METODOS DE EXTRACCION DE NEMATODOS DEL SUELO De los nematodos fitoparásitos, los géneros Aphelenchoides, Aphelenc hoides, Dytilenchus, Meloidogyne, Xiphimena, Pratylenchus, Tylenchulus, Globoderay Heterodera, causanprácticamenteel100% de losdañosencultivoseconómicamenterentables. Existen muchastécnicasdiferentesparalaextraccióndelosnematodosdelsuelo.Engeneral,lasmásutilizadas sonaquellasbasadasenlacapacidaddelosnemato sonaquellasbasadasenlacapacidaddelosnematodosdemigrardelsueloalag dosdemigrardelsueloalaguaatravésdeunfiltro, uaatravésdeunfiltro, embudodeBaermannybandejitas,oaquellasbasadasensudensidadespecífica, centrifugacionesdiferencialesengradientesdesacarosaosales. Unavez
realizada
latomademuestrasdesueloyplantas,
los
nematodosdeben
serextraídosparasurecuento.Siestenose vaarealizar inmediatamente,debenguardarseensitiofresco serextraídosparasurecuento.Siestenose hastasuprocesamiento. MUESTREO DELSUELO El 90%de la poblaciónhabitaen losprimeros15cm delsuelo,ysiesposible,cercade lasraíces. Lapoblaciónenelsuelovaríaconstantemente,enrespuestaalascondiciones ambientalesydecultivo.Así,eninviernoyplenoverano,desciendelapoblacióndelsueloparaescaparde las inclemencias
de
éste,
así
como
aumentando
en
presencia
de
cultivo
disminuyendocuandohasidocosechado. Lamejorépocademuestreoportantoes,duranteel desarrollodelcultivo. Lasmayorespoblacionesnosiempresepresentanenlaszonasmásafectadas, pueslasplantasnosoportanaltasdensidadesdepoblación. Muestrearde variospuntos,a variospuntos,a la altura de las raíces,y homogeneizaren una muestra. muestra. Lamuestrasetomadesuelohúmedo,nuncaseco. Guardarenunabolsadeplástico,evitandoquesecalientemanteniéndoloala sombra. Paraunamejorextracción,esimprescindiblequelosnematodoslleguenvivosal laboratorio,porloqueelenvíode lamuestraseharádelaformamás l amuestraseharádelaformamásrápidaposible. rápidaposible. Vivenmejorensuelosarenosos,húmedosyconcultivo.Sonmuysensiblesala Vivenmejorensuelosarenoso s,húmedosyconcultivo.Sonmuysensiblesala sequíayala faltadecultivo.
y
METODO DE EXTRACCION DE LA BANDEJITA Objetivos -Conocer la metodología de extracción de nematodos de la bandejita Materiales para la bandejita -tubo PVC de 10cm de diámetro -mallas de tela o de plástico -pegamento PVC -bandejitas de plástico Método 1. Se comienza con la fabricación de la bandejita, que consiste en cortar anillos de 5cm del tubo de PVC, luego pegar la malla en uno de los extremos del tubo PVC cortado, y de ahí adaptarlos a la bandejita de tal modo que no choque con la base de la bandejita. Repetir todo el proceso para tener 3 bandejitas
Materiales para la práctica -muestra de suelo con nematodos -bandejitas del tubo de PVC -plumas de pavo -plaquitas petri -porta y cubreobjetos -microscopio Método 1. Se coloca dentro de la bandejita el tubo PVC con la malla hacia abajo. Luego cubrir el interior del tubo PVC con papel higiénico (esto es para que no pase la tierra al interior de la bandejita).
2. Luego colocar una porción homogenizada de la muestra desuelo con nematodos dentro del tubo PVC y además cubrir con agua el suelo (esto es para que se desplacen los nematodos y se vayan al fondo). 3. Dejar la bandejita reposando por 24 a 48 horas. Luego del tiempo pasar el contenido de agua + nematodos por un tamiz y luego colocarlo en una placa petri pequeña y rayada que facilita el conteo de los nematodos del suelo y continuar con la observación por el microscopio.
En acá es donde tenemos que pescar a los nematodos con ayuda de la pluma de pavo y colocarlo sobre el portaobjeto para continuar con la observación. Conclusiones -Por este método de la bandejita obtenemos nematodos macho, hembra, J1, J2, J3 y J4
MÉTODO DEL EMBUDO DE BAERMANN Objetivos -Conocer la metodología de extracción de nematodos por el embudo de Baermann Materiales para la práctica -muestra de suelo con nematodos -embudo de Baermann -plumas de pavo -plaquitas de plástico -porta y cubreobjetos -microscopio Método 1. Se obtiene muestra de suelo con nematodos, de lo que utilizaremos unos 300g para continuar con los siguientes pasos. 2.Se llena con agua un embudo de Baermann, en la parte superior se coloca una malla con papel secante sobre el que se coloca la muestra de suelo para que permanezca húmeda, dejándose de 24 a 48 horas. 3. Transcurrido este tiempo se abre la válvula de paso y se recoge el sedimento (agua + nematodos) en un tubo de ensayo. 4. La muestra obtenida se pasa a un vidrio de reloj para observar bajo el microscopio. Conclusiones -Este método es para analizar el suelo y detectar la existencia de nematodos y determinar el grado de infestación de los suelos, siendo un método sencillo y preciso.
Embudo de Baermann
METODO DE LA CENTRIFUGA Objetivos -Conocer la metodología de extracción de nematodos de la centrifuga Materiales para la práctica -muestra de suelo con nematodos -azúcar -una centrifuga -tamices pequeño y grande -embudo -plumas de pavo -plaquitas petri -porta y cubreobjetos -microscopio -pizeta Método 1. En un balde se depositan 3 litros de agua y 200g de suelo, se agitan para romper terrones y se deja reposar por espacio de 1 minuto. Enseguida se pasa esta mezcla a otro balde a través de un tamiz pequeño (se deberá pasar toda el agua), se agita y se deja reposar. La mezcla se pasa a otro balde por el tamiz grande, parte de la muestra de suelo queda en el tamiz. 2. De la muestra que queda en el tamiz se pasa una porción a los tubos de la centrifuga y se colocan estos tubos en la centrifuga, los tubos deben llenarse al mismo nivel (suelo mas agua). Los tubos en la centrifuga deben giran por espacio de 2 minutos a 5000 RPM 3. Se saca tubo por tubo de la centrifuga y se tira el agua, entonces en el fondo del tubo queda la muestra con nematodos y una porción de suelo. 4. En un tubo de ensayo depositar 50% de azúcar y 100% de agua, agitarlo y tendremos preparada agua azucarada su función es que los nematodos se adhieran, esta agua se vacía en el tubo de la centrifuga y se agita el suelo con agua azucarada. 5. Otra vez llenar los tubos de la centrifuga y hacer girar por espacio de 2 minutos a 5000 RPM. 6. Se sacan los tubos de la centrifuga, los nematodos se quedan en agua azucarada, se pasan a través del tamiz grande, se sacan las muestras, pasándose a través de un embudo, sus paredes se lavan con una pizeta con agua y los nematodos se pasan a un tubo de ensayo.
7. La muestra obtenida se pasa a una placa petri para verificar la existencia de nematodos a través de la observación por el microscopio. Conclusiones -Este método es para análisis de suelo y detectar la existencia de nematodos, pero hay que mencionar que este método requiere habilidad y practica para que sea efectivo.
Centrifugas para extracción de nematodos del suelo
