Práctica No. 1

PRÁCTICA No. 1 DETERMINACION DE VOLUMEN MINIMO DE LECTURA Y  OBSERVACIÓN DEL EFECTO MENISCO OBJETIVO Calcular la cantidad exacta de volumen que requiere el espectr espectrofot ofotóme ómetro tro de uso frecuen frecuente te en el laborato laboratorio rio de bioquími bioquímica ca clínica para la correcta lectura de absorbancia.

FUNDAMENTO En las las deter determin minaci acion ones es fotom fotométr étrica icas s es de vital vital impo importa rtanci ncia a que que el volumen que se deposita en la celda de lectura sea el adecuado para asegurar que el rayo de luz atraviesa completamente la solución. El mane manejo jo de volú volúme mene nes s infe inferi rior ores es al volu volume men n míni mínimo mo reque equeri rido do ocasiona lecturas erróneas erróneas y como consecuencia resultados incorrectos. incorrectos. Cuando se coloca una cantidad insuciente de solución en la celda! el rayo rayo de luz luz atra atravi vies esa a por por el meni menisc sco o de la mism misma a y por por efec efecto to de difracción se obtienen lecturas elevadas. En un espectrofotómetro! la luz blanca que proviene de una fuente de luz "una bombilla# atraviesa un monocromador! de donde sale la luz de la longitud de onda "color# seleccionada. Esta luz pasa a continuación a través de una solución contenida en la celda óptica! llamada cubeta. $a solución absorbe una fracción de la luz y un detector mide la reducción de intensidad de luz resultante "la absorbancia#. Cuanto m%s intenso sea el color de la solución! mayor ser% la medida de absorbancia.

$as cubetas m%s comúnmente utilizadas tienen una longitud de &cm y requieren un volumen mínimo de ' ml de solución para obtener medidas satisfactorias. El objetivo principal de un espectrofotómetro de uso general es la medida exacta y precisa de la absorbancia. (or tanto! la selección de la longitud de onda debe ser lo m%s exacto posible y la luz altamente monocrom%tica "es decir de un estrec)o rango de longitudes de onda#.

PROCEDIMIENTO

Ajustar el aparato a cero con aire, a una longitud de onda de 500 nm

Colocar en la celda 0.2 ml de la solución de dicromato de potasio y tomar la primera lectura

Agregar 0.2 ml de la solución nuevamente y registrar la lectura

Repetir la adición de la misma cantidad de solución tomando las lecturas hasta que permanezcan constantes

etermina r el volumen m!nimo de lectura

RESULTADOS *úmero de lectura

1 2 3 4 5 6 7 

+bsorbancia -.& .0&0 .&01 .&00 .&02 .&1 .&03 .&03

VOLUMEN TOTAL

,olumen "ml# ./ ./ ./ ./ ./ ./ ./ ./

1.6

CONCLUSIÓN 4ado el volumen y el número de veces que se agregaron los ./ ml a la celda! concluimos que para que el espectrofotómetro pueda leer correctamente la absorbancia y se puedan obtener resultados co)erentes! la celda debe contener aproximadamente lo de &.1 ml.