MANEJO DE MICROPIPETAS MICROPIPETAS AUTOMÁTICAS Y PRECISIÓN DE SUS MEDIDAS Angélica Villalobo lopez1, Ingri Gómez Ibáñez 2, Andrea Barón Vasquez Vasquez3, adeleiss! "érez Agudelo# $
%ni&ersidad 'e (órdoba$ )acul*ad 'e (iencias Básicas$ 'epar*amen*o 'e Biolog+a$ on*er+a, (órdoba$
RESUMEN n es*a prác*ica se implemen*ó el mane-o apropiado de las icropipe*as, las cuales serán u*ilizadas en muc.os procesos den*ro del labora*orio$ 'e igual /orma se es*udiaron las di/eren*es icropipe*as ! su uso espec+/ico a la .ora de *omar &ol0menes$
INTRODUCCIÓN as as icr icrop opip ipe* e*as as son un ins*r ns*rum umen en*o *o de labora labora*or *orio io emple empleado ado para para medir medir pequeñ pequeños os &ol0menes de l+quidos ! permi*ir su mane-o en las dis*in*as *écnicas cien*+/icas$ os &ol0 &ol0me mene ness cap* cap*ab able less por por es*o es*oss ins*rume ins* rumen*o n*oss &ar+an seg0n el modelo n los labora*orios de Biolo Biolog+a g+a olecu olecular lar,, el manemane-o o del equip equipo o bás básico es es /und /undam amen en**al$ al$ Ade Adem más, ás, se se req requi uieere del del cono conoci cimi mien en*o *o de las las dis dis*in* *in*as as unid unidad ades es de medició med ición, n, !a que que dic. dic.os os proce procedi dimi mien en*o *oss se u*ilizan a diario Acero e* al$, 24115$ as pipe*as son una .erramien*a básica en cualquier labora*orio de in&es*igación en el que se necesi*en preparar disoluciones$ (on ellas ellas podremo podremoss alicuo alicuo*ar *ar dis*in dis*in*os *os rangos de &ol0menes sin come*er un error e6ces e6cesi& i&o$ o$ 7on 7on de espe especi cial al in*e in*eré réss para para &ol0menes pequeños desde 4,18l a 9 ml5 !a que para ma!ores se dispone ac*ualmen*e de o*ro *ipo de ins*rumen*al como como las probe* probe*as as gradua graduadas das :or :or*os *osaa 24135$
n /unc /unció ión n del del ma*e ma*eri rial al de que que es*é es*én n .ec.as, e6is*en dos grandes *ipos; •
De cristal$ s*as pueden ser *an*o de &olum &olumen en /i-o /i-o como como &ari &ariab able le$$ 7uel 7uelen en *ener ener gran gran prec preciisión sión ! e6ac*i*ud dependiendo del *ipo de cris*a cris*all *ipo *ipo A, B5$ l l+quid l+quido o se *oma oma media edian* n*ee un sis* sis*em emaa de succ succió ión n manu manual al$$
•
De plástico$ 'en*ro de es*e grupo, cabe des*acar las pipe*as au*omá*icas, las cuales se basan en el uso uso de un pis pis*ón *ón in*er n*erno no de succión que &ariamos para permi*irnos *omar el &olumen deseado$ 7on más ergonómicas que las las an*e an*eri rior ores es aunqu aunquee nece necesi si*a *an n cal calibrac braciión per periódi iódica ca :or*os r*osaa 24135$
METODOLOGA l pro*ocolo que .a! que seguir para medir correc*amen*e un &olumen con una micropipe*a es el siguien*e; 7e selecciona la pipe*a adecuada para medir el &olumen, de manera que es*é den*ro del rango especi/icado para la pipe*a$ 7e /i-a el &olumen deseado en la pipe*a median*e el giro del émbolo$ "or e-emplo 144 =l$ 7e coloca una pun*a desec.able en el &ás*ago de la pipe*a 7e asegura que es*á bien su-e*a e-erciendo un ligero mo&imien*o de *orsión$ 7e presiona sua&emen*e el émbolo con el pulgar .as*a el primer *ope$ 7e in*roduce la pun*a de la micropipe*a en la mues*ra no más de 3 mm de la super/icie de l+quido, man*eniendo la pipe*a en posición &er*ical 7e succiona el l+quido, rela-ando sua&emen*e la presión del dedo pulgar sobre el émbolo, sin permi*ir que el émbolo suba por s+ solo$ 7e espera un par de segundos con la pun*a in*roducida en el l+quido$ 7e re*ira la pun*a de la mues*ra$ 7e in*roduce la pun*a de la pipe*a en el *ubo adecuado, colocando la pun*a con*ra la pared del *ubo, sin sumergirla en la solución$ 7e aprie*a el émbolo len*amen*e .as*a el primer *ope$
7e espera un par de segundos ! se aprie*a el émbolo .as*a el segundo *ope para eliminar el posible l+quido que quede en la pun*a$ (on el émbolo *o*almen*e presionado se re*ira cuidadosamen*e la pipe*a, deslizando la pun*a a lo largo de la pared del *ubo$ 7e rela-a la presión del pulgar para que el émbolo &uel&a a la posición normal$ 7e elimina la pun*a por presión del e6pulsor de pun*as o *irando de ella, para e&i*ar con*aminaciones$
Precisi!" #e las $e#i#as to$a#as co" Micropipetas a%to$áticas si&%ie"#o las si&%ie"tes i"str%ccio"es' 1$ lenar un Bea>er con #44m de agua des*ilada a *empera*ura ambien*e$ 2$ 'e*erminar la masa de un *ubo ppendor/ en una balanza anal+*ica, es*e será el peso inicial$ 3$ :rans/erir con la micropipe*a al *ubo ppendor/ 144 8 de agua des*ilada$ :apa el *ubo péselo ! ano*e su masa$ #$ ?e*ire la *apa del *ubo ! añádale 144 8 más de agua des*ilada, *ápelo ! &uél&alo a pesar$ Ano*e es*e &alor$ 9$ ?epi*a es*e procedimien*o .as*a comple*ar 1444 8 de agua en el *ubo$
ANÁLISIS Y RESULTADOS' n la prác*ica del uso ! mane-o de las icropipe*as se aprendió la gran impor*ancia de es*os al momen*o de realizar procedimien*os en el labora*orio, !a que es*as son necesarias en biolog+a molecular$ "or e-emplo en las e6*racciones de A'< en donde se necesi*an can*idades mu! pequeñas, en micro li*ros generalmen*e, que no son
posibles con o*ros ins*rumen*os ! además can*idades e6ac*as, que es uno de las &en*a-as que bridan las icropipe*as !a que *ienen una medida es*ándar$ l buen uso de las icropipe*as garan*iza un buen proceso de medición !a que al darle un mal uso se pueden al*erar los resul*ados$ "or e-emplo, al oprimir mal el embolo, al no sumergir bien la pun*a de la micropipe*a se pueden generar burbu-as que pos*eriormen*e generara un error en la medición$ os resul*ados del procedimien*o se encuen*ran en la siguien*e *abla; Volumen ul5
@*ubo 5g
@ *ubo @ agua g
@ agua g
4
4,CD
4,CD
4
144
4,CD
4,CC#3
4,4CE9
244
4,CD
1,4C2C
4,1C91
344
4,CD
1,1CD2
4,2CC#
#44
4,CD
1,29E
4,3D
944
4,CD
1,3#2D
4,###C
E44
4,CD
1,#E2
4,9#
D44
4,CD
1,9C2D
4,EC#C
44
4,CD
1,EC3
4,DC19
C44
4,CD
1,DC9C
4,C1
1444
4,CD
1,C#1
4,CCE3
CÁLCULOS' Me#ia Arit$(tica F 1,3427
)aria"*a' 0,0998232
Des+iaci!" está"#ar' 0,33104404 'e acuerdo con los da*os que se ob*u&ieron al de*erminar el peso en gramos del agua, se de*erminó la media ari*mé*ica, la &arianza ! la des&iación es*ándar, es*as medidas pueden arro-ar carac*er+s*icas de precisión o e6ac*i*ud$ a e6ac*i*ud mues*ra que *an cercana es*a la medición a su &alor &erdadero ! de*ermina el error, ! la precisión describe que *an cercanos es*án en*re silos resul*ados ob*enidos e6ac*amen*e$ bser&ando los da*os se puede decir que el peso ob*enido del agua es direc*amen*e proporcional al &olumen *omado en microli*ros de agua, es decir, a ma!or &olumen del agua ma!or será su peso que es lo obser&ado$
PRECISIÓN'
el *érmino precisión describe la apro6imación de las mediciones, es decir, que *an cercanos es*án en*re si los resul*ados que se .an ob*enido e6ac*amen*e para describir la precisión de una serie de da*os repe*idos se u*ilizan; la des&iación es*ándar, la &arianza ! el coe/icien*e de &ariación$ s*os *érminos son una /unción de des&iación de los da*os respec*o a la media$
E,ACTITUD' l *ermino e6ac*i*ud indica que *an cercana es*a la medición de su &alor &erdadero o acep*ado, ! se e6presa en *érminos de error$ s*á relacionada al &alor cen*ral de una serie de mediciones, el cual se de*ermina median*e la media o la mediana$
CONCLUSIÓN' Después de realizarse la práctica podemos concluir que la micropipeta es un instrumento de laboratorio empleado para succionar y transerir peque!os "ol#menes de l$quidos, la utilizaci%n de micropipetas de "olumen i&o nos permitirá tener un mayor control dentro de los "ol#menes e'actos que se deben tomar, los "ol#menes captables por estas "ar$an se(#n el modelo) las utilizadas se encuentran en un ran(o de 0*+, 10, 100 y asta 1000 -l, respecti"amente* .s destacable que el uso de micropipetas permite emplear distintos l$quidos sin tener que la"ar estas porque para ello se emplean puntas desecables, de plástico, que abitualmente son estériles* .'isten "arios tipos de puntas dependiendo del "olumen que
se desee tomar por tal raz%n se podemos decir que las micropipetas son muy #tiles y necesarias para los laboratorios de la biolo($a molecular*
-I-LIOGRA.IA •
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/cero , arazona D, ásquez D* ediciones con mircropipetas 2011*
er(ara"at anessa, aca(no 5ulio* ema 1* roceso anal$tico 6eneral* acultad de ioqu$mica y ciencias iol%(icas* .scuela superior de sanidad Dr:;amon
ni"ersidad ?acional del @itoral* ortosa 6*
