Metodos Para La Extraccion de Nematodos

Universidad de San Carlos de Guatemala Facultad de Agronomía Área Tecnológica Tecnológica Subarea de Protección de Plantas Laboratorio de Introduccion a la Fitopatologia r! "din #ro$co %orge &ub'n (umeta Portillo Carn') *+,-,.*+/ Fec0a) ,-1+21*+,3 45'todos para la "6tracción de 7ematodos8 Introducción Existen diversos métodos para la extracción extracción de nematodos nematodos usados habitualmente en los laboratorios de Fitopatologia. La selección del método a utilizarse para la extracción de nematodos depende varios factores siendo la eficiencia deseada y el equipo disponible las más determinantes para la selección. ay que tener en cuenta que ning!n método es capaz de extraer el "##$ de los nematodos de la muestra. ay dos dos princ principa ipales les proce proceso sos s para para la extra extracci cción ón de nemat nematod odos os pued pueden en ser  ser  extra%dos extra%dos del suelo o del material vegetal. &no de ellos depende de la movilidad y disponibilidad de los nematodos para que sean extra%dos' mientras que el otro método tiene la capacidad de extraer nematodos de formas inactivas y estados no móvile móviles s por por medio medio de una una corri corrient ente e de agua agua que que ascie asciend nde. e. Las Las técnic técnicas as de extr extrac acci ción ón está están n basa basada das s en proc proces esos os o comb combin inac ació ión n de los los méto método dos' s' lo primordial es la elección del método en base al ob(eto de estudio. Los métodos de extracc extraccione iones s nematodo nematodos s que existen existen en diverso diversos s laborat laboratorio orios s de microbi microbiolog olog%a %a son) son) embud embudo o de *aer *aerman man'' técni técnica ca de criba cribado do y centr centrifu ifuga gaci ción ón en soluc solució ión n azucarada' método de cribado y decantación de +obb' elutriador de ,ostenbrin-' aparato de Fenic- para extracción de quistes

5'todos de "6tracción de 7ematodos "mbudo de 9aerman El embud embudo o de *aer *aerman man'' se trata trata de una una técnic técnica a dond donde e se requie requiere re que que los los nema nemato todo dos s se muev muevan an a trav través és de la mues muestr tra a para para su extr extrac acci ción ón'' los los requerim requerimient ientos os de esta técnica técnica consiste consiste en un embudo embudo plástico plástico'' y en su parte inferior se le a(usta una manguera de hule suave' que se cierra mediante una pinza de presión tipo mohr. El embudo embudo de *aerm *aerman an cons consist iste e en susp suspen ender der el suelo suelo en un deter determin minad ado o volumen de agua' y después de un corto per%odo de reposo' la suspensión se vierte vierte sobre sobre un (ueg (uego o supe superpu rpues esto to de criba cribas s de "## "## y /## mallas mallas.. El suelo suelo retenido retenido en la criba más fina' se transfier transfiere e a un cilindro cilindro con fondo de tela' tela' que posteriormente se coloca en el embudo. 0espués de 1/ a /2 horas' todas las formas activas de nematodos han pasado a través de la tela o papel y pueden ser  reco recogi gida das s en un pequ peque3 e3o o volu volume men n de agua agua al reti retira rarr la pinz pinza a mohr mohr de la manguera. Entre las venta(as de este método están el ba(o costo y lo portabilidad portabilidad del equipo' mientras mientras que dentro dentro de las desventa(a desventa(as s cabe cabe mencion mencionar) ar) la dependen dependencia cia del método de la movilidad de los nematodos' que difiere entre especies y estados del ciclo de vida' la cual además puede ser afectada desde que la muestra es tomada en el campo.

T'cnica de Centri:ugación ; Flotación

Esta técnica para la extracción de nematodos consiste en mezclar y centrifugar  peque3as muestras de suelo con agua' seguidamente de una segunda mezcla centrifugación con solución azucarada' los nematodos serán recuperados del suelo. El principio de las técnicas es la recuperación de los nematodos por  flotación' mediante soluciones de gravedad especifica superior a los fluidos del nematodo. En 4lgunos laboratorios se utiliza soluciones azucaradas a partir de ca3a de az!car' sin embargo también pueden ser utilizadas soluciones de sulfato de magnesio y sulfato de zinc también pueden ser utilizadas. +uando se tratan muestras de suelo arcilloso se le debe de agregar alg!n tipo de detergente para que ayude a la dispersión de part%culas de la muestra de suelo. 54le(andro Esquivel' 1#"67 El estrés osmótico ocasionado por estas soluciones puede matar o distorsionar  los nematodos' por lo tanto es necesario en(uagarlos con suficiente agua para ayudar a la recuperación. 4ctualmente la técnica' es utilizada rutinariamente en muchos laboratorios' debido especialmente a que es efectiva para extraer  huevos' estados inmóviles' formas inactivas y nematodos muertos. 4demás es un método rápido' que permite procesar y leer gran cantidad de muestras en pocas horas. 54le(andro Esquivel' 1#"67

Procedimiento) ". 8omar una al%cuota de "## gr de suelo bien homogeneizado. Eliminar las ra%ces' piedras y otros desechos 1. 1. +olocar la muestra en una cubeta y lavarla directamente ba(o un chorro de agua a presión' la cantidad de agua agregada no debe superar la mitad de la misma 6. 6. La suspensión resultante se agita bien y se de(a reposar alrededor de 6# segundos. /. /. 9osteriormente se procede a decantar la solución sobre un (uego de tamices superpuesto de "## y /## mallas. La operación se puede repetir una vez más con el suelo remanente en la cubeta :. :. +on la ayuda de un frasco lavador 5pizeta7 los residuos retenidos en la criba de /## mallas se transfieren a tubos de centrifuga de :# ml' con el cuidado de que éstos una vez colocados en la centrifuga queden balanceados. ;.