UNIVERSIDAD PRIVADA TELESUP
FACULTAD DE INGENIERIA ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
CURSO
:
TEMA Nº Nº 4 :
PROFESOR :
CASTILLO AMADO, LUIS
ALUMNA
CARDENAS RAMIREZ, JEHAYRA
:
MICROBIOLOGIA
PREPARACION ,FIJACION Y COLORACION SIMPLE DE FROTIS.
2010
jehayra@g jeha
[email protected] mail.com om
(98)110*4183
TITULO:
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PREPARACION, FIJACION Y COLORACION SIMPLE DE FROTIS
OBJETIVO
1. Aplicar Aplicar técnicas técnicas de frotis frotis de fijación fijación y coloración. coloración. 2. Identifica Identificarr las células células de los los alimentos alimentos mediante mediante la la tinción. tinción. 3. Conoce Conocerr la técnica técnica mas utiliz utilizada ada en el estudio estudio microbio microbiológ lógico ico de cultiv cultivos os bacterianos. 4. Recono Reconocer cer célula células s presente presentes s en el tomate tomate
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FUNDAMENTACION Considerando que los microorganismos son seres que pueden ser vistos mediante el microscopio para diferenciar formas o estructuras; sin embargo la observación observación de células células vivas es limitada limitada debido a sus células células incoloras incoloras que presentan estas .Por ello se utiliza técnicas de teñido como: El Frotis que consta de la fijación y el teñido de microorganismos de acuerdo al numero de soluciones colorantes según el objetivo y Tinción la cual puede ser simple, diferenciación, seclectiva, o negativa.
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MATERIALES
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Porta objeto
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OTROS MATERIALES
1. probeta de 100 ml. 2. Vaso precipitado de 100 ml. 3. Mechero 4. Asa de siembra 5. Piceta de agua destilada 6. Microscopio 7. Azul de metileno. 8. Alcohol etílico.
Tomate
Cubre objeto
9. fenol 2 % 10. Aceite de inmersión.
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PROCEDIMIENTO
Experiencia : célula de tomate
1. Cortar el tomate en 2 mitades. 2. Con una pinza, extrae 2 mm.de la pulpa del tomate. 3. Colocar la muestra en una lamina portaobjeto. 4. Colocar un cubre objeto sin aplastar la muestra. 5. Observar en el microscopio.
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CONCLUSIONES
1. Por la estructura estructura de estas células podemos podemos diferenciarlas diferenciarlas en procariotas procariotas y eucariotas según sus características.
2. La célula eucariota es típicamente mayor y estructuralmente más compleja que la célula procariota.
3. Podemos observar fácilmente la estructura mediante las técnicas de tinción, fijación, y frotis las cuales han sido ejecutadas en estas prácticas.
4.
Según la practica, la forma, la estructura ha sido eucariota
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DIAGRAMA
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Muestra de Tomate
(Fig. 1)
Muestra del tomate en porta objeto
º Muestra del tomate
(Fig. 2)
(Fig. 3)
1.
Experiencia : preparación del frotis.
lava lavarr perf perfec ecta tame ment nte e etiquetarlos.
los los
port portao aobj bjet etos os,,
seca secarl rlos os con con
pape papell
y
2. prender el mechero y esterilizar el asa en la flama del mechero hasta que se ponga al rojo vivo. 3.
deja dejarr enfr enfriiar el asa asa para para evit evitar ar que al toma tomarr la mues muesttra los los microorganismos sean destruidos .después acercar al mechero el tubo de cultivo, quitarle el tapón y flamear rápidamente en la boca del del mismo ismo.. Int Introdu roduci cirr el asa asa en el tubo ubo de cult cultiv ivo o y tomar omar cuidadosamente la muestra.
4.
para el caso de cultivos líquidos, colocar la muestra en ele centro del portaobjeto. Extenderla suavemente en el área circular de 2 cm. de diámetro aproximadamente y esterilizar nuevamente el asa . Dejar secar el frontis al aire y repetir los procedimientos 3-4 por 2 a 3 veces.
5.
si el cult cultiv ivo o es de medi medio o sólid sólido o prev previa iame ment nte e se colo coloca cara ra en el portaobjeto una gota de agua destilada en la que se mezcla una pequeña muestra del d el cultivo que se s e forma siguiendo las la s indicaciones del paso 3 . Extendería suavemente y dejar secar el aire.
Experiencia : Fijación del frotis.
1. fijar el frotis del cultivo liquido con dos gotas de metanol o etanol absoluto y dejar secar al aire(alejado al mechero) 2.
los frotis de cultivo sólido ,completamente secos se fijaron con el calor .para esto se pasara el frotis rápidamente 2-3 veces en el interior de la parte amarilla de la flama del mechero
3. palpar la parte inferior del portaobjeto con el dorso de la mano izquierda para enfriar y comprobar que no hubo sobrecalentamiento.
Experiencia : tinción simple
1. cubrir el frotis con 2 gotas de azul de metileno durante durante 30 segundos a 1 minuto. 2. eliminar eliminar el exceso de colorantes con lavado suave el agua corriente corriente o con la ayuda de la pipeta con agua destilada. 3.
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dejar secar al aire libre.
DIAGRAMA
(fig.4)
PREP. DEL FROTIS
FIJACIÓN DEL FR FROTIS
TINCIÓN SIMPLE
Lavar, secar y etiquetar el portaobjeto.
Fijar en el frotis 2 gotas de metanol
Agregar al frotis 2 gotas de azul metileno
Esterilizar el asa de siembre en la flama de mechero.
Dejar secar.
Después un suave lavado con agua destilada.
Dejar secar el asa de siembra
Para Frotis sólidos, la muestra se pondrá en calor
Dejar secar.
Cultivo liquido,.extender la masa para esterilizar
cogerlo y determinar si se encuentra sobrecalentado
Cultivo sólido.- colocar una gota de agua destilada.
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CONCLUSIONES y RECOMENDACIONES.
1.
esta secuencia de pasos nos permite tener una organización de investigación, utilizando tanto materias primas sólidas como liquidas.
2.
la prepara preparació ción n del frotis frotis consta consta de antici anticipar par el experim experiment ento o obje objeti tivo vo.. Para Para est este es nece necesa sari rio o una asa asa de siem iembra bra esterilizada para captar bacterias.
3.
en la fijación, se subdivide según la muestra; según sea sólido se utilizara calor y en líquidos gotas de metananol o etanol.
4. en el paso de fijación se debe evitar el sobrecalentamiento.
