Prueba de Fragilidad Osmotica

PRUEBA DE FRAGILIDAD OSMOTICA Método de Dacie

FINALIDAD:

1. Determ Determina inarr con la mayor mayor precisi precisión ón posible posible la fragil fragilida idad d osmóti osmótica ca de la muestra de un paciente mediante el método de Dacie. 2. Gra Graca carr una una curv curva a de frag fragil ilid idad ad osmó osmóti tica ca con con los los dato datos s obte obteni nido dos s durante la práctica. 3. Asociar Asociar resultado resultados s patológico patológicos s a patrones patrones observables observables en una curva de ! INTRODUCCIÓN:

"a fragilidad osmótica osmótica mide la #abilidad de de los glóbulos ro$os ro$os de incrementar incrementar su volumen cuando son sometidos a soluciones #ipotónicas de cloruro de sodio %&a'() %&a'() de concentr concentraci acione ones s variab variables les.. *s la prueba prueba más utili+a utili+ada da para el diagnóstico de la *sferocitosis ,ereditaria ,ereditaria - alasemias. alasemias. "os esferocitos tienen una relación supercie/volumen disminuida0 tienen una capacidad disminuida para para aume aumenta ntarr su volu volume men n y se lisa lisan n a una una conc concen entra traci ción ón de sale sales s más más elevada ue las células normales. *stos glóbulos presentan presentan un aumento en la frag fragil ilid idad ad osmó osmóti tica ca son son más más frág frágil iles es ue ue lo norm normal al00 por por lo cont contrar rario io los los eritrocitos de individuos ue sufren de talasemia0 son menos frágiles ue lo normal por lo tanto la prueba esta disminuida. PRINCIPIO:

*n esta prueba cuando los eritrocitos son puestos en una serie de soluciones #ipo #ipotó tóni nica cas s de &a'l &a'l00 el agua agua entr entra a a las las célu célula las s #asta #asta ue ue alca alcan+ n+an an un euilibrio. ientras esto sucede la célula va incrementando su volumen #asta ue es lisada porue no puede contener el volumen. "a muestra es pipeteada en una serie de tubos con diferentes concentraciones de solución salina y el sobrenadante de estos es medido. "a concentración de #emó #emóli lisi sis s en cada cada tubo tubo es comp compar arad ado o cont contra ra rang rangos os norm normal ales es para para su diagnóstico. "a sensibilidad de esta prueba puede incrementarse con la preincubación de las las célul células as.. 4e util utili+ i+a a la mism misma a meto metodo dolo log5 g5a a e6ce e6cept pto0 o0 ue ue la prue prueba ba es efectuada con sangre estéril ue #a sido incubada por 27 # oras a 38 9'.

REACTIVOS:

1. 4olución 4olución 4toc: 4toc: de de cloruro cloruro de sodio sodio bufera buferado0 do0 p, 8.7 8.7 a. ;< g de &a' &a'll b. 13.== g de de osfato osfato de de sodio dibási dibásica ca %&a2,>!7 %&a2,>!7.2,2< .2,2<))

c. 2.73 g de osfato de sodio monobásico %&a,2>!7.2,2!) *sto se disuelve en 1 " de agua destilada 2. "as soluciones de traba$o se obtienen colocando en un frasco volumétrico de 1<< ml los siguientes vol?menes de la solución stoc: y diluyendo con agua destilada a 1<< ml. Concentracin !

"# de $o#%cin $toc&

<.1< <.2< <.3< <.3@ <.7< <.7@ <.@< <.@@ <.=< <.=@ <.8< <.8@ <.< <.@

1.< 2.< 3.< 3.@ 7.< 7.@ @.< @.@ =.< =.@ 8.< 8.@ .< .@

/Botule cada frasco con la debida concentración y guarde a 7 9'. Descarte cuando se contamine. MUESTRA:

3. 4angre venosa fresca con *DA o ,eparina 7. 4angre completa con *DA o #eparina pre/incubada 27 #oras0 preparada de la siguiente manera ,omogenice bien la muestra y pipetee 2 ml de sangre en un tubo plástico estéril. 4elle el tubo e inc?belo en baCo mar5a durante 27 #oras. PROCEDIMIENTO:

1. !btenga de 2/3 ml de sangre anticoagulada del paciente. 2. Botule 17 tubos y agregue @ ml de cada concentración del &a'l a cada tubo. 3. 'oloue <.<@ ml de sangre anticoagulada en cada tubo y me+cle. 7. De$e los tubos a temperatura ambiente por 3< minutos. @. Besuspenda suavemente y centrifugue as 30<<< g  1< minutos. =. "ea en el espectrofotómetro el sobrenadante de cada tubo %@7< nm longitud de onda). 8. Ese el sobrenadante del tubo <.@F como blanco y el tubo de <.1F como el ue representa el 1<
F ,emólisis  D! del sobrenadante de cada tubo  D! del tubo con 1<
H1<<

'on los datos obtenidos se construye una curva0 en el e$e de las I6I el F de &a'l y en IyI el F de #emólisis *$emplo de curva de fragilidad osmótica

VALORES DE REFERENCIA:

En glóbulo ro$o normal0 bicóncavo comien+a a mostrar #emólisis a una concentración de <.7@ y su #emólisis se encuentra completa a <.3<. Concentracin de NaCI

! de (e"#i$i$ a )* C

! de (e"#i$i$ inc%+ada

<.2< <.3< <.3@ <.7< <.7@ <.@< <.@@ <.=< <.=@ <.8< <.@

1<< ;8/1<< ;
;1/<< 
INTERFERENCIAS

!tras enfermedades también resultan con fragilidad incrementada o disminu5da como ser ,emoglobina 40 Anemia #emol5tica inmune0 deciencia severa de #ierro0 >iropoiuilocitosis #ereditaria0 *stomatocitosis #ereditaria y otras condiciones ue alteren el volumen del eritrocito como uemaduras.

BIBLIOGRAF,A

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