RECUENTO MICROSCOPICO DIRECTO: METODO DE BREED 1. INTR INTROD ODUC UCCI CION ON:: Existen Existen muchos muchos métodos métodos para la cuantifcac cuantifcación ión de microrg microrganism anismo, o, incluyendo métodos microscópicos, microscópicos, electrónicos (contador Coulter), químicos (para estimar masa celular), y conteo en placas donde se orman y crecen las colonias de bacterias El recue ecuent nto o micr micros osco copi pico co dir directo ecto trat trata a de un méto método do para para el !recuento de totales!, dado que se contabili"an los microorganismos #i#os y muertos Cuando el método solamente recuenta organismos #i#os se denomina !recuento de #iables Entre las principales des#enta$as del recuento directo tenemos% se pue pueden den cont contar ar célu célula las s muer muerta tas s y #i#a #i#as, s, difc difcul ulta ta el cont conteo eo de bact bacter eria ias s mó#i mó#ile les, s, se requi equier eren en conc concen entr trac acio ione nes s de bact bacter eria ias s adecuadas En esta técnica un #olumen defnido se coloca en un portaob$etos para luego ser obser#ado al microscopio El método de recuento de &reed es muy usado en la industria l'ctea, en éste se colocan ml de muestra sobre un portaob$etos con un recuadro de cm * que se ti+e con un colorante para luego contar las células obser#adas con el ob$e ob$eti ti#o #o de ,, al fnal fnal el n-me n-merro de bact bacter eria ias s cont contad adas as se multiplica por .os recuentos microscópicos también se reali"an usando la c'mara de /etro012ausser3 estos métodos no requieren tiempo de incubación .os estudios relacionados con el an'lisis de muestras como agua, alimentos, leche y aire requieren de una enumeración cuantitati#a de los micro microor organ ganism ismos os prese presente ntes s en estos estos compue compuesto stos, s, ya que la calidad microbiológica de estos productos est' en relación directa con la calidad sanitaria y la seguridad para el consumo de ellos
2. OB OBJE JETI TIV VOS: OS: •
•
4diestrar al estudiante con el mane$o del metodo de extension de &reed 5eterminar el numero total de microorganismos presentes en una muestra de alimento por el metodo de breed
3. MATE MATERI RIAL AL MATERIAL BIOLOGICO •
4gua
MATERIAL DE LABORATORIO • • • •
.amina porta ob$etos /ipeta graduada 6echero 4sa bacteriologica
COLORANTE Y REACTIVO •
7ioleta de genciana
8aranina 4lcohol acetona .ugol
• • •
EQUIPO 6icroscopio
•
4. PROCEDIMIENTO 8obre un porta ob$etos limpio y desengrasado se dibu$o con un l'pi" un cuadrado de un centímetro cuadrado 8e homogeni"o la muestra problema y con una pipeta se coloco una gota de la muestra (aproximadamente , ml) sobre el cuadrado y extendio bien sin salirse de él 8e f$o la muestra y se coloreo mediante la tecnica de 9ram 8e obser#o al microscopio 8e conto el n-mero de microorganismos en #arios campos, no menos de campos .uego se sacó un promedio del n-mero de microorganismos por campo y se multiplicó por el actor microscópico .uego, como la muestra usada ue de m., multiplicaremos el resultado anterior obtenido por ml para pasarlo a la misma unidad
•
•
• • •
•
•
5. RESULTADOS ACM = π ×r ACM
2
2
=
3.1416 × 2500 μ
ACM =7854 μ
2
8
FM =
10
7854
=12732.4
107∗12732.4 −−−−−−−−−−−0.01 ml
x −−−−−−−−−−−−−−−1 ml 7
x =13 × 10
6. COMENTARIO El metodo de &reed es un metodo de recuento directo que se puede aplicar para el analisis de muestras en el campo de alimentos nos indica en el numero de celulas o microorganismos esta alterando un determinado alimento , pero el error de este metodo que cuenta celulas #i#as y muertas
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
•
•
•
4tlas, : 6 ; : &artha * 6icrobial Ecology Cummings 8cience /ublishing Collins C2 y .yne /atricia 6 ?@? 6étodos 6icrobiológicos 4C:A&A4 B*= pp 6adigan, 6 , D6 6artino y D /arer *F &roc &iología de los microorganismos G Edición en espa+ol /rentice may Aberia, Espa+a
DETECCION DE UEVOS Y LARVAS DE PARASITOS 1. INTRODUCCION .as inecciones parasitarias se encuentran entre los trastornos m's generali"ados que aectan a los ni+os en edad escolar y los residentes de las "onas pobres de los centros urbanos .a acilidad de la contaminación, la alta de saneamiento y las políticas estructurales que se centraron en la #igilancia de las enermedades parasitarias contribuyeron a esta situación .a inección alimentaria por proto"oos y helmintos transmitidos por la ingestión de #egetales que se comen crudos, es uno de los actores que conducen a la propagación de estas enermedades El agua contaminada por materia ecal de origen humano, a menudo es utili"ada para el riego de $ardines y la contaminación de los alimentos por manipuladores inectados también puede ser una de las causas de contaminación de #egetales .a mayoría de los par'sitos intestinales se transmiten por contaminación del ambiente y en este aspecto, el agua y los alimentos $uegan un papel importante 8i las heces no se eliminan de manera apropiada, los quistes, ooquistes y hue#os de los par'sitos intestinales pueden quedar en el ambiente de las casas o contaminar uentes de agua o culti#os regados con aguas residuales /or lo que se estima que =H del total de muertes en el mundo se deben a problemas relacionados al agua, desagIe e higiene Giardia duodenalis, causa giardiasis (9A1are15A41sis), éste es un par'sito unicelular microscópico que puede #i#ir en los intestinos de los animales y de las personas 8e encuentra en cada región alrededor del mundo y est' reconocido como una de las causas m's comunes de enermedades transmitidas por agua (y ocasionalmente por alimentos) Taenia saginata (gusano plano de carne de res) y Taenia solium (gusano plano de carne de cerdo) son gusanos par'sitos (helmintos) aeniasis es el nombre de la inección intestinal causada por gusanos planos en la etapa adulta (gusanos planos de res y cerdo) Cisticercosis es el nombre de la inección del te$ido (adem's de intestinal) causada por esta etapa lar#al del gusano plano de cerdo solamente Es interesante notar que los humanos son los huéspedes defniti#os de ambos organismos Esto signifca que su ciclo reproducti#o y la producción de hue#os por estos microorganismos, sólo ocurren dentro de los humanos .os hue#os pasan en las heces ecales y pueden ser excretados al ambiente mientras los gusanos permane"can en el intestino (tanto como por F a+os) En adición, los hue#os pueden permanecer #iables en el ambiente por muchos meses Estas enermedades son pre#alecientes en países subdesarrollados donde las pr'cticas de saneamiento son sub 1 est'ndares y en 'reas donde la carne de cerdo y de res son consumidas crudas o no cocidas completamente
2. OBJETIVO: Adentifcar los tipos d ehue#os de parasitos y algunas ormas lar#arias
•
3. MATERIAL BIOLOGICO 6uestras parasitos
•
conser#adas
conteniendo
hue#os
y
quistes
de
DE LABORATORIO: • • • •
.amina portaob$etos .amina cubre ob$etos .ugol 9otero
EQUIPO •
6icroscopio
4. PROCEDIMIENTO •
•
8e homogeni"o la muestra *B g en **B ml de agua destilada se la#o y se centriugao para obtener el sedimento 8e agrego lugol y se suspendio el sedimento y se obser#o en el microscopio
5. RESULTADOS
O!"#$%&'()*: Ascaris sp A+,#*-) : = x
O!"#$%&'()*: Entamoeba coli
O!"#$%&'()*: Himenolepis sp
O!"#$%&'()*: Taenia sp A+,#*-) : = x
6. COMENTARIO .os parasitos pueden ser transmitidos mediante la ingesta de alimentos o agua contaminada ocasionando una serie de enermedades en las personas con malos habitos alimenticios e higienicos
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS •
•
•
8olarte ;, /e+a 6, 6adera C ransmisión de proto"oarios patógenos a tra#és del agua para consumo humano Colomb 6ed *J3 FK()% K=1@* /rIs 4, Lay 5,
RECUENTO POR EL MTODO DEL N/MERO M0S PROBABLE 1. INTRODUCCIN El método de n-mero m's probable (N6/) es una estrategia efciente de Estimación de densidades poblacionales especialmente cuando una e#aluación cuantitati#a de células indi#iduales no es actible .a técnica se basa en la determinación de presencia o ausencia en réplicas de diluciones consecuti#as de atributos particulares de microorganismos presentes en muestras de suelo u otros ambientes /or lo tanto, un requisito importante de este método es la necesidad de poder reconocer un atributo particular de la población(es) en el medio de crecimiento a utili"arse El estimado de densidad poblacional se obtiene del patrón de ocurrencia de ese atributo en diluciones seriadas y el uso de una tabla probabilística 4lgunas de las #enta$as del N6/ son% (i) la capacidad de estimar tama+os poblacionales basados en atributos relacionados a un proceso (selecti#idad)3 por e$emplo se puede determinar la densidad poblacional de organismos que pueden nodular leguminosas en una muestra de suelo usando el método de inección de plantas, (ii) pro#ee una recuperación uniorme de las poblaciones microbianas de suelos di#ersifcados, (iii) determina sólo organismos #i#os y acti#os metabólicamente, y (i#) suele ser m's r'pido e igual de confable El método requiere la reali"ación de una serie de diluciones en serie de la muestra de culti#o, en un medio líquido adecuado para el crecimiento de dicho organismo de un #olumen die" #eces mayor .uego, se incuban las muestras de esos tubos y, pasado un tiempo, se examinan los tubos 4quellos tubos que recibieron una o m's células microbianas procedentes de la muestra, se pondr'n turbios, mientras que los tubos que no recibieron ninguna célula permanecer'n transparentes 4l aumentar el actor de dilución, se alcan"a un punto en el que algunos tubos contendr'n tan sólo un microorganismo y otros tubos no contendr'n ninguno 4l calcular la probabilidad de que los tubos no hayan recibido ninguna célula, se puede estimar el n-mero m's probable de microorganismos presentes en la muestra original, a partir de una tabla estadística .a precisión del método del n-mero m's probable aumenta con el n-mero de tubos que se usan3 cinco tubos por dilución se consideran como una relación adecuada entre precisión y economía
2. OBJETIVOS •
5eterminar el numero aproximado de bacterias #iables presentes en una muestra de alimento
3. MATERIAL BIOLOGICO •
6uestra (agua)
DE LABORATORIO • •
ubos de ensayo /ipetas de y ml
Campana 5urhanhttps%>>riunetup#es>bitstream>handle>*B> F@F@>E#aH*9arcHCFH45aH*Calidad H*leche1*=pdQsequenceR • •
9radilla 6echero
MEDIOS DE CULTIVO • •
Caldo lactosa bilis #erde brillante (&:A..4) Caldo triptonado
REACTIVO •
Lo#acSs
EQUIPOS • •
Estua reguladora a FB 1FKTC &a+o 6aria a == T C
4. PROCEDIMIENTO • •
•
•
•
• •
8e desinecto la mesa de traba$o con alcohol yodado 8e procedio a tomar la muestra (agua) y se agito para homogeni"ar la muestra 8e pipeteo ml de muestra original a cada uno de los tres primeros tubos conteniendo ml de caldo &:A..4 doble concentrado, ml a los tres siguientes tubos conteniendo &:A..4 a concentracion normal y ml a los tres tubos restantes con &:A..4 a concentracion normal 8e homogeni"o la siembra adecuadamente y se incubo los tubos a FB1FK TC durante *= a =@ horas 5e cada tubo positi#o (presencia de gas) se sembro una alicuota en caldo &:A..4 y otra alicuota en caldo triptonado 8e incubo en ba+o maria a ==TC durante *=1 =@ horas .uego del tiempo de incubacion eectuar la prueba del indol en los tubos con caldo triptonado para lo cual se adiciono * a F gotas de reacti#o de o#acs
5. RESULTADOS
:A454 R F /X8AA7X8 * :A454 R /X8AA7X F :A454 R NAN9YN /X8AA7X CX.A ml
No hay coliormes ecales ni
6. COMENTARIO El numero mas probable (N6/>ml % =F) de coliormes totales en la muestra de agua El crecimiento bacteriano de coliormes en los tubos es reUe$ado mediante el cambio de apariencia en el medio que se enturbia y la presencia de gas que se obser#a en la campana 5urham
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS •
•
•
CC4;4C161= (*J) VEstimación de la densidad microbiana por la técnica del n-mero m's probable, detección de coliormes totales, cliormes ecales y Escherichia coli por el n-mero m's probableW
PASTEURIACION 1. INTRODUCCION .a pasteuri"ación o pasteri"ación, es el proceso térmico reali"ado a líquidos (generalmente alimentos) con el ob$eti#o de reducir la presencia de agentes patógenos (como por e$emplo ciertas bacterias, proto"oos, mohos, le#aduras, etc) que puedan contener Este proceso de calentamiento recibe el nombre del que lo lle#ó a cabo por primera #e", el científco1químico rancés .ouis /asteur (@**1@?B) .a primera pasteuri"ación ue reali"ada el * de abril de @J= por el propio /asteur y su colega Claude &ernard Yno de los ob$eti#os del tratamiento térmico es una !esterili"ación parcial! de los alimentos líquidos, alterando lo menos posible su estructura ísica, sus componentes químicos y sus propiedades organolépticas ras la operación de pasteuri"ación, los productos tratados se enrían r'pidamente y se sellan herméticamente con fnes de seguridad alimentaria3 por esta ra"ón, es b'sico en la pasteuri"ación el conocimiento del mecanismo de la transerencia de calor en los alimentos 4 dierencia de la esterili"ación, la pasteuri"ación no destruye totalmente las esporas de los microorganismos, ni elimina todas las células de microorganismos termoílicos .ouis /asteur me$oró la calidad de #ida al hacer posible que productos alimenticios b'sicos, como la leche, se pudieran transportar largas distancias sin ser aectados por la descomposición En la pasteuri"ación, el ob$eti#o primordial no es la !eliminación completa de los agentes patógenos! sino la disminución sustancial de sus poblaciones, reduciéndolas a ni#eles que no causen intoxicaciones alimentarias a los humanos (siempre que el producto pasteuri"ado se mantenga rerigerado correctamente y que se consuma antes de la echa de caducidad indicada) En la actualidad, la pasteuri"ación es ob$eto de cada #e" m's polémicas por parte de ciertas agrupaciones de consumidores en todo el mundo, debido a las cuestiones existentes sobre la destrucción de #itaminas y alteración de las propiedades organolépticas (sabor y calidad) de los productos alimenticios tratados con este procedimiento
2. OBJETIVOS 8aber la importancia de la
•
pasteuri"acion en los procesos de
abricacion de alimentos
3. MATERIAL BIOLOGICO •
6uestra (agua)
DE LABORATORIO •
/ipetas
•
/lacas petri
•
6echero
•
9radilla
•
•
ermometro 7aso de precipitacion
MEDIOS DE CULTIVO: •
/C4
EQUIPOS: Estua
4. PROCEDIMIENTO •
4 partir de la muestra original se siembra ml por incorporacion en dos placas y se agrega el medio /C4 se de$a solidifcar y se lle#a a incubar *= a =@ horas
•
.a muestra se lle#o a tratamiento termico a J=TC por F min y se sembro ml en dos placas por incorporacion , se agrega el medio /C4 y se de$o solidifcar y se lle#o a incubar *= a =@ horas
5. RESULTADOS M+#"-$& )$((*& /laca R ?= /laca * R J ´ =100=10 x 10 X
1
Yml
P&"-#+$(&'()* No hubo crecimiento microbiano en ninguna de las placas
6. COMENTARIO 8i se redu$o las poblacion microbiana de la muestra de agua lo que demuestra que este tratamiento es eecti#o para eliminar la Uora #egetati#a presente en los alimentos
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS •
!6icrobiología e higiene de los alimentos!, 2ayes /:, Ed 4cribia 84, Zarago"a, Espa+a, ??F
RECUENTO EN PLACA 1. INTRODUCCION : En di#ersos estudios microbiológicos (como an'lisis de alimentos, de agua de bebida, de productos armacéuticos o del medioambiente entre otros), se requiere conocer el n-mero de microorganismos presentes en un material con ob$eto de determinar su calidad El procedimiento es esencialmente el mismo que para la medida del crecimiento de las poblaciones de bacterias El crecimiento de poblaciones microbianas puede determinarse mediante métodos de medida de la masa total celular, que generalmente es directamente proporcional al n-mero de células, (métodos de determinación del peso, de la acti#idad del culti#o o métodos turbidimétricos) o por la determinación del n-mero de células Es un método muy utili"ado cuando se necesita determinar el tama+o de la población bacteriana de una muestra El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollar' una colonia #isible /ero debido a que una muestra
no es totalmente homogénea con respecto a su composición microbiológica, es posible que una colonia se origine de un microorganismo o de cientos de ellos, dando en este -ltimo caso un recuento menor del real ambién es posible que muchas de las bacterias presentes en la muestra no puedan crecer en las condiciones elegidas (p2, temperatura, medio de culti#o, tiempo, etc) En este caso el recuento también ser' inerior al real .o que si se sabe es que cada colonia obser#ada se ormó a partir de por lo menos un microorganismo Esta es una condición necesaria y sufciente Entonces la colonia es considera una unidad ormadora de colonia (uc) a los eectos de los c'lculos 8e admite, por lo tanto, que en los métodos de recuento de microorganismos #i#os, son ine#itables los errores Especialmente cuando se examinan muestras peque+as, es posible cometer grandes errores .a técnica se basa en contar las Vunidades ormadoras de coloniasW o Y
2. OBJETIVO : •
5eterminar el numero de microorganismos #iables presentes en una muestra de alimentos
3. MATERIAL BIOLOGICO •
6uestra (agua)
DE LABORATORIO • • • •
/lacas petri esteriles /ipetas 6echero ubo de ensayo
MEDIO DE CULTIVO •
4gar cuenta germenes (pca)
•
8olucion salina fsiologica
EQUIPOS •
4.
Ancubadora regulada a FB1 FKT C
PROCEDIMIENTO •
•
•
•
8e procedio a tomar la muestra de agua y se coloco un ml apartir de la muestra original en * placas 8e coloco ml de la muestra original en ?ml de 88< ( 1) a partir de la dilucion se sembro por incorporacion ml en * placas 8e licuo el medio /C4 y se agrego a todas las placas y se de$o solidifcar 8e lle#o a incubar a FKTC por *=1=@ horas
5. RESULTADOS
D(+'()* 11 : /laca R @ Yml
Kx
/laca *R K Yml
M+#"-$& )$((*& : /laca R BJ Yml
=x /laca *R F Yml Yml
6. COMENTARIO .os resultados obtenidos en la practica estan dentro del rango establecido de F1F Yml , al momento de l a lectura se obser#o
contaminantes es decir que no se traba$o de una manera aseptica, mala manipulacion al momento de tomar la muesta, las #entanas al estar abiertas el aire pudo arrastar tierra y eso contamina el medio, etc
7. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS •
•
•
8ecretaría de 8alud NX61?18841??= &ienes y 8er#icios /rocedimiento para la oma, 6ane$o y ransporte de 6uestras de 4limentos para su 4n'lisis 6icrobiológico Norma Xfcial 6exicana 6éxico 8ecretaría de 8alud NX6118841??= &ienes y 8er#icios /reparación y 5ilución de 6uestras de 4limentos para su 4n'lisis 6icrobiológico Norma Xfcial 6exicana 6éxico 8ecretaría de 8alud NX61?*18841??= &ienes y 8er#icios 6étodo para la cuenta de &acterias 4erobias en /laca Norma Xfcial 6exicana 6éxico
