UNIVERSIDAD DE LAS FUERZAS ARMADAS -
“ESPE”
Microbiología I Nombre: Andrés Acosta
NRC: 3310
Título: Tinción de esporas y cápsulas bacteriana Palabras clave: Bacillus subtilis, nigrosina, verde malaquita, safranina. Resumen: Se realizó dos frotis de Staphylococcus aureus aureus en distintos portaobjetos. Luego se llevó cada placa a diferente tinción (simple y diferenciada) para distinguir las diferencias entre estas técnicas. Una vez teñidas las placas se las observo al microscopio con en el lente 100X con aceite de inmersión. Introducción Antecedentes: Las llamadas tinciones especiales son aquellas que se utilizan para teñir y aislar partes específicas de algunos microorganismos, tales como, endosporas (esporas) y flagelos. Además, son usadas para detectar la presencia de cápsulas (Tortora, Funke, & Case, 2007). Justificación: Algunas estructuras como las esporas, cápsulas bacterianas o flagelos no se logran teñir con las técnicas habituales de tinción, es por esto que se hace uso de tinciones especiales. Marco Teórico: Algunos microorganismos contiene una cubierta gelatinosa denominada cápsula. La tinción de esta estructura es más difícil que otros tipos de tinciones ya que los materiales capsulares capsular es son hidrosolubles, es decir, que se puede perder con un lavado riguroso. Por este motivo se usa una solución con suspensión coloidal fina de partículas coloreadas (como nigrosina) para otorgar un fondo de contrastes y luego teñirlas con colorantes simples (como safranina).
Las endosporas (esporas) son estructuras especiales y resistentes que se forman dentro de una célula, estas no se tiñen con los métodos comunes porque los colorantes que se usan no pueden atravesar sus paredes. Es por esto que se usa la tinción Schaeffer Fulton para endosporas (Tortora, Funke, & Case, 2007). Objetivos General: Observar las esporas y cápsulas bacterianas de Bacillus de Bacillus subtilis. Específicos - Aplicar tinciones especiales para observar esporas y cápsulas bacterianas de Bacillus de Bacillus subtilis. subtilis. Hipótesis: El bacilo se teñirá de rojo y la espero de verde. Materiales y métodos: En el laboratorio de microbiología se realizó la práctica de tinción de esporas y cápsulas bacteriana el 16 de noviembre de 2017, a cargo de la Lic. Alma Koch y Andrés Acosta.
Se realizó frotis de Bacillus subtilis con la técnica aprendida, se procedió a la tinción de esporas, para ello se colocó verde de malaquita sobre la placa y papel toalla sobre el colorante, se sometió a calor con ayuda de una pinza de madera, trípode, mechero Bunsen y malla metálica, cuidado evitar que se seque el colorante por 5 minutos. Se espero a que se enfríe la placa y retiramos el exceso de verde malaquita con agua, teñimos con safranina por 1 minutos, enjuagamos y secamos a presión. Observamos la placa en el microscopio en el lente objetico 100X con aceite de inmersión. Para la tinción de cápsulas bacterianas se colocó una gota de nigrosina en un portaobjetos, después tomamos muestra de Bacillus subtilis con un asa bacteriana y mezclamos sin esparcir con la nigrosina en el portaobjetos, con ayuda de otro portaobjetos se hizo un barrido. Se secó el exceso de colorante y fijó la muestra. Se llevó la placa al microscopio y se observó en el lente objetico 100X con aceite de inmersión (Tortora, Funke, & Case, 2007). Resultados: En mi placa se observó las esporas teñidas de color verde; en otra placa observé los bacilos teñidos de color rojo sin tinción de las esporas como se observa en la figura 1.
En la placa con nigrosina se observó un campo óptico de color negro y puntos transparentes que son las células con sus cápsulas bacterianas reflejando la luz como se observaba en la figura 2.
Figura 1 Bacillus subtilis teñidos de color rojo sin tinción de esporas observada a 100X.
Figura 2 Bacillus subtilis con tinción negativa (colorante nigrosina) mostrando sus cápsulas bacterias transparente observada a 100X.
Discusión: Las esporas y cápsulas bacterianas son estructuras difícilmente teñibles, ya que poseen características que lo impiden o dificultan este proceso, por ello se hace uso
de las llamadas tinciones especiales que facilita su tinción para poder ser observadas y estudiadas (Tortora, Funke, & Case, 2007). Conclusiones
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El Bacillus subtilis presenta cápsula bacteriana y esporas que se pueden observar en el microscopio haciendo uso de la tinción adecuada. Existen algunas estructuras bacterianas como la cápsula bacteriana o esporas que no se pueden teñir mediante métodos comunes de tinción.
Bibliografía Tortora, G., Funke, B., & Case, C. (2007). Introducción a la m icrobiología. Ed. Médica Panamericana: México.
