Pract. # 4 Inoculacion Virus en Huevo Embrionado

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO PRACTICA Nro. …. CULTIVO DE VIRUS EN

HUEVO EMBRIONADO MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA II

ANTECEDENTES En la década del 50, el hospedador estándar para par a cultivo de muchos virus fue el huevo embrionado de gallina. A pesar que actualmente esta técnica ha sido sustituida por cultivos celulares, continua usándose para aislamiento y producción de vacunas

SISTEMAS VIVOS Cultivo celular Huevos embrionados Animales -EFECTOS Efecto citopatico ECP Enfermedad/muerte Hemoaglutinacion

Métodos de propagación Huevos embrionados • Este sistema se usa para propagación viral con fines diagnósticos y de investigación. • Para fines diagnósticos la inoculación de animales es un medio para detectar virus en muestras clínicas, como el virus de la rabia en ratones lactantes. • Actualmente el uso de animales experimentales como hospederos para propagación viral está limitado por razones éticas.

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La membrana coreoalantoidea y el saco amniotico son sustratos adecuados y sensibles para el crecimiento de muchos poxvirus, virus de la influenza. El alantoides permite obtener rendimientos elevados del virus de la influenza y newcastle.

ALGUNOS EJEMPLOS DE CULTIVO DE VIRUS EN HUEVOS EMBRIONADOS VIA DE INOCULACION

VIRUS

SIGNOS DE CRECIMIENTO

Saco vitelino

Virus de la bronquitis V. de la encefalomielitis

Enanismo del embrión Encefalitis

Membrana coreoalantoidea

Ortopoxvirus

Pústulas

Amniotica

Virus influenza

Hemoaglutinación

Alantoidea

Virus influenza V. Del Newcastle

Hemoaglutinación

Intravenosa

V. De la lengua azul

Muerte del embrión

OBJETIVOS Familiarizar al estudiante con las técnicas de inoculación de agentes virales en huevos embrionados

MATERIALES: • • • • • • • • •

Huevos embrionados de 6 a 11 días Jeringa de tuberculina. Estufa. Incubadora Algodón. Cera o parafina Muestras de virus en dilución Mechero bunzen Ovoscopio casero

METODO DE INOCULACION DE LOS VIRUS • • • • • • • •

Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 días de incubación (verificar por transluminación) Ordene los huevos en el soporte, con la cámara de aire hacia arriba, rotular. Con algodón embebido de alcohol desinfectar Perfore con un punzón al centro de la cámara de aire. Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material a inocular de la dilución preparada. Con el huevo sobre la lampara, inserte la aguja en dirección del objetivo. Retire la aguja del huevo y selle el orificio con parafina u otro materia no toxico. Incube los huevos inoculados a 33 ºC por tres días.

1.-Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 días de incubación (verificar por transluminación)

2.- Ordene los huevos en el soporte, con la cámara de aire hacia arriba, rotular.

Con algodón embebido de alcohol desinfectar Perfore con un punzón al centro de la cámara de aire .

- Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material a inocular de la dilución preparada. - Con el huevo sobre la lampara, inserte la aguja en dirección del objetivo.

7.1.- Miraje durante la incubación: 1. Ninguna señal de desarrollo = huevo no fértil. 2. Fértil con vasos sanguíneos. 3. Mancha roja o negra = muerto precozmente. 4. Embrión con anillo rojo = muerto precozmente. 5. Embrión vivo con el pico en la cámara de aire = eclosión dentro de 48 horas. 6. Evolución normal de la cámara de aire en función de los días de incubación