Protap Dan Protokol Validasi Metode Analisis (1)

MAKALA

JAMINAN MUTU SEDIAAN FARMA I PROTAP DAN PROTOKOL ALIDASI METODE ANALISIS

OLEH:

Ni Made C intya Ade Wiputri

(160861104 )

Ni Nyoman Putri Dharmapradnyawati

(160861104 )

Inggrid Yo efa Jue Wage

(1608611047)

Kadek Giselda Gityarani

(1608611051)

Luh Ketut ulys Wintari

(160861105 )

PRO RAM STUDI PROFESI APOTEKER JURUSAN FARMASI FAKULTAS MATEMATIK EMATIKA A DAN DAN ILMU ILMU PEN PENGETA GETAHUA HUA ALAM UNIVESITAS UDAYANA 2016

Prosedur Tetap

Halaman 1 dari 13

VALIDASI METODE ANALISIS BUNGA FARMA

Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

1. TUJUAN

Untuk memberikan petunjuk pelaksanaan validasi terhadap metode analisis agar metode tetap sesuai dengan tujuan penggunaannya penggunaannya dan selalu memberikan hasil yang dapat dipercaya.

2. RUANG LINGKUP 

Prosedur ini berlaku untuk semua metode analisis kompendial dan nonkompendial yang digunakan digunakan di Laboratorium Pengawasan Pengawasan Mutu di Pabrik BUNGA FARMA



Prosedur ini juga berlaku untuk metode analisis yang digunakan dalam menetapkan residu zat aktif pada validasi prosedur pembersihan.



Prosedur ini berlaku pula untuk validasi ulang m etode analisis, misal dalam kasus berikut ini: - perubahan proses proses sintesis bahan berkhasiat, berkhasiat, - perubahan komposisi komposisi produk produk jadi, bila bila perlu dan - perubahan prosedur prosedur analisis analisis

3. TANGGUNG JAWAB

3.1

Manajer Pengawasan Mutu bertanggung jawab untuk: 

Menyiapkan Menyiapkan dan mengkaji m engkaji ulang secara periodis Protap ini.



Melaksanakan pelatihan teknis laboratorium dan pelatihan lain yang sesuai terhadap semua personil yang terkait dengan validasi dan melakukan evaluasi hasil pelatihan sebelum validasi dilaksanakan.



Memastikan bahwa semua metode analisis divalidasi sebelum digunakan untuk pengujian rutin.



Menyiapkan Protokol Validasi untuk tiap metode analisis dan menyusun Laporan Validasi berdasarkan protokol tersebut

3.2

Manajer Pemastian Mutu bertanggung bertanggung jawab untuk: 

Melakukan pengkajian dan menyetujui Protap ini serta Protokol Validasi sebelum validasi dilakukan

Prosedur Tetap

Halaman 1 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

1. TUJUAN

Untuk memberikan petunjuk pelaksanaan validasi terhadap metode analisis agar metode tetap sesuai dengan tujuan penggunaannya penggunaannya dan selalu memberikan hasil yang dapat dipercaya.

2. RUANG LINGKUP 

Prosedur ini berlaku untuk semua metode analisis kompendial dan nonkompendial yang digunakan digunakan di Laboratorium Pengawasan Pengawasan Mutu di Pabrik BUNGA FARMA



Prosedur ini juga berlaku untuk metode analisis yang digunakan dalam menetapkan residu zat aktif pada validasi prosedur pembersihan.



Prosedur ini berlaku pula untuk validasi ulang m etode analisis, misal dalam kasus berikut ini: - perubahan proses proses sintesis bahan berkhasiat, berkhasiat, - perubahan komposisi komposisi produk produk jadi, bila bila perlu dan - perubahan prosedur prosedur analisis analisis

3. TANGGUNG JAWAB

3.1

Manajer Pengawasan Mutu bertanggung jawab untuk: 

Menyiapkan Menyiapkan dan mengkaji m engkaji ulang secara periodis Protap ini.



Melaksanakan pelatihan teknis laboratorium dan pelatihan lain yang sesuai terhadap semua personil yang terkait dengan validasi dan melakukan evaluasi hasil pelatihan sebelum validasi dilaksanakan.



Memastikan bahwa semua metode analisis divalidasi sebelum digunakan untuk pengujian rutin.



Menyiapkan Protokol Validasi untuk tiap metode analisis dan menyusun Laporan Validasi berdasarkan protokol tersebut

3.2

Manajer Pemastian Mutu bertanggung bertanggung jawab untuk: 

Melakukan pengkajian dan menyetujui Protap ini serta Protokol Validasi sebelum validasi dilakukan

Prosedur Tetap

Halaman 2 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -



Melakukan pengkajian terhadap data dalam Laporan Validasi dan menjamin kelengkapan laporan sebelum menandatanganinya.

3.3

Supervisor Pengawasan Mutu bertanggung Jawab untuk: 

Membuat jadwal pelaksanaan validasi, mengawasi pelaksanaannya dan memeriksa kebenaran dan kelengkapan catatan pengujian.



Menjamin bahwa status kalibrasi semua peralatan dan instrumen yang digunakan untuk validasi telah diperbaharui.



Menjamin bahwa semua Protap yang berhubungan dengan validasi metode analisis telah diperbaharui sesuai protokol validasi.



Menjamin bahwa semua bahan yang digunakan untuk validasi termasuk reagensia dan baku pembanding pembanding belum belum kadaluwarsa.

3.4

Analis di Bagian Pengawasan Mutu bertanggung Jawab untuk: 

Melaksanakan validasi metode analisis sesuai dengan Protokol Validasi.



Mencatat semua hasil uji dalam format yang sesuai.



Melaporkan pelaksanaan validasi kepada supervisor.

4. PROSEDUR

4.1 Protokol validasi harus mencakup : 

Tujuan



Ruang Lingkup



Prosedur langkah demi langkah



Metode untuk evaluasi



Kriteria keberterimaan



Dokumentasi dan Laporan



Rekomendasi

Prosedur Tetap

Halaman 3 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

4.2 Tentukan dan lakukan evaluasi parameter validasi sesuai dengan tipe metode analisis yang akan divalidasi. Berikut ini adalah persyaratan/ parameter validasi: Pengujian Impuritas Parameter validasi

Identifikasi

Penetapan Kadar - Disolusi*

Kuantitatif

Batas

-

+

-

+

Ripitabilitas

-

+

-

+

Presisi Intermediat

-

+

-

+ (1)

Spesifisitas (2)

+

+

+

+

Limit Deteksi

-

- (3)

+

-

Limit Kuantitasi

-

+

-

-

Linearitas

-

+

-

+

Rentang

-

+

-

+

Akurasi

- Kandungan/potensi

Presisi

(-) Tidak dipersyaratkan (+) Dipersyaratkan (1) Dalam hal telah dilakukan test reprodusibiltas, maka presisi intermediate tidak dipersyaratkan. (2) Kekurangan spesifisitas dari salah satu prosedur analisis dapat dikompensasikan dengan prosedur analisis yang lain yang dapat m enunjang (3) Hanya diperlukan pada kasus tertentu *) Hanya untuk mengetahui kadar zat terlarut.

Penerapan parameter validasi metode analisis : a. Non kompendial : Sesuai dengan tabel di atas b. Kompendial yang dimodifikasi : Sesuai dengan tabel atau parameter yang berkaitan dengan modifikasi c.

Kompendial : verifikasi, yaitu

Prosedur Tetap

Halaman 4 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

Metode

Parameter Verifikasi

Kadar

Akurasi Presisi Spesifisitas

Impuritas

Akurasi Presisi Spesifisitas Limit Deteksi / Kuantitasi

Identifikasi

Spesifisitas

d. Validasi prosedur pembersihan: 

Akurasi



Presisi o

Ripitabilitas

o

Presisi Intermediat



Spesifisitas



Limit Deteksi



Limit Kuantitasi



Linearitas



Rentang



Perolehan Kembali: o

Cara usap

o

Cara bilas

o

Ketangguhan

4.2.1 Spesifisitas Spesifisitas merupakan ukuran seberapa spesifik metode analisis. Spesifitas metode analisis diuji terhadap bahan aktif obat, bahan pembantu (plasebo), pelarut, impuritas dan produk jadi

Prosedur Tetap

Halaman 5 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

Bila menggunakan metode KCKT: 

Resolusi antara puncak yang berdampingan terpisah secara nyata atau sesuai persyaratan.



Kromatogram seluruh hasil uji disajikan dalam bentuk 1 gambar (“overlaid”)

4.2.2 Linearitas Untuk mengetahui apakah kuantitas yang terukur proporsional terhadap kadar senyawa uji dalam sampel Linearitas diuji sesuai RENTANG yang ditetapkan Pengujian dapat dilakukan minimal dengan 5 tingkat konsentrasi 

Bahan aktif obat

:pengenceran larutan induk



Produk jadi

: penimbangan terpisah sesuai rentang

Data yang disajikan 

Kurva signal vs konsentrasi analit

Persyaratan  

Linear secara visual Koefisien korelasi ≥ 0,98 -



Persamaan regresi



Convidence interval

-

Residu jumlah kuadrat (“residual sum of squares”)

-



4.2.3 Rentang Rentang minimum berikut ini berlaku untuk: 4.2.3.1

Penetapan kadar bahan aktif obat: lazimnya konsentrasi zat ujiberkisar antara 80 hingga 120% kadar yang tertera pada label;

4.2.3.2

Keseragaman kandungan: meliputi konsentrasi zat uji sekurang- kurangnya berkisar antara 70 hingga 130% pernyataan kadar pada label, kecuali diperlukan rentang yang lebih lebar dapat digunakan, tergantung pada sifat bentuk sediaan (misalnya, inhaler dosis terukur);

Prosedur Tetap

Halaman 6 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

4.2.3.3 Pengujian disolusi : lebih kurang 20% syarat spesifikasi misalnya: syarat spesifikasi untuk sediaan yang pelepasannya terkendali meliputi rentang dari 20%, setelah 1 jam, hingga 90% sesudah 24 jam, maka rentang yang divalidasi menjadi 0 - 110% pernyataan kadar pada label; 4.2.3.4 Penentuan cemaran: rentang konsentrasi zat uji mulai dari batas cemaran yang dilaporkan hingga 120% syarat spesifikasi; dan 4.2.3.5 Bila validasi metode analisis penetapan kadar dan penetapan cemaran dilakukan bersama-sama sekaligus dan hanya menggunakan satu standar 100% saja, maka pengujian linearitas harus meliputi rentang dari kadar cemaran yang dilaporkan hingga 120% syarat kadar dalam spesifikasi. 4.2.3.6 Konsentrasi kadar bahan aktif obat dengan “stability overage” agar memperhatikan persyaratan pada saat pelulusan maupun paska pemasaran.

4.2.4 Akurasi Akurasi metode pengujian dinilai sesuai rentang pengujian dengan 5 cara penentuan metode analisis untuk penetapan kadar bahan aktif obat dalam bahan awal dan produk jadi : 4.2.4.1

Menggunakan metode analisis untuk menetapkan kadar analit dalam bahan aktif obat yang diketahui kemurniannya (misalnya bahan awal pembanding sekunder).

4.2.4.2

Bahan aktif obat atau cemaran dalam jumlah yang diketahui ditambahkan kedalam plasebo. Metode analisis ini akan digunakan untuk penetapan kadar bahan aktif obat / cemaran dalam produk obat.

4.2.4.3

Bila plasebo tidak bisa diperoleh, verifikasi akurasi metode dapat dilakukan dengan teknik standar adisi, yaitu dengan menambahkan sejumlah tertentu analit ke dalam produk obat yang telah diketahui kadarnya. Metode analisis ini digunakan untuk penetapan kadar bahan aktif / cemaran dalam produk obat.

Prosedur Tetap

Halaman 7 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

4.2.4.4 Menambahkan cemaran dalam jumlah tertentu ke dalam bahan aktif / produk obat. Metode analisis ini digunakan untuk penetapan kadar cemaran dalam bahan aktif obat dan produk obat. 4.2.4.5 Membandingkan dua metode analisis untuk mengetahui ekivalensinya, yaitu membandingkan hasil yang diperoleh dari metode analisis yang divalidasi terhadap hasil yang diperoleh dari metode analisis yang valid (akurasi metode analisis yang valid ini telah diketahui). Metode analisis ini digunakan untuk penetapan kadar bahan aktif obat dalam bahan aktif obat, produk obat dan penetapan kadar cemaran.

Akurasi dinilai menggunakan minimal 9 (sembilan) penentuan dari 3 (tiga) tingkat konsentrasi yang berbeda dalam rentang pengujian metode analisis tersebut dan masingmasing konsentrasi 3 (tiga) kali penetapan. Data yang disajikan

Persyaratan



Perolehan kembali (“recovery”)



98 – 102 %



RSD (Simpangan Baku/Rata-rata x 100%)



≤ 2%



“Confidence interval”

-

4.2.5 Presisi Dikenal tiga tipe presisi : 4.2.5.1

Keberulangan (“Repeatability”) Keberulangan dinilai terhadap : 

Keberulangan SISTEM 



minimum 6 penentuan pada konsentrasi 100% kadar analit

Keberulangan METODE 

minimum 9 penentuan dalam rentang penggunaan metode analisis tersebut (3 konsentrasi yang berbeda, masing-masing 3 replikasi )

Prosedur Tetap

Halaman 8 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

4.2.5.2

Presisi Antara 

4.2.5.3

Dapat menggunakan beberapa operator dengan alat dan hari yangberbeda.

Reprodusibilitas Menggunakan minimal 2 laboratorium untuk validasi metode analisis, agar diketahui pengaruh lingkungan yang berbeda terhadap kinerja metode analisis.

Data yang disajikan : 

Rata-rata



RSD adalah (Simpangan Baku/Rata-rata) x 100%, Persyaratan RSD adalah sebagai berikut :

No Tipe Metode Analisis 1. 2.



Prosedur Penetapan Kadar bahan aktif obat Metode analisis untuk penetapan kadar impuritas: Batas impuritas : 1 - 10% 0,01% 1 ppm “Confidence Interval”

Persyaratan RSD (misal) tidak lebih dari 2%

tidak lebih dari 2% tidak lebih dari 10% tidak lebih dari 20%

4.2.6 Batas Deteksi Konsentrasi

terendah

senyawa

uji

yang

terkandung

dalam

sampel

yang

dapatdideteksi.Beberapa pendekatan yang dapat digunakan untuk menentukan batas deteksitergantung pada jenis metode analisis apakah metode analisis instrumentalatau noninstrumental. 4.2.6.1 Berdasarkan evaluasi visual Evaluasi visual dapat digunakan untuk metode analisis noninstrumental,tapi dapat juga digunakan untuk metode analisisinstrumental. Batas deteksi ditentukan dengan melakukan analisisterhadap sampel yang diketahui konsentrasinya dan menetapkankadar terendah yang dapat dideteksi dengan baik.

Prosedur Tetap

Halaman 9 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

4.2.6.2 Berdasarkan rasio signal terhadap noise Pendekatan ini hanya dapat diterapkan pada metode analisis yangmemberikan baseline noise. Penentuan signal to noise dilakukandengan membandingkan pengukuran signal sampel yang diketahuimengandung analit dalam konsentrasi rendah dan blanko, kemudiandapat ditetapkan konsentrasi minimum analit yang dapat dideteksidengan baik. Rasio signal to noise sama dengan 3 atau 2 : 1umumnya dianggap dapat diterima untuk memperkirakan batas deteksi. 4.2.6.3 Simpangan respon dan kemiringan (“slope”) kurva ka librasi : Batas deteksi dapat dinyatakan sebagai : DL =

. 

s

Keterangan rumus : DL = Batas deteksi σ = simpangan baku respon S = kemiringan (slope) kurva kalibrasi. 

Slope dapat ditentukan dari kurva kalibrasi analit



σ dapat ditentukan dengan : Simpangan baku dari blanko



Mengukur beberapa respon dari larutan blanko dan hitung simpangan baku dari respon Kurva kalibrasi



Kurva kalibrasi dibuat dengan contoh yang mempunyai rentang di sekitar Batas Deteksi. Residu simpangan baku (residual standard deviation) atau simpangan baku dari y-intercepts dari garis regresi adalah σ (simpangan baku)

Prosedur Tetap

Halaman 10 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

4.2.7 Batas Kuantitasi Konsentrasi terendah senyawa uji yang terkandung dalam sampel yang dapatditetapkan secara kuantitatif dan reprodusibel.Beberapa pendekatan yang dapat digunakan untuk penentuan batas kuantitasitergantung pada jenis metode analisis instrumental atau noninstrumental. 4.2.7.1 Berdasarkan evaluasi visual Evaluasi visual dapat digunakan untuk metode analisis noninstrumental,tapi dapat juga digunakan untuk metode analisisinstrumental. Batas kuantitasi ditentukan dengan melakukananalisis terhadap sampel yang diketahui konsentrasinya danmenetapkan kadar terendah analit yang dapat ditentukan secarakuantitatif dengan akurasi dan presisi yang dapat diterima 4.2.7.2 Berdasarkan rasio signal terhadap noise : Pendekatan ini hanya dapat digunakan pada metode analisis yangmemberikan baseline noise. Penentuan rasio signal terhadap noisedilakukan dengan membandingkan signal yang diukur dari sampelyang mempunyai konsentrasi analit yang rendah dan blankonya,kemudian ditentukan konsentrasi terendah analit yang dapatditetapkan secara kuantitatif dengan baik, umumnya pada rasiosignal terhadap noise 10:1. 4.2.7.3 Simpangan baku dari respon dan kemiringan (slope) kurva kalibrasi : Batas kuantitasi dapat dinyatakan sebagai : LOQ =

 

s

Keterangan rumus : LOQ = batas kuantitasi σ = Simpangan baku respon S = Kemiringan (slope) kurva kalibrasi 

Slope dapat ditentukan dari kurva kalibrasi analit



σ dapat ditentukan dengan

Prosedur Tetap

Halaman 11 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

Simpangan baku dari blanko 

Mengukur beberapa respon dari larutan blanko danhitung simpangan baku dari respon Kurva kalibrasi



Kurva kalibrasi dibuat dengan contoh yang mempunyai rentang di sekitar Batas Deteksi. Residu simpangan baku (residual standard deviation) atau simpangan baku dari y-intercepts darigaris regresi adalah σ (simpangan baku)

4.2.8 Ketangguhan (“Robustness”) Ketangguhan ditentukan pada saat tahap pengembangan dan tergantung darikebutuhan. Metode hendaklah handal terhadap variasi parameter yangditetapkan Misal : stabilitas larutan analit Contoh uji ketangguhan untuk metode analisis yang menggunakankromatografi cair kinerja tinggi (KCKT), tetapkan: 

Pengaruh variasi pH dalam fasa gerak terhadap hasil analisis;



Pengaruh variasi komposisi fasa gerak terhadap hasil analisis;



Pengaruh perbedaan merk atau nomor lot dari kolom terhadap hasilanalisis; dan



Pengaruh perbedaan suhu dan laju alir terha dap hasil analisis.

4.2.9 Uji Kesesuaian Sistem (UKS)

UKS merupakan bagian tak terpisahkan dari pengujian yang didasarkan pada peralatan, instrumen, elektronik, pelaksanaan analisis dan sampelyang akan diuji o

Dilakukan terhadap minimal 5 - 6 hasil analisis dilakukan terhadaplarutan baku dan ditentukan: 

resolusi antara dua puncak yang berdekatan;



ukuran faktor ikutan (“tailing factor”);

Prosedur Tetap

Halaman 12 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -



relative standard deviation (RSD) dari hasil penyuntikan enam kali larutan baku;



angka lempeng teoritis;



ukuran faktor kapasitas kolom; dan



waktu retensi relatif.

4.3 Bila ada penyimpangan siapkan laporan termasuk justifikasi sesuai Protap Penanganan Hasil Uji di Luar Spesifikasi No. ……… 4.4 Dokumentasi dan Laporan Validasi 4.4.1 Buat laporan validasi untuk metode analisis yang divalidasi denganmenggunakan Format Laporan Validasi Catatan: Dalam

laporan

ini

tercakup

tanggal

mulai

dan

tanggal

selesai

validasi,

hasilpengamatan, masalah yang dijumpai, kelengkapan informasi yangdikumpulkan, hasil uji dan analisis statistik, disposisi apakah hasil uji memenuhikriteria keberterimaan atau tidak, lokasi uji dan data asli serta informasi lainyang relevan dengan pelaksanaan validasi. 4.4.2 Buat kesimpulan tentang validitas metode analisis terhadap masing-masinghasil uji dan replikasinya. 4.4.3

Serahkan

Laporan

Validasi

kepada

memerolehpersetujuan akhir.

5. Lampiran

5.1 Format Protokol Validasi Metode Analisis* 5.2 Format Laporan Validasi *Dalam Contoh ini, tidak dilengkapi

Manajer

Pemastian

Mutu

untuk

Prosedur Tetap

Halaman 13 dari 13


Departemen

Seksi

No. 1

Pengawasan Mutu

Validasi

Tanggal 10/11/2016

Dibuat oleh

Diperiksa oleh

Disetujui oleh

Mengganti

Giselda Gityarani

Inggrid Wage

Spoiler Flower

No. -

Tanggal10/10/2016

Tanggal11/10/2016

Tanggal 10/10/2016

Tanggal -

6. Dokumen Rujukan

Tidak Ada Dokumen Rujukan

7. Riwayat

1. Dokumen ini merupakan dokumen yang pertama (No. 1) yang berlaku mulai tanggal 10/11/2016

8. Distribusi

Asli : Kepala Bagian Pemastian Mutu Kopi : Kepala Bagian Pengawasan Mutu

Halaman 1 dari 18 PROTOKOL VALIDASI METODE ANALISIS PENETAPAN KADAR PROTOKOL VALIDASI METODE ANALISIS PENETAPAN KADAR TABLET PARASETAMOL

Nama :Parasetamol Tablet No. Produk :602088

No. Protokol : 1 Tanggal Berlaku : 10/11/2016

Disusun oleh :Luh Ketut Sulys WintariTanggal :10/11/2016

Diperiksa oleh :Chintya Ade Wiputri

Tanggal :10/11/2016

Disetujui oleh : Putri Dharmapradnyawati Tanggal :10/11/2016

BUNGA FARMA

PROTOKOL VALIDASI METODE ANALISIS PENETAPAN KADAR TABLET PARASETAMOL

Nama Produk : Tablet Parasetamol 500 mg Bentuk Sediaan : Tablet Kekuatan Sediaan : 500 mg/tablet No. Protokol : Tanggal Berlaku : Halaman : 2 dari 18 1. Tujuan: Untuk membuktikan bahwa metode analisis yang digunakan dapat menetapkan kadar tablet Parasetamol secara konsisten dan memberikan hasil yang akurat. 2. Ruang Lingkup: Metode analisis yang divalidasi adalah metode analisis dengan alat KCKT untuk penetapan kadar Tablet Parasetamol No. : ........ 3. Referensi: Petunjuk Operasional Penerapan Cara Pembuatan Obat yang Baik 2006 4. Tanggung Jawab: a. Kepala Instalasi Pengawasan Mutu bertanggung jawab untuk: 1) Menetapkan protokol validasi untuk metode analisis penetapan kadar tabletparasetamol dan menyusun laporan validasi berdasarkan protokol tersebut. 2) Melakukan pengkajian dan menyetujui protokol validasi penetapan kadar tabletparasetamol sebelum dilakukan validasi. 3) Melakukan pengkajian terhadap data dalam laporan validasi dan menjaminkelengkapan laporan sebelum ditandatangani dan diserahkan kepada atasannyauntuk dimintakan persetujuan akhir dan pengesahan. Melaksanakan pelatihanteknis laboratorium dan pelatihan lain yang sesuai terhadap semua personil yangterkait dengan validasi ini dan melakukan evaluasi hasil pelatihan sebelumvalidasi dilaksanakan. b. Kepala Seksi Kimia-Fisika Instalasi Pengawasan Mutu bertanggung jawab untuk: 1) Membuat jadwal pelaksanaan validasi ini, mengawasi pelaksanaannya danmemeriksa kebenaran dan kelengkapan catatan pengujian. 2) Menjamin bahwa status kalibrasi semua peralatan dan instrumen yangdigunakanuntuk validasi telah diperbaharui. 3) Menjamin bahwa semua protap yang berhubungan dengan validasi metodeanalisis penetapan tablet parasetamol telah diperbaharui sesuai protokol validasi. 4) Menyusun laporan validasi berdasar hasil dan data yang diperoleh.

Halaman 3 dari 18 BUNGA FARMA


c. Analis di Instalasi Pengawasan Mutu bertanggung jawab untuk : 1) Melaksanakan validasi metode analisis sesuai dengan protokol validasi. 2) Mencatat semua hasil uji dalam format yang tepat. 3) Melaporkan pelaksanaan validasi kepada supervisor. 5. Parameter Pengujian Parameter pengujian yang dipakai untuk validasi adalah: a. Uji Kesesuaian Sistem b. Selektifitas c. Spesifisitas d. Akurasi e. Presisi f. Linearitas dan Rentang g. Uji Batas Deteksi dan Batas kuantitasi ( LOD dan LOQ) h. Uji Kekuatan ( Robustness) 6. Prosedur Pelaksanaan a. Verifikasi 1) Lakukan verifikasi dokumen yang terkait dengan validasi. 2) Lakukan verifikasi status kualifikasi dan kalibrasi dari semua peralatan yangdipakai. 3) Lakukan verifikasi pelatihan karyawan yang terkait dengan pelaksanaan validasi. b. Pembuatan larutan 1) Pelarut Campuran dari aquades dan metanol (3:1) 2) Fase Gerak: Fase gerak dibuat dengan komposisi campuran aquades dan metanol (3:1),Campurkan 125 mL metanol dengan 375 mL aquades. Sebelum digunakan, fase gerak disaring melalui membran filter 0,5 μm dengan menggunakan vakum (Ditjen POM,1995). 3) Larutan Standar Parasetamol Ditimbang seksama ± 10,0 mg parasetamol working standard (WS), masukanke dalam labu ukur 100,0 mL, dilarutkan dengan fase gerak campuran aquadesmetanol (3:1) sebanyak 20,0 mL, kemudian volumenya dicukupkan dengan fase gerak hingga garis batas, hingga dihasilkan larutan dengan konsentrasi0,1mg/mL

Halaman 4 dari 18 BUNGA FARMA PROTOKOL VALIDASI METODE ANALISIS PENETAPAN KADAR TABLET PARASETAMOL

Kemudian larutan tersebut dipipet 10,0 mL, dimasukkan ke dalam labu ukur 100,0mL dan ditambahkan pelarut sampai garis batas hingga dihasilkan larutan dengan konsentrasi 0,01 mg/mL (U.S. Pharmacopeia 30, 2007). 4) Larutan Sampel Ditimbang dan diserbukkan tidak kurang da ri 20 tablet. Kemudian ditimbangseksama setara sejumlah 100,0 mg serbuk sampel lalu dimasukkan kedalam labu ukur 200,0 mL, lalu ditambahkan 100,0 mL fase gerak campuran aquades-metanol (3:1), di sonicate selama 5 menit kemudian volumenya dicukupkan dengan fase gerak hingga garis batas. Kemudian larutan tersebut dipipet 5,0 mL, dimasukkan ke dalam labu ukur 250 mL dan ditambahkan pelarut sampai garis batas hingga dihasilkan larutan dengan konsentrasi 0,01 mg per mL, berdasarkan yang tertera pada etiket. Kemudian saring larutan dengan menggunakan vakum dan membrane filter 0,5 μm dan ambil bagian supernatan yang bersih (U.S. Pharmacopeia 30, 2007). 5) Larutan Plasebo Timbang seksama sejumlah 100,0 mg serbuk eksipien lalu dimasukkan kedalamlabu ukur 100,0 mL, dilarutkan dengan fase gerak campuran aquades-metanol (3:1) sebanyak 20,0 mL, di sonicate selama 5 menit kemudian volumenya dicukupkan dengan fase gerak hingga garis batas. c. Uji Kesesuaian Sistem

1) Pengukuran Uji Kesesuaian Sistem a) Dialirkan fase gerak melewati kolom selama tidak kurang dari 30 menit. b) Disuntikkan 10,0 μl larutan standar sebanyak enam kali pada KCKT dengan: Fase diam Fase gerak Laju alir Temperatur Detektor

: kolom L1 (oktadesil silana) 3,9 mm x 30 cm : aquades - metanol (3:1) : 1,5 ml/menit : Temperatur kolom dijaga pada 40ºC : UV

Halaman 5 dari 18 BUNGA FARMA PROTOKOL VALIDASI METODE ANALISIS PENETAPAN KADAR TABLET PARASETAMOL

Panjang gelombang : 243 nm c) Waktu retensi dicatat, kemudian dihitung faktor kapasitas (k’), f aktor ikutan(T), jumlah lempeng teoritis (N), efisiensi kolom (HETP), dan resolusi (R). 2) Perhitungan a) Faktor kapasitas (k’) =

 

dengan : tR tM

b) Faktor ikutan (T)

= waktu retensi zat = waktu retensi zat inert

=

  ,

dengan: W0,05 = jarak tepi muka sampai tepi belakang puncak f = jarak dari maksimum puncak sampai tepi muka puncak c) Jumlah lempeng teoritis (N) N

= 16



2

dengan: N tR W

= jumlah lempeng teoritis = waktu retensi = luas puncak

d) Efisiensi kolom (HETP)

HETP =  dengan: HETP L (Length) N

= (Height Equivalent to A Theoretical Plate) panjang lempeng teoritis = panjang kolom = jumlah plat teoritis


e) Resolusi (R) =


 () 

dengan : R = resolusi tR = waktu retensi W = luas puncak 3) Syarat a. Resolusi (R) parasetamol terkait senyawa A (cemaran) tidak kurang dari 2,0. b. Jumlah lempeng teoritis (N) tidak dari 5000. c. Faktor ikutan (T) adalah kurang dari atau sama dengan 2. d. Faktor kapasitas (k’) adalah lebih dari 2. Hasil yang diperoleh sebagai berikut : No

Nama Sampel

k’

Hasil Pengamatan T N HETP

R

k’

2

Persyaratan T N

2

5000

R

2,0

Kesimpulan:

d. Pembuatan Kurva Kalibrasi 1) Pembuatan kurva kalibrasi larutan standar a) Timbang seksama ± 20,0 mg standar parasetamol, b) Masukkan ke dalam labu ukur 200,0 mL, c) Larutkan dengan fase gerak campuran air - metanol (3:1) sebanyak 20,0 mL, d) kemudian volumenya dicukupkan dengan fase gerak hingga garis batas, hingga dihasilkan larutan dengan konsentrasi 0,1 mg/mL.



e) Pipet 40,0 mL dari larutan standar dan masukkan ke dalam labu ukur 100,0 mL.Tambahkan fase gerak sedikit demi sedikit hingga batas labu ukur, homogenkan(konsentrasi 0,04 mg/mL). f) Pipet 30,0 mL dari larutan standar dan masukkan ke dalam labu ukur 100,0 mL.Tambahkan fase gerak sedikit demi sedikit hingga batas labu ukur, homogenkan(konsentrasi 0,03 μg/mL). g) g) Pipet 20,0 mL dari larutan standar dan masukkan ke dalam labu ukur 100,0 mL. h) Tambahkan

fase

gerak

sedikit

demi

sedikit

hingga

batas

labu

ukur,

homogenkan(konsentrasi 0,02 mg/mL). i) Pipet 10,0 mL dari larutan standar dan masukkan ke dalam labu ukur 100,0 mL.Tambahkan fase gerak sedikit demi sedikit hingga batas labu ukur, homogenkan(konsentrasi 0,01 mg/mL). j) Pipet 9,0 mL dari larutan standar dan masukkan ke dalam labu ukur 100 mL.Tambahkan fase gerak sedikit demi sedikit hingga batas labu ukur, homogenkan(konsentrasi 0,009 mg/mL). k) Pipet 8,0 mL dari larutan standar dan masukkan ke dalam labu ukur 10 mL.Tambahkan fase gerak sedikit demi sedikit hingga batas labu ukur, homogenkan(konsentrasi 0,008 mg/mL). l) Pipet 7,0 mL dari larutan standar dan masukkan ke dalam labu ukur 10 mL.Tambahkan fase gerak sedikit demi sedikit hingga batas labu ukur, homogenkan(konsentrasi 0,007 mg/mL).

2) Pengukuran kurva kalibrasi Parasetamol a) Disuntikkan 10 μl larutan standar dengan konsentrasi 0,04; 0,03; 0,02; 0,01;0,009; 0,008; dan 0,007 mg/mL secara duplo dan bergantian pada KCKTdengan: Fase diam

: kolom L1 (oktadesil silana) 3,9 mm x 30 cm

Fase gerak :aquades - metanol (3:1) Laju alir

: 1,5 ml/menit

Halaman 8 dari 18

BUNGA FARMA


Temperatur : Temperatur kolom dijaga pada 40ºC Detektor : UV Panjang gelombang : 243 nm b) Dari data yang diperoleh, dilakukan perhitungan untuk mendapatkan persamaangaris regresi, koefisien regresi (r), serta limit deteksi (LOD) dan limit kuantitasi(LOQ). 3) Perhitungan a) i. Persamaan regresi linear: y = a + bx dengan: x y a b r

= konsentrasi = luas puncak = perpotongan garis lurus dengan sumbu y = kemiringan garis = koefisien korelasi

ii. Kriteria penerimaan: koefisien korelasi (r) ≥ 0,999 b) Uji Batas Deteksi dan Batas Kuantitasi (LOD dan LOQ) i. Perhitungan: 3) Digunakan data linearitas (konsentrasi (x) dan luas puncak (y)) danpersamaan regresi linear yang diperoleh dari lima la rutan standar pada uji linearitas. 4) Dihitung batas deteksi dan kuantitasi dengan rumus : Q=

   /  

dengan : Q = LOD (batas deteksi) atau LOQ (batas kuantitasi) k = 3 untuk LOD atau 10 untuk LOQ Sy/x = standar deviasi fungsi =

 [ ()2 ]

b = slope pada persamaan regresi linier y = a + bx

Halaman 9 dari 18

BUNGA FARMA


e. Uji Selektivitas 1) Pengukuran Selektivitas

a ) Disuntikkan larutan sampel dan larutan plasebo parasetamol sebanyak 10,0 μl secara bergantian pada KCKT dengan : Fase diam


Fase gerak

: aquades - metanol (3:1)

Laju alir

: 1,5 ml/menit

Temperatur

: Temperatur kolom dijaga pada 40ºC

Detektor

: UV

Panjang gelombang

: 243 nm

b) Amati puncak pada kromatogram. 2) Syarat Hasil kromatogram larutan sampel dan larutan plasebo parasetamol selektivitas tidak boleh mengandung gangguan di sekitar waktu retensi zat aktif Hasil kromatogram yang diperoleh sebagai berikut :

f. Uji Stres

1) Pengukuran Stres a) Siapkan larutan standar parasetamol dan larutan sampel. b) Ambil masing-masing 5,0 mL larutan standar parasetamol dan lar utan sampelkemudian masing-masing larutan tersebut simpan di oven pada suhu 60ºCselama 24 jam. Ambil masing-masing 5,0 mL larutan standar parasetamol dan lar utan sampeltambahkan 5,0 mL HCl 0,1N larutan tersebut disimpan selama 24 jam.



c) Ambil masing-masing 5,0 mL larutan standar parasetamol dan larutan sampeltambahkan 5,0 mL NaOH 0,1N larutan tersebut disimpan selama 24 jam. d) Ambil masing-masing 5,0 mL larutan standar parasetamol dan larutan sampeltambahkan 5,0 mL H2O2 3% larutan tersebut disimpan selama 24 jam. e) Kemudian

masing-masing

larutan

standar

parasetamol

dan

larutan

sampeldisuntikkan sebanyak 10,0 μl secara bergantian pada KCKT pada kondisianalisis terpilih. f) Setelah

itu,

hasil

kromatogram

dari

masing-masing

larutan

standar

parasetamoldan larutan sampel dibandingkan sebelum penyimpanan selama 24 jamdengan sesudah

penyimpanan selama

24

jam baik

dari

pengaruh

lingkunganasam, basa maupun oksidasi. 2) Kondisi KCKT 1. Disuntikkan larutan standar parasetamol dan larutan sampel sebanyak 10,0μlsecara bergantian pada KCKT dengan: Fase diam : kolom L1 (oktadesil silana) 3,9 mm x 30 cm Fase gerak


Laju alir

: 1,5 ml/menit

Temperatur


Detektor

: UV

Panjang gelombang

: 243 nm

2. Amati puncak pada kromatogram. 3) Syarat Dari hasil kromatogram dilihat waktu retensinya. Jika terdapat puncak baru yang muncul namun dengan waktu retensi berbeda, kemungkinan hasil itu menunjukkan hasil degradasi dari analit, maka dapat disimpulkan bahwa metode yang digunakan selektif terhadap hasil degradasi analit. a) Hasil kromatogram yang diperoleh sebagai berikut :

BUNGA FARMA

Halaman 11 dari 18 PROTOKOL VALIDASI METODE ANALISIS PENETAPAN KADAR TABLET PARASETAMOL

g. Uji Akurasi 1) Pembuatan Larutan a) Larutan Uji Ditimbang dan diserbukkan tidak kurang dari 20 tablet. Kemudian ditimbang seksama setara sejumlah 100,0 mg serbuk simulasi lalu dimasukkan kedalam labu ukur 200,0 mL, lalu ditambahkan 100,0 mL fase gerak campuran aquades-metanol (3:1), disonicate selama 5 menit kemudian volumenya dicukupkan dengan fase gerak hingga garis batas, hingga dihasilkan larutan dengan konsentrasi 0,5 mg/mL. (U.S. Pharmacopeia 30, 2007). b) Larutan Sampel 

Larutan sampel 80% Pipet 5,0 mL dari larutan uji, dimasukkan ke dalam labu ukur 250 mL dan ditambahkan pelarut sampai garis batas hingga dihasilkan larutan dengan konsentrasi 0,4 mg/mL, berdasarkan yang tertera pada etiket. Kemudian saring larutan dengan menggunakan vakum dan membran filter 0,5 µm dan ambil bagian supernatan yang bersih (U.S. Pharmacopeia 30, 2007).









2) Pengukuran Akurasi a) Disuntikkan larutan standar dan masing-masing larutan sampel sebanyak 10,0 µl secara bergantian pada KCKT dengan: Fase diam : kolom L1 (oktadesil silana) 3,9 mm x 30 cm Fase gerak : aquades - metanol (3:1) Laju alir : 1,5 ml/menit Temperatur : Temperatur kolom dijaga pada 40ºC Detektor : UV Panjang gelombang : 243 nm b) Akurasi dihitung berdasarkan nilai perolehan kembali untuk tiap pengukuran 3) Syarat Perolehan kembali (recovery) atau akurasinya berada pada rentang 98%-102%. 4) Hasil yang diperoleh sebagai berikut No

Konsentrasi

Area Terdeteksi Hasil Pengamatan

1

80%

2

100%

3

120%

Rata-rata

Persyaratan Persen

Perolehan Kembali 98-102%



h. Presisi

1) Pengukuran Presisi a) Keterulangan (repeatability) 1. Siapkan larutan standar parasetamol, larutan sampel dan larutan plasebo. 2. Pengukuran presisi dilakukan dengan cara disuntikkan 10,0 µl larutan standar, larutan sampel dan larutan plasebo secara be rgantian pada KCKT dengan: Fase diam : kolom L1 (oktadesil silana) 3,9 mm x 30 cm Fase gerak : aquades - metanol (3:1) Laju alir : 1,5 ml/menit Temperatur : Temperatur kolom dijaga pada 40ºC Detektor : UV Panjang gelombang : 243 nm 3. Lakukan duplo untuk tiap pengujian 4. Kriteria penerimaan : RSD ≤ 2 %. Hasil yang diperoleh sebagai berikut : No.

Konsentrasi (%)

Sampel 1

Area Terdeteksi Sampel SD 2

Persyaratan RSD

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Kesimpulan :

RSD ≤ 2,0 %



2) Presisi Antara: a) Lakukan pengujian diatas oleh 2 analisa yang berbeda dan/ atau menggunakan alat yang berbeda. b) RSD maksimal dari 2 pengujian ≤ 2 %. Hasil yang diperoleh sebagai berikut : No.

Lar Sampel Analis 1

Area Terdeteksi Analis 2 Rata-Rata

Persyaratan RSD

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Kesimpulan : i.

RSD ≤ 2,0 %

Linearitas dan Rentang

1) Larutan Sampel Ditimbang dan diserbukkan tidak kurang dari 20 tablet. Kemudian ditimbang seksama setara sejumlah 100,0 mg serbuk sampel lalu dimasukkan kedalam labu ukur 200,0 mL, lalu ditambahkan 100,0 mL fase gerak campuran air-metanol (3:1), disonicate selama 5 menit kemudian volumenya dicukupkan dengan fase gerak hingga garis batas. Kemudian larutan tersebut dipipet 5,0 mL, dimasukkan ke dalam labu ukur 250 mL dan ditambahkan pelarut sampai garis batas hingga dihasilkan larutan dengan konsentrasi 0,01 mg per mL, berdasarkan yang tertera pada etiket. Kemudian saring larutan dengan menggunakan vakum dan membran filter 0,5 µm dan ambil bagian supernatan yang bersih (U.S. Pharmacopeia 30, 2007).



2) Buat larutan sampel untuk pengujian Linearitas: a) Larutan sampel konsentrasi 0,007 mg/ml Dipipet 0,7 ml larutan sampel ke dalam labu ukur 10 ml dan ditambahkan dengan fase gerak hingga garis batas (70% konsentrasi target). b) Larutan sampel konsentrasi 0,008 mg/ml Dipipet 0,8 ml larutan sampel ke dalam labu ukur 10 ml dan ditambahkan dengan fase gerak hingga garis batas (80% konsentrasi target). c) Larutan sampel konsentrasi 0,009 mg/ml Dipipet 0,9 ml larutan sampel ke dalam labu ukur 10 ml dan ditambahkan dengan fase gerak hingga garis batas (90% konsentrasi target). d) Larutan sampel konsentrasi 0,01 mg/ml Dipipet 1,0 ml larutan sampel ke dalam labu ukur 10 ml dan ditambahkan dengan fase gerak hingga garis batas (100% konsentrasi target). e) Larutan sampel konsentrasi 0,011 mg/ml Dipipet 1,1 ml larutan sampel ke dalam labu ukur 10 ml dan ditambahkan dengan fase gerak hingga garis batas (110% konsentrasi target). f) Larutan sampel konsentrasi 0,012 mg/ml Dipipet 1,2 ml larutan sampel ke dalam labu ukur 10 ml dan ditambahkan dengan fase gerak hingga garis batas (120% konsentrasi target). g) Larutan sampel konsentrasi 0,013 mg/ml Dipipet 1,3 ml larutan sampel ke dalam labu ukur 10 ml dan ditambahkan dengan fase gerak hingga garis batas (130% konsentrasi target). 3) Semua larutan disaring dengan membran filter 0, 5 µm. 4) Pengukuran Linearitas dan Rentang Parasetamol a) Disuntikkan 10,0 µl larutan sampel dengan konsentrasi 0,007; 0,008; 0,009; 0,01; 0,011; 0,012; dan 0,013 mg/mL secara duplo dan bergantian pada KCKT dengan: Fase diam




Fase gerak


Laju alir

: 1,5 ml/menit

Temperatur


Detektor

: UV

Panjang gelombang : 243 nm b)Dihitung koefisien korelasi, kemiringan garis dan perpotongan garis lurus dengan sumbu y sebagai analisis regresi linearnya serta dicatat hasilnya 5) Perhitungan a) Persamaan regresi linear: y = a + bx dengan: x = konsentrasi y = luas puncak a = perpotongan garis lurus dengan sumbu y b = kemiringan garis r = koefisien korelasi b) Kriteria penerimaan: koefisien korelasi (r) ≥ 0,9990 Hasil yang diperoleh sebagai berikut :

j.

Uji Kekuatan (Robustness) 1) Prosedur Parasetamol a) Divariasikan kondisi analisis fase gerak pada metode kromatografi cair kinerja tinggi, yaitu: a. Komposisi fase gerak diubah menjadi aquades - metanol (2:1) b. Laju alir diubah menjadi 1,4 ml/menit c. Suhu kolom diubah menjadi 38ºC



2) Disuntikkan 10,0µl larutan standar dan larutan s ampel dari lima replikasi secara bergantian pada KCKT dengan fase diam, panjang gelombang dan detektor yang sama. 3) Dihitung standar deviasi relatif dan diamati faktor ikutannya. 4) Perhitungan a. Standar deviasi relatif RSD = SD X 100%

5) Syarat a) Standar deviasi relatif tidak lebih dari 2,0 %. b) Tailing factor (T) kurang dari atau sama dengan 2 No.

Keterangan

Validasi kondisi

1

Fase gerak ( air : metanol)

2:1

2

Laju alir fase gerak

1,4

(mL/menit) 3

o

Suhu kolom C

Kriteria penerimaan : RSD ≤ 2,0 % T ≤ 2,0

38

Hasil Pengamatan

Protap Dan Protokol Validasi Metode Analisis (1)

Recommend Documents