BAB III HASIL PENGAMATAN
•
Penetapan Kadar DNA Sampel
A260
A280
Kadar (μg/μl)
Kemur!a
Kelompok C1
0,251
0,174
2510
1,44
Kelompok C2
0,130
0,078
1300
1,67
Kelompok C3
0,232
0,162
2320
1,43
Perhitunan Kelompok C2 ! 5 μl
"aktor Penen#eran $ 1000 μl $
Kadar DNA %&'&l( ! )
Kelompok C1 Kadar DNA $ 0,251 * 200 * 50 $ 2510 &'&l
)
Kelompok C2 Kadar DNA $ 0,130 * 200 * 50 $ 1300 &'&l
)
Kelompok C3 Kadar DNA $ 0,232 * 200 * 50 $ 2320 &'&l
Kemurnian )
Kelompok C1 Kemurnian $
0,251 0,174
$ 1,44
1 200
)
Kelompok C2 Kemurnian $
0,130 0,078
$ 1,67 )
Kelompok C3 Kemurnian $
0,232 0,162
$ 1,43 •
Anali+i+ DNA Kromo+om dan Pla+mid )
Pemuatan Aaro+a
Ha"!l Pegama#a Pemuatan Buffer -./ 1* denan
diamil 2 ml larutan -./ dan dien#erkan denan Auaide+t teril ad 40 ml Penamahan Auaide+t teril untuk memuat Buffer -./ 1*
Penimanan Aro+a dan penamahan Buffer -./ 1* +erta di ko#ok ad homoen denan menutup mulut /rlenmeer denan kapa+ Penamahan Buffer -./ 1* untuk memudahkan mira+i dari ramen DNA erda+arkan peredaan kekuatan ionik Buffer denan kadar ion tini akan menaikkan konduktan+i li+trik +ehina memper#epat mira+i DNA
Gam$ar
Pemana+an larutan #ampuran denan Hot Plate pada +uhu 185C +ehina larutan keruh menadi ernih
Penamahan 1μl /t.r dalam larutan an +udah ernih dan hanat Kemudian diko#ok ad homoen eelumna praktikan diharu+kan memakai hand scoon erahan nitril al ter+eut karena hand scoon ter+eut tidak mudah ditemu+ larutan /t.r an er+iat kar+inoenik +ehina dapat melinduni tanan dari larutan ter+eut Penamahan /t.r %/tidium .romida( dapat meninkatkan daa luore+en+i dari DNA +ehina dapat terlihat ela+ elain itu /t.r merupakan pearna an menha+ilkan arna teran apaila terpapar +inar 9: Pema+ukan larutan #ampuran ke dalam -ra an telah ditutup denan +elotip di +i+i erluanna Kemudian di tempatkan +i+ir elektroore+i+ Tray diunakan +eaai #etakan el aaro+e i+ir %Com( untuk mementuk well %+umur( pada el aaro+a
;el aaro+a ditunu hina memadat denan dima+ukkan dalam pendinin al ter+eut untuk memantu pemadatan el aaro+a
etelah memadat, +elotip pada adah diuka dan +i+ir diamil Kemudian ;el aaro+a +ima+ukkan dalam adah an eri+i larutan uer
BAB I%
PEMBAHASAN &' Pee#apa Kadar NA
Pada praktikum ini dilakukan penetapan kadar DNA dari ha+il peni+ola+ian DNA an telah dilakukan pada praktikum +eelumna 9i kuantitati dilakukan una melihat tinkat kemurnian DNA +erta menetapkan kadar DNA ha+il i+ola+i 9i kuantitati DNA denan +pektrootometri 9:):i+ dilakukan karena DNA murni dapat menerap #ahaa ultral DNA pla+mid kemudian ditamahkan auaide+t +eanak ??5 >l an dima+ukkan pada ku'>l @ika +ampel dien#erkan, maka haru+ dikalikan dena aktor penen#eran ua edanakan untuk men#ari nilai kemurnian dari DNA didapatkan denan memai nilai a+oran+i pada λ260 nm denan nilai a+oran+i pada λ280 nm a+il an diperoleh dalam praktikum penetapan kadar DNA pada 3 kelompok adalah +eaai erikut ! C1 $ 2510 &'&l, C3 $ 2320 &'&l, dan kelompok kami C2 memperoleh ha+il 1300 &'&l Dan untuk nilai kemurnian i+olat DNA pla+mid dari 3 kelompok ialah +eaai erikut ! C1 $ 1,44 C3 $ 1,43 dan kelompok kami C2 memperoleh nilai kemurnian +ee+ar 1,67 Dilihat dari nilai kemurnianna maka dapat dikatakan aha ha+il i+ola+i DNA pla+mid terkontamina+i oleh protein dan phenol, +ehina diperoleh nilai kemurnian B1,8 -eradina kontamina+i kemunkinan di+eakan oleh tidak +terilna peralatan an diunakan, atau pun praktikan an kuran teliti dalam peni+ola+ian DNA &'2 Ele*#r+,+re"!" NA
Pada per#oaan ini dilakukan anali+i DNA kromo+om dan pla+mid denan teknik elektroore+i+ etode +tandar an diunakan untuk memi+ahkan, menidentiika+i dan
memurnikan ramen DNA adalah elektroore+i+ el aoro+e /lektroore+i+ adalah teknik pemi+ahan komponen atau molekul ermuatan erda+arkan peredaan tinkat mira+ina dalam +euah medan li+trik -eknik ini +ederhana, #epat terentuk, dan mampu memi+ahkan #ampuran potonan DNA +e+uai denan ukuranna +e#ara akurat, diandin denan den+ita+ radient +entriua+i Ke#epatan molekul an ererak pada medan li+trik terantun pada muatan, entuk dan ukuran /lektroore+i+ dapat diunakan untuk +epara+i makromolekul %+eperti protein dan a+am nukleat( elanutna, loka+i DNA dalam el ter+eut dapat diidentiika+i +e#ara lan+un denan menunakan pearna erluore+#e an dipan#arkan oleh ethidium romide dari +ampel DNA -ahap pertama adalah elektroore+i+ aaro+a Aaro+a ditiman denan erat 0,4 dan dilarutkan dalam 40 ml uer -./ 1* denan #ara pemana+an +ampai +emua aaro+a larut denan +empurna +ehina diperoleh el aaro+a 1 kemudian menamahkan 1>l /t.r dan larutan didiamkan hina +uhu kuran leih 60C Keuntunan menunakan aaro+a adalah tidak er+iat kar+inoenik +eperti halna a#rlamide Penamahan uer -./ diunakan aar p dalam larutan dapat dipertahankan dari penamahan Eat an akan dima+ukkan kedalam larutan itu +endiri dan memudahkan mira+i dari ramen DNA erda+arkan kekuatan ionik, Buffer denan kadar ion tini akan menaikkan konduktan+i li+trik +ehina memper#epat mira+i DNA edankan /t.r %/tidium .romida( dapat meninkatkan daa luore+en+i dari DNA +ehina dapat terlihat ela+ elain itu /t.r merupakan pearna an ila diletakan diaah +inar 9: akan meneakan erpendarna ethidium romida dalam el .erpendarna +enaa ini dapat menadi indikator pererakan DNA kromo+om dan pla+mid dalam el Cetakan aaro+a kemudian di+iapkan denan menutup +i+i erluan #etakan denan menunakan +elotip dan menempatkan +i+ir elektroore+i+ untuk mementuk +umur Farutan aaro+a an telah mementuk +umur kemudian dituankan kedalam #etakan dan diiarkan hina memadat etelah el memadat, penutup #etakan dan +i+ir dilepa+kan kemudian #etakan ditempatkan dalam adah an eri+i uer -./ 1* "un+i larutan uer an diunakan ialah menaa ke+etimanan p dari el aaro+a ter+eut aar tidak teradi peruahan p, peruahan p dapat mempenaruhi DNA an akan di ui karena meruah elektromoilita+ DNA dalam el aaro+a
DA"-AG P9-AKA .irren, . H / Fai 1??3 Pulsed field ge electrophoresis: a practical guide. ;ardner, /@, @ immon+, H DP nu+tad 1??1 Principles of genetics 8th ed @ohn Iile H on+ Jn#, Ne ork "at#hiah, 2011 odul Pelatihan Anali+i+ "inerprintin DNA -anaman Denan etode GAPD Faoratorium entral Jlmu aati 9ni
