PENETAPAN HCG DENGAN TEKNIK IMUNOKROMATOGRAFI
Oleh : Nama NIM Rombongan Kelompok
: : : :
Rani Wulandari B1J011010 IV 3
LAPORAN PRAKTIKUM IMUNOLOGI
KEMENTERIAN PENDIDIKAN DAN KEBUDAYAAN UNIVERSITAS JENDERAL SOEDIRMAN FAKULTAS BIOLOGI PURWOKERTO 2013
I.
PENDAHULUAN
A. Latar Belakang
HCG adalah hormon yang mendukung perkembangan telur dalam ovarium dan merangsang telur dalam pelepasan telur dalam ovulasi. Hormon HCG tersusun atas glikoprotein yang dihasilkan oleh protoblast dan bakal plasenta. Pembentukan HCG maksimal pada 60-90 hari, kemudian turun ke kadar rendah yang menetap selama kehamilan. Kadar HCG yang terus menerus rendah berkaitan dengan gangguan perkembangan plasenta atau kehamilan. Kadar HCG memiliki struktur yang sangat mirip dengan yang bekerja pada reseptor LH sehingga usia korpus luteum memanjang. HCG mula-mula di produksi oleh sel lapisan
luar
blastokista.
Sel
ini
berdiferensiasi
menjadi
sel
tropoblast,
sinsitiotropoblast yang berkembang dari tropoblast, terus menghasilkan HCG yang disekresikan dan dapat dideteksi disekresi vagina sebelum inplantasi. biasanya HCG dapat dideteksi di darah ibu 8-10 8-10 minggu (Frandson, 1993). Penggunaan strip HCG urine test merupakan suatu metode imunoassay untuk memastikan secara kualitatif adanya Human Chorionic Gonadotropin (HCG) didalam urine sebagai deteksi dini adanya kehamilan. Human kehamilan. Human Chorionic Gonadotropin Gonadotropin merupakan sebuah hormon glikopeptida yang dihasilkan oleh plasenta selama kehamilan. Adanya Adan ya HCG dan peningkatan konsentrasinya secara cepat didalam urin ibu membuatnya sebagai penanda untuk memastikan kehamilan (Prawirohardjo, 1976). Alat uji kehamilan untuk dipakai di rumah (home pregnancy test, HPT) yang biasa dikenal dengan test pack merupakan alat praktis yang cukup akurat untuk mendeteksi kehamilan pada tahap awal yang menggunakan urine. Urine yang digunakan yaitu air seni pertama setelah bangun pagi, karena konsentrasi hormon HCG tinggi pada saat itu. Bentuk alat tes kehamilan (test pack) ada dua macam, yaitu strip dan compact. Bedanya, bentuk strip harus dicelupkan ke urine yang telah ditampung atau disentuhkan pada urine waktu buang air kecil sedangkan compact sudah ada tempat untuk menampung urine yang akan diteteskan. Test slide ini sangat tergantung pada kerja sama antibodi dan antigen. Antibodi ini zat kimia yang dihasilkan oleh limfosit dan struktur lain di dalam
tubuh. Sedangkan antigen, zat asing yang masuk dan merangsang reaksi kimia tubuh. Jika antigen masuk ke dalam jaringan tubuh, antibodi bereaksi sehingga antigen tidak berbahaya lagi. Tiap antibodi hanya bereaksi terhadap antigen tertentu. Antibodi-antibodi Antibodi-antibodi itulah yang “ditambatkan” pada media test, tes t, yang mempunyai dua strip (garis) indikator (Pearce, 1997). B. Tujuan
Praktikum ini bertujuan untuk mengetahui penetapan HCG dengan menggunakan teknik imunokromatografi melalui test kehamilan.
C. Tinjauan Pustaka
Hormon kehamilan ini hanya ditemukan pada tubuh seorang wanita hamil yang dibuat oleh embrio segera setelah pembuahan dan karena pertumbuhan jaringan plasenta. plasenta. Hormon kehamilan yang dihasilkan oleh villi choriales choriales ini berdampak pada meningkatnya produksi progesteron oleh indung telur sehingga menekan menstruasi dan menjaga kehamilan. Produksi HCG akan meningkat hingga sekitar hari ke 70 dan akan menurun selama sisa kehamilan. Hormon kehamilan HCG mungkin mempunyai fungsi tambahan, sebagai contoh diperkirakan HCG mempengaruhi toleransi imunitas pada kehamilan. Hormon ini merupakan indikator yang dideteksi oleh alat oleh alat test kehamilan yang melalui air seni. Jika, alat test kehamilan mendeteksi adanya peningkatan kadar hormon HCG dalam urin, maka alat test kehamilan akan mengindikasikan sebagai sebaga i terjadinya kehamilan atau hasil test positif. Dampak kadar HCG yang tinggi dalam darah menyebabkan mual-muntah (morning sickness) sickness) (Johnson, 1994). Pengumpulan dan penyimpanan urin sebaiknya menggunakan urin pagi hari karena berisi konsentrasi HCG yang paling tinggi sehingga baik untuk pemeriksaan sampel urin. Meskipun demikian, urin sewaktu dapat juga digunakan. Urin spesimen dikumpulkan pada gelas atau penampung plastik yang bersih. Jika spesimen tidak digunakan segera maka harus disi mpan pada suhu 2-8o C dan letakkan pada suhu temperatur sebelum digunakan, tetapi penyimpanan ini tidak boleh lebih dari 48 jam (Vitthala, 2012).
Tingkat sekresi HCG meningkat dengan cepat selama kehamilan awal untuk menyelamatkan korpus luteum dari kematian. Sekresi puncak HCG berlangsung sekitar 60 hari setelah periode haid hai d terakhir. Pada minggu kesepuluh kehamilan, pengeluaran HCG menurun sehingga tingkat tingkat sekresinya rendah yang kemudian dipertahankan dipertahankan selama kehamilan. Turunnya HCG terjadi pada saat korpus luteum tidak lagi diperlukan untuk menghasilkan hormon-hormon steroid karena plasenta sudah mulai mengeluarkan estrogen dan progesterone dalam jumlah bermakna. Korpus luteum kehamilan mengalami regresi parsial seiring dengan turunnya sekresi HCG (Saifuddin, 2002).
II.
MATERI DAN METODE
A. Materi
Alat dan bahan yang digunakan dalam praktikum Penetapan HCG dengan Teknik Imunokromatografi adalah tempat urin (botol film), sampel urin wanita hamil muda, sampel urin wanita normal (tidak hamil), test strip strip Acon (antigen HCG) dan tissue.
B. Metode
Metode yang dilakukan dalam praktikum ini adalah sebagai berikut : 1.
Urin dituang pada botol film
2.
Test pack dibuka, kemudian dicelupkan ke dalam botol film yang berisi urin
3.
Hasil dibaca setelah 5 menit dan disimpulkan
III.
HASIL DAN PEMBAHASAN
A. Hasil
Gambar 1. Test Pack (+)
Gambar 2. Test Pack (-)
Tabel 1. Hasil Pengamatan Pengamatan Test Pack Kelompok
Postif
1 2
Negatif
3
4
5
B. Pembahasan
Berdasarkan hasil praktikum didapatkan hasil bahwa urin yang dipakai kelompok 3 merupakan urin wanita yang tidak hamil. Hal ini ditandai dengan garis merah yang hanya terdapat 1 strip saja. Sesuai dengan pernyataan George (2008) strip HCG urin adalah tes menggunakan metode imunoassay kromatografi dimana menggunakan antibodi spesifik untuk secara selektif mengidentifikasi adanya HCG didalam didalam urin dengan derajat sensitivitas yang tinggi. tinggi. Peningkatan level HCG sebesar 20 mIU/ml dapat dideteksi hanya dalam 3 menit. Prinsip dari test ini adalah penambahan urin ke peralatan test dan membiarkannya berjalan di sepanjang absorban. Penanda antibodi yang menafsirkan warna melekat ke HCG pada daerah tes dan menghasilkan pita berwarna merah ketika konsentrasi HCG sama dengan atau lebih dari 20 mIU/ml. Saat keadaan tidak adanya hormon HCG, maka tidak akan terbentuk pita di daerah test. Reaksi pencampuran berlanjut di sepanjang absorban melewati daerah test dan kontrol. Konjugasi yang tidak berikatan ke reagen rea gen pada daerah kontrol menghasilkan pita berwarna merah, yang menunjukkan bahwa reagen dan peralatan masih berfungsi secara baik. Human Chorinic Gonadotropin (HCG) adalah suatau glikoprotein yang mengandung galaktosa dan heksosamin. Kadar HCG meningkat dalam darah dan urine segera setelah implantasi ovum yang sudah dibuahi. Dengan demikian ditemukannya HCG merupakan dasar bagi banyak tes kehamilan (Murray et al , 1999). Test kehamilan menggunakan urine, karena dalam wanita hamil mengadung HCG (Human Chorionic Gonadotropin). HCG yaitu suatau hormon glikoprotein yang mempertahankan sistem reproduksi wanita dalam keadaan cocok untuk kehamilan. HCG di sintesis pada retikulum endoplasma kasar, glikosilasi disempurnakan apparatus golgi (Shakuntala, 2012). HCG dapat juga digunakan dalam upaya mensinkronkan ovulasi dan perkawianan yang diperlukan agar terjadi suatu konsepsi (Frandson,1993). Bila terdapat HCG dalam urin, HCG terikat pada antibodi dan dengan demikian akan mencegah aglutinasi partikel lateks yang dilapisi HCG yang diperlihatkan oleh antibodi tersebut. Dengan demikian uji kehamilan positif apabila tidak terjadi aglutinasi, dan kehamilan negatif jika terjadi aglutinasi (Pearce , 1997).
Adapun mekanisme kerja testpack yang lebih rinci adalah urin yang diperiksa akan bergerak dari zona yang satu ke zona yang lain, dimulai dari zona yang terdapat mobile anti HCG1. Anti HCG1 akan ikut terbawa oleh urin ke zona anti HCG2. Disinilah penentuan positif atau negatifnya suatu tes. Jika pada urin terdapat molekul HCG, maka molekul ini yang sebelumnya sudah berikatan dengan anti-HCG1 akan berikatan dengan anti-HCG 2 sehingga akan terbentuk warna atau garis pada strip ataupun kaset pemeriksaan. Jika pada urin tidak terdapat molekul HCG, maka anti-HCG 2 tidak akan terikat. Selanjutnya urin bergerak ke zona anti-anti HCG. Pada zona ini, baik urin yang mengandung molekul HCG maupun yang tidak, akan terbentuk warna ataupun garis. Hal ini dikarenakan anti-anti HCG berikatan dengan anti-HCG1 yang ikut terbawa oleh urin. Zona ini disebut control (Hanifa, 2005). Keuntungan immunoassay cara cepat menggunakan lateks pada lempeng kaca adalah lebih baik dan cepat, tidak perlu disentifugasi, spesifik kalau kandungan protein rendah (<50 mg/dl) dan tidak ada obat yang mempengaruhi ikatan lateks HCG kovalen. Sedangkan kerugiannya relatif tidak sensitif, angka kesalahan teknis tinggi (1,5-3,0 %) akibat pencampuran teknik yang tidak tepat dan hasil positif palsu yang kadang-kadang terjadi disebabkan oleh protein protein yang jelas (Speicher dan Smith, 1996). Ditambahkan oleh Greenspan dan Baxter (2000) keuntungan dari uji ini adalah murah, dijual bebas diapotek, tidak memerlukan waktu yang lama untuk menunjukkan hasilnya serta memberi hasil positif pada kehamilan yang sangat dini, sebelum Anda memutuskan pergi ke dokter, namun kelemahannya adalah, hasilnya akan rancau atau tidak falid jika ikatan yang sudah dikemas oleh pabrik tersebut rusak. Manfaat penetapan kadar HCG tidak hanya untuk wanita hamil. Dokter telah menghadapi pasien dengan titer HCG meningkat dalam 5 tahun terakhir. Biasanya dalam kisaran 500-100 mIU/mL setelah kehamilan muda. Kadangkadang ditemukan secara kebetulan titer HCG pada wanita yang tidak hamil. Selama periode diam, pasien yang tidak terdeteksi memiliki HCG-H tapi secara tiba-tiba kadar HCG naik secara signifikan. Sekitar 20% pasien ini menjadi relevan dan diketahui bahwa mereka mengidap tumor. Pasien yang memiliki kejadian abnormal ini biasanya melakukan pengobatan dengan kemotrapi atau
operasi. Pasien yang memiliki kejadian abnormal ini biasanya melakukan pengobatan dengan kemotrapi kemotrapi atau operasi (Hektan, et al ., ., 2012).
IV.
KESIMPULAN
Kesimpulan yang didapat dari hasil praktikum kali ini adalah: 1.
Hasil urin wanita yang positif hamil ditunjukkan dengan 2 garis merah yang menunjukkan kadar HCG lebih dari 50 LU/I dan hasil urin wanita yang negatif hamil ditunjukkan dengan 1 garis merah yang menunjukkan kadar HCG kurang dari 50 LU/I.
DAFTAR PUSTAKA
Frandson, R.D. 1993. Anatomi dan Fisiologi Ternak. Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. George Adriaans. 2008. 2008. Asuhan Antenatal, Jaringan Nasional Pelatihan Klinik Kesehatan Reproduksi. Bina Pustaka, Surabaya. Greenspan, F. S. dan J. D. Baxter. 2000. Endokrinologi Dasar Klinik. EGC, Jakarta. Hanifa,W dan Saifuddin,A.B. 2005. Ilmu Kebidanan Edisi 3. Yayasan Bina Pustaka Sarwono Prawirohardjo, Jakarta. Hextan Y.S. Ngana, Ernest I. Kohornb, Laurence A. Cole. 2012. Trophoblastic Disease. International Journal Of Gynecology And Obstetrics P. S130 – S130 – S136 S136 Johnson K. E. 1994. Hormon-Hormon Kehamilan. Binarupa Aksara, Jakarta. Murray, Robert K. et al. 1999 Biokimia Harper. ECG. Jakarta. Pearce, E. 1997. Anatomi dan Fisiologi untuk Paramedis. Gramedia Pustaka Utama, Jakarta. Prawirohardjo, S. 1976. Ilmu Kebidanan. Yayasan Bina Pustaka. Jakarta. Saifuddin. 2002. Ilmu Kebidanan. Yayasan Bina Pustaka Sarwono Prawiroharjo, Jakarta. Shakuntala Pn, Bafna Ud, Anbukkani S, Rajshekar K, Umaevi K. 2012. Risiko Tinggi Neoplasia Tropoblastik Gestasional Setelah Kehamilan Anggur. Departemen Ginekologi 3 (1) : 50-54. Speicher, C.E dan N.W. Smith. 1996. Pemilihan Uji Laboratorium yang Efektif EGC, Jakarta. Vitthala, S.,1 Jerome Bouaziz,2 Amanda Tozer,3 Ariel Zosmer,3 And Talha AlShawaf. 2012. Tingkat Fsh Serum Pada Program Meluncur Pada Hari Hcg Dan Hasil Klinis Mereka Di Ivf Icsi ± Cycles. Jurnal Endokrinologi P. 1-7.
