Guion de la clase de taxonomía bacteriana del pre-grado de medicina veterinariaFull description
Descripción completa
Descripción completa
Descripción: Objetivo: Conocer y aplicar la metodología para una prueba de inhibición bacteriana Realizar pruebas de inhibición bacteriana utilizando diferentes sustancias para probar su poder antibacteriano.
Practica No.3: Coloraciones bacterianas El tamaño de la mayoría de las células bacterianas es tal que resultan difíciles de ver con el microscopio óptico. La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea. El modo más simple de aumentar el contraste es la utilización de colorantes.
3.1Logro de aprendizaje : Conoce las técnicas para la coloración de bacterias y su importancia para su reconocimiento.
3.2 Marco teórico i se desea simplemente aumentar el contraste de las células para la microscopía! son suficientes los procedimientos que usan unos solo colorantes llamados de tinción simple. in embar"o! a menudo se utilizan métodos que no tiñen de i"ual modo todas las células! es el proceso denominado tinción diferencial. #no muy usado en microbiolo"ía es la tinción $ram. %asándose en su reacción a la tinción $ram! las bacterías pueden dividirse en dos "rupos: "rampositivas y "ramne"ativas. Esta tinción tiene "ran importancia en ta&onomía bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de la pared celular de las distintas bacterias. 'ientras que las bacterias "ramne"ativas son constantes en su reacción! los microo microor"a r"anis nismos mos "rampo "ramposit sitivo ivos s pueden pueden presen presentar tar respues respuestas tas variab variables les en cierta ciertas s condic condicion iones es (son (son "ramlá "ramlábil biles) es).. *or e+empl e+emplo! o! los cultiv cultivos os vie+os vie+os de al"una al"unas s bacter bacterias ias "rampositivas pierden la propiedad de retener el cristal violeta! y en consecuencia! se tiñen por la safran safranina ina aparec aparecie iendo ndo como como "ramne "ramne"at "ativa ivas. s. ,nálo ,nálo"o "o efect efecto o se produc produce e en ocasiones por cambio en el medio del or"anismo! o por li"eras modificaciones en la e+ec e+ecuc ució ión n de la técn técnic ica. a. *or *or este este moti motivo vo!! es prec precis iso o aten atener erse se!! en la prác prácti tica ca!! al procedimiento establecido. *ara e&plicar el mecanismo de la tinción de $ram se -an propuesto varias -ipótesis fundadas en la naturaleza química de las paredes celulares de los microor"anismos. ,quí puedes ver las diferencias estructurales y químicas de los dos tipos de pared bacteriana:
e forma el comple+o C102. Las células contin3an teñidas de color violeta.
e forma el comple+o C102. Las células contin3an teñidas de color violeta.
e des-idratan las paredes celulares. e contraen los poros. 4isminuye la permeabilidad. El comple+o C102 no sale de las células que contin3an teñidas de color violeta.
Eliminación por e&tracción de "rasas de las paredes celulares. ,umenta la porosidad. El comple+o C102 se separa de la célula.
Células no decoloradas5 quedan teñidas de color violeta.
Células decoloradas5 se tiñen de color rosado.
3.3. Materiales e (nstru)entos
Reacti"os para coloración *ra) • • • •
'ec-ero Láminas porta0ob+eto 6isopos estériles! papel toalla ,sa de siembra.
+tros )ateriales: láminas montadas de bacterias con coloración $ram y 7eil- 8eelsen. 'icroscopios compuesto lente de 9& y accesorios de limpieza. •
,ceite de inmersión
3.% Procedi)iento
1.
Muestra de &arro ,ental en #gar Nutriti"o
Extensión: 1.
En el portaob+eto bien limpio (esterilizado con alco-ol! papel de filtro y flameado) se colocó
2.
una "ota de a"ua destilada con ayuda del asa de siembra. Con ayuda del asa de siembra! previamente esterilizada a la llama! se tomó una colonia de bacterias de nuestra muestra de sarro dental se)brado en agar nutriti"o y con el asa se
3.
e&tiende a la "ota y las bacterias sobre el portaob+eto. ;inalmente se fi+a la e&tensión por el calor! calentando suavemente a la llama del mec-ero
4.
-asta que se seque. Lue"o pasamos a la coloración de nuestra muestra si"uiendo los pasos a continuación.
Coloración:
a) 9 minuto en cristal
violeta -colorante inicial!
b) se lava con a"ua
destilada
c) 9 minuto en lu"ol
-)ordiente!
d) se decolora con
alco-ol de <=>
-decolorante! e) se lava con a"ua
destilada
f) 9 minuto en fucsina
básica -colorante de
contraste! ") se lava con a"ua
corriente
-) se seca sua"e)ente
y sin 'rotar con papel de
filtro
#na vez que nuestra preparación está totalmente seca! ponemos una "ota muy pequeña de aceite de cedro y observar al microscopio con el ob+etivo de inmersión.
Resultados Con ayuda de nuestro microscopio observamos en nuestra muestra lo si"uiente: %acterias $ram positivas (/) y $ram ne"ativas (0)
Cocos
Muestra de la &uper'icie de la Mesa de Laboratorio 1.
En el portaob+eto bien limpio (esterilizado con alco-ol! papel de filtro y flameado) se colocó
2.
una "ota de a"ua destilada con ayuda del asa de siembra. Con ayuda del asa de siembra! previamente esterilizada a la llama! se tomó una colonia de bacterias de nuestra )uestra de la super'icie de la )esa de laboratorio y con el asa se
3.
e&tiende a la "ota y las bacterias sobre el portaob+eto. ;inalmente se fi+a la e&tensión por el calor! calentando suavemente a la llama del mec-ero
4.
-asta que se seque. Lue"o pasamos a la coloración de nuestra muestra si"uiendo los pasos a continuación.
Coloración:
a) 9 minuto en cristal violeta -colorante inicial! b) se lava con a"ua destilada c) 9 minuto en lu"ol -)ordiente! d) se decolora con alco-ol de <=> -decolorante! e) se lava con a"ua destilada f) 9 minuto en fucsina básica -colorante de contraste! ") se lava con a"ua corriente -) se seca sua"e)ente y sin 'rotar con papel de filtro
#na vez que nuestra preparación está totalmente seca! ponemos una "ota muy pequeña de aceite de cedro y observar al microscopio con el ob+etivo de inmersión.
Resultados Con ayuda de nuestro microscopio observamos en nuestra muestra lo si"uiente:
Cocos ne"ativos
%acilos
3. Conclusiones
3./ Cuestionario 1.
0u 'or)a tienen las bacterias obser"adas
Las baterías observadas tenian la forma de:
•
Cocos: son bacterias de forma esférica! estas tienen la capacidad de vivir solas o enlazarse -asta formar cadenas y estas pueden causar infecciones a la piel e into&icación alimenticia.
•
%acilos: on bacterias características por su forma de barras o cilíndricas! pueden ser "ram positivo o ne"ativo! estas causan distintas enfermedades como la tuberculosis.
2.
0Las bacterias aparecen aisladas o agrupadas 4n caso de que aparezcan agrupadas indicar el tipo de asociación.
•
Las bacterias observadas en el e&perimento aparecen a"rupadas
3. 0u tipo de *ra) son las bacterias 6ubo del tipo de $,' (/) y $,' (0) ?.
@Cu5l es la di'erencia bacteriana para la tinción de *ra) positi"a negati"as La diferencia es que las bacterias que quedan teñidas de azul son $ram positivas y bacterias teñidas de rosa son $ram ne"ativas (*ara ver me+or las bacterias $ram ne"ativas se aplica otro colorante llamado fucsina! que dan un color rosa a las bacterias.)
.
0Por qu utilizar el )ec$ero en el )o)ento de la coloración
*orque nos ayudara a secar el líquido que se quedó en la laminay además nos ayudara a esterilizar el aza de siembra y evitar que se contaminen de otras bacterias la placa *etri al momento de la colocación de las colonias.
3.6 Reco)endaciones •
Debemos hacer uso de nuestros materiales para evitar contaminación (guantes, gorro, mascarilla, mandil) El tratamiento con cristal violeta debe p receder al tratamiento con yodo. El yodo por sí solo tiene poca afin idad con las células.
La decoloración debe realiarse con poca agua para evitar !ue pierdan la tinción las células "ram positivas.
E# proceso de decoloración debe ser corto y es esencial un c$lculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios.
%l momento de realiar nuestra fi&ación, debemo s tener en cuenta a hacerlo cerca de un mechero para evitar mayor contaminación.
Debemos esteriliar nuestra asa de siembra por cada procedimiento !ue realicemos.
'anipular cuidadosamente el microscopio. En el caso de usar el ob&etivo ** debemos realiarlo utiliando el aceite de cedro en nuestra muestra.
Después de utiliar el ob&etivo de inmersión debe limpiarse con alcohol.
3.7 8ibliogra'9a 9. 'urray! *. 'icrobiolo"ía médica. Aa. ed.España: Elsevier5 B<. B. oneman! ,llen et al. 4ia"nóstico 'icrobioló"ico. De&to y atlas en color. Ata ed. ,r"entina: 'édica *anamericana5 B. F. Dortora! $. 2ntroducción a la microbiolo"ía.
