Practica huevo embrionado

UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE MEDICINA HUMANA ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE TECNOLOGÍA MÉDICA

PRACTICA Nº 12: HUEVO EMBRIONADO, ANATOMIA Y VIAS DE INOCULACION. 1. Introducción Muchos de los virus y rickettsias patógenas para el hombre y los animales pueden propagarse en células vivas.

2. Huevo Embrionado Los virus pueden propagarse en las membranas extraembrionarias o en el propio embrión. Anatómicamente el huevo embrionado de gallina presentan en su estructura las siguientes partes:

1.2.2a.3.4.5.6.7.8.9.-

Embrión Cavidad am amniótica Membrana amn amniótica Saco vitelino Albúmina Cavidad alantoidea Membrana corioalantoidea Membrana externa del huevo Cáscara Cámara de aire

2a

___________________________________________________________________________

1

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3. Vías de Inoculación Las vías de inoculación y la edad del embrión a usar, depende del virus que va a ser inoculado. Con el objeto de visualizar las cavidades se inoculará un colorante por vía alantoidea y otro por vía amniótica. También se inoculará por vía del saco de yema o saco vitelino

4. Materiales 4.1

Biológico

4.1.1 4.1.1

Huevo Huevos s embri embrion onado ados s de de 7 a 8 días días y de 10 a 12 12 días días

4.2

Material de vidrio

4.2.1

Placas de petri

4.3

Equipos e Instrumental

4.3. 4.3.1 1

Jeri Jering ngas as de tube tuberc rcul ulin ina a con con aguj aguja a

4.3.2

Ovoscopio

4.3.3

Pinzas de de di disección

4.3.4

Punzo nzones de acero

4.3 4.3.5

Soluc olució ión n fifisio siológi lógic ca

4.3.6

Tijeras cu curvas

4.4.

Soluciones y Colorantes

4.4.1

Alcohol yodado

4.4. 4.4.2 2

Azul Azul de meti metile leno no al 1 % en en agua agua desti destila lada da

4.4.3

Cinta adhesiva

4.4. 4.4.4 4

Fucs Fucsin ina a al al 1 % en en agu agua a des desti tila lada da

5.- Procedimiento 5.1 Inoculación por vía alantoidea 5.1.1

Determinar mediante el Ovoscopio en huevos embrionados de 10 a 12 días, el límite de la cámara de aire y colorear una marca entre los vasos sanguíneos

de

la

membrana

corioalantoidea,

aproximadamente a 1 cm. por debajo de la cámara de aire.

5.1.2

Cargar la jeringa con azul de metileno.

esta

estaría



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Introducir

la

aguja

de

jeringa

de

1ml.

cargada

con

fucsina

(aproximadamente ¼ de la aguja) en un ángulo de 45 grados, e inocular 0,2 ml del colorante. 5.1.6

Cortar con tijeras la cáscara siguiendo la marca que señala la cámara de aire, levantar la membrana corioalantoidea y observar el líquido alantoideo coloreado, el cual se elimina vertiéndolo en un petri con cuidado

5.2

Inoculación por vía amniótica

5.2.1 Determinar mediante el Ovoscopio en huevos embrionados de 10 a 12 días, el límite de la cámara de aire y colorear una marca entre los vasos sanguíneos de la membr membrana ana corioa corioalan lantoi toidea dea,, esta esta estar estaría ía aprox aproxima imadam damen ente te a 1 cm. por por debajo de la cámara de aire.

5.2.2 Cargar la jeringa con fucsina 5.2.3 Desinfectar la cáscara con alcohol yodado sobre la cámara de aire por encima del embrión.

5.2.4 Realizar una perforación rectangular rectangular de 0,5 cm 2 5.2.5 Dejar caer una gota de solución fisiológica estéril 5.2.6 Introducir con unas pinzas curvas a través de ésta área dentro de la cavidad alantoidea cogiendo al membrana amniótica hacia arriba, formar una pequeña “tienda” en cuya base se inyecta 0,2 ml de un colorante o del inóculo problema

5.2.7 Tapar la abertura con cinta adhesiva

5.3 Cosecha 5.3.1

Cortar con las tijeras la cáscara a nivel del límite de la cámara de aire.

5.3.2

Descargar el líquido alantoideo,

5.3.3

Extraer con pipeta Pasteur el líquido amniótico.

5.3.4

En caso de no haber líquido, hacer un lavado con suero fisiológico estéril (1mL) y luego se colecta este líquido




ESQUEMAS DE LAS VIAS DE INOCULACION

En Cavidad Alantoidea

(5)

En Cavidad Amniótica (2)

Practica huevo embrionado

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