Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif.............................8 BAB III : PEMBAHASAN....................................................................................10 3.1. Pengecatan Sederhana....................................................................10 3.2. Pewarnaan Negatif.........................................................................10 3.3. Pewarnaan Gram............................................................................10 BAB IV : KESIMPULAN.....................................................................................12 DAFTAR PUSTAKA............................................................................................13


3

BAB I PENDAHULUAN

1.1. Latar Belakang Mikroba yang ada di alam ini mempunyai morfologi, struktur dan sifatsifat yang khas. Mikroba berukuran sangat kecil, sehingga diperlukan alat bantu untuk mengamatinya. Namun demikian, penggunaan alat bantu tersebut hanya untuk mengamati morfologisnya. Masih diperlukan metode lain untuk mampu mengidentifikasinya. Banyak

metode

atau

tahapan

standar

yang

dilakukan

dalam

mengidentifikasi mikroba, salah satunya berdasarkan sifat kimiawinya. Sel terdiri dari berbagai bahan kimia. Bila sel mikroba diberi perlakuan kimiawi, maka sel ini memperlihatkan susunan kimiawi yang spesifik. Sebagai contoh disini adalah bakteri. Bakteri yang hidup hampir tidak berwarna dan kontras dengan air, dimana sel-sel bakteri tersebut disuspensikan. Salah satu cara untuk mengamati bentuk sel bakteri sehingga mudah untuk diidentifikasi ialah dengan metode pengecatan atau pewarnaan. Hal tersebut juga berfungsi untuk mengetahui sifat fisiologisnya yaitu mengetahui reaksi dinding sel bakteri melalui serangkaian pengecatan. Berbagai macam tipe morfologi bakteri dapat dibedakan dengan menggunakan pewarna sederhana. Istilah ”pewarna sederhana” dapat diartikan dalam mewarnai sel-sel bakteri hanya digunakan satu macam zat warna saja. Kebanyakan bakteri mudah bereaksi dengan pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofilik (suka akan basa), sedangkan zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkalin (komponen kromoforiknya bermuatan positif). Faktor-faktor yang mempengaruhi pewarnaan bakteri yaitu fiksasi, peluntur warna , substrat, intensifikasi pewarnaan dan penggunaan zat warna penutup.


4

1.2. Tujuan Dalam penulisan makalah ini, adapun tujuannya adalah untuk menjelaskan mengenai pengidentifikasian mikroba berdasarkan sifat kimiawi dengan teknik pewarnaan mikroba dengan cara pewarnaan negatif, pewarnaan positif, dan pewarnaan sederhana. 1.3. Manfaat Manfaat dari pembuatan makalah ini pada dasarnya memperkaya pengetahuan

khususnya tentang bagaimana cara mengidentifikasi mikroba

berdasarkan sifat kimianya. Serta dapat menambah pemahaman tentang cara pengidentifikasian mikroba berdasarkan sifat kimianya, dan bagi penyusun lain, makalah ini dapat digunakan sebagai referensi awal dalam penelitian lain khususnya bidang mikrobiologi Laut.


5

BAB II TINJAUAN PUSTAKA 2.1. Teknik Pewarnaan Dalam Pengamatan Bakteri Melihat dan mengamati bakteri dalam keadaan hidup sangat sulit, kerena selain bakteri itu tidak berwarna juga transparan dan sangat kecil. Untuk mengatasi hal tersebut maka dikembangkan suatu teknik pewarnaan sel bakteri, sehingga sel dapat terlihat jelas dan mudah diamati. Maka dari itu teknik pewarnaan sel bakteri ini merupakan salah satu cara yang paling utama dalam penelitian mikroba. Macam-macam pewarnaan : 1. Pewarnaan negatif - Bakteri tidak diwarnai, tapi mewarnai latar belakang - Ditujukan untuk bakteri yang sulit diwarnai, seperti spirochaeta 2. Pewarnaan sedehana - Menggunakan satu macam zat warna (biru metilen/air fukhsin) - Tujuan hanya untuk melihat bentuk sel 3. Pewarnaan diferensial - Menggunakan lebih dari satu macam zat warna - Tujuan untuk membedakan antar bakteri - Contoh: Pewarnaan Gram, pewarnaan Bakteri Tahan Asam. 4. Pewarnaan khusus - Untuk mewarnai struktur khusus/tertentu dari bakteri→ kapsul, spora, flagel dan lain-lain.


6

2.2. Metode Gram Pewarnaan Gram atau metode Gram adalah suatu metode empiris untuk membedakan spesies bakteri menjadi dua kelompok besar, yakni gram positif dan gram negatif, berdasarkan sifat kimia dan fisik dinding sel mereka. Metode ini diberi nama berdasarkan penemunya, ilmuwan Denmark Hans Christian Gram (1853–1938) yang mengembangkan teknik ini pada tahun 1884 untuk membedakan antara pneumokokus dan bakteri Klebsiella pneumoniae (filzahazny, 2008). Bakteri Gram negatif adalah bakteri yang tidak mempertahankan zat warna metil ungu pada metode pewarnaan Gram. Bakteri gram positif akan mempertahankan zat warna metil ungu gelap setelah dicuci dengan alkohol, sementara bakteri gram-negatif tidak. Pada uji pewarnaan Gram, suatu pewarna penimbal (counterstain) ditambahkan setelah metil ungu, yang membuat semua bakteri gram-negatif menjadi berwarna merah atau merah muda. Pengujian ini berguna untuk mengklasifikasikan kedua tipe bakteri ini berdasarkan perbedaan struktur dinding sel mereka. Sifat bakteri terhadap pewarnaan Gram merupakan sifat penting untuk membantu determinasi suatu bakteri. Pewarnaan sederhana, merupakan pewarna yang paling umum digunakan. Disebut demikian karena hanya digunakan satu jenis cat pewarna untuk mewarnai organisme. Kebanyakan bakteri telah bereaksi dengan pewarna-pewarna sederhana karena sitoplasmanya bersifat basofil (suka akan basa). Zat-zat warna yang digunakan untuk pewarnaan sederhana umumnya bersifat alkalin (komponen kromofornya

bersifat

positif).

Pewarnaan

sederhana

ini

memungkinkan

dibedakannya bakteri dengan bermacam-macam tipe morfologi (coccus, vibrio, basillus, dsb) dari bahan-bahan lainnya yang ada pasa olesan yang diwarnai. Pewarnaan negatif, metode ini bukan untuk mewarnai bakteri tetapi mewarnai latar belakangnya menjadi hitam gelap. Pada pewarnaan ini mikroba terlihat transparan (tembus pandang). Teknik ini berguna untuk menentukan morfologi dan ukuran sel. Pada pewarnaan ini olesan tidak mengalami pemanasan atau perlakuan yang keras dengan bahan-bahan kimia, maka terjadinya Mikrobiologi Laut | Identifikasi Mikroba Berdasarkan Sifat Kimiawi

7

penyusutan dan salah satu bentuk agar kurang sehingga penentuan sel dapat diperoleh dengan lebih tepat. Metode ini menggunakan cat nigrosin atau tinta cina. Struktur di dalam sel pada tempat-tempat yang khas dibentuk oleh spesies ini disebut endospora. Endospora dapat bertahan hidup dalam keadaan kekurangan nutrien, tahan terhadap panas, kekeringan, radiasi UV serta bahanbahan kimia. Ketahanan tersebut disebabkan oleh adanya selubung spora yang tebal dan keras. Sifat-sifat ini menyebabkan dibutuhkannya perlakuan yang keras untuk mewarnainya. Hanya bila diperlukan panas yang cukup, pewarna yang sesuai dapat menembus endospora. Tetapi sekali pewarna memasuki endospora, sukar untuk dihilangkan. Ukuran dan letak endospora di dalam sel merupakan ciri-ciri yang digunakan untuk membedakan spesies-spesies bakteri yang membentuknya. 2.3. Ciri-ciri Bakteri Gram Positif dan Gram Negatif •

Ciri-ciri bakteri gram negatif, yaitu : •

Struktur dinding selnya tipis, sekitar 10 – 15 mm, berlapis tiga atau multilayer.

•

Dinding

selnya

mengandung

lemak

lebih

banyak

(11-22%),

peptidoglikan ter 10%± dapat didalam lapisan kaku, sebelah dalam dengan jumlah sedikit

dari berat kering, tidak mengandung asam

tekoat. •

Kurang rentan terhadap senyawa penisilin.

•

Pertumbuhannya tidak begitu dihambat oleh zat warna dasar misalnya kristal violet.

•

Komposisi nutrisi yang dibutuhkan relatif sederhana.

•

Tidak resisten terhadap gangguan fisik.


8

•

Ciri-ciri bakteri gram positif, yaitu : •

Struktur dinding selnya tebal, sekitar 15-80 nm, berlapis tunggal atau monolayer.

•

Dinding selnya mengandung lipid yang lebih normal (1-4%), peptidoglikan ada yang sebagai lapisan tunggal. Komponen utama merupakan lebih dari 50% berat ringan. Mengandung asam tekoat.

•

Bersifat lebih rentan terhadap penisilin.

•

Pertumbuhan dihambat secara nyata oleh zat-zat warna seperti ungu kristal.

•

Komposisi nutrisi yang dibutuhkan lebih rumit.

•

Lebih resisten terhadap gangguan fisik.

Pengecatan gram dilakukan dalam 4 tahap yaitu : 1. Pemberian cat warna utama (cairan kristal violet) berwarna ungu. 2. Pengintesifan cat utama dengan penambahan larutan mordan JKJ. 3. Pencucian (dekolarisasi) dengan larutan alkohol asam. 4. Pemberian cat lawan yaitu cat warna safranin


9

BAB III PEMBAHASAN

3.1. Pengecatan Sederhana Pewarnaan sederhana digunakan untuk memperlihatkan atau memperjelas kontras antara sel dan latar belakangnya sehingga dapat mempertajam bentuk dari sel-sel mikroba itu sendiri, dengan cara mewarnai sel-sel mikroba dengan zat warna khususnya warna Kristal violet. Pada pewarnaan sederhana digunakan bakteri Bacillus cereus dan Salmonella typii. Setelah pewarnaan diperoleh bakteri tersebut berwarna ungu, yang berarti bakteri tersebut menyerap zat warna cat tersebut sehingga Nampak pada mikroskop. Zat warna yang umunya digunakan yakni yang bersifat alkalin (kromatofornya bermuatan +). 3.2. Pewarnaan Negatif Pada pewarnaan ini digunakan cat asam nirosin (tinta cina). Pewarnaan ini dilakukan untuk mewarnai latar belakang preparat sedangkan bakteri sendiri tidak terwarnai serta untuk mengamati ukuran, bentuk, dan tata letak sel. Setelah pengamatan dibawah mikroskop diperoleh preparat mikroba berwarna hitam sedangkan bakteri sendiri tidak berwarna (berwarna putih) dan berbentuk basil (batang). 3.3. Pewarnaan Gram Pewarnaan gram termasuk pewarnaan diferensial yang digunakan untuk membedakan bakteri gram negatif dan bakteri gram positif. Pada pewarnaan ini digunakan 3 jenis bakteri yaitu Bacillus cereus, Salmonella typii dan Eshericia coli. Pewarnaan ini menggunakan 4 jenis larutan yaitu Kristal violet sebagai cat


10

utama, larutan iodine sebagai pengintensifan cat utama, alcohol asam untuk pencucian dan safranin sebagai cat penutup. Berdasarkan percobaan diperoleh Bacillus cereus dan Salmonella typii bersifat gram positif yang berarti bakteri dapat mengikat dengan kuat cat utama cristal violet berwarna ungu, pada saat bakteri Gram positif ditambahkan dengan kristal violet maka gram positif akan mengabsorbsi larutan tersebut hanya pada dinding sel, dengan pemberian larutan lugol maka kristal violet akan masuk sampai ke inti sel, pemberian alkohol menyebabkan pori-pori dinding sel mengecil sehingga warna ungu tertahan di dalam sel disebabkan oleh rendahnya kandungan lipid. Sedangkan bakteri Eschericia coli bersifat gram negative karena tidak dapat mengikat kuat cat utama dan dapat diwarnai oleh cat lawan yakni merah dari pewarna safranin. Perbedaan gram (+) dan gram (-) Sifat Gram (+) Gram (-) diantaranya: • Komposisi Kandungan lipid rendah Kandungan lipid tinggi • Ketahanan terhadap penisilin Lebih sensitif Lebih tahan • Penghambatan warna Lebih dihambat Kurang dihambat • Ketahanan terhadap fisik Lebih tahan Kurang tahan • Kebutuhan Nutrien Kompleks Relatif


11

BAB IV KESIMPULAN

Dalam mengidentifikasi mikroba yang didasarkan pada sifat kimiawi nya, di dapatkan cara dengan melakukan teknik pewarnaan. Pewarnaan mikroba dapat dilakukan dengan cara yaitu dengan pewarnaan gram, pewarnaan sederhana, dan pewarnaan negatif. Pewarnaan sederhana digunakan untuk melihat bentuk dan struktur sel bakteri dengan menggunakan satu jenis pewarna seperti safranin atau kristal violet, pewarnaan gram digunakan untuk membedakan antara bakteri gram (+) dan gram (-) dengan lebih dari satu zat warna sedangkan pewarnaan negatif berguna untuk mewarnai latar belakang preparat dan bakteri sendiri tidak terwarnai.


12

DAFTAR PUSTAKA http://firebiology07.wordpress.com/2009/04/19/teknik-pewarnaan mikroorganisme/ http://www.wisegeek.com/what-are-gram-negative-bacteria.htm http://wawan-junaidi.blogspot.com/2010/02/makalah-tentang-pewarnaan-gramatau.html


13

TUGAS MIKROBIOLOGI (Identifikasi Mikroba Berdasarkan Sifat Kimiawi)

Recommend Documents