plaqueo ambiental labo

Universidad Nacional Del Callao

Facultad de Ingeniería Química

I. INTRODUCCIÓN La atmósfera no tiene una microbiota autóctona pero es un medio para la dispersión de muchos tipos de microorganismos (esporas, bacterias, virus y hongos), procedentes de otros ambientes. Algunos han creado adaptaciones especializadas que favorecen su supervivencia y permanencia. Los microorganismos dispersados por el aire tienen una gran importancia biológica y económica. Producen enfermedades en plantas, animales y humanos, causan alteración de alimentos y materiales orgánicos y contribuyen al deterioro y corrosión de monumentos y metales. La Microbiología del aire comienza en el siglo XIX, con Pasteur y Miquel que diseñaron métodos para estudiar los microorganismos en el aire y descubrir la causa de algunas enfermedades. Desde entonces numerosos investigadores han trabajado en este campo tanto en el aire exterior como en recintos cerrados. Las enfermedades transmitidas por el aire, producidas por bacterias, virus y hongos, son las respiratorias (neumonía, tosferina, tuberculosis, legionelosis, resfriado, gripe), sistémicas (meningitis, sarampión, varicela, micosis) y alérgicas.

LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

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II. OBJETIVOS

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Determinar y evaluar la calidad del ambiente del laboratorio, si se encuentra dentro del rango de límites máximos permisibles, tomando como referencia la norma R.M 461 - 2007 MINSA. Observar la presencia de microorganismos en el aire mediante un método cualitativo (Agar Plate Count). Realizar adecuadamente mediante el método de cuenta en placa, el número de aerobios mesófilos viables presentes en el aire.


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III. FUNDAMENTO TEORICO 1.- AEROBIOS MESÓFILOS Definición: Bacterias mesofólicas son las Bacteria que descompone la materia orgánica a temperaturas que oscilan entre 30 y 40 C. Bacteria que descompone la materia orgánica a temperaturas que oscilan entre 30 y 40 C. El agua es utilizada como medio de eliminación de excretas y otros desechos; puede también contener microorganismos patógenos de asiento no intestinales (flora de la piel por ejemplo); estos son los llamadas bacterias mesofólicas.

BACTERIAS AEROBIAS MESÓFILOS: Características -Se multiplican en aerobiosis -Temperatura de incubación entre los 20 y los 37°C -Pueden ser patógenas o saprofitas -Recuentos altos en alimentos estables a menudo indican materias primas contaminadas o tratamientos no satisfactorios desde el punto de vista sanitario. -En los productos perecederos pueden indicar también condiciones inadecuadas de tiempo/temperatura durante su almacenamiento. -La presencia de un número elevado de bacterias aerobias mesófilos que crecen bien a temperatura corporal o próxima a ella, significa que puede haberse dado condiciones favorables a la multiplicación de los microorganismos patógenos de origen humano o animal. -Todas las Bacterias patógenas conocidas vehiculadas por los alimentos son mesófilos y en algunos casos contribuyen con su presencia a los recuentos en placa encontrados.


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DESARROLLO HISTÓRICO DE LA MICROBIOLOGÍA DEL AIRE

La existencia de una multitud de corpúsculos en el aire fue observada desde la antigüedad. Lucretius (55 a.C.) observó las partículas de polvo brillando en un rayo de sol en una habitación oscura y concluyó que su movimiento se debía al bombardeo de innumerables e invisibles átomos en el aire, aunque fue necesario esperar al descubrimiento del microscopio para ver que en el aire había microorganismos vivos. Las esporas de los hongos fueron vistas por un botánico napolitano, Valerius Cordus, en el siglo XVI, pero fue Micheli (1679-1737) quien primero las dibujó observando las esporas de los mohos que se transmitían por el aire (Miquel y Cambert, 1901). Leeuwenhoek (1722) observa y describe por primera vez las bacterias en distintos ambientes y supone que «estos animálculos pueden ser transportados por el viento mediante el polvo que flota en el aire». Un siglo después, Ehrenberg, en sus numerosas memorias publicadas de 1822 a 1858, demostró que tanto las partículas atmosféricas del interior de las casas y hospitales como las del aire exterior de elevadas montañas estaban compuestas de esporas criptogámicas. En esta misma época en Francia, Gaultier de Claubry (1855), inaugura la investigación científica estudiando las partículas atmosféricas mediante un procedimiento que las retiene haciendo borbotear el aire en agua destilada. Pero fue Pasteur el que perfeccionó los procedimientos empleados por este investigador y realizó los primeros estudios precisos de las bacterias del aire, cuando demostró la no existencia de la generación espontánea. El método utilizado consistió en hacer pasar un volumen determinado de aire con ayuda de un aspirador por algodónpólvora colocado en un tubo de vidrio, que posteriormente se disolvía en alcoholéter.


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ORIGEN DE LOS MICROORGANISMOS

En el aire hay microorganismos, aunque no se puede asegurar que existe un verdadero «aeroplankton» que viven, se alimentan y se reproducen permanentemente en él. Muchos microorganismos que viven en la hidrosfera y litosfera pueden encontrarse en el aire. Son microbios alóctonos, procedentes del suelo, agua y seres vivos que pueblan estos ambientes. Los movimientos del aire y de los seres vivos son los que sitúan a los microorganismos en la atmósfera. Junto al suelo hay una capa laminar de aire que impide el fácil paso de microorganismos del suelo al aire. Para que pasen se necesita una fuerte corriente de aire que levante polvo del suelo o agua de sus depósitos (mares, ríos...). También las plantas los lanzan en sus movimientos de dehiscencia y diseminación (polen, esporas...) y los animales en los actos respiratorios normales y anormales (estornudos, gotas de Pflügge...). A menudo, tanto las esporas como los microorganismos vegetativos entran en la atmósfera como bioaerosoles, que pueden formarse por muchas causas: lluvia, movimiento del agua en los ríos y mar, tratamiento de aguas residuales, aspersores de riego, aire acondicionado o secreciones respiratorias del hombre y de los animales. Ésta última es muy importante en la dispersión de bacterias patógenas y virus animales. Los microorganismos también pueden encontrarse en el aire sobre partículas de polvo o en el suelo (Atlas y Bartha, 2002).


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TIPOS DE MICROORGANISMOS

El aire contiene en suspensión diferentes tipos de microorganismos, especialmente bacterias y hongos. La presencia de uno u otro tipo depende del origen, de la dirección e intensidad de las corrientes de aire y de la supervivencia del microorganismo. Algunos microorganismos se encuentran en forma de células vegetativas, pero lo más frecuente son las formas esporuladas, ya que las esporas son metabólicamente menos activas y sobreviven mejor en la atmósfera porque soportan la desecación. Las producen hongos, algas, líquenes, algunos protozoos y algunas bacterias. En el aire se aíslan frecuentemente bacterias esporuladas de los géneros Bacillus, Clostridium y Actinomicetos (Underwood, 1992). Entre las bacterias también son muy frecuentes los bacilos pleomórficos Gram positivos (Corynebacterium) y los cocos Gram positivos (Micrococcus y Staphylococcus). Los bacilos Gram negativos (Flavobacterium, Alcaligenes) se encuentran en menor proporción y disminuyen con la altura (Gregory, 1973; Pelczar et al., 1993). Cladosporium es el hongo que predomina en el aire, tanto sobre la tierra como sobre el mar, aunque también es frecuente encontrar otros mohos, como Aspergillus, Penicillium, Alternaria y Mucor (Takahashi, 1997) y la levadura Rhodotorula (Underwood, 1992). Los virus también pueden encontrarse en el aire y ser transportados por él. Numerosos virus humanos (Orto y Paramixovirus, Poxvirus, Picornavirus) se transmiten por vía respiratoria, principalmente en ambientes cerrados, y pueden formarse bioaerosoles de virus entéricos en las plantas de tratamiento de aguas residuales. Por otro lado, pueden encontrarse virus de vegetales en aerosoles procedentes de plantas infectadas. Se han descrito numerosos géneros de algas aisladas del aire procedentes del suelo y de lagos eutróficos. Así mismo, amebas de vida libre como Naegleria y Acanthamoeba pueden ser aerolizadas de forma natural (lagos, manantiales termales) o artificial (sistema de aire acondicionado o humidificadores) (Stetzenbach, 1997).


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NÚMERO Y DISTRIBUCIÓN DE MICROORGANISMOS

El número de microorganismos de la atmósfera cambia según la altura (10-104 por m3), obteniéndose el más alto junto al suelo, sobre todo en los dos metros inferiores, que constituyen el microclima del hombre, disminuyen hasta los 200 metros y luego se hacen más escasos hasta los 5.000 metros, su presencia es rara hasta el límite de la troposfera y no se encuentran en la estratosfera. El número de microorganismos del aire en las zonas pobladas depende de la actividad en esa zona, tanto industrial o agrícola, como de los seres vivos y la cantidad de polvo. El número de microorganismos es mayor en las zonas pobladas y después en el mar, cerca de las costas. En las zonas desérticas no hay más que lo que aportan los vientos de las zonas habitables próximas y en los casquetes polares no hay nada. En las zonas con clima seco, el aire contiene numerosos microorganismos y el número desciende después de la lluvia debido a que ésta los arrastra por lavado del aire. Hay variaciones estacionales en el número de microorganismos en la atmósfera. Los hongos son típicamente más abundantes en verano que en el resto del año, mientras que las bacterias son más abundantes en primavera y otoño debido a factores como la temperatura, humedad relativa del aire, exposición a la luz solar, etc... (Bovallius et al., 1978). 

PERMANENCIA

El tiempo que permanecen los microorganismos en el aire depende de la forma, tamaño y peso del microorganismo y de la existencia y potencia de las corrientes aéreas que los sostengan y los eleven. Son factores adversos los obstáculos, LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA

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que al oponerse a los vientos, disminuyen su velocidad y su potencia de arrastre, y las precipitaciones, que arrastran al suelo las partículas suspendidas. La sedimentación de los microorganismos por gravedad sólo es importante en el aire en calma. Generalmente, hay demasiadas turbulencias para que esto suceda, excepto en zonas de vegetación densa, donde la velocidad del viento disminuye, o en condiciones estables durante la noche, cuando la capa laminar limitante alcanza varios metros de altura.


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IV. MARCO EXPERIMENTAL 1. MATERIALES Y EQUIPOS MECHERO DE BUNSEN

TERMÓMETRO

PICETA

PLACA PETRI

MUESTRA

LEJIA

MEDIO AMBIENTE DEL LABORATORIO

AGAR PLATE COUNT


PROBETA

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2. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL 1. Fundir el medio de cultivo Agar Plate Count. Colocamos el Agar Plate Count en un vaso de precipitado con agua de 250ml y lo sometemos a calor hasta fundirlo (temperatura de 50° C A 60°C).

2. Colocar en la placa de 10-15 ml del medio de cultivo y dejar enfriar hasta que este frio, evitar que se contamine durante el enfriamiento en todo momento debe permanecer tapado.

3. Ubicar el lugar donde se realizará el plaqueo y de acuerdo al tipo de bacteria a identificar colocar las placas y el tiempo necesario para aerobios Mesófilos, mohos y levaduras. Dejar 15 minutos expuesta al ambiente y luego cerrar. En nuestro caso, fue en el área donde se hallaban paltas en descomposición.


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4. Identificar la placa y colocarlo en la incubadora para el crecimiento durante 24-72 horas a 37°C. 5. Después sacamos nuestra muestra de la incubadora y contamos colonias.

6. Una vez terminado el conteo, realizamos la asepsia de nuestra placa Petri, metemos dicha placa en una bolsa ziplot y posteriormente en un baño maría, aproximadamente 15 min a unos 80°C, esto hará que el contenido de la placa se diluya, se deposite en la bolsa ziplot y podamos desecharlo. Lavamos la placa Petri con lejía.


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V. DISCUSIÓN DE RESULTADOS En nuestro caso solo encontramos 105 colonias. 105 /15

El resultado obtenido en el conteo nos indicó que el laboratorio de microbiología, al menos la parte en la cual se expuso las muestras (lugar donde se encuentran las paltas) un área no apta para realizar actividades.

-INFORME DE ENSAYO

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Análisis

:

Plaqueo ambiental

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Lugar

:

Laboratorio de microbiología (FIQ - UNAC)

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Fecha de Muestreo

:

09/10/2017

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Fecha de Ejecución

:

09/10/2017

-RESULTADOS OBTENIDOS Microorganismo Crecimiento

Aerobios

Color

Satisfactorio Crema

Resultado(UFC/min)

105 UFC/15min

mesófilos


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RESULTADOS EN EL LABORATORIO

ENSAYO/

LABORATORIO

MANIPULADOR

DE

LIMITE

FORMA DE LA COLONIA

MAXIMO MICROBIOLOGIA PERMISIBLE

Aerobios Mesofilos

Colonias filamentosas 105 UFC/15min


15UFC/15min

Colonias circulares

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VI. CONCLUSIONES 

El número de colonias de Aerobios Mesofilos, Mohos y Levaduras en la placa petri fue 105 ufc/15min.

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Comparando los resultados con el LMP que es de 15UFC/15min se puede decir que nuestra muestra: Laboratorio de microbiología. Es un área no apta para realizar prácticas y actividades, ya que el resultado no está dentro del LMP.

VII. RECOMENDACIONES 

Controlar correctamente el tiempo de exposición de la placa al ambiente (15minutos), ya que este es un factor influyente en los resultados.

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Mantener una limpieza adecuada tanto en las superficies de trabajo como en los utensilios que hay que emplear.

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No sacarnos en ningún momento ningún implemento personal porque podríamos contaminar la muestra a tratar.


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VIII. ANEXO CUESTIONARIO 1. ¿Cuáles son los microorganismos patógenos que se encuentran en ambientes donde se preparan alimentos? Las bacterias son los patógenos más habituales en los alimentos, aunque no son los únicos. Virus, mohos y levaduras también suelen frecuentar los alimentos. Las bacterias pueden causar al consumidor infección e intoxicación, son dos consecuencias diferentes. La infección se produce por la ingesta de alimentos contaminados con bacterias vivas que entran en el huésped y provocan la enfermedad. La intoxicación, en cambio, aparece cuando se ingieren alimentos que antes se han contaminado con bacterias que producen toxinas, y estas últimas son las que causan la enfermedad. Sin embargo, el denominador común de todas ellas son los síntomas gastrointestinales que producen: dolor abdominal, nauseas, vómitos, diarreas, calambres, fiebre, etc. Entre las más habituales son las siguientes: -Salmonella -E. coli -Listeria monocytogenes -Campylobacter jejuni -Staphylococcus aureus -Shigella -Yersinia enterocolítica


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2. ¿Cuáles son los LMP de los microorganismos que se encuentran presentes en ambiente de trabajo en EEUU y la Comunidad Europea? Diferentes organizaciones internacionales como la OMS y el CIBC (International Council of Building Research), privadas como la ASHRAE (American Society of Heating Refrigerating and Air Conditioning Engineers), y algunos países como Suecia (The Swedish Council of Building Research), Estados Unidos, Canadá y Australia han desarrollado guías y estandards de exposición. Referencias de la necesidad de renovar el aire de ambientes cerrados con aire fresco se conocen ya desde mediados del siglo XVIII recomendándose aportaciones de aire fresco mínimas, por ocupante, para diluir las concentraciones de bioefluentes humanos y evitar las molestias debidas a malos olores. En los años 70, ASHRAE publica diversos trabajos recomendando una aportación de aire fresco mínima de 34 m3/h por persona para evitar los malos olores y un mínimo absoluto de 8.5 m3/h por persona para mantener la concentración de dióxido de carbono por debajo de 2500 ppm, que es la mitad del límite de exposición promedio permisible en un ambiente laboral. En el más reciente ASHRAE Standard 62-1989 se recomienda un mínimo de 25.5 m3/h por persona para aulas de clase, 34 m3/h para oficinas y 42.5 m3/h para hospitales (zona de enfermos). Este estándar recomienda también aumentar dichos volúmenes cuando hay problemas de mezcla del aire en la zona de respiración o fuentes inhabituales de contaminación. Por otro lado, no hay que olvidar que la finalidad primaria de un sistema de aire acondicionado en un edificio de oficinas es proporcionar un buen nivel de confort térmico. Según ASHRAE 55-1981, la temperatura interior debe mantenerse entre 20 y 24 ºC en invierno y entre 23 y 26 ºC en verano. Este estándar no especifica la humedad relativa, que se considera que debe estar entre el 20 y el 60% (preferiblemente del 30 al 50%). En la Tabla 3 se presentan los valores indicados en la Ordenanza General de Seguridad e Higiene en el Trabajo.


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