Universidad autónoma de Chiapas Facultad de ciencias químicas Campus IV LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA
PRACTICA NO. 2 “localización de órganos linfoides”
CATEDRATICO:
ALUMNO:
DRA. MARISOL ESPINOZA RUIZ
RODAS HERRERA MIGUEL ANGEL
SEMESTRE: 6° “A”
GRUPO:
TAPACHULA CHIAPAS CHIAPAS A 22 DE FEBRERO DEL 2010 1
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INTRODUCCIÓN El siste istem ma inm inmun uno ológi lógico co.. Toda Todass las las expr expre esione ioness de la respu espues esta ta inmunológica dependen de la existencia y función del aparato inmunológico. El aparato inmunológico es un complicado sistema que incluye a los órganos linfoides, al tejido linfoide, polidisperso y a los elementos de la circulación sanguínea y linfática. Los Los órga órgano noss linf linfoi oide des. s. En los mamí mamífe fero ros, s, los órga órgano noss linf linfoi oide dess está están n repre represen senta tados dos por el timo, timo, la medula medula ósea, el bazo, bazo, las amígdala amígdalas, s, los ganglios linfáticos, el apéndice ileocecal y las placas de peyer. En las aves existe un órgano adicional llamado “bolsa de Fabricio”. Los órganos linfoides se clasifican en 2 grandes grupos: los primarios o centra centrales les (m (medu edula la ósea, ósea, timo timo y bolsa bolsa de Fabri Fabricio cio), ), y los secund secundar arios ios o periféricos (bazo, amigadalas, ganglios linfáticos, apéndice ileocecal y las placas de peyer). En los órganos linfoides primarios o centrales, las células del tejido linfoide term termin inan an su proc proces eso o de difer diferen enci ciac ació ión n y/o y/o madu madura raci ción ón qu que e las las hace hace inmunológicamente competentes. En los órganos linfoides secundarios o periféricos, las células del tejido linfoide hacen contacto con el antígeno como como prol prolif ifer eran an en resp respue uest sta a al esti estimu mulo lo anti antigé géni nico co y prod produc ucen en los los efec efecto tore ress solu solubl bles es de la resp respue uest sta a inmu inmune ne celu celula larr (cit (citoc ocin inas as)) y de la respuesta inmune humoral (anticuerpos). Existe además tejido linfoide que no se encuentra limitado por una capsula de tejido conectivo. conectivo. Este es el tejido linfoide linfoide polidisperso polidisperso que se encuentra encuentra asociado a las mucosas principalmente en la regio subepitelial. En el tejido linfo linfoide ide enca encaps psula ulado do y en meno menorr grad grado o en el poli polidis dispe pers rso, o, las las célu célula lass linfoides linfoides se encuentra encuentran n contenidas contenidas por el tejido de sostén sostén formado formado por las células reticulares y las fibras reticulares. Las Las célula célulass linfoi linfoides des.. Es común común denomi denominar nar célula célulass linfoi linfoides des a todas todas las células células móviles móviles encontra encontradas das en los órganos órganos linfoides, linfoides, independie independientem ntemente ente de su origen. Es así que las células linfoides se incluyen a los linfocitos, a los monoci monocitos tos y macró macrófa fagos gos,, a otras otras célula célulass repre represen senta tador doras as de antíge antígeno no (células de Langherhans, células veladas, células interdigitantes y algunas otras) y a las células K (asesinas o killer) y NK (asesinas naturales o natural killer), células con apariencia morfológica de linfocitos pero distintas en otros aspectos incluyendo su función. Todas estas células participan en la etapa de inducción de la respuesta inmunológica o como efectoras de la misma. Linfoc Linfocito itos. s. Aun Aunque que morfol morfológic ógicam ament ente e todos todos los linfoc linfocito itoss son iguale igualess en real realida idad d esta estass célu célula lass cons consti titu tuye yen n un una a pobl poblac ació ión n hete hetero rogé géne nea. a. Para Para empezar, existen 2 tipos fundamentales de linfocitos: los linfocitos T, cuya diferenciación y maduración se completa en el timo, y los linfocitos B que determinan su diferenciación y maduración maduración en la medula ósea (o en la bolsa
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Mientr Mientras as que los primer primeros os se consid considera eran n respon responsa sable bless de la respue respuesta sta inmune celular, los segundos se involucran más con la respuesta humoral. Los linfocitos Th2 a través de los factores solubles que producen estimulan la proliferación de los linfocitos B, su transformación en células plasmáticas y su capacidad de síntesis de anticuerpos
OBJETIVO ✔
✔
✔
Al final del desarrollo de la práctica, el alumno deberá ser capaz de loca locali liza zarr e iden identi tifi fica carr los los órga órgano noss más más apar aparen ente tess del del sist sistem ema a inmuno inmunológ lógico ico:: timo, timo, ganglio ganglioss linfá linfátic ticos, os, bazo, bazo, placa placass de peyer peyer y apéndice ileocecal. Deberá reconocer la estructura histológica general de los órganos linfoides más prominentes (timo, ganglios linfáticos, bazo). Por ultimo deberá de ser capaz de identificar y describir las células linfoides que se encuentran en la circulación sanguínea.
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MARCO TEORICO El sistema inmune alcanza a todo el organismo excepto algunos órganos ó área áreass inmuno inmunológi lógicam cament ente e privil privilegi egiada adass donde donde norma normalme lmente nte no exist existe e respue respuesta sta inmune inmune:: cereb cerebro, ro, testíc testículos ulos y cáma cámara ra anteri anterior or del ojo. ojo. Están Están protegidas por fuertes barreras entre sangre y tejido (p. ej., la barrera hemato hematoenc encefá efálica lica)) y bajas bajas permea permeabili bilidad dades es o sistem sistemas as especí específic ficos os de tran transp spor orte te.. Su signi ignifi fica cado do adap adapta tati tivo vo estr estrib iba a en evit evita ar resp respue uest stas as inflamatorias en lugares donde sería lesivo para la integridad del individuo. ÓRGANOS LINFOIDES. Órga Órgano no hema hemato topo poyé yétic tico o es el prod produc ucto torr de las las esti estirp rpes es sang sanguín uínea eas, s, mientras que órgano linfoide es el órgano de producción y diferenciación de linfocitos. El sistema linfoide está integrado por órganos linfoides: - Primarios: timo, médula ósea y bolsa de Fabricio (aves). - Secu Secund ndar ario ios: s: bazo bazo,, gang ganglio lioss linf linfát átic icos os,, tejid tejidos os linf linfoid oides es asoc asocia iado doss a mucosas (MALT) que incluye amígdalas, apéndice vermiforme, placas de Peyer, adenoides. La médula ósea es el único órgano hematopoyético y linfoide a la vez. En la respue respuesta sta secund secundar aria, ia, la médula médula ósea ósea actúa actúa igualm igualment ente e como como órgan órgano o secundario.
FUNCIÓN DEL TEJIDO LINFOIDE PRIMARIO Y SECUNDARIO. ÓRGANOS LINFOIDES PRIMARIOS O CENTRALES.
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Aquí, los linfocitos, adquieren Rc antigénicos específicos para defenderse de los microorganismos y distinguir lo propio de lo no propio. ÓRGANOS LINFOIDES SECUNDARIOS. Son ganglios linfáticos, bazo y tejido linfoide asociado a mucosas (MALT). Son lugares donde se crea el ambiente necesario para que los linfocitos puedan interaccionar entre sí, con los Ags y las CPA, para dar una respuesta inmunitaria apropiada. También disemina la l a respuesta inmunitaria. TIMO Es un órgano plano y blando situado en la cavidad torácica, por encima del coraz corazón. ón. Está Está forma formado do por dos lóbulos lóbulos rodead rodeados os por cápsu cápsula la de tejido tejido conjuntivo. A su vez, los lóbulos están divididos en lobulillos separados entre sí por trabéculas de tejido conjuntivo. Cada lobulillo tímico está relleno de células linfoides denominadas timocitos, dispuestas en una corteza de gran densidad celular y una médula (interior) de menor densidad celular. Desde la corteza corteza hasta la médula médula existe un gradiente gradiente de diferencia diferenciación, ción, de modo que en la corteza se encuentran los timocitos más inmaduros, mientras que en la médu médula la se loca locali liza zan n los los timo timoci cito toss en fase fasess madu madura rati tiva vass más más avanzadas. Tanto la corteza como la médula están rellenas de una red de células no linfoides que constituyen el estroma tímico, y que consta de varios tipos celulares: 1. Tres tipos de células epiteliales, que forman una red que desempeñan un papel muy importante en el proceso de diferenciación de los LT (se cree que eliminan a los LT autorreactivos): a) Nodrizas en la cortical externa: b) Corticales: c) Medulares: 2. Células dendríticas interdigitantes sobre todo en el límite l ímite cortico-medular. 3. Macrófagos, con una localización similar a las l as dendríticas.
El timo de los mamíferos va involucionando con la edad, a partir de la pubertad. En humanos, al nacer, el timo pesa 10-15 g, alcanza su máximo en la adolescencia (40-70 g), y va regresionando, de modo que en la vejez sólo pesa 3 g, aunque siempre queda un remanente de zona medular. Por lo tanto, en la vida adulta, la producción de linfocitos T en el timo decae bastante, aunque siempre existe una actividad residual. La función tímica y respuesta inmune tienen una relación clara, de tal forma
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MÉDULA ÓSEA. En el feto, son los islotes de células hematopoyéticas del hígado fetal y médula ósea fetal. En el adulto, es la médula ósea roja (limitada a esternón, costillas, vertebras y pelvis) la que se encarga de la producción de LB. Ademá Ademáss de se órgano órgano linfoid linfoide e prima primario rio,, lo es tambi también én secun secundar dario, io, con células plasmáticas y LT maduros. En concreto, es el principal productor de Ac en infecciones prolongadas: el tejido periférico responde rápidamente a la secreción de Ac, pero decae pronto. La médula ósea tarda más en responder, pero perdura. Las Las célu célula lass plur plurip ipot oten enci cial ales es de la líne línea a linf linfoi oide de son son CD34 CD34+/ +/CD CD38 38-, -, en cont contra rast ste e con con otra otrass líne líneas as,, qu que e son son CD34 CD34+/ +/CD CD38 38+. +. Esta Estass célu célula lass pluripotentes maduran hasta LB vírgenes (IgM+/IgD+). De los linfocitos que contiene, el 75% son LB y menos del 25% LT. La médula ósea también puede actuar como órgano linfoide secundario en la produc producció ción n de anticu anticuerp erpos os durant durante e la respu respues esta ta secund secundar aria ia hum humora oral. l. Durant Durante e esta esta respu respues esta, ta, los órgano órganoss secund secundar arios ios “clás “clásico icos” s” respon responden den rápid rápidam amen ente te,, pero pero du dura rant nte e poco poco tiem tiempo po.. En camb cambio io,, la médu médula la ósea ósea “arr “arran anca ca”” lent lenta ament mente, e, pero pero da un una a resp respue uest sta a más más prol prolon onga gada da de producción de anticuerpos, llegando a ser responsable del 80% de estos durante la respuesta secundaria. ÓRGANOS LINFOIDES SECUNDARIOS Los linfoc linfocito itoss vírgen vírgenes es migra migran n de los órgano órganoss linfoi linfoides des prima primario rioss a los secundarios (tránsito linfocitario). Los órganos linfoides secundarios pueden clasificarse desde un punto de vista histológico en: 1. Capsulados: en ellos se produce la secreción de Ac que se distribuirán por la circulación; también se dan respuestas celulares locales. - ganglios (recogen Ag de la piel y de superficies internas) - bazo (recoge Ag de la sangre) 2. Órganos no capsulados asociados a mucosas (MALT): protegen del Ag que entre entre directame directamente nte a través través de mucosas mucosas (gastroin (gastrointest testinal, inal, respirat respiratoria oria,, genit genitou ouri rina nari ria) a).. Su resp respue uest sta a es la secr secrec eció ión n de inmu inmuno nogl glob obul ulin ina a A secretoria (sIgA), que recubrirá la superficie mucosa (epitelial). 3. .Acúmulos más o menos difusos (no capsulados), dispersos por casi todo el cuerpo. BAZO. Es un órgano linfoide secundario grande (150 g en humanos adultos), de forma ovoide, situado en el cuadrante superior izquierdo del abdomen. Está especializado en capturar antígenos transportados por la sangre (p. ej., en las situaciones de infecciones i nfecciones sistémicas). sistémicas).
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Posee una cápsula de tejido conectivo, de la que salen hacia el interior num nu merosa osas trabéc bécula ulas que delim elimit ita an compa omparrtimen imenttos. os. En cada cada compartimento se distinguen dos tipos principales de tejidos: - Pulpa roja (función hematológica). La pulpa roja es una red de sinusoides venosas que contienen macrófagos residentes especializados (macrófagos (macrófagos de los senos esplénicos), que se encargan de destruir eritrocitos y plaquetas viejos (proceso de hematocatéresis hematocatéresis - Pulpa blanca (función inmune). La pulpa blanca se dispone alrededor de las arteriola central, formando el manguito linfático periarterial (PALS). En este manguito hay dos áreas: - Área de células T: alrededor de la arteriola central. Es la primera en desar desarrol rollar larse se en la pulpa pulpa blanca blanca del del embrió embrión. n. Las Las prime primera rass célula célulass en instalarse son los LT, macrófagos, CPA, y alguna célula plasmática. plasmática. - Área de células B: en la periferia del manguito, que contiene, además, CPA, macrófagos y células B que recirculan lentamente. Se forma 1 semana después que la zona T. Las Las célu célula lass B pu pued eden en form formar ar folíc folícul ulos os prim primar ario ioss (no (no esti estimu mula lado dos) s) o secundarios (estimulados), también llamados centros germinales. a) Folículos PRIMARIOS (se forman en la periferia de las vainas del PALS). Están constituidos por un estroma de fibras reticulares que contiene células reticular reticulares es mesenquim mesenquimatos atosas, as, células células dendrítica dendríticass foliculare folicularess (CPA) (CPA) y LB
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- Casquete, corona o manto: contiene linfocitos B pequeños en estado de reposo, y menos CPA que en la zona central. Los LB de esta zona son IgD+/IgM+ (VIRGENES). GANGLIOS LINFÁTICOS. FUNCIONES. Capturar fluido procedente de los tejidos y reingresarlo en la sangre. El plasma se extravasa desde los capilares a los tejidos, generando el líquido intersticial. Parte de éste retorna a la sangre a través de las membranas capilares, pero el resto, llamado linfa, fluye desde los tejidos conectivos a una red de finos capilares linfáticos abiertos, y de allí va pasando a vasos cada vez mayores (vasos linfáticos). Finalmente, la linfa llega l lega al mayor vaso linfá linfátic tico, o, denomi denominad nado o conduc conducto to torác torácico ico,, que desca descarga rga a la circul circulac ación ión sanguínea a nivel de la subclavia izquierda (cerca del corazón). Capturar antígenos de los líquidos intersticiales de los tejidos y llevarlos a algunos de los órganos linfoides secundarios, donde quedarán retenidos para su interacción con las células del sistema inmune. El antígeno queda retenido en alguno de los ganglios interpuestos a lo largo del sistema de vaso vasos, s, pero pero en el caso caso de qu que e “pas “pase e de larg largo” o” entr entrar ará á en circ circula ulaci ción ón sang sanguí uíne nea a y tend tendrá rá la opor oportu tunid nidad ad de ser ser capt captad ado o por por el bazo bazo.. (A los gang ganglio lioss y al bazo bazo se les les calif calific ica a como como órga órgano noss linf linfoi oide dess secu secund ndar ario ioss sistémicos). ESTRUCTURA Forman parte del entramado corporal que filtra los Ags de los tejidos y la linfa durante su paso de la periferia hacia el conducto torácico. Los ganglios humanos suelen medir entre 2 y 10 mm de diámetro, y tienen forma de judía, con una parte cóncava denominada hilio, a donde entra una arteria que se ramifica a arteriolas, a vénulas postcapilares a vena que sale por el hilio. En los ganglios linfáticos se pueden distinguir distintas zonas de la periferia al centro: a) SENO SUBCAPSULAR b) CORTEZA (ÁREA DE CÉLULAS B) c) PARACORTEZA (ÁREA DE CÉLULAS T) d) MÉDULA
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a) Células M especializadas en el transporte de Ags hacia tejido linfoide y la secreción de Ac (IgAs). b) Bajo número de células caliciformes. c) No tiene criptas ni vellosidades. CELULAS DE LOS ORGANOS PRIMARIOS Y SECUNDARIOS Al microscopio se verá: Bazo : Dominio predominante de glóbulos rojos teñidos de color rojo por la eosina. No
Tienen núcleo y son más delgados por el centro que por los bordes.
◙ Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un solo
núcleo que ocupa casi toda la célula. ◙ Macrófagos: son los leucocitos de mayor tamaño, poco frecuente, núcleo grande, laxo y redondo. ◙ Células dendríticas: Mayores que los linfocitos muy poco frecuentes, con una gran cantidad de prolongaciones citoplasmáticas. Ganglio: No se observan eritrocitos.
◙ Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un
solo núcleo que ocupa casi toda la célula. ◙ Macrófagos: son los leucocitos de mayor tamaño, poco frecuente, núcleo grande, laxo y redondo. ◙ Células dendríticas: Mayores que los linfocitos muy poco frecuentes, con una gran cantidad de prolongaciones citoplasmáticas. Timo: No se observan eritrocitos.
◙ Linfocitos: de tamaño aproximado al de los glóbulos rojos, tienen un solo núcleo que ocupa casi toda la célula.
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CORTES HISTOLÓGICO DE TIMO, BAZO, GANGLIOS Y PLACAS DE PEYER. TIMO El timo está rodeado de una delgada cápsula de tejido conectivo que se proyecta hacia el interior como septos dividiendo al órgano en lobulillos. En cada lobulillo se aprecia una corteza de linfocitos densamente agrupados y una médula más clara. El timo carece de nódulos linfoides y está sostenido por células reticulares epiteliales. Los corpúsculos de Hassall son exclusivos del del timo timo y se loca localiz lizan an en la médu médula la.. Son Son estr estruc uctu tura rass redo redond ndea eada dass y acidófilas constituidas por células epiteliales aplanadas dispuestas en forma concéntrica, que pueden sufrir queratinización y calcificación en la zona central.
LOBULILLOS CORPUSCULO DE HASSALL
ZONA CORTICAL
PLACAS DE PEYER Las placas de Peyer están formadas por agregados de nódulos linfoides situ situa ados dos en la lámi lámina na prop propia ia y su subm bmuc ucos osa a de int intesti estino no delg delgad ado, o, part partic icul ular arme ment nte e íleo íleon. n. Se pu pued eden en apre apreci ciar ar en ocas ocasio ione ness los los cent centro ross germin germinale ales. s. El tejido tejido linfoi linfoide de difuso difuso entre entre dichos dichos folícu folículos los linfoi linfoides des está está formado por linfocitos T. GANGLIOS LINFÁTICOS En periferia se distingue el tejido conjuntivo capsular fibroso por debajo del cual aparece el seno subcapsular como un espacio vascular que en determinados puntos es difícil de apreciar, en la parte cortical se observan folículos secundarios y tejido linfoide difuso quedando una porción central correspondiente a la zona medular rica en vasos sanguíneos y senos linfáticos.
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blanca las células linfoides se distribuyen tanto de forma dispersa como agrupadas en folículos. La pulpa roja formado por senos venosos y cordones celulares (cordones de Billroth). Bazo: cápsula (a), la pulpa roja (b), la Pulpa blanca (c) y las trabéculas (d).
PROCEDIMIENTO Disección del animal de experimentación Se recomienda manejar a los animales extremando las precauciones para evitar mordeduras.
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porque en estas zonas, cubiertas por la piel o adheridas a ella, se localizan los ganglios linfáticos cervicales, inguinales y axilares.
6.- localizar localizar las aéreas aéreas vascular vascularizada izadass señalada señaladass a continuaci continuación, ón, notar notar el depósito de grasa en la piel correspondiente a la región abdominal y ubicar la posi posici ción ón de los los gang ganglio lioss linf linfát átic icos os inguin inguinal ales es,, esto estoss se encu encuen entr tran an adhe adheri rido doss a la piel piel prot proteg egid idos os por por la capa capa de gras grasa a su subc bcut után ánea ea y se observan como protuberancias discretas. Levantar la piel del cuello para descubrir los ganglios cervicales; estos son los ganglios de mayor tamaño y se encuentran constituyendo un cinturón ganglionar alrededor del cuello. Su forma forma ovoide ovoide permit permite e distin distingui guirlo rloss de las glándu glándulas las subma submandib ndibula ulare ress localizadas también en la parte anterior del cuello.
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9.- si durante el proceso de extirpación del timo ocurre la ruptura de algún vaso sanguíneo, con una caja pipeta Pasteur recoger una pequeña gota de sangre y depositarla sobre un portaobjetos para hacer una extensión. Para esto, seguir las indicaciones del instructor. Si no hay ruptura de vasos sang sanguí uíne neos os,, sele selecc ccio iona na algu alguno no de ello elloss para para prom promov over er el sang sangra rado do y proceder a hacer la extensión de sangre. 10.- en la cavidad abdominal abdominal localizar el bazo y proceder proceder a su extirpación. extirpación. Sepa Separa rarr el órga órgano no cuid cuidad ados osam amen ente te del del teji tejido do cone conect ctiv ivo o qu que e lo fija fija al estomago y al intestino delgado. Depositarlo en caja petri. 11.11 .- local localiza izarr la regi región ón du duod oden enal al del del inte intest stino ino delga delgado do y con con cuid cuidad ado o extender el tubo intestinal cortando la fina membrana conectiva que lo mant mantie iene ne en posi posici ción ón.. Iden Identi tifi fica carr las las plac placas as de peye peyerr dist distri ribu buid idas as a intervalos en esta región intestinal. Localizar la parte donde el intestino delgado se une al intestino i ntestino grueso e identificar el apéndice ileocecal.
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En el procedimiento de la practica marca que debíamos hacer la ruptura de un vaso sanguíneo para observar la sangre, pero eso parte de la practica no la realizamos solo realizamos los extendidos de las órganos linfoides y a nuestro equipo le toco teñir las placas de peyer. ✔ Como lo menciono la Dra., es cierto que si jalamos al ratón muy fuerte de la cola al querer inmovilizarlo esta puede llegar a desprenderse ✔ Observe los órganos órganos linfoides en nuestro nuestro ratón en en los lugares señalados ✔ Observamos Observamos que aunque hallamos inmovilizado al ratón su corazón siguió latiendo un rato más ✔
CARACTERISTICAS CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS, DE CONSISTENCIA Y DE COLOR DE LOS GANGLIOS LINFATICOS, LINFATICOS, DEL TIMO, DEL BAZO Y DE LAS PLACAS DE PEYER Ganglios linfáticos: Tenían una forma de puntitos o aglomerados de color blanquecino confundible con la grasa del animal, tenían una consistencia que permitía
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HISTOLOGIA GENERAL DEL BAZO, TIMO, PLACAS DE PEYER, MEDULA OSEA
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PLACAS DE PEYER
TIMO
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BAZO
DISCUSIONES
En el bazo pudimos ver ver la pulpa blanca blanca y la pulpa roja. roja. La Pulpa roja es una red red de sinu sinuso soid ides es veno venoso soss qu que e cont contie iene nen n macr macróf ófag agos os resi reside dent ntes es especializados, que se encargan de destruir eritrocitos y plaquetas viejos y la Pulpa Pulpa blanca blanca (funci (función ón inmune inmune)) se dispon dispone e alrede alrededor dor de las arter arteriola iola central, formando el manguito linfático periarterial (PALS). En este manguito hay dos áreas: - Área de células T: células son los LT, macrófagos, CPA, y alguna célula plasmática. - Área de células B: contiene, además, CPA, macrófagos y células B que recirculan lentamente. MEDULA OSEA En la medula medula ósea ósea vemos vemos la presen presencia cia de linfoc linfocito itoss B apilon apilonado ados, s, ya que recordemos es la médula ósea roja (limitada a esternón, costillas, vertebras y pelvis) la que se encarga de la producción de LB. Además de ser órgano linfoide primario, lo es también secundario, con células plasmáticas y LT
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Aprendí a reconocer la estructura estructura histológica general de los órganos linfoides más prominentes (timo, ganglios linfáticos, bazo). ✔
BIBLIOGRAFÍA In veterinary technology: AVMA, Membership Directory and Resource Manual, 44th ed. Schaumburg, Ill.: AVMA; 1995. p.236-240 ✔
Tur-Mari JA, Orellana-Muriana JM (editors). Animal research and welfare: a partnership. FELASA-ICLAS FELASA-ICLAS Joint Meetitn, 7th symposium, Palma de Mallorca 26-28 May 1999. London: Laboratory Animal Ltd; 2000. ✔
✔
Centro Panamericano Panamericano de Fiebre Aftosa. Temas seleccionados sobre
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