I.
Introducción
Los carbohidratos incluyen los azucares y sustancias relacionadas, simples y complejas, naturales y sintéticas, y constituyen el tipo de compuestos más ampliamente distribuido en la naturaleza. El nombre de carbohidrato es muy antiguo y debe su origen a la obse ob serv rvac ació iónn de qu quee mu much chos os co comp mpue uest stos os de es esta ta cl clas ase, e, in incl cluy uyen endo do lo loss tre tress má máss abundantes
glucosa,sacarosaycelulosa.
La oxidación de los azucares ue concebida inicialmente como una herramienta para determinación estructural. Esta unción ha sido parcialmente superada, aunque no en su totali tot alida dad, d, por las téc técnic nicas as esp espect ectros roscóp cópica icas. s.
La esp espect ectro rooto otome metr!a tr!a de abs absorc orción ión
ultravioleta"visible ue uno de los primeros métodos !sicos que se aplicó al análisis cuantitativo y a la determinación de estructuras, sin embargo, la escasa ormación cualita cua litativ tivaa que pro propor porcio ciona na la es espec pectro troot otome ometr!a tr!a #$ #$"$ "$is is imp impide ide la res resolu olució ciónn simultánea, de manera sencilla, de mezclas de componentes con espectros solapados.
II.
Marco teórico
Determinación de la glucosa por métodos espectroscópicos Los métodos espectroscópicos de análisis se basan en la medida de la radiación electromagnética emitida o absorbida por la materia. Los métodos de emisión utilizan la radiación emitida cuando un soluto es excitado por energ!a térmica, eléctrica o energ!a radiante. Los métodos de absorción, por el contrario, están basados en la diminución de la potencia %o atenuación& de la radiación ' electromagnética como consecuencia de la absorción que se produce en su interacción con el soluto. Los métodos espectroscópicos se consideran como una de las mejores y más atizadas técnicas instrumentales a disposición del cient!ico, para la adquisición de inormación tanto cuantitativa como cualitativa. Los métodos espectroscópicos se clasiican seg(n la región del espectro electromagnético que esté implicada) siendo las más importantes las regiones de rayos x) ultravioleta, visible, inrarroja, microondas y radiorecuencia. Método químico:
La o"toluidina se condensa inicialmente con el grupo aldeh!do de la glucosa para ormar una mezcla en equilibrio de la glucosamina y la base de schi correspondiente. Las reacciones que tienen lugar después de la condensación original producen una mezcla de cromógenos verdes con una longitud de onda anal!tica a *+nm.
III. parte experimental
Objetivos:
• •
-eterminar el método qu!mico o"toluidina a través de la espectroscopia. -eterminar la curva de calibración absorbancia vs concentración de glucosa para los complejos glucosa"reactivo de antrona.
Materiales:
ubos de ensa!os
beaker
tripode
Reactivos Rejilla/cido de metal sul(rico • • • •
Pin#as de madera
0iourea 1ntrona 2lucosa
Procedimiento 3. 4reparar una muestra problema
Mec"ero
$. %levar a una &ola con $' ml de muestra patron adicionando (' ml de agua destilada
+. Luego adicionar 5ml de antrona" sul(rico y llevar a ba6o maria
I).
Resultados: Las absorbancias de cada tubo de ensayo son 4rimer tubo de ensayo +.+ 7egundo tubo de ensayo +.38 0ercer tubo de ensayo +.+3 9uarto tubo de ensayo 5.88
:uinto tubo de ensayo +.3* 7e muestra la curva de calibración de las soluciones del •
).
•
complejo. El coeiciente de absorción se obtiene a partir de la pendiente
•
de la recta de ajuste por m!nimo cuadrado. 1l calibrar el equipo la absorbancia nos dio 3 pero debió ser
*onclusiones •
•
•
7e determinó el coeiciente de absorción para complejo glucosa" antrona a *5nm 1 dierencia de la espectroscopia convencional, en la cual se requiere construir una curva de calibración, en un método oto ac(stico se requiere una solución estándar. Los valores obtenidos son casi precisos, mostrando la conveniencia del método espectroscópico, en la cuantiicación de glucosa por el método de antrona.
Interpretación:
•
)I.
Luego de enriar se procedió a llevar a la oscuridad para evitar la desnaturalización por la luz.
*uestionario
3." -E79;<=1 L>7 ?@0>->7 :#E 7E #0
B9EB0;19 =<>LC2<9> Ej. muestra sangu!nea Método cualitativo: tiras colorimétricas
La glucosa puede ensayarse cualitativamente con el uso de tiras colorimétricas. Este test usa glucosa oxidasa que cataliza la oxidación de d"glucosa a ácido gluconico con ormación de h5o5. En presencia de la enzima oxidasa el h5o5 generado, oxida un cromógeno %orto"dianicidina& produciendo cambio de color, que indica la presencia de
glucosa. Este método es espec!ico para la glucosa y la detecta cuando su concentración esta sobre rango normal. Método cuantitativo Método químico: o-toluidina
La o"toluidina se condensa inicialmente con el grupo aldeh!do de la glucosa para ormar una mezcla en equilibrio de la glucosilamina y la base de schi correspondiente las reacciones que tienen lugar después de la condensación original producen una mezcla de cromógenos verdes con una longitud de onda anal!tica a *+nm •
Método enzimático: trinder-100 (sigma)
El método enzimático se basa en la especiicidad de la enzima glucosa oxidasa %god& por la b"d"glucosa. La enzima cataliza la oxidación de la glucosa por oxigeno molecular dando el d"gluconato y peróxido de hidrogeno %h5o5, agua oxigenada&. 4ara detectar y cuantiicar esta oxidación se ocupa una reacción acoplada.
5." 2;1D<91; L>7 ;E7#L01->7 >=0EB<->7 EB L1 4;/90<91 -E -E0E;?71 4>; ?@0>->7 E74E90;>79C4<9>7.
)II.
+ibliogra,-a
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-isponibleenhttpsFFF.medicionespectrscopicosdelcoeicientedeabsorcion,a, *5nm,paracomplejosglucosa"reactivodeantrona. 1cceso. 5G de enero 53*.
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-isponible en httpsFFF.metodoespectroscopicoyotoacustico. 1cceso. 5G de enero 53*.
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-isponible en httpsFFF.metodosparamuestradeglucosa" biologicaenelorganismo. 1cceso. 5G de enero 53*.
