REACCIONES IMViC Las reacciones IMViC son un conjunto de cuatro reacciones útiles, que se emplean comúnmente en la identificación de miembros de familia de las enterobacterias. Las cuatro reacciones son las siguientes: prueba de indol, prueba de rojo de metilo, Voges Proskauer test y Citrato. La letra "i" es sólo para fines de rima.
Prueba de indol: Principio: Algunas bacterias pueden producir indol a partir del aminoácido triptófano mediante la enzima triptofanasa. La producción de indol se detecta utilizando el reactivo de Ehrlich o reactivo de Kovac. El Indol reacciona con el aldehído aldehído en el reactivo reactivo para dar un color rojo. Una capa alcohólica se concentra el color rojo como un anillo en la parte superior.
Procedimiento: La bacteria a ensayar se inoculara en agua de peptona, que contiene amino ácido triptófano y se incuba durante la noche a 37 ºC. Luego se le agregan unas pocas gotas de Reactivo de Kovac. Reactivo de Kovac se compone de para-dimetil aminobenzaldehyde, alcohol isoamílico HCl. Reactivo de Ehrlich es más sensible en detectar la producción producción de indol en anaerobios y no fermentadores. fermentadores. La formación de un color color rojo o rosado anillo de color en la parte superior superior se toma como positivo. Ejemplo: Escherichia coli: positivo, Klebsiella pneumoniae: Negativo
Rojo de metilo (RM) PRUEBA: Principio: Esto es para detectar la capacidad de un microorganismo para producir y mantener estables los productos finales de ácido desde la fermentación de glucosa. Algunas bacterias producen grandes cantidades de ácidos de fermentación de la glucosa que superar la acción amortiguadora del sistema. Rojo de metilo es un indicador de pH, que sigue siendo de color rojo a un pH de más o menos 4,4
Procedimiento: la bacteria a ensayar se inoculó en caldo de glucosa fosfato, que contiene glucosa y un tampón de fosfato y se incubaron a 37 ºC durante 48 horas. Durante las 48 horas, organismo mixto productor de ácido debe producir ácido suficiente para superar el tampón de fosfato y permanecer ácido. El pH del medio se comprueba. Además de 5 gotas de reactivo SR. El desarrollo de color rojo se toma como positivo. MR producto organismo negativo color amarillo. Ejemplo: E. Eschericihia: positivo, Klebsiella pneumoniae: Negativo
Voges Proskauer (VP) PRUEBA: Principio: Si bien la prueba RM es útil en la detección de los productores de ácido mixtos, prueba de VP detecta los productores butileno glicol. Acetil-metil carbinol (acetoína) es un intermedio en el producción de butilenglicol. En esta prueba dos reactivos, 40% de KOH y alfa-naftol se añaden en el caldo a probar, después de la incubación y se expone al oxígeno atmosférico. Si acetoína está presente, se oxida en presencia de aire y KOH al diacetil. Diacetilo reacciona entonces con guanidin, en presencia de alfa- naftol para producir el color rojo. El papel de alfa-naftol es el de un catalizador y un intensificador de color. Procedimiento: Bacteria a ensayar se inoculó en caldo de glucosa fosfato y se incubaron durante al menos 48 horas. 0,6 ml de alfa-naftol se añade al caldo de ensayo y se agita. 0,2 ml de KOH al 40% se añade al caldo y sacudida. El tubo se dejó reposar durante 15 minutos. Apariencia de color rojo se toma como una prueba positiva. La tubos negativos debe ser mantenida durante una hora, ya que el desarrollo máximo del color se produce dentro de una hora después de la adición de los reactivos. Ejemplos: Escherichia coli: Negativo, Klebsiella pneumoniae: Positivo
CITRATO DE PRUEBA DE UTILIZACIÓN:
Principio: Esta prueba detecta la capacidad de un organismo a utilizar citrato como única fuente de carbono y energía. Las bacterias se inoculan en un medio que contiene citrato de sodio y un indicador de pH azul de bromotimol. El medio también contiene sales inorgánicas de amonio, que se utiliza como única fuente de nitrógeno. La utilización de citrato implica la citritase enzima que descompone el citrato de oxaloacetato y acetato. El
oxaloacetato se desglosa a piruvato y CO2. Producción de Na2 CO3 así como NH3 a partir de la utilización de citrato de sodio y amonio sal respectivamente resulta en un pH alcalino. Esto resulta en cambio de color del medio de verde a azul. Procedimiento: colonias bacterianas se recogieron en un alambre recto y se inocularon en pendiente de agar citrato de Simmon y se incubaron durante la noche a 37ºC. Si el organismo tiene la capacidad de utilizar citrato, los cambios de medio su color de verde a azul.
Ejemplos: Escherichia coli: Negativo, Klebsiella pneumoniae: Positivo
ROJO DE METILO/VOGES-PROSKAUER Estas dos pruebas forman parte del IMVIC de las colimetrías y permiten la diferenciación dentro de las enterobacterias del grupo coli y aerógenes. Las enterobacterias son anaerobios facultativos que utilizarán la glucosa en dos fases: primero la metabolizarán aerobiamente (respiración oxibióntica) consumiendo rápidamente el oxígeno del medio, para, en segundo lugar, continuar metabolizándola por vía anaerobia (fermentación). Ésta puede ser de dos tipos: Fermentación ácido mixta: La realizan las bacterias del grupo de E.coliy los productos finales son ácidos orgánicos (ácidos fórmico, acético, láctico y succínico) que provocan un fuerte descenso del pH inicial del medio. Puede detectarse por el viraje del indicador de rojo de metilo que permanece amarillo por encima de pH 5,1 y rojo por debajo de 4,4. •
Fermentación butilén glicólica: La realizan las bacterias del grupoKlebsiella-Enterobacter (antiguo aerógenes). Los productos finales son compuestos neutros como el butanodiol y el etanol, produciéndose acetoína como intermediario que podrá ser detectada añadiendo al medio KOH (reactivo A de Voges-Proskauer) y alfa-naftol (reactivo B de Voges-Proskauer) que reaccionarán con este compuesto produciendo un color rojo característico. •
Para la realización de estas dos pruebas se cultiva el microorganismo en caldo RMVP (medio de Clark y Lubs) y se incuba a 30ºC durante un periodo de 3 días como mínimo y 5 como máximo. Al revelar las pruebas, se separa el cultivo en dos porciones de unos 2,5ml que servirán para cada uno de los ensayos.
Rojo de Metilo: A uno de los tubos se le añade unas gotas (4-5) de solución indicadora de Rojo de Metilo. Se agita para homogeneizar y se observa la coloración. Se considera positiva si vira al rojo y negativa si permanece amarillo. Foto de los resultados de esta prueba •
•
Voges-Proskauer: A la otra porción de cultivo se le añade:
o 0,6ml del Reactivo A de Voges-Proskauer (alfa-naftol 5% en etílico absoluto). El medio adquiere un aspecto lechoso. o 0,2ml del Reactivo B de Voges-Proskauer (KOH 40%). Desaparece el aspecto lechoso y se agita fuertemente. Si la prueba es positiva, antes de cinco minutos aparece un color rosado-violáceo, más o menos intenso, que se inicia en la parte superior del tubo. Si la prueba es negativa no aparece coloración alguna.
PRUEBAS IMVIC
MARIA FERNANDA ACEVEDO JUAN CARLOS DIAZ ORNELLA RIVERA YECENIA CARDONA LUZ GUZMAN
DR VENANCIO ESQUIVIA
UNIVERSIDAD DEL SINU SECCIONAL CARTAGENA –
