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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANO PUNO PRACTICA Nro. …. CULTIVO DE VIRUS EN
HUEVO EMBRIONADO MICROBIOLOGIA E INMUNOLOGIA II
ANTECEDENTES En la década del 50, el hospedador estándar para par a cultivo de muchos virus fue el huevo embrionado de gallina. A pesar que actualmente esta técnica ha sido sustituida por cultivos celulares, continua usándose para aislamiento y producción de vacunas
Métodos de propagación Huevos embrionados • Este sistema se usa para propagación viral con fines diagnósticos y de investigación. • Para fines diagnósticos la inoculación de animales es un medio para detectar virus en muestras clínicas, como el virus de la rabia en ratones lactantes. • Actualmente el uso de animales experimentales como hospederos para propagación viral está limitado por razones éticas.
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La membrana coreoalantoidea y el saco amniotico son sustratos adecuados y sensibles para el crecimiento de muchos poxvirus, virus de la influenza. El alantoides permite obtener rendimientos elevados del virus de la influenza y newcastle.
ALGUNOS EJEMPLOS DE CULTIVO DE VIRUS EN HUEVOS EMBRIONADOS VIA DE INOCULACION
VIRUS
SIGNOS DE CRECIMIENTO
Saco vitelino
Virus de la bronquitis V. de la encefalomielitis
Enanismo del embrión Encefalitis
Membrana coreoalantoidea
Ortopoxvirus
Pústulas
Amniotica
Virus influenza
Hemoaglutinación
Alantoidea
Virus influenza V. Del Newcastle
Hemoaglutinación
Intravenosa
V. De la lengua azul
Muerte del embrión
OBJETIVOS Familiarizar al estudiante con las técnicas de inoculación de agentes virales en huevos embrionados
MATERIALES: • • • • • • • • •
Huevos embrionados de 6 a 11 días Jeringa de tuberculina. Estufa. Incubadora Algodón. Cera o parafina Muestras de virus en dilución Mechero bunzen Ovoscopio casero
METODO DE INOCULACION DE LOS VIRUS • • • • • • • •
Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 días de incubación (verificar por transluminación) Ordene los huevos en el soporte, con la cámara de aire hacia arriba, rotular. Con algodón embebido de alcohol desinfectar Perfore con un punzón al centro de la cámara de aire. Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material a inocular de la dilución preparada. Con el huevo sobre la lampara, inserte la aguja en dirección del objetivo. Retire la aguja del huevo y selle el orificio con parafina u otro materia no toxico. Incube los huevos inoculados a 33 ºC por tres días.
1.-Seleccione los huevos embrionados de 6 a 11 días de incubación (verificar por transluminación)
2.- Ordene los huevos en el soporte, con la cámara de aire hacia arriba, rotular.
Con algodón embebido de alcohol desinfectar Perfore con un punzón al centro de la cámara de aire .
- Con una jeringa de 1 ml. Cargue el material a inocular de la dilución preparada. - Con el huevo sobre la lampara, inserte la aguja en dirección del objetivo.
7.1.- Miraje durante la incubación: 1. Ninguna señal de desarrollo = huevo no fértil. 2. Fértil con vasos sanguíneos. 3. Mancha roja o negra = muerto precozmente. 4. Embrión con anillo rojo = muerto precozmente. 5. Embrión vivo con el pico en la cámara de aire = eclosión dentro de 48 horas. 6. Evolución normal de la cámara de aire en función de los días de incubación