“
Año de la inversión para el desarrollo rural y la seguridad alimentaria” UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA
FACULTAD DE INGENIERIA E.A.P.INGENIERIA AGRONOMA PRACTICA Nº 002 FOTOCOLORIMETRIA
ASIGNATURA: Bioquímica
DOCENTE: Eterio Alva Muñoz
INTEGRANTE: De La Cruz Castro Luis Rhusbel
Nvo. Chimbote 03 de junio del 2013
Bioquímica
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FOTOCOLORIMETRIA 1.
INTRODUCCIÓN:
Una de las mediciones más frecuentes en bioquímica es la concentración de una sustancia y para su determinación se puede recurrir a dos métodos factor de calibración o curva de calibración, esta última no siempre es correcta; es decir sus puntos de intersección (x,y)=(concentración, absorbancia), no se encuentran cólineales , lo cual lleva a elaborar una curva irreal no representativa de lo esperado. La curva de calibración relación, por lo que se puede tomar como variable independiente las concentraciones (eje de las x )y como variable dependiente las absorbancias (eje de las y ),siendo posible determinar la ecuación de la curva que se adapta mejor a los datos Y=a° +
x+E
a°=verdadero valor de la intersección de la curva = verdadero valor de la pendiente. X,y= X es una variable pre establecido o no aleatoria , se utiliza para hacer una predicción de Y . E=representa una variabilidad en toda medición causada por material de vidrio sucio, variación de temperatura, fluctuaciones eléctrica, variabilidad biológica, no linealidad, interferencias químicas, etc. Este valor no se toma en cuenta en la ecuación final por ser un valor constante. Una de las consideraciones que se toma en cuenta una análisis de regresión lineal, es para cualquier valor de X exactamente conocido, existen celdas, distribuciones normales de valores de Y, quedando la ecuación reducida a Y = a+bx “a y “b”=son coeficientes de regresión y remplazan a a° y b respectivamente Y= denota el valor predecible de la media de Y para un valor dado de X .
Fianlmente lo que interesa es determinar los coeficientes de regresión, aplicando el método de los minimos cuadrados, luego hallar el valor de las nuevas lecturas aplicando .
Y=a+bx
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2.
OBJETIVOS:
Conocer los principios básicos de colorimetría.
Hallar
concentraciones
Determinar
el
espectro
de de
muestras
absorción
de
un
de
proteína.
compuesto
determinado.
Realizar curva de calibración a partir de una muestra de albumina.
3. EQUIPOS , MATERIALES Y MÉTODOS: 3.1. EQUIPO:
3.2.
Espectrofotómetro
MATERIALES Y REACTIVO:
Soluciones a ensayar :sulfato de cobre, dicromato de potasio ,rojo de metilo Tubos de ensayo Pipetas de 1 a 10 ml.
4. RESULTADOS:
PTACTICA N° 01 DE Bioquímica RESULTADOS DEL ESPECTOFOTOMETRO TUBO DE ENSAYO 1 2 3 4 5 6 7
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0.123 0.076 0.291 0.13 0.374 0.68 -0.078
ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA
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PTACTICA N° 01 DE Bioquímica RESULTADOS DEL ESPECTOFOTOMETRO Pergamanato de potasio 0,015%
TUBO DE ENSAYO 1 2 3 4 5 6 7
-0.010 -0.005 -0.003 -0.008 -0.026 -0.031 0.007
ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA ABSORVANCIA
Fig N° 01: Se hecho a cada tubo de ensayo agua destilada respectivamente.
Fig. N°02: Se agregó a cada tubo de ensayo permanganato de sodio respectivamente.
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Fig.N°03: Se colocaron cada tubo de ensayo en el espectrofotómetro y se obtuvo la absorbancia de cada uno.
CUESTIONARIO:
a) ¿Qué consideraciones deberán tomarse en cuenta para obtener una curva de calibración? La curva estándar inicial debe incluir un blanco reactivo y, por lo menos, ocho estándares que cubran toda la escala de concentraciones que se usaran en los análisis rutinarios del laboratorio y que permite medir el método analítico.
b) ¿Cuál de los métodos :factor de calibración o curva de calibración es más exacto ¿.Explique. El más exacto es el método de “El factor de calibración.”.
c) ¿Existe otro método de ajuste de curvas? También se pueden usar en ciertos casos otros tipos de curvas, como secciones cónicas (arcos circulares, elípticos, parabólicos e hiperbólicos)o funciones trigonométricas(como el seno y el coseno). Por ejemplo, las trayectorias de objetos bajo la influencia de la gravedad siguen una curva parabólica, si se ignora la resistencia del aire. Por tanto, ajustar los puntos de una trayectoria a una curva parabólica tendría sentido. Las mareas siguen patrones sinusoides, por tanto se podría ajustar datos provenientes de mareas a una onda sinusoidal; o la suma de dos sinusoides de periodo diferente, si se considera el efecto conjunto de la luna y el sol.
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d) ¿Qué desventajas tiene el método de los mínimos cuadrados? Es necesario contar con un importante grupo de datos para obtener resultados confiables. Los resultados de la regresión son sensibles a la forma funcional si no se interpreta correctamente el termino de error, lo que puede generar conclusiones muy variadas, dependiendo dela forma en que se haya organizado inicialmente la regresión.
e) Aplicaciones de la practica en el campo de su especialidad? Podemos aplicarlo para fertilizantes, materias vegetales, alimentos; también para análisis de suelos para determinar Na,K,Al,Fe, y Ca para análisis de aguas residuales, cementos, productos de petróleo y productos metalúrgicos.
5. DISCUSION: Se ven en los resultados de la absorbancia a partir de las soluciones de concentración conocida como aumentan de manera proporcional al aumento de concentración, demostrando la relación directamente proporcional entre la concentración y la absorbancia. Por lo que a mayor concentración mayor absorbancia. En cuanto a la concentración de la solución incógnita de absorbancia 0.087 a través del grafico se obtuvo una concentración lógica para ese valor de absorbancia (0.0144 g/l) pero a la hora de comprobarlo analíticamente con el factor hubo una diferencia no muy grande, pero con resultados (0.0152g/l) no muy lejos de la lógica, por lo que se puede inferir que esa diferencia de valores pudo deberse a errores de precisión del grafico
6. CONCLUSIOINES: • La fotocolorimetría consiste en medir la absorción de luz que produce una determinada sustancia al paso de un color determinado. Para ello, se utiliza un aparato llamado fotocolorímetro que utilizamos en el laboratorio y nos permitió medir la absorción de la luz concretamente en una proteína llamada albumina de suero sanguíneo. • En cuanto la curva de calibración, como se mencionó anteriormente se pudieron haber presentado varios errores en el laboratorio (precisión, limpieza, preparación de diluciones, etc.) que impidieron obtener como resultado una gráfica lineal de los datos obtenidos experimentalmente, evitando así un buen resultado y análisis del ejercicio. • Algo muy importante a comprender en el laboratorio es la importancia de la ley de Beer para hallar concentraciones desconocidas (una muestra problema) midiendo la absorbancia de la muestra patrón.
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7. OBSERVACIONES Y RECOMENDACIONES:
Tener en buen estado los materiales del laboratorio. Para poder medir la concentración de una especie química en una solución, primero se debe establecer el largo de onda en la cual la solución tiene absorbancia máxima, Max, y después se debe preparar una curva de calibración. Las muestras de gaseosa en el momento de medir deben estar secas. Al momento de usar la pipeta se debe usar correctamente
8. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS: http://bc.inter.edu/facultad/arodriguez/cursos/biol3503/lab8_biol3503.htm http://es.wikipedia.org/wiki/Curva_de_calibrado http://www.uam.es/personal_pdi/ciencias/bolarios/BiologiaCCAA/Guiones/Practica1.htm Q Amaris, R y Lopera P. Practicas de bioquímica U. de A. 1995 Skook, D.A. y West D.M. Analisis instrumental. Nueva editorial Interamerican . Mexico 1987
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