MICROPIPETAS Método gravimétrico para la determinación del error de medición Materiales -Balanza analítica con resolución apropiada al volumen de la micropipeta a evaluar. Tabla 1 – Selección de Balanza Volumen a evaluar (V) 10 µl < V ≤ 100 µl 100 µl < V ≤ 1000 µl 1 ml < V ≤ 10 ml
Resolución Resoluci ón (mg) 0.01 0.1 0.1
-Recipiente para líquido, con capacidad suficiente para todo el líquido necesario para realizar la prueba completa. -Recipiente para pesada. Debe seleccionarse de manera tal de reducir la perdida de agua por evaporación durante el procedimiento de pesada. Para volúmenes pequeños, es rec omendable que la relación altura/diámetro del recipiente sea 3:1 . -Cronómetro -Termómetro -Higrómetro -Barómetro Liquido de prueba Debe emplearse agua destilada o desionizada a temperatura ambiente. Condiciones de prueba La verificación debe realizarse en una habitación sin corrientes de aire y con ambiente controlado. Debe tener una humedad relativa por encima de l 50% y una temperatura constante (±0.5 °C) e ntre 15 °C y 30 °C. Antes de la prueba, el líquido debe permanecer en la habitación el tiempo suficiente (al menos 2 horas) para alcanzar el e quilibrio con las condiciones de la misma. NOTA: para volúmenes menores a 50 µl, el e rror por evaporación no puede despreciarse y deben tomarse las medidas adecuadas. Consultar la norma ISO 8655-6, apartado 6.3. El tiempo de ciclo (tiempo requerido para completar la pesada para un volumen determinado) debe mantenerse al mínimo, y no debería superar los 60 segundos. Procedimiento de comprobación de la calibración En el caso de micropipetas con volumen variable, se deben verificar al menos tres volúmenes: el volumen nominal (máximo volumen dispensado), el 50% del volumen nominal y el límite inferior
del rango de volumen útil o el 10% del volumen nominal (entre estos, el que presente el mayor valor). La medición de otros valores es opcional. Deben realizarse 10 mediciones para cada volumen verificado. 1) Colocar líquido de prueba en el recipiente de pesada hasta una altura de por lo m enos 3 mm. Comprobar la temperatura del líquido de prueba y las c ondiciones de presión y humedad de la habitación. 2) Para micropipetas con volumen variable, seleccionar el volumen de prueba, el cual no debe alterarse durante todo el ciclo de prueba (10 mediciones). 3) Colocar un tip en la micropipeta. Ubicar el recipiente de pesada con su líquido en el plato de la balanza. Si es posible, no retir arlo durante todo el ciclo. 4) Llevar a cabo el siguiente ciclo de prueba: a. Presionar el émbolo hasta el primer tope . b. Sumergir el tip 2 o 3 mm por debajo de la superficie del líquido en el recipiente de reserva. c. Soltar el embolo lentamente, esperar 1 o 2 segundos. d. Retirar la pipeta cuidadosamente de manera vertical a la superficie del agua. e. Tocar la pared del recipiente para remover gotas externas. f. La primera succión tiene el fin de humedecer el tip. Desechar el líquido presionando el embolo hasta el segundo tope y volver a rellenarlo como se describe en los pasos anteriores. g. Registrar el peso del recipiente de pesada con líquido, o tarar a cero la balanza. h. Colocar el contenido de la pipeta e n el recipiente de pesada presionando el embolo hasta el segundo tope, tocando con el tip la pared del recipiente por encima de la superficie del líquido, y en un ángulo entre aproximadamente 30° y 45°. i. Al retirar el tip del recipiente, arrastrar la punta 8 o 10 mm a lo largo de la pared del recipiente para remover cualquier gota en o alrededor de la punta del tip. Soltar el embolo. j. Registrar el valor pesado. k. Reemplazar el tip por uno nuevo. l. Repetir el ciclo hasta completar 1 0 mediciones para un mismo volumen. m. Medir la temperatura del líquido de prueba restante al final del ensayo y registrar la temperatura media de la prueba (promedio entre inicial y final) NOTA: El procedimiento detallado es para volúmenes mayores a 50 µl. Par a volúmenes iguales o menores a este último, revisar el procedimiento descripto en la norma ISO 8655-6, apartado 7.2. Evaluación En el archivo Excel “TC20 – Calibracion de micropipetas” se encuentran las hojas de cálculo con todas las ecuaciones detalladas a continuación, solo deben insertarse los datos medidos. Conversión de masa a volumen
Calcular la masa media como el promedio de las mediciones. Para convertir la masa registrada en volumen se debe tener en cuenta la densidad del agua. Aplicar el factor de corrección Z (Tabla 2) correspondiente a la temperatura media y la presión barométrica registradas durante el ensayo. = ×
V: volumen medio; m: masa media; Z: Factor de corrección. Tabla 2 – Factor de conversión en función de presión y temperatura, para agua destilada
Se calcula la inexactitud o error sistemático (A) y la imprecisión o error aleatorio (CV) para cada conjunto de mediciones y se comparan los resultados con los límites establecidos por el fabricante o por la norma ISO 8655.
Si los resultados calculados están dentro de los límites seleccionados, el ajuste de la pipeta es correcto. Ajuste de la pipeta Si la pipeta se encuentra fuera de los límites, debe ajustarse mecánicamente. El ajuste se realiza solo para un volumen, el volumen de ajuste recomendado es e l volumen mínimo o el 10% del volumen máximo. 1. Colocar la herramienta de servicio en las aberturas de la tuerca de calibración que se encuentra en la parte superior del mango como se muestra en la imagen. 2. Girar la herramienta de servicio en el sentido de las agujas del reloj para aumentar el volumen o en la dirección opuesta para disminuirlo. 3. Una vez ajustado el volumen, compruebe la calibración siguiendo las instrucciones descritas anteriormente.
