UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES CUAUTITLÁN DEPARTAMENTO-CIENCIAS BIOLÓGICAS SECCIÓN-BIOQUÍMICA Y FARMACOLOGÍA HUMANAS
MANEJO DE TÉCNICAS HISTOLÓGICAS I
“
NECROPSIA Y TOMA DE MUESTRA PARA PROCESAMIENTO HISTOLÓGICO ”
Anatomía e Histología Humanas Humanas
Equipo: 4
Grupo: 1302
Integrantes: Fuentes Bautista Jesús Uriel Luna Flores Oscar Medina Velázquez Laura Quetzally Rivero Alcalá Víctor Daniel Profesores: Nopal Guerrero Tais Vázquez Verónica
Fecha: lunes 20 de agosto de 2012
OBJETIVOS
a) Distinguir tipo de corte realizado con distintos instrumentos. b) Identificar, observar y describir partes anatómicas u órganos. órganos. c) Pasos a seguir en la realización de anestesia por inhalación. d) Identificar las etapas de la anestesia. e) Aprender a dividir y subdividir a los órganos. f) Pasos a seguir en la necropsia de un animal de laboratorio. g) Aprender a identificar órganos con ayuda de algún modelo o esquema. h) Aprender a realizar fijaciones y su importancia. i) Distinguir semejanza o diferencias entre órganos del animal estudiado y el humano. j) Identificar sistemas sistemas y aparatos que componen componen al al animal de estudio. estudio.
INTRODUCCIÓN
El término eutanasia deriva del griego: "eu" (bien) y "thánatos" (muerte). Los animales se sacrifican en los laboratorios o establecimientos de cría por varios motivos:
al final de un experimento o cuando pudieran proseguir con efectos adversos;
para obtener sangre y otros tejidos con un fin científico;
cuando los niveles de dolor, angustia y sufrimiento es probable que sobrepasen el nivel previsto;
cuando el campo de estudio sea la salud o el bienestar de los animales;
cuando ya no sean aptos para la cría;
animales no utilizados, o aquellos con sus características no adecuadas, por ejemplo el tipo de animal o el sexo y que por ello no son necesarios.
Los criterios primordiales para la eutanasia en términos de bienestar animal, son que el método sea indoloro, consiga una rápida inconsciencia y muerte, requiera una mínima inmovilización, evite la excitación, sea apropiado para la edad, especie y salud del animal, debe de minimizar el miedo y el estrés en el animal, ser fiable, reproducible, irreversible, sencillo de administrar (en dosis pequeñas si es posible) y seguro para el operador. Y en la medida de lo posible, debe ser estéticamente aceptable para el operador.
Métodos físicos Estos métodos deben producir la inmediata pérdida de consciencia a través del trauma físico del cerebro.
Métodos químicos Muchos anestésicos se utilizan en sobredosis como agentes eutanásicos. Un anestésico es un agente que produce, de un modo controlado, la ausencia de percepción de cualquier sensación. Produce inconsciencia, analgesia y relajación muscular suficiente para realizar los procedimientos sin dolor.
Agentes inhalatorios Los agentes inhalatorios son, o bien vaporizados, o bien conducidos como gas hasta cámaras o circuitos anestésicos. Las cámaras que se utilicen para la distribución de estos agentes, deben estar diseñadas adecuadamente, de modo que aseguren la distribución uniforme del gas y la rápida exposición de los animales a una concentración alta del agente. Su utilización es de gran interés en muchos animales pequeños, por ejemplo aves, roedores, gatos y perros pequeños (Smith et al. 1986). Se debe confirmar la muerte.
La anestesia es un acto médico controlado en el que se usan fármacos para bloquear la sensibilidad táctil y dolorosa de un paciente, sea en todo o parte de su cuerpo y sea con o sin compromiso de conciencia. La anestesia general se caracteriza por brindar hipnosis, amnesia, analgesia, relajación muscular y abolición de reflejos. Etapas de la anestesia general: 1.- Inducción o analgesia: Empieza cuando se aplica el fármaco y consiste en analgesia y amnesia, se conserva la actividad refleja y termina cuando se pierde la conciencia. 2.-Excitación o delirio: Comienza con la perdida
de la conciencia.
La
actividad
refleja
está aumentada, hay respiración irregular, amnesia, pero el paciente puede presentar delirios, forcejeo s … Esta etapa termina cuando la respiración se vuelve regular. 3.- Anestesia quirúrgica Comienza con la regularización de la respiración. 4.- Parálisis bulbar: El centro vasomotor y respiratorio del bulbo se deprimen intensamente y la respiración espontánea se detiene y hay colapso cardiovascular. Si no se toman medidas para reducir las dosis el paciente fallece rápidamente.
Por ultimo es importante conocer las diferencias y similitudes entre la anatomía de la rata y la del humano:
Peso
Color Ubicación Gris la capa 1300externa, y gris 1400g Distal, superior casi negro el Cerebr r interior o Rosa claro, 2gr muy pálido Distal, superior casi blanco Estom ago
Riñón
Vejiga
Hígad o
Coraz ón
Tamaño
#
La corteza cerebral extendida, cubriría entre 1 1.800 y 2.300 cm2 6 cm 2
1
25 cm del cardias al píloro Rosa Abdomen y el diámetro transverso es 1 de 12cm. Blanco Abdomen 1 Aproximadamente, Aproximadamente, el 150 g rojo parduzca Abdomen tamaño de un puño 2 cerrado. 0,71gr Café claro Abdomen 2 En la excavación de 350 cc de volumen líquido 1 la pelvis en su interior En la excavación de transparente 1 la pelvis 26 cm (horizontal) por 15 la totalidad de la cm (vertical) en sentido región 2 kg. Rojo pardo anteroposterior, y 8 cm de 1 del hipocondrio derec espesor a nivel del lóbulo ho derecho. la totalidad de la Café muy región 0,139 1,34cc 1 obscuro del hipocondrio derec ho En la parte inferior del mediastino medio, Unos 12 cm de longitud, 9 300gr Rojo pardo entre el segundo y cm de anchura y 6 cm de 1 quinto espacio grosor máximo. intercostal, izquierdo. Es al tamaño de lo que es Café obscuro 1.3gr tórax el tamaño de su mano. 1 casi rojo (0,498cc)
DIAGRAMA DE FLUJO
Observa la apariencia externa de la rata. Haz observaciones observaciones
Continua con el corte de la capa muscular hacia arriba hasta llegar a la traquea.
Corta la piel de la cabeza por la linea media y retirala hacia los costados, corta los huesos del craneo por la linea media.
Tomar la rata por la cola y colocarla en una campana de vidrio, anestesiarla con alcohol etilico hasta provocarle la muerte
Regresa a la zona abdominal, identifica el musculo diafragmatico diafragmatico y cortalo al igual que las costillas con ayuda de unas tijeras de diseccion.
Retira con pinza los nervios craneales coloca el cerebro en una caja petri. Comparalo con el cerebro humano.
Se coloca la rata con la parte ventral hacia arriba y se sujeta con cinta adhesiva
Continua la insicion hasta la zona genital, identifica las gonadas sexuales.
Extrae otros organos y realiza su comparacion anatomica de aquellos que tambien se tengan en la coleccion.
Levanta la piel de la zona abdominal con ayuda de una pinza y realiza con el bisturi una incision en la linea media ventral
Realiza el corte de la linea ventral hacia abajo , observa e identifica los organos abdominales.
Elije el o los organos de tu interes, separalos y retiralos retiralos con cuidado con ayuda de un bisturi y tijeras.
Colocalo en el vidrio de reloj y lavalo perfectamente perfectamente con SSF y con la jeringa
Obten una muestra de 1cc con bisturii, colocalo en la rejilla para fijacion y etiquetalo.
Colocalo en un frasco gerber que contenga formol al 10% en buffer de fosfatos y etiqueta tu frasco
Toma una barra de plastilina, realiza un corte con bisturi y observa la zona de corte, anota tus observaciones.
Toma un trozo de barra de plastilina y realiza un corte con tijeras de bisturi.
Compara la zona de corte realizada con los dos instrumentes, anota tus observaciones.
METODOLOGÍA La metodología fue seguida como se indica en el manual, solo se agregó el siguiente paso en el punto 3: Si la rata no muere por completo, se procede con el procedimiento de la dislocación cervical. Se toma al animal de la parte delos hombros con los dedos índice y pulgar con la cola atorada entre los dedos meñique y anular, y con la otra mano con el dedo índice y pulgar se toma la cabeza. Se localiza la epiglotis del animal para realizar la dislocación. Con un jalón, fuerte y único, se tira del cuerpo y de la cabeza al mismo tiempo para lograr la separación del cerebro con el resto del cuerpo.
OBSERVACIONES Y RESULTADOS Eutanasia y Necropsia de una Rata Wistar W istar Previo al proceso de Eutanasia, se realizó una observación intensiva de la apariencia física de la rata con la que se trabajaría obteniéndose lo siguiente Tabla No.1 Apariencia Física de la externa de una rata Wistar Observaciones Ojos
Redondos rojos color de rubí
Orejas
Color rosadas cónicas
Nariz
En forma de M rosácea
Pelaje Afecciones de la piel y/o heridas
Ligeramente largo de color ligeramente amarillento, grueso algo áspero Cola lastimada de la punta, lesión cerca del ojo izquierdo
Diarrea
Eses normales un poco flojas
Sexo
Hembra
En el proceso de Eutanasia se observaron las etapas de la Anestesia.
Etapa 1 Analgésica o de relajación. La rata se ve en un estado de relajación, en calma, perece somnolienta, pero aun despierta (Figura 1).
Figura 1 Rata Wistar en la Primera Etapa de la Anestesia Etapa 2 Excitación o Delirio. El pulso es rápido y la respiración puede ser irregular irr egular acompañado de una serie de movimientos involuntarios, como levantarse en dos patas, levantar la cabeza, correr a través de la campana (Figura 2).
Figura 2 Rata Wistar en la segunda Etapa de la Anestesia
Etapa 3. Quirúrgica. La rata se encuentra en un estado total de relajación. Su pulso es normal y sus latidos son lentos (Figura 3).
Figura 3 Rata Wistar en la tercera Etapa de la Anestesia A pesar de los datos anteriores, no se logró la muerte de la rata por simple inhalación de éter etílico, por lo que se procedió a la dislocación cervical, por el método indicado por las asesoras. Así se le dio muerte si dolor al roedor, es decir, se le practicó la eutanasia. Entonces se procedió a colocar al objeto de estudio sobre la charola de disección para comenzar con la misma. Al levantar la piel (Figura 4a) y después el musculo de la zona (Figura 4b) ventral se pudieron observar los órganos abdominales, entre ellos el hígado, el estómago, los intestinos por mencionar algunos (Figura 5 y Tabla No.2). En muchos de estos órganos se observó amplio parecido con los presentes en el ser humano, tanto en color, como en forma f orma (Tabla No.2). Tabla No.2 Tabla que recopila las observaciones a los órganos del objeto de estudio y Órgano
Observaciones Observaciones medidas,
(color, Semejanzas
con
los
consistencia, órganos humanos
etc.,) Baso
Negro
de
aproximadamente de 1 a 2 cm Cerebro
Grisáceo en forma de nuez
No muy parecido, pues el del ser humano sólo se divide en dos hemisferios y
el del roedor en 5 Corazón
Aun latía, de color rojo Muy parecido en color, intenso aproximadamente forma y función. de 2 x 1.5 cm
Estómago
En forma parecida a una Muy parecido al del ser “U” de un color entre gris y
humano
café, aun lleno de alimento de 3 x 2.5cm aprox. Glándulas suprarrenales suprarrenales
Sobre los riñones, café oscuro, muy pequeños
Hígado
Es el órgano más grande Muy parecido al del ser del cuerpo de la rata, color humano vino de gran medida
Intestinos
De color café claro y muy Parecidos a los del ser largos
Ovarios
humano
Muy pequeños de color Parecidos en forma, pero morado
Pulmones
no en color
Color rosa pálido de 3 x 2 Parecidos cm
en
color
y
forma, pero no en tamaño en relación con el humano
Riñón
En forma de frijol, café Parecidos
en
color
y
oscuro, pequeños, de 1 a forma, pero no en tamaño 1.5 cm aprox. Vejiga
Color
transparente transpare nte
en relación con el humano de
forma de gota de aprox. 1 cm
Figura 4 Corte de piel y musculo para ver óganos internos
Figura 5 Órganos internos del objeto de estudio
Toma de muestra y fijación de órganos de rata Wistar En el equipo se tomó la decisión de extraer el estómago del cuerpo del roedor, para lo cual se hizo el corte para separarlo del intestino (Figura 6a). Después, al ser necesario abrir el órgano para tomar la muestra, desprendió un aroma muy fuerte por su contenido (restos de alimento) (Figura 6b). Dicha muestra fue colocada en una rejilla de fijación, etiquetado y puesto en un frasco Gerber® con formol al 10% en Buffer de fosfatos.
Figura 6 Toma de mustra de estómago de rata a) Separación del estomago b) interior del estómago Cortes en plastilina Tras el corte con el bisturí y con las tijeras en la barra de plastilina se observó que el corte realizado con bisturí casi no lastima ni maltrata el objeto de estudio, cosa que con las tijeras si sucede
ANÁLISIS E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
Eutanasia y necropsia de una rata Wistar Primeramente fue observada la rata y se fueron identificando algunos aspectos superficiales que pueden ser de gran ayuda para predecir si el animal pudiera padecer alguna enfermedad, golpe interno, heridas o alguna otra lesión que pudiera afectar el estudio realizado. Después se procedió a la anestesia de la rata, permitiendo observar las etapas de inducción, excitación, anestesia quirúrgica, aunque ya no se pudo observar la fase de sueño profundo, ya que el tiempo de exposición ante el éter etílico fue prolongado, pero suficiente para reconocer la etapa adecuada para comenzar la realización de la necropsia. Para comenzar la necropsia fueron de utilidad los conocimientos anteriores respecto a los cortes anatómicos, ya que para realizar el primer corte se tomo como base un corte sagital, permitiendo que los órganos no fueran dañados. Se comprobó que la primera
capa está conformada por una capa de tejido epitelial, el cual presentó una pequeña resistencia ante el bisturí, el cual era de esperarse, sabiendo sabiendo que está estructurado de tejido epitelial y tejido conjuntivo adiposo. Una vez pasada esa capa se encontró el tejido muscular que recubría la parte abdominal y le da soporte a los órganos internos, observando una gran semejanza ante los esquemas de la rata y el humano, incluyendo incluyendo el peritoneo que protege a los órganos y les da un soporte, previniendo que estos pierdan su posición anatómica. Una vez cortado el peritoneo se pudieron apreciar algunos órganos tales como el estómago, intestinos delgado y grueso, hígado, pulmones, vejiga y riñones, los cuales presentaban un gran parentesco ante los esquemas del humano, tanto en color y forma, dando a entender que la anatomía de los órganos no es muy distinta y que son fácilmente reconocibles. El corte sagital se extendió hasta la parte supra posterior de la cavidad craneal, el cual se requirió de la ayuda de las tijeras, sin importar el daño al tejido epitelial, ya que la muestra de interés era el cerebro y no podía ser cortada tan fácilmente. Una vez identificados los sistemas y órganos, se tomó la muestra de estómago aunque provocó olores desagradables, demostrando que la rata se encontraba en proceso de degradación de los alimentos el cual también se asemeja al del humano. Como la muestra presentaba un aspecto blando y de fácil corte, fue requerido el bisturí para no dañar el tejido epitelial y no rasgar ese tejido. La muestra fue lavada con SSF para evitar algún resto
de alimento u otros componentes
gastrointestinales. Para su fijación fue puesta la muestra en un saco compuesto de gasas para evitar que pudiese haber pequeñas fracciones flotando, la sustancia requerida fue el formol al 10% para evitar que las células fueran destruidas por microorganismos y que ellas mismas tuvieran un proceso de autolisis.
Cortes realizados en plastilina Los cortes realizados en las barras de plastilina permitieron identificar la utilidad y zonas en donde pueden ser ocupados algunos instrumentos de corte, tal es el caso del bisturí, ya que en la barra permitió un corte suave, recto y sin mayores complicaciones, tomando en cuenta que se tomo una barra delgada, pero al momento de hacer un corte más profundo, el bisturí perdió esa facilidad, razonando la situación, nos da a entender que es útil para cortes superficiales y que no son de alta dureza. Por otro lado al realizar los cortes con las tijeras se comprobó que maltrata demasiado la muestra, debido a que la longitud de corte no es tan amplia, por lo tanto, requiere de más cortes. Aunque los cortes realizados a mayor profundidad fueron de mayor facilidad, al igual que el esfuerzo realizado para el corte fue menor, esto permite saber
que esta herramienta puede ser de mayor utilidad para cortes profundos y con un grado de dureza mayor, aunque tengan que ser cortes no tan extensos para no causar lesiones o maltratar muestras.
CONCLUSIONES Al final de la práctica se aprendió como se utiliza la anestesia por inhalación de gases en ratas, así como identificar cada fase de la misma observando los síntomas que mostraba dicho animal, también se aprendió un método de eutanasia. Posteriormente se aprendió a realizar una necropsia a una rata de laboratorio con lo cual, cada miembro del equipo tuvo la oportunidad de identificar cada órgano que compone los diferentes aparatos y sistemas que componen a un ser vivo así como nombrar e identificar los tejidos que se pudieron observar observar a simple vista. Finalmente, todos los miembros del equipo pudieron realizar una correcta extracción de un órgano específico así como una toma de muestra del mismo.
BIBLIOGRAFÍA
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