UNIVERSIDAD VERACRUZANA FACULTAD DE QUÍMICA FARMACÉUTICA BIOLÓGICA LABORATORIO DE HEMATOLOGIA PRÁCTICA 8 FRAGILIDAD OSMÓTICA DE LOS ERITROCITOS FUNDAMENTO: Examen de la fragilidad osmótica. Es un examen de sangre para detectar si hay mayor probabilidad de que los glóbulos rojos se descompongan Razones por las que se realiza r ealiza el examen Este examen se realiza para detectar la esferocitosis hereditaria y la talasemia. La esferocitosis hereditaria hace que los glóbulos rojos sean más frágiles de lo normal. Con la talasemia, los glóbulos rojos son más frágiles de lo normal, pero un gran número de ellos es menos frágil de lo habitual. Fragilidad de los eritrocitos se refiere a la propensión de los eritrocitos a hemolisis bajo estrés. Puede ser pensado como el grado o porcentaje de hemólisis que se produce cuando una muestra de las células rojas de la sangre se someten a estrés. Dependiendo de la aplicación, así como el tipo de fragilidad implicado, la cantidad de tensión aplicada y/o el significado de la hemólisis resultante pueden variar. Cuando múltiples niveles de estrés se aplican a una determinada población/muestra de células, un perfil de fragilidad se puede obtener mediante la medición de la medida relativa o absoluta de hemólisis existente en cada uno de dichos niveles, además de encontrar uno o más índices de números individuales asociados con particulares respectivos niveles de hemólisis y/o el estrés correspondiente. Fragilidad pruebas puede ser útil para evaluar la capacidad de las células para resistir el estrés sostenida o repetida. Por otra parte, se puede utilizar para evaluar la forma en sí fragilidad varía bajo diferentes o cambiantes condiciones ambientales o de estrés, durante o antes de la inducción de la hemólisis. Bajo fragilidad a menudo se denomina "estabilidad", aunque técnicamente la estabilidad se refiere r efiere a resistencia de las células tanto lisis inducida por el estrés y espontánea auto-lisis.
GENERALIDADES: Fragilidad osmótica eritrocitaria Fragilidad osmótica se refiere al grado o porcentaje de hemólisis que se produce cuando una muestra de las células rojas de la sangre se somete a estrés osmótico por ser colocado en una solución hipotónica. Fragilidad osmótica se ve afectada por varios factores, incluyendo la composición de la membrana y la integridad, así como el tamaño de las células o la superficie de la zona a relaciones de volumen. La prueba de fragilidad osmótica es común en hematología, y a menudo se lleva a cabo para ayudar con el diagnóstico de enfermedades asociadas con anormalidades de la membrana de rbc. Algunas enfermedades relacionadas con el aumento de de son la esferocitosis hereditaria y hypernatermia, mientras que algunos vinculados a la disminución de de son la enfermedad crónica del hígado, anemia por deficiencia de hierro, la talasemia, la hiponatremia, la policitemia vera y la anemia de células falciformes después de la esplenectomía. Nuevos enfoques para probar de están en desarrollo para facilitar mejor su uso en el diagnóstico de enfermedades y la detección, tal como mediante la utilización de dispositivos de microfluidos, junto con el recuento de células.
Valores normales Un examen negativo es normal. Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes laboratorios. Algunos laboratorios utilizan diferentes mediciones o analizan muestras diferentes. Hable con el médico acerca del significado de los resultados específicos de su examen.
Significado de los resultados anormales •Talasemia •Esferocitosis hereditaria
PREGUNTAS GUÍA: 1. ¿Qué es la fragilidad osmótica de los eritrocitos? La fragilidad osmótica eritrocitaria es a menudo realizada en los estudios de posibles casos de esferocitosis hereditaria. Esta prueba no ayuda a diferenciar los esferocitos de la esferocitosis hereditaria de la anemia hemolítica autoinmune adquirida; este test solo indica que una proporción de células rojas tiene una disminución de la relación de la superficie y el volúmen y son más susceptibles a la lísis en las soluciones hipo-osmóticas.
2. ¿Cuáles pueden ser las principales fuentes de error en esta determinación? En pacientes con hemólisis aguda, un test de fragilidad osmótica de las células rojas normales no excluye una anormalidad en la fragilidad osmótica debido a que las células pueden ser hemolisadas y no estar presentes. Este test se recomienda durante un estado de homeostásis prologada con hematocrito estable.
3. ¿Por qué en la esferocitosis hereditaria hay un aumento de la fragilidad osmótica? Los esferocitos son raros en la sangre normal. Cuando se sospecha una esferocitósis sobre la base de una hemoglobina corpuscular media elevadao sobre el análisis de un extendido de sangre periférica, la fragilidad osmótica se utiliza para la presencia de esferocitos. Los pacientes con esferocitosis hereditaria quienes experimentan elevaciones significativas en los reticulocitos no caen dentro del rango normal. Las células con aumento en la relación volúmen/superficie, tal como ocurre en las talasemias y en la deficiencia de hierro, puede mostrar disminución de la fragilidad osmótica.
4. Explica que significa que los eritrocitos tengan una fragilidad osmótica disminuida La forma y el volumen de los eritrocitos cambian cuando varía la cantidad de agua contenida en su interior, pudiendo tomar una forma estrellada o irregular al ocurrir pérdida de volumen (fenómeno de crenación) o bien aumentar su volumen hasta adquirir la forma de una esfera. Cuando la célula no puede resistir la carga de agua que recibe, la membrana se rompe (fenómeno de hemólisis) y se libera la hemoglobina la cual puede ser cuantificada por métodos espectrofotométricos.
DIAGRAMA DE TRABAJO:
Extraer 2ml de sangre en un tubo con aticoagulante
Determinar el porcentaje de hemólisis
Colocar 18 tubos de ensayo y colocarlos según la tabla especificada
Para leer se debe extraer con cuidado el sobrenadante
Mezclar y agregar 50 microlitros de sangre
Proceder a leer absorbancias de cada tubo en el espectrofotómetro a 540 nm
Reposar a temperatura ambiente durante 30 minutos
Transcurrido el tiempo, centrifugar a 2000 rpm por 5 minutos.
Tubo No.
mL de solución salina al 1% tamponada
mL de agua destilada
Concentración de la solución (%)
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
4.5 3.8 3.6 3.4 3.2 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.0
0.5 1.2 1.4 1.6 1.8 2.0 2.2 2.4 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 3.8 4.0 4.2 5.0
4.5 3.8 3.6 3.4 3.2 3.0 2.8 2.6 2.4 2.2 2.0 1.8 1.6 1.4 1.2 1.0 0.8 0.0
OBSERVACIONES:
Imagen 1. Tubos con solución salina al 1% tamponada, agua destilada y muestra de sangre.
Imagen 2. Tubo 18 con hemólisis completa.
Imagen 3. Tubos después de la centrifugación.
RESULTADOS: Después de leer los resultados se deben calcular el % de hemólisis de cada tubo con la siguiente fórmula:
D.O. del tubo 18: 2.339nm
Tubo No.
Densidad Óptica
% de hemólisis
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
0.106 0.129 0.134 0.149 0.418 0.241 0.181 0.516 1.141 1.598 1.519 2.026 2.148 2.210 2.227 2.280 2.290 2.339
5 6 7 7 20 10 9 25 56 64 78 86 92 94 95 97 98 100
Fragilidad osmótica de los eritrocitos 120 s i 100 s i l ó m 80 e h e d 60 e j a t n 40 e c r o P 20
0 4.5 3.8 3.6 3.4 3.2
3
2.8 2.6 2.4 2.2
2
1.8 1.6 1.4 1.2
1
0.8
0
Concentración de la solución
CONCLUSION: A menor concentración de NaCl se incrementa el porcentaje de hemolisis, debido a que ingresa agua al eritrocito liberando hemoglobina. La variación del porcentaje de hemolisis influye directamente con la lectura de las absorbancias. En un ambiente salino se produce mayor cantidad de hemolisis comparado con un ambiente normal. La temperatura del hielo obtiene la menor hemolisis debido a que conserva a los eritrocitos sin ningún cambio y por consiguiente no hay liberación de hemoglobina.
BIBLIOGRAFIA: -
Hematología: fundamentos y aplicaciones clínicas Bernadette F. Rodak Ed. Médica Panamericana, 2005 - 838 páginas.
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Source: Conteo de glóbulos rojos | University of Maryland Medical Center http://umm.edu/health/medical/spanishency/articles/conteo-de-globulosrojos#ixzz3Dslyqpwe University of Maryland Medical Center
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http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003489.html
