BAB I PENDAHULUAN
1.1 Latar Belakang Indonesia merupakan negara yang terkenal akan kekayaan alamnya, terutama keanekaragaman tumbuhan yang dapat dikembangkan sebagai salah satu sumber obat tradisional. Obat tradisional berasal dari alam, baik dari tumbuhan, hewan maupun bahan-bahan mineral. Disamping pelayanan kesehatan formal, pengobatan secara tradisional dan pemakaian obat tradisional masih banyak dilakukan oleh masyarakat Indonesia secara luas baik di daerah pedesaan maupun daerah perkotaan. Hal ini muncul sebagai akibat banyak dijumpainya efek samping yang tidak dikehendaki dari penggunaan obat kimia sintetis (Hargono, 1997). Selain itu penggunaan obat tradisional lebih menguntungkan karena dapat diperoleh secara mudah, harga yang relatif murah, dan pengolahan yang cukup sederhana. Agar pemakaian obat tradisional dapat dipertanggung-jawabkan, maka perlu dilakukan berbagai macam penelitian, seperti mencari komponen aktifnya maupun efek farmakologi dan keamanannya. Untuk meneliti kandungan fitokimia pada tumbuhan, perlu diketahui tentang metode penapisan (skrining) fitokimia, ekstraksi, fraksinasi, isolasi preparatif, uji kemurnian, dan isolasi minyak atsiri.
1.2 Tujuan penulisan Tujuan penyusunan makalah ini adalah sebagai berikut :
1
1.
Mengetahui dan memahami metode dalam penapisan (skrining) fitokimia.
2.
Mengetahui dan memahami tentang cara ekstraksi pada tumbuhan.
3.
Mengetahui dan memahami tentang cara fraksinasi senyawa pada tumbuhan.
4.
Mengetahui dan memahami mengenai isolasi preparatif.
5.
Mengetahui dan memahami tentang uji kemurnian senyawa fitokimia.
6.
Mengetahui dan memahami mengenai isolasi pada minya atsiri.
1.3 Rumusan Masalah Berikut ini rumusan masalah yang akan dikaji dalam makalah ini, yaitu 1. Apa dan bagaimana metode penapisan (skrining) fitokimia ? 2. Apa dan bagaimana cara ekstraksi pada tumbuhan ? 3. Apa dan bagaimana cara fraksinasi senyawa pada tumbuhan ? 4. Apa dan bagaimanakah isolasi preparatif senyawa fitokimia ? 5. Apa dan bagaimana cara uji kemurnian senyawa fitokimia ? 6. Apa dan bagaimanakah isolasi pada minyak atsiri ?
1.4 Metode dan Teknik Penulisan Untuk mendapatkan data dan informasi yang di perlukan, kami mempergunakan teknik studi kepustakaan atau studi pustaka. Teknik penulisan makalah merupakan jenis penelitian linier dan literatur, yaitu setiap pembahasan masalah dalam makalah ini dijabarkan berdasarkan buku-buku sebagai bahan kajiannya dan kaji pustaka (internet).
2
1.5 Sistematika Penulisan Sistematika penyusunan makalah ini dibagi menjadi tiga bagian utama. Bagian I adalah Pendahuluan. Dalam bagian ini memuat latar belakang, rumusan masalah, tujuan penulisan, metode penulisan, dan sistematika pembahasan. Bagian II yaitu Pembahasan yang berisi kami membahas secara keseluruhan tentang masalah yang diangkat. Bagian III yakni Kesimpulan dan Saran.
Dimana
kami
menyimpulkan
uraian
yang
sebelumnya
telah
disampaikan, dan memberi saran mengenai apa yang sebaiknya kita lakukan setelah memahami materi yang telah dibahas
3
BAB II PEMBAHASAN
2.1 Metode Penapisan (Skrining) Fitokimia Skrining fitokimia merupakan suatu analisa kualitatif kandungan kimia tumbuhan atau bagian tumbuhan. Skrining fitokimia atau penapisan kimia adalah tahapan awal untuk mengidentifikasi kandungan kimia yang terkandung dalam tumbuhan, karena pada tahap ini kita bisa mengetahui golongan senyawa kimia yang dikandung tumbuhan yang sedang kita uji/teliti (Fauzi, 2013). Metode yang digunakan dalam skrining fitokimia harus memiliki persyaratan :
metodenya sederhana dan cepat peralatan yang digunakan sesedikit mungkin
selektif dalam mengidentifikasi senyawa-senyawa tertentu
dapat memberikan informasi tambahan mengenai keberadaan senyawa tertentu dalam kelompok senyawa yang diteliti (Fauzi, 2013). Golongan senyawa kimia dapat ditentukan dengan cara:
uji warna;
penentuan kelarutan;
bilangan Rf; dan
ciri spektrum UV. Dari keempat metode diatas, secara umum penentuan golongan
senyawa kimia dilakukan denga cara uji warna dengan menggunakan pereaksi
4
yang spesifik karena dirasakan lebih sederhana(Fauzi, 2013). Skrining juga dapat dilakukan dengan metode KLT (kromatografi Lapis Tipis) karena dapat mengahasilkan
pemisahan
lebih
sempurna,kepekaan
yang
lebih
tinggi,dilaksanakan hanya beberapa menit saja, dapat dipakia preaksi kolosif, dapa dipakai senyawa hidrofob. Senyawa kimia berdasarkan asal biosintesis, sifat kelarutan, gugus fungsi digolongkan menjadi :
Senyawa fenol, bersifat hidrofil, biosintesisnya berasal dari asam shikimat;
Terpenoid, berasal dari lipid, biosintesisnya berasal dari isopentenil pirofosfat;
Asam organik, lipid dan sejenisnya, biosintesisnya berasal dari asetat;
Senyawa nitrogen, bersifat basa dan bereaksi positif terhadap ninhidrin atau dragendorf;
gula dan turunannya;
makromolekul, umumnya memiliki bobot molekul yang tinggi (Fauzi, 2013). Sedangkan
berdasarkan
biogenesisnya
senyawa
bahan
alam
dikelompokkan menjadi :
Asetogenin : flavonoid, lipid, lignan, dan kuinon
karbohidra : monosakarida, oligosakarida, dan polisakarida
isoprenoid : tepenoid, steroid, karotenoid
senyawa mengandung nitrogen : alkaloid, asam amino, protein, dan nukleat (Fauzi, 2013).
5
ANALISIS SKRINING FITOKIMIA Uji alkaloid . Uji
Alkaloid
dilakukan
dengan
metode
Mayer,
Wagner dan Dragendorff. Sampel sebanyak 3 mL diletakkan dalam cawan porselin kemudian ditambahkan 5 mL HCl 2 M
, diaduk dan
kemudian
didinginkan pada temperatur ruangan. Setelah sampel dingin ditambahkan 0,5 g NaCl lalu diaduk dan disaring. Filtrat yang diperoleh ditambahkan HCl 2 M sebanyak 3 tetes , kemudian dipisahkan menjadi 4 bagian A, B, C, D. Filtrat A sebagai blangko, filtrat B ditambah pereaksi Mayer, filtrat C ditambah pereaksi Wagner, sedangkan filtrat D digunakan untuk uji penegasan. Apabila terbentuk endapan pada penambahan pereaksi Mayer dan Wagner maka identifikasi menunjukkan adanya alkaloid. Uji penegasan dilakukan dengan menambahkan amonia 25% pada filtrat D hingga PH 8-9. Kemudian ditambahkan kloroform, dan diuapkan diatas waterbath. Selanjutnya
ditambahkan HCl 2M, diaduk dan disaring. Filtratnya
dibagi
menjadi 3 bagian. Filtrat A sebagai blangko, filtrat B diuji dengan pereaksi Mayer,
sedangkan
filtrat
C
diuji
dengan
pereaksi
Dragendorff.
Terbentuknya endapan menunjukkan adanya alkaloid (Marliana, 2005). Uji tanin dan polifenol. Sebanyak 3 mL sampel diekstraksi akuades
panas kemudian didinginkan. Setelah itu ditambahkan 5 tetes NaCl 10% dan disaring. Filtrat dibagi 3 bagian A, B, dan C. Filtrat A digunakan sebagai blangko, ke dalam filtrat B ditambahkan 3 tetes pereaksi FeCl3, dan ke dalam filtrat C ditambah garam gelatin. Kemudian diamati perubahan yang terjadi (Marliana, 2005). Uji saponin. Uji Saponin dilakukan dengan metode Forth yaitu
dengan cara memasukkan 2 mL sampel kedalam tabung reaksi kemudian ditambahkan 10 mL akuades lalu dikocok selama 30 detik, diamati perubahan yang terjadi. Apabila terbentuk busa yang mantap (tidak hilang selama 30
6
detik) maka identifikasi menunjukkan adanya saponin. Uji penegasan saponin dilakukan dengan menguapkan sampel sampai kering kemudian mencucinya dengan heksana sampai filtrat jernih. Residu yang tertinggal ditambahkan kloroform, diaduk 5 menit, kemudian ditambahkan Na2SO4 anhidrat dan disaring. Filtrat dibagi menjadi menjadi 2 bagian, A dan B. Filtrat A sebagai blangko, filtrat B ditetesi anhidrat asetat, diaduk perlahan, kemudian ditambah H2SO4 pekat dan diaduk kembali. Terbentuknya cincin merah sampai coklat menunjukkan adanya saponin (Marliana, 2005). Uji Kardenolin dan bufadienol. Uji Kardenolin
dan
Bufadienol
menggunakan 3 metode yaitu metode Keller Killiani, metode LiebemanBurchard dan metode Kedde . (i)
Metode Keller-Killiani yaitu dengan menguapkan 2 mL sampel, dan mencucinya dengan heksana sampai
heksana
jernih.
Residu
yang
tertinggal dipanaskan diatas penangas air kemudian ditambahkan 3 mL pereaksi FeCl3 dan 1 mL H2SO4 pekat. Jika terlihat cincin merah bata menjadi biru atau ungu maka identifikasi menunjukkan adanya kardenolin dan bufadienol. (ii)
Metode Lieberman-Burchard yaitu dengan cara menguapkan sampel sampai kering. Kemudian ditambahkan kedalamnya 10 mL heksana, diaduk selama beberapa menit lalu biarkan. Selanjutnya diuapkan diatas
penangas
air
dan
ditambahkan 0,1 g Na2S04 anhidrat lalu
diaduk. Larutan disaring sehingga diperoleh filtrat. Kemudian filtrat dipisahkan menjadi 2 bagian, A dan B. Filtrat A sebagai blangko dan filtrat B ditambahkan 3 tetes pereaksi
asam asetat
glasial dan
H2SO4, senyawa kardenolin dan bufadienol akan menunjukkan warna merah sampai ungu.
7
(iii) Metode Kedde yaitu dengan cara menguapkan sampel sampai kering kemudian menambahkan 2 mL kloroform, lalu dikocok dan disaring. Filtrat dibagi menjadi 2 bagian, A dan B. Filtrat A sebagai blangko, dan filtrat B ditambah 4 tetes reagen Kedde. Senyawa kardenolin dan bufadienol akan menunjukkan warna ungu (Marliana, 2005). Uji flavonoid. Sebanyak 3 mL sampel diuapkan, dicuci
dengan
heksana sampai jernih. Residu dilarutkan dalam 20 mL etanol kemudian disaring. Filtrat dibagi 4 bagian A, B, dan C. Filtrat A sebagai blangko, filtrat B ditambahkan 0,5 mL HCl pekat kemudian dipanaskan pada penangas air, jika terjadi perubahan warna merah tua sampai ungu menunjukkan hasil yang positif (metode Bate Smith-Metchalf). Filtrat C ditambahkan 0,5 mL HCl dan logam Mg kemudian diamati perubahan warna yang terjadi (metode
Wilstater). Warna
merah sampai jingga diberikan oleh senyawa
flavon, warna merah tua diberikan oleh flavonol atau flavonon, warna hijau sampai biru diberikan oleh aglikon atau glikosida. Filtrat D digunakan untuk uji KLT (Marliana, 2005). Uji antrakuinon. Uji antrakuinon dilakukan dengan uji Brontrager
dan
uji
Brontrager termodifikasi. Uji Brontrager dilakukan dengan cara
melarutkan 2 mL sampel dengan 10 mL akuades kemudian disaring, filtrat diekstrak dengan 5 mL benzena. Hasil ekstrak dibagi menjadi 2 bagian,
A dan B. Filrat A digunakan sebagai blangko dan filtrat B
ditambahkan 5 mL ammonia kemudian dikocok, bila terdapat warna merah berarti hasil positif. Uji
Brontrager
termodifikasi
dilakukan
melarutkan 2 mL sampel dengan 10 mL 0,5 N KOH dan
1
mL
dengan larutan
hidrogen peroksida. Kemudian dipanaskan pada waterbath selama 10 menit, didinginkan dan disaring. Pada filtratnya ditambahkan asam asetat bertetestetes sampai pada kertas lakmus menunjukkan asam. Selanjutnya diekstrak dengan 5 mL benzena. Hasil ekstrak dibagi menjadi 2 bagian, A dan B.
8
Larutan A digunakan sebagai blangko, sedangkan larutan B dibuat basa dengan 2-5
mL
larutan
amonia.
Perubahan
warna pada lapisan
basa
diamati. Warna merah atau merah muda menunjukkan adanya antrakuinon (Marliana, 2005). Masalah
pada
skrining
fitokimia
biasanya
adalah
kesalahan
menafsirkan hasil analisis pengujian/skrining, seperti : adalah hasil pengujian menyatakan ada (positif), tapi Reaksi posit if pal su
sebenarnya tidak ada (negatif), hal ini bisa disebabkan kesalahan alat, atau pengaruh senyawa yang memiliki kesamaan sifat maupun struktur atom yang identik. adalah hasil pengujian menyatakan tidak ada Reaksi negatif palsu
(negatif), tapi sebenarnya ada (positif), hal ini bisa disebabkan kurang sensitifnya alat, atau karena kadar didalam bahan uji terlalu sedikit, atau bahan ujinya (ekstrak simplisia) tidak memenuhi syarat, oleh karena itu senyawa yang tadinya ada hilang/rusak karna reaksi enzimatik maupun hidrolisis (Fauzi, 2013).
2.2 Ekstraksi 2.2.1
Pengertian
Ekstraksi merupakan proses pemisahan, penarikan atau pengeluaran suatu komponen cairan/campuran dari campurannya. Biasanya menggunakan pelarut yang sesuai dengan kompnen yang diinginkan.Cairan dipisahkan dan kemudian diuapkan sampai pada kepekatan tertentu. Ekstraksi memanfaatkan pembagian suatu zat terlarut antar dua pelarut yang tidak saling tercampur untuk mengambil zat terlarut tersebut dari satu pelarut ke pelarut lain (Oxtoby, 2001).
9
Ekstraksi memegang peranan penting baik di laboratorium maupun industri. Di laboratorium, ekstraksi seringkali dilakukan untuk menghilangkan atau memisahkan zat terlarut dalam larutan dengan pelaurt air yang diekstraksi dengan pelarut lain seperti eter, kloroform, karbondisulfida atau benzene (Mulyani, 2005).
2.2.2
Klasifikasi Ekstraksi
Klasifikasi ekstraksi berdasarkan sifat zat yang diekstraksi terdiri atas 4 yaitu:
Ekstraksi khelat
Ekstraksi dapat diklasifikasikan sebagai ekstraksi khelat apabila ekstraksi berlangsung melalui pembentukan khelat atau struktur cincin,. Misalkan ekstraksi uranium dengan 8-hidrosikuinilin pada kloroform atau ekstraksi besi dengan cupferron pada pelarut yang sama.[3]
Ek str aksi solvasi
Ekstraksi pasangan ion
Ekstraksi sinergi
2.3 Fraksinasi 2.4 Isolasi Preparatif 2.5 Uji Kemurnian 2.6 Isolasi Minyak Atsiri
10
BAB III PENUTUP 3.1
Kesimpulan
3.2
Saran
11
DAFTAR PUSTAKA
12
13
