UNIVERSIDAD VERACRUZANA
FACULTAD ACULTAD DE BIONALISIS BIONAL ISIS
LABORATORIO DE PARASITOLOGIA
MANUAL DE PARASITOLOGIA
ALUMNAS: MAGDA ELENA HERNANDEZ HERNANDEZ SANDRA LUZ HERNANDEZ LOPEZ
* TOMA DE MUESTRA PARA EXAMEN COPROPARASITOSCOPICO
INTRODUCCION : Regula Regularmen rmente te en el áreade Parasito Parasitolog logia ia , las muestras muestras más analiz analizadas adas para demostrar la presencia de parasitos intestinales del hombre son las heces fecales fecales ; sin embargo embargo , existe existen n otros otros parásit parásitos os cuya cuya presenc presencia ia se puede puede eviden evidencia ciarr en muestras biológicas como : bilis, jugo duodenal, esputo, secreción , biopsia o frotis peri perian anal al , no obst bstant ante esta estass prueb ruebas as se hará harán n toma tomand ndo o en cuen cuentta los los antecedentes clínicos específicos del paciente. A continuación , se hará referencia a los diversos aspectos con los cuales deberán proceder las muestras a analizar con fines parasitologicos para obtener resultados reproducibles y de esta manera ayudar eficazmente al médico en el diagnostico, pronostico , y tratamiento del paciente. HECES FECALES SOLIDAS :
✔
Condiciones del paciente : Durant Durante e al menos tres días días previos previos a la prueba el pacien paciente te deberá evitar
tomar medicamento medicamentoss (ant (antip ipara arasi sita tario rioss , anti antibi biót ótic icos os,, anti antidi diarr arrei eicos cos , laxant laxantes es o purgant purgantes es en caso caso de ser necesario necesario deberá deberán n emplea emplearse rse un purgante purgante salino, como sulfato de sodio o fosfato fosfato y carbonato carbonato de sodio. Por ningún motivo deberán emplearse aceites minerales o compuestos de bismuto o magnesio, ya que las gotas o cristales procedentes de ellos pueden confundirse con algunos parásitos o enmascarar su presencia. ✔
R ecipiente ecipiente de recolección :
Frasco estéril de boca ancha , con tapa de rosca. ✔
Cantidad Cantid ad de muestra muestr a requerida requerid a : 3-6 grs Toma de muestra : La muestra deberá ser recolectada de la siguiente manera : •
Con una abatel abatelengu enguas as tome tome direct directame amente nte de la cavidad cavidad anal anal un volumen volumen de heces aprox. entre 3 -6 grs (equivalente (equivalente al tamaño tamaño de una nuez )
NOTA: Evite la contaminación de la muestra con orina , papel higiénico. jabón , aguao tierra. •
Transfiera las heces obtenidas al contenedor estéril.
•
Cierre el envase herméticamente de forma inmediata para evitar contaminaciones bacterianas
•
. A continuación identifique. el frasco con una etiqueta autoadhesiva llenándola claramente con su nombre, apellidos, edad y fecha y hr de recolección.
NOTA : Pegue la etiqueta al frasco NUNCA en la tapadera . •
Finalmente lleve la muestra al laboratorio lo más pronto posible.
NOTA : Cuando la muestra va a demorar en llegar al laboratorio varias horas o días , se recomienda adicionarle liquido fijador y/o conservador ( formalina al 10 % , por ejemplo ) aumentar la eficacia eficacia de la prueba prueba se recomienda recomienda que que para estudios estudios NOTA :Para aumentar parasitoscoscopicos se recolecten un total de tres muestras en 3 dias consecutivos
ya que la expulsión de parásitos puede ser intermitente . ✔
Criterios de rechazo :
Que el paciente no haya tomado la muestra respectivamente de forma adecuada .
Que la muestra muestra haya haya sido llevada llevada al laborat laboratori orio o con mas de 1 hr de haber sido tomada o no haya sido adecuadamente conservada.
Que el paciente este recibiendo tratamiento antiparasitario.
HECES FECALES DIARREICAS :
Cantidad Cantidad de muestra muestra requerida requerida : 10 ml (un volumen similar al de un cuchara sopera ) Estas muest muestras ras deben deben proces procesars arse e de inmedia inmediato to (30 minuto minutoss como como máximo máximo NOTA : Estas después después de la deposición) deposición) en caso contrario contrario se debe adicionarse adicionarse algun conservador conservador e indicarlo en la etiqueta de identificación identificación pues de no rexaminarse dentro de un margen de tiempo prudencial pues al acidificarse a cidificarse muchos gérmenes patógenos se lisan . RASPADO PERIANAL :
Condiciones del paciente : La toma de muestras deberá realizarse preferentemente por la noche o a primera hora de la mañana antes de que el paciente orine, defeque o se bañe (lo ideal es hacer la toma antes de levantarse de la cama). NOTA : Es imprescindible imprescindible el uso de guantes desechables desechables durante durante la toma de la muestra muestra y el avado cuidadoso de las manos tras su realización. ✔
R ecipiente ecipiente de recolección :
Portaobjetos con cinta adhesiva.
Toma de muestra : 1.
Se toma toma un abat abatel eleng engua uass cubi cubier erto to de cint cinta a adhe adhesi siva va tran transp spar aren ente te,, de mane manera ra que que
la
superficie engomada quede expuesta hacia fuera. 2. A continuación , se coloca al paciente en posición
genupectora genupectorall donde la región perianal quedara ampliamente expuesta para realizar varias aplicaciones con el abatelenguas alre alrede dedo dorr de esta esta zona zona ; con con la fianl fianlid idad ad , de que los los huev huevos os qque qque se encontrarab presentes queden adheridos a la superficie engomada.
3. Finalmente se pega la muestra la cinta adhesiva sobre una de las caras del
por porta obje objeto toss (con (con lo que que se reco recole lect cto o haci hacia a abaj abajo o ) y se obse observ rva a al microscopio. JUGO DUODENAL Y YEYUNAL:
Algunos parásitos colonizan el intestino delgado durante alguno de sus estadios, permane permanecie ciendo ndo habitu habitualm alment ente e en el área área yeyuna yeyunall y siendo siendo infrecu infrecuent enteme emente nte detectados en las heces durante estas fases. Este es el caso de los trofozoitos de Giardia lamblia y las larvas de Strongyloides sp.
NOTA : Los conductos biliares desembocan en duodeno, por lo que también pueden hallarse huevos de parásitos procedentes del hígado o del árbol biliar en el jugo duodenal y yeyunal. ✔
Toma de muestra mues tra :
Las muestr muestras as de jugo jugo duodena duodenall y yeyunal yeyunal suelen obtener obtenerse se median mediante te sonda sonda gastrica o bien durante un procedimiento endoscópico, por el medico medico tratante , las las cuales tras unas adecuada identificación, identificación, deberán ser enviadas enviadas rápidamente rápidamente al laboratorio y procesadas inmediatamente . ✔
R ecipiente ecipiente de recolección : Frasco estéril de boca ancha , con tapa de rosca.
✔
Cantidad Cantid ad de muestra muestr a requerida requerid a : 1-2 ml
ESPUTO :
Condiciones del paciente : El paciente paciente deberá recolectar recolectar la muestra de esputo esputo en ayunas a primera hora de la mañana ; para lo cual , deberá enjuagarse previamente la boca solamente con agua para eliminar eliminar bacterias bacterias que se encuentren encuentren en boca y lengua lengua que pudieran pudieran ser parte de la flora normal. NOTA : Se recomienda que el paciente no este ingiriendo medicamentos. ecipien te de recolección recolec ción : ✔ Recipiente Frasco estéril de boca ancha , con tapa de rosca.
Toma de muestra : Para recolectar la muestra el paciente deberá toser profundamente (lo mas que pueda) y depositar el esputo obtenido en un recipiente estéril .
NOTA: Si el paciente no puede expectorar expectorar , existen existen diversas diversas técnicas encaminada encaminadass a favorecer la obtención del esputo;
✔
La inducción de la tos por inhalación con vaporizador. Lavado bronquial, aspiración mediante aguja transtorácica, o biopsia de pulmón.
✔
Cantidad Cantid ad de muestra muestr a requerida requerid a : 1- 2 ml
✔
Criterios de rechazo :
✔
Que la muestra sea “saliva”.
Que la muestr muestra a tenga tenga menos de 25 leucocito leucocitos, s, y mas de 10 células células epiteliales por campo (aumento X 100) .(ya que indicaría que la muestra no fue adecuadamente tomada
ENVIO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS MUESTR AS
Las muestras muestras deben mantenerse mantenerse en un ambiente ambiente fresco y lejos de la luz solar , se debe deben n evit evitar ar las las temp temper erat atur uras as extr extrem emas as o el dese deseca cami mien ento to , debe deben n cont conten ener er cantidades optimas y estar en frascos o contenedores rotulados y en algunos casos necesarios en soluciones conservadoras. Condiciones Condiciones de envio envio de la muestra según según el tipo y tiempo de demora demora en llegar al laboratorio para el diagnostico parasitologico presuntivo de :
TIPO DE MUESTRA
TIEMPO QUE DEMORA EN LLEGAR AL LABORATORIO LABORATORIO
<24 HRS
> 24 24 HRS
AGENTES PARASITARIOS E. histoltyca, Giardia ,
HECES FORMADAS HECES DIARREICAS ESPUTO , SECRECIÓN BILIAR . CONTENIDO DUODENAL
T° ambiente T° ambiente T° ambiente T° ambiente
Formalina 10 %
Quistes de Balantidium coli.
PAF; PVA
Criptosporidium , Isospora belli. belli. ,
Medio de transp : Cary blair
(no muy comúnes en personas inmunocompetentes) inmunocompetentes)
Formalina 10 %
Trofozoito de Balantidium coli etc.
Formalina 10 %
Trichuris.Ascaris,Necator,Ancylostoma etc
Pneumocistis , Paragonimus, Fasciola hepatica, ,Giardia. Giardia,
Formalina 10 %
Strongyloides,Paragonimus,Fasciola,Ancylostom a, Necator etc. Huevos de :
FROTIS PERIANAL
T° ambiente
Enterobius vermicularis
T° ambiente
Ascaris lumbricoides, Taenia sp. Hymenolepis nana.
SECRECION VAGINAL LCR. SANGRE BIOPSIA DE TEJIDOS
T° ambiente
Frotis en lamina
Trichomona vaginalis. Naegleria, Acanthamoeba yBalamuthia Tripanosoma,Plasmodium,Leishmania
4°C
Formol 10 %
PROCEDIMIENT EN TOS DE LAB LA B ORAT RATORIO ENT NTO LABO BORA PARASITOLOGICO-HECES, I. EXAMEN DIRECTO MACROSCOPICO: M ACROSCOPICO:
Trichinella spiralis (triquinoscopia)
PARA
EL
DIAG IA G NOS TICO IAGN GNO STI ST
FUNDAMENTO : Permite Permite observar directamente directamente las característi características cas morfológicas morfológicas de los parasitos adultos, enteros o fraccionados , asi como los cambios en las características organolépticas de las heces eliminadas(color, presencia de sangre y/o moco, consistencia etc). MATERIAL Suero fisiológico Aplicador Pinza de metal Coladera de plástico o malla metalica.
PROCEDIMIENTO : 1. Observar cuidadosamente las características organolépticas de la muestra
a analizar con la finalidad de determinar su :
CONSISTENCIA: COLOR: OLOR:
Deber ser pastosa y dura Marrón oscuro ( *Ver Anexo) Característico ,puede mostrarse fétido (anomalía) La presencia de moco nos indica gastritis, ulcera o
MOCO: SANGRE
amibiasis. La sangre nos indica hemorragia intestinal por ulceras perforadas intoxicación con medicamentos o ácidos, hemorroides y en ocasiones amibiasis
2. Después Después de ello, es necesario agregar suero fisiológico fisiológico a la muestra (en
cantidad suficiente ) para homogeneizarla. 3. Finalmente las heces deberán ser cuidadosamente pasadas a través de un tamiz tamiz con la finalidad de aislar gusanos cilíndric cilíndricos, os, anillados anillados o aplanados que pudieran encontrarse en las heces,
RESULTADOS RESULTADOS . Se informará informará detalladame detalladamente nte aquellas aquellas característi características cas macroscópicas macroscópicas observadas observadas durante el análisis coproparasitoscopico así como se deberá hacer referencia en su caso el aislam aislamien iento to de algún algún gusano gusano durant durante e el tamiza tamizado do especi especific ficand ando o su especie .
TIPOS DE EXAMNES
MUESTRA
TIEMPO QUE DEMORA EN LLEGAR AL LABORATORIO <24 HRS > 24 HRS
TECNICA ✔
EXAMEN DIRECTO EN FRESCO
COPRO
HECES FORMADAS
T° ambiente
Formalina 10 % PAF; PVA Medio de transp : Cary blair
HECES DIARREICAS SECRECION VAGINAL ESPUTO
T° ambiente T° ambiente
Form Forma alin lina 10 10 % Frotis en lamina
✔
FAUST (FLOTACION)
✔
RITCHIE (SEDIMENTACION)
DEMOSTRACION DE LARVAS: ✔
KATO
✔
STOLL
EXAM EXAMEN EN DIRE DIRECT CTO O EN EN FRE FRESC SCO O EXAMEN DIRECTO EN FRESCO TINCION DE GRAM Y GIEMSA TINCION DE GRAM Y GIEMSA ✔
SECRECIONES
SECRECIÓN BILIAR .
T° ambiente
AGENTES PARASITARIOS E. histoltyca, Giardia , Quistes de Balantidium coli. Criptosporidium Criptosporidium , Isospora belli. belli. , (no muy comúnes en personas inmunocompetente inmunocompetentes) s) Trichuris.Ascaris,Strongyloides,Necator,Ancylostoma etc Trofozoito de Balantidium coli etc. Trofozoitos Trichomona vaginalis. Pneumocistis ,
EXAMEN DIRECTO EN FRESCO
Formalina 10 % ✔
FAUST Y RITCHIE
✔
CAPSULA DUODENAL DE
Fasciola hepatica, ,Giardia. Paragonimus,
BEAL
CONTENIDO DUODENAL
SANGRE
T° ambiente
Giardia,
Form Forma alin lina 10 10 %
CAPS CAPSUL ULA A DUOD DUODEN ENAL AL DE BEAL BEAL
Necator etc. Hemoprotozooarios FROTIS DIRECTO DE SANGRE, HEMOCULTIVO
SANGRE
FROTE EN GOTA GRUESA DE SANGRE TINCION DE GIEMSA
TEJIDOS
BIOPSIA
4°C
(Strongyloides,Paragonimus,F (Strongyloides,Paragonimus,Fasciola,Ancyl asciola,Ancylostoma, ostoma,
Formalina 10 %
TRIQUINOSCOPIA
Tripanosoma,(xenodiagnostico) Plasmodium, Plasmodium, (Frote grueso) grueso) Leishmania Trichinella spiralis
Huevos de :
EXAMENES ESPECIALES
FROTIS PERIANAL
T° ambiente
T° ambiente
TIPOS DE EXAMENES PARASITOLOGICOS: EX AMENES PARASITOLOGICOS RASITOLOGICOS:
METODO DE GRAHAM (Raspado perianal)
Enterobius vermicularis Ascaris lumbricoides, lumbricoides, Taenia sp. Hymenolepis nana.
Huevos de :
EXAMENES ESPECIALES
FROTIS PERIANAL
T° ambiente
T° ambiente
METODO DE GRAHAM (Raspado perianal)
TIPOS DE EXAMENES PARASITOLOGICOS: EX AMENES PARASITOLOGICOS RASITOLOGICOS:
Enterobius vermicularis Ascaris lumbricoides, lumbricoides, Taenia sp. Hymenolepis nana.
SIGNIFICADO CLINICO DEL COLOR DE LAS HECES: El color de las heces proporciona una significativa información al químico clínico , ya que con solo realizar un detallado análisis macroscópico de estas , le puede orie orient ntar ar en gran gran part parte e para para dete detect ctar ar algu alguna na pato patolo logí gía, a, disf disfun unci cion on orgá orgáni nica, ca, hemorragia, o bien hacer de su conocimiento el tipo de alimentación o ingestión de algún medicamento que este presentando el paciente en ese momento . El color anormal ayuda al médico médico a seleccionar seleccionar las pruebas tanto químicas químicas como microbiológicas necesarias para llegar finalmente a extender un buen diagnostico , pronostico y plan de tratamiento adecuados para el paciente. A contin continuac uación ión los colo colores res más comunes comunes que pueden pueden tinuaci ón se hará referencia a los
SIGNIFICADO CLINICO DEL COLOR DE LAS HECES: El color de las heces proporciona una significativa información al químico clínico , ya que con solo realizar un detallado análisis macroscópico de estas , le puede orie orient ntar ar en gran gran part parte e para para dete detect ctar ar algu alguna na pato patolo logí gía, a, disf disfun unci cion on orgá orgáni nica, ca, hemorragia, o bien hacer de su conocimiento el tipo de alimentación o ingestión de algún medicamento que este presentando el paciente en ese momento . El color anormal ayuda al médico médico a seleccionar seleccionar las pruebas tanto químicas químicas como microbiológicas necesarias para llegar finalmente a extender un buen diagnostico , pronostico y plan de tratamiento adecuados para el paciente. A contin continuac uación ión los colo colores res más comunes comunes que pueden pueden tinuaci ón se hará referencia a los presentar las heces fecales ya sea por alguna patología o bien por algún otro factor externo :
COLOR
AMARILLO VERDOSO AMARILLENTAS YEMA DE HUEVO
BLANQUECINAS O GRISACEAS (ACOLIA)
VERDOSAS
SIGNIFICADO Diarrea abundante.
Se presentan en las "diarreas de fermentación" y en las “ esteatorreas .” Heces Hece s proc proced eden ente tes s de un trán tránsi sito to acelerado a partir de las partes más altas del intestino delgado. Heces Heces carac caracter teríst ística icas s de las icteri ictericia cias s obstructivas y de la fase aguda de las hepáticas,. NOT NOTA : La inge ingest stió ión n de papi papill lla a de bari bario o puede producir el mismo efecto .
Diarrea abundante. Tambi ambien en se pres presen enta tan n en las las diar diarrreas eas duodenales . Por otra parte se pueden presentar por una una inge ingest stió ión n excesi cesiva va de vege vegeta tale les s clo clorofíli fílico cos s los los cua cuales les darán un ton tono verdoso a las heces, En los los lact lacta antes tes son son fre frecue cuentes tes las las diarreas verdes, pero es normal que en los niños criados al pecho las deposiciones se tornen verdes al contacto del aire.
NEGRO
ARCILLA MARRON INTENSO
Heces Hece s que que proc proced eden en gene genera ralm lmen ente te de una hemorragia del aparto gastro trointestinal alto (>100 ml de sangre). Sin embargo también se pueden presentar cuando se ingirió una elevada proporción de carnes en la dieta , cerezas, o alimentos con colorante artificial. Heces característ características icas de un bloqueo bloqueo del conducto biliar común. Probable hemorragia del aparato gastr gastroi oint ntes esti tina nall bajo bajo ( por por ejem ejempl plo: o: tumores, tumores, hemorroides, hemorroides, fisuras, procesos procesos inflamatorios).
ROJIZA (MELENA)
Rojizas, irregularmente, son las deposicio deposiciones nes que contiene contienen n sangre sangre no transformada, de origen bajo (hemorr (hemorroide oides, s, tumore tumores s de colon colon distal, distal, etc.). Unas Unas hece heces s rojiz ojizas as tamb tambié ién n pued pueden en present presentarse arse por la ingestió ingestión n abundan abundante te de betabel o tomate .
MEDICAMENTOS QUE PROVOCAN CAMBIOS EN LA COLORACIÓN DE LAS HECES : •
Negro: Negro: Sales de hierro, Sales de bismuto, carbón.
•
Verde: cloruro de mercurio, indiometicina, calomel.
•
Verde a azul: ditiazanina.
•
Marrón: antraquinonas.
•
Rojo: fenolftaleína fenolftaleína,, pamoato de pirivino, tetraciclinas em jarabe, bromosulfaleína.
•
Amarillo: santonina, antibióticos.
•
Claro a blancuzco: blancuzco: bário, antiácidos.
•
Naranja rojizo: fenazopiridina.
•
Rosa a rojo a negro negro:: anticoagulantes dosis excesivas, salicilatos.
Como Como se pude pude obse observ rvar ar la hist histor oria ia clín clínic ica a del del paci pacien ente te , los los ante antece cede dent ntes es dietéticos dietéticos y el tratamien tratamiento to bajo el el cual se encuentre encuentre el paciente paciente , son son aspedctos aspedctos sumamente sumamente importantes importantes que debe saber el Qumico clínico clínico para poder distinguir distinguir anormalidades importantes importantes en las heces fecales de simples interferencias.
I EXAMENES PARASITOLOGICOS * EXAMEN :MACROSCOPICO :
✔ Consistencia CARACT. DE LAS CARACT. L AS HECES : ✔ Color TAMIZADO ✔ Mucus, (Nematodos adultos y huevos de Taenia)
Sangre Especímenes SOLUCION SALINA: ✔ ✔
Trofozoitos y Quistes al natural natural
núcleos y vacuolas vacuolas . LUGOL : Estructuras internas , núcleos
ideal para buscar trofozoitos móviles ó larvas
Huevos y lavas
FAUST (ZnSO4)
FLOTACION
MUESTRA: ✔ ✔ ✔
II
* EXAMEN MICROSCOPICO :
Heces Esputo , Contenido duodenal
METODOS DE CONCENTRACION
TUBO
(Útil para quistes y huevos )
POR SEDIMENTACION -FLOTACION
RITCHIE
(Útil para quistes ooquistes y huevos
COPA
III
* EXAMEN CUANTITATIVO (Recuento de huevos )
BAERMAN (Útil para
larvas de Strongyloides Strongyloides Necator y Ancylostoma) Ancylostoma)
STOLL
POR DILUCIÓ DILUCIÓN
Ideal para huevos de Ancylostoma y Necator
FROTIS GRUESO
KATO Ideal para huevos de helmintos
GRAHAM Útil para huevos de Enterobius ,Ascaris,Trichuris,Hymenolepis,y ,Ascaris,Trichuris,Hymenolepis,y Taenia Taenia (Útil para trofozoitos trofozoitos de CÁPSULA DUODENAL DE BEAL(Útil huevos de Uncinarias)
IV
EXAMENES ESPECIALES:
HARADA MORI HEMOCULTIVO
METODO DIRECTO
(Útil para Hemof Hemofla la Uncinarias elados elados y Strongyloides)
Giardia, larvas larvas de Strongyloides
EXAMENES ESPECIALES:
HARADA MORI HEMOCULTIVO
(Útil para Hemof Hemofla la Uncinarias elados elados y Strongyloides)
METODO DIRECTO
Tripanosomiasis.
Tripanosomiasis.
*DIAGRAMA DE FLUJO DE UNA :
Larvas Coccidios Trofozoito Strongyloides de Entamoeba **TROFOZOITOS: ZIEHL-NEELSEN CENTRIFUGAR SEDIMENTO BAERMAN CON SIN NEGATIVO POSITIVO FROTIS EXAMEN HEMATOXILINA MOCO MEZCLAR LIQUIDAS DEL EN SEDIMENTO FRESCO MDIARREICAS UESTRA FRESCA FRESCA DE *MOCO Útil para Ooquistes de Quistes E.histolytica de Y G,lamblia O FERRICA I, belli HECES Giardia lamblia
**
CENTRIFUGAR TRICROMICA :
Balantidium coli
QUISTES Balantidium coli Giardia lamblia
OOQUISTES: Cryptosporidium I. belli B, hominis Cyclosporidium
LARVAS: S, stercolaris
HUEVOS : H, nana
*DIAGRAMA DE FLUJO DE UNA :
Larvas Coccidios Trofozoito Strongyloides de Entamoeba **TROFOZOITOS: ZIEHL-NEELSEN CENTRIFUGAR SEDIMENTO BAERMAN CON SIN NEGATIVO POSITIVO FROTIS EXAMEN HEMATOXILINA MOCO MEZCLAR LIQUIDAS DEL EN SEDIMENTO FRESCO MDIARREICAS UESTRA FRESCA FRESCA DE *MOCO Útil para Ooquistes de Quistes E.histolytica de Y G,lamblia O FERRICA I, belli HECES Giardia lamblia
**
CENTRIFUGAR TRICROMICA :
Balantidium coli
QUISTES Balantidium coli Giardia lamblia
OOQUISTES: Cryptosporidium I. belli B, hominis Cyclosporidium
LARVAS: S, stercolaris
HUEVOS : H, nana
* TAMIZADO GENERALIDADES: La técnica de tamizado Permite observar directamente las características morfológicas de los parásitos adultos, enteros o fraccionados. tal es el caso de los helmintos: Taenia solium soli um y T. saginata saginat a
Es un pará parási sito to impor importa tant nte e del del hombr hombre e en aque aquellllos os luga lugares res donde donde el consumo frecuente de la carne de cerdo y de res cruda o insuficientemente cocida, ya que la carne de estos animales puede contener las fases larvarias de las tenias mencionadas, las cuales se denominan metacéstodos o cisticercos. Fases de desarrollo:
Adulto (de T. solium.) Mide de 2 a 7 metros de longitud y posee escólex o cabez cabeza a cuad cuadran rangu gula larr de aproxi aproxima mada damen mente te 1 mm de diám diámet etro, ro, con cuat cuatro ro ventosas musculares grandes en forma de copa que miden 0.5 mm de diámetro y rostelo prominente, redondeado y armado con una doble corona de ganchos en número de 22 a 32. Luego sigue el cuello y la cadena estrobilar compuesta por unos 1,000 a 2,000 segmentos o proglótidos. Metacéstodo, Metacéstodo, cisticerco cisticerco, etc . Existen dos tipos fundamentales el de T. solium , tambié también n denomi denominad nado o Cysticercus Cysticercus cellulosae cellulosae , el cual es una vesícula blanquecina de 0.5 a 1.5 cm de ancho, con escólex invaginado y armado con doble corona de ganchos, al igual que el adulto, y el de T. saginata, denominado Cysticercus bovis , más o menos con las mismas características que el anterior, pero sin corona de ganchos en el escólex. Huevos: Los huevos que producen los adultos de ambas especies de Taeniason semejantes semejantes e indistinguibl indistinguibles es al examen microscópico. microscópico. Son esféricos, esféricos, miden de 30 a 45 micras de diámetro y poseen una cápsula gruesa radiada y una membrana hialina de origen embrionario. En su interior, se encuentra el embrión (oncosfera o embrión hexacanto) que generalmente posee tres pares de ganchos.
EXAMENES DE LABORATORIO LABORATORIO: Despué Despuéss de la expulsió expulsión n espont espontáne ánea a de proglóti proglótidos, dos, estos estos se pueden pueden recuperar por medio de la técnica de TAMIZADO en heces expulsadas durante 24 hora horas. s. En caso caso de obte obtene ners rse e prog progló lótitido dos, s, debe deben n comp compri rimi mirs rse e entr entre e dos dos portaobjetos y observarlos a contraluz o en un microscopio estereoscópico. Hay que estudiar los proglótidos grávidos y contar el número de ramas uterinas, ya que en caso de pertenecer a la especie T. solium son poco numerosas (8 a 12), y si se trata de T. saginata, generalmente son numerosas (12 a 24). Mediante el TAMIZADO de las heces también es posible recuperar el escólex, sobre todo después de los tratamientos, el cual se observará bajo el microscopio para determinar sus características morfológicas. Ocasi Oc asion onal alme ment nte e se pued pueden en enco encont ntrar rar huevo huevoss de Taenia sp. sp. por por los exámenes coproparasitoscópicos de flotación como el Faust, Ferreira, etc, o de sedimentación, como el Ritchie, o a buscar huevos de Enterobius vermicularis mediante el método de Graham. Es importante decir, que el hallazgo de los huevos de Taenia sp. por cualquiera de los métodos empleados de ninguna manera permiten realizar el
diagnóstico de una especie de tenia, y sólo se informan como "huevos de Taenia sp." Recien Recientem tement ente, e, se ha desarro desarrolla llado do la detecci detección ón de coproan coproantíg tígenos enos de Taenia; pero tampoco permiten discriminar la especie.
II. EXAMEN MICROSCÓPICO: MICROSCÓPIC O:: MICROSCÓPICO
* COPROPARASITOSCOPICO DIRECTO FUNDAMENTO : Este método permite buscar principalmente en muestras frescas , la presencia presencia de formas formas evolutivas evolutivas móviles de parásitos parásitos de tamaño tamaño microscópico microscópico ( trof trofoz ozoi oito tos, s, quis quiste tess de prot protoz ozoo oos: s: Entamoe Entamoeba ba histolyt histolytica, ica,Giar Giardia dia lamblia lamblia (duoden (duodenalis alis)) ,Balant ,Balantidium idium coli coli etc, así así como como larva larvass o huev huevos os de helm helmin into tos: s: Strongyl Strongyloide oides s stercol stercolaris aris,, Paragonimus,Fasciola etc )
Ancylos Ancylostoma toma
MATERIALy EQUIPO Aplicadores de madera Portaobjetos de 25 X 76 mm Cubreobjetos de 22 X 22 mm Solución salina isotónica Lugol Microscopio
duodena duodenale, le,
Necato Necatorr
america americanus nus,,
METODO: a) En un portao portaobje bjetos tos limpio limpio y desengra desengrasado sado,, se colocan colocan separada separadamen mente, te, una gota de solución salina y otra de lugol. b) Con el aplic aplicador ador de madera madera se toma toma una muest muestra ra de 1 a 4 mg de heces heces 8 en muestras con sangre y moco elegir esa parte para estudiar) y se mezcla con la solu soluci ción ón,, con con el mism mismo o apli aplicad cador or se retir retiran an las las fibr fibras as y otros otros frag fragmen mento toss gruesos, procurando hacer una suspensión no un frotis. c) Colo Colocar car el el cubre cubreobj objet etos os.. d) Repetir Repetir estas estas operacio operaciones nes en la gota gota de lugol. lugol. e) Observar al microscopio con objetivos de 10X y 40X. No es recomendable usar obje objetitivo vo de inme inmersi rsión ón (100 (100 x) , pues pues se pued puede e ensu ensuci ciar ar el micro microsc scopi opio. o. Recorrerla Recorrerla lamina siguiendo siguiendo un sentido sentido direccional direccional , ejemplo ejemplo :de derecha derecha a izquierda , o de arriba abajo. NOTA:Con el suero fisiológico, los trofozoitos trofozoitos y quistes de los protozooarios se observan en forma natural , y con lugol , las estructuras internas , núcleos y vacuolas.
INTERPRETACION DE RESULTADOS: Se informará informará detalladamente detalladamente la presencia presencia de alguna forma parasitaria observada durante el análisis coproparasitoscopico , indicando su especie y estado evolutivo (trofozoito, quiste en caso de un protozoo) ó (huevo , larva en caso de un helminto)
* COPROPARASITOSCÓPICO MEDIATO O INMEDIATO CON COLORANTES VITALES
FUNDAMENTO: Este método nos permite diferenciar correctamente los diferentes protozoos basándose en las características morfológicas de cada uno de ellos obser observan vando do sus núcleo núcleos, s, endos endosom omas as,, etc etc .medi .median ante te la util utiliz izac ació ión n de los los colorantes vitales ( azul de metileno, rojo congo, eosina, verde de malaquita, verde de Janus, Safranina) MATERIALy EQUIPO Aplicadores de madera Portaobjetos de 25 X 76 mm
Puente de tinción Lámpara de alcohol Azul de metileno al 3.5% Agua destilada Microscopio
METODO: a) En un portaobjet portaobjetos os se coloca coloca una gota gota de azul de metil metileno eno al 3.5% 3.5% b) Se toma toma una una porc porció ión n pequ pequeñ eña a de heces heces fecale fecaless con un aplicad aplicador or y se realiza una suspensión homogénea con el colorante. c) Se deja deja actuar actuar el coloran colorante te por 3 minuto minutoss o bien se flamea flamea pero pero sin que hier hierva va la mues muestr tra, a, sólo sólo hast hasta a la emis emisió ión n de vapo vapore res. s. Obse Observ rvar ar al microscopio con objetivos de 10X y 40X. INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso caso de encont encontrar rar algún algún parasit parasito o durante durante la realiza realización ción de esta esta prueba prueba se deberáanotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio evolutivo evolutivo (trofozoito (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
* MÉTODO DE CONCENTRACIÓN CONCENTR ACIÓN
POR FLOTACION
FAUST
FUNDAMENTO: Se basa en que los quistes y/o huevos de los parásitos parásitos flotan en la superficie por ser de menor densidad que el sulfato de zinc a 33,3%, cuya
densidad es 1180. Es útil para la búsqueda de quistesy/o huevos de parásitos y excepcionalmente se observan larvas. Se recomienda controlar la densidad del sulfato de zinc y usar agua filtrada para el lavado previo de la muestra.
MATERIALy EQUIPO Vaso de precipitado de 50 ml Tubos de ensaye de 15 X 100 mm Gradilla Embudo de polietileno Gasa cortada en cuadros de 15 cm por lado Portaobjetos de 76 X 26 mm Cubreobjetos de 22 X 22 mm Aplicadores de madera Asa de alambre terminada en círculo de 3 a 5 mm de diámetro y formando ángulo recto con el resto del alambre. Solución de Sulfato de Zinc 1.180° Baumé Lugol Microscopio Centrífuga
METODO: a) Se hace hace una suspens suspensión ión homogé homogénea nea con 1 g de materia materia fecal fecal y 10 ml de agua. b) Se filtr iltra a la suspe uspens nsió ión n a travé ravéss de la gas gasa colo coloca cada da en el embu embudo do,, colectando el filtrado directamente en el tubo. c) Se centrif centrifugan ugan los los tubos tubos a 2000 2000 rpm durante 1 min. min. d) Se decanta decanta el sobrenad sobrenadant ante e y se resuspen resuspende de el sediment sedimento o con agua. Se cent centríf rífuga uga nueva nuevame ment nte, e, repit repitie iendo ndo la mism misma a opera operaci ción ón hast hasta a que que el sobrenadante se observe limpio. e) Se deca decant nta a el últi último mo sobr sobren enad adan ante te,, se resu resusp spen ende de el sedi sedime ment nto o y se agrega Sulfato de Zinc 1.180° Baumé y se centrífuga a 2000 rpm durante 1 min. f) Con el asa asa se recoge recoge la muestr muestra a de la películ película a superfi superficial cial que que se encuent encuentra ra en el menisco, dos o tres ocasiones y se deposita sobre el portaobjetos; se añade una gota de lugol, se mezcla con el ángulo del cubreobjetos y se cubre con el mismo. g) Se observa observa la preparac preparación ión con objetivos objetivos de 10 10 X y 40 X.
INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deber deberá á anot anotar ar en la hoja hoja de result resultad ados os el nombre nombre del paras parasitito o así así como como su estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
* METODO DE CONCENTRACION POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE
FUNDAMENTO: Se basa basa en la conc concen entr trac ació ión n de los los quis quiste tess y huev huevos os por por sedimentación mediante la centrifugación, con la ayuda de formol y éter para separar y visualizar los elementos parasitarios. Unas ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.
MATERIALy EQUIPO Centrífuga Tubos de ensaye cónicos de 15 ml Gasa cortada en cuadros de 15 cm por lado Embudos de polietileno Vasos de precipitado de 50 ml Aplicadores de madera Pipetas Pasteur con bulbo Portaobjetos de 26 X 76 mm Cubreobjetos de 22 X 22 mm Solución salina isotónica Solución de formaldehido al 10% Microscopio
METODO a) Con el aplicado aplicadorr de madera se coloca coloca aproximada aproximadamente mente 1 gr. gr. de la materia materia fecal en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza. b) Se filtr iltra a la suspe uspens nsió ión n a travé ravéss de la gas gasa colo coloca cada da en el embu embudo do,, recogiendo el filtrado en el tubo cónico. c) Se centrífu centrífuga ga la suspensión suspensión durante durante 1 min a 2000 rpm. d) Se decant decanta a el sobrena sobrenadan dante te y se resuspe resuspende nde el sedi sedimen mento to con con solución solución salina, centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias hasta que el sobrenadante sea claro. e) Al último último sedimento sedimento se agregan agregan 10 ml de de solución solución de formaldehíd formaldehído o al 10%, se mezcla y se deja reposar durante 10 min. f) 6.6.- Se añade añaden n despué despuéss 5 ml de éter éter, se tapa tapan n los tubos tubos con tapone taponess de caucho y se agitan enérgicamente durante 30 segundos. g) Se centrí centrífug fuga a durante durante 2 minut minutos os a 1500 1500 rpm. h) Después Después de de centrif centrifugar ugar se se observan observan 4 capas: capas: ➢ ➢ ➢ ➢
éter en la superficial, un tapón de restos fecales, formaldehído, sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los ele mentos parasitarios.
i) Se intro introduce duce la la pipeta pipeta Pasteu Pasteurr hasta hasta la capa d, se se extrae extrae con cuida cuidado do una gota del sedimento y se coloca en un portaobjetos. j) Se le añade añade una una gota de lugo lugoll y con uno de de los ángul ángulos os del cubre cubreobj objeto etos, s, se homogeniza, cubriéndolo con el mismo. k) Se observa observa la preparac preparación ión en el el microscopio microscopio con con objetivos objetivos de 10X y 40X. 40X.
INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deber deberá á anot anotar ar en la hoja hoja de result resultad ados os el nombre nombre del paras parasitito o así así como como su estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
III. EXAMEN CUALITATIVO CUALITATIVO :
* MÉTODO DE DILUCION DILUCION
DE STOLL STOLL
FUNDAMENTO: Este Este méto método do se basa basa en los los prin princi cipi pios os de sapo saponi nifificac cació ión, n, homogenización y aclaración. El NaOH 0.1 N al ponerse en contacto con las grasas de las heces se saponifica, hace que los huevos de los parásitos sean menos pegajosos, desinfecta y deodoriza la muestra. MATERIALy EQUIPO Prob Probet eta a grad gradua uada da de 100 100 ml con con tapón esmerilado Pipetas de Stoll o graduadas de 2 ml en 0.01 ml. Varilla de vidrio de 20 cm de longitud Perlas de vidrio Portaobjetos de 74 X 38 mm NaOH 0.1 N Microscopio
METODO: a) Se coloca coloca en la probeta probeta Hidróxido Hidróxido de de Sodio 0.1 0.1 N hasta la la marca de 56 ml. b) Con la varilla varilla de de vidrio, se añade materia materia fecal fecal hasta hasta aforar aforar a 60 ml. c) Si las las heces son son duras, duras, se espera espera un tiempo tiempo a que se reblande reblandezcan. zcan. d) Se añaden añaden 15 perlas perlas de vidrio, vidrio, se tapa la la probeta, probeta, se agita agita fuertemente, fuertemente, de arriba abajo, durante 1 minuto, hasta formarse una suspensión homogénea. e) Los huevos huevos y restos empieza empiezan n a precipitar precipitar en cuanto cuanto cesa la agitac agitación. ión. Con la pipe pipeta ta se toma toma inme inmedi diat atam amen ente te 0.07 0.075 5 o 0.15 0.15 ml del del cent centro ro de la suspen suspensió sión. n. Se recomi recomiend enda a el segundo segundo volumen, volumen, que da una muestr muestra a mayor para el recuento. Llevando la punta de la pipeta al centro del matraz, el error debido a la precipitación de los huevos disminuye. f) Se pasa pasa la totalid totalidad ad del conte contenid nido o de la pipeta pipeta a un portaob portaobjet jetos os y se cubre cubre la gota con el cubreobjetos. g) Se examina examina la preparación preparación sistem sistemáticam áticamente ente con el objetivo objetivo seco débil débil y se cuentan cuentan todos los huevos y larvas presentes presentes cuidando no contar dos veces la misma estructura. CALCULOS: El número de huevos y larvas contados se multiplica por: 100, si la materia fecal es dura. 200, si la materia fecal es pastosa. 400, si la materia fecal es líquida. NOTA: Esto Estoss fact factor ores es depe depend nden en de la cant cantid idad ad de agua agua que que las las mues muestr tras as contengan. El resultado se expresa en huevos o larvas por ml de heces ( H.ml.H) Los quistes únicamente se reportan, sin cuantificarse. •
• •
INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deber deberá á anot anotar ar en la hoja hoja de result resultad ados os el nombre nombre del paras parasitito o así así como como su
estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
* METODO CUANTITATIVO DE FROTIS GRUESO KATO FUNDAMENTO: Es un método método cuantitativo cuantitativo de helminto helmintos. s. El cual se basa en la acción que tiene la glicerina como aclarador de los huevos de helmintos y el verde de malaquita como colorante de contraste. MATERIAL y EQUIPO Aplicadores de madera Malla de alambre Pape Papell celof elofán án de gros grosor or medi medio, o, no resistente a la humedad recortado en cuadros de 22 X 40 ó 22 X 30 mm Recipiente conteniendo glicerol Verde de malaquita al 3% Microscopio
METODO: a) Con un abateleng abatelenguas, uas, pasar pasar 50- 60 mg de materia materia fecal fecal a un portaobjeto portaobjetoss a través través de la malla metálica. b) Cubrir Cubrir la muestra muestra con el cubreobjet cubreobjetos os de celofán celofán embebido embebido en la solució solución n de verde de malaquita y glicerol. Invertir Invertir la preparación, preparación, presionar presionar sobre una hoja de papel filtro contra la superficie de la mesa de trabajo, para lograr la extensión de la muestra hasta cubrir un área de 20 a 25 mm de diámetro. c) Dejar Dejar reposa reposarr la preparac preparación ión con el cubre cubreobje objetos tos de papel papel celof celofán án hacia hacia arriba arriba durante una hora a temperatura ambiente o 30 minutos a 34-40°C. Esto motivará el aclaración de las heces, sin que se aclaren los huevos de helmintos. d) Observ Observar ar al micros microscop copio, io, hacer hacer el conteo conteo de los huevos huevos que se encuent encuentren ren en la preparación. Para obtener la cifre total, cada cuenta alcanzada, multiplicarla por el factor correspondiente para expresarla en huevos por gramo de heces (h.g.h) Si se pesaron 50 mg , multiplicar por 20 que es un factor constante y el producto será la cifra a reportar. e) Debe Debe evit evitar arse se exce excede derr el tiem tiempo po de acla aclara raci ción ón porq porque ue esto esto difi dificu cultltar aría ía la obse observ rvac ació ión n de los los huev huevos os de helm helmin into tos. s. Si fues fuese e nece necesa sari rio o demo demora rarr la observación observación puede detenerse detenerse el proceso proceso de aclaración aclaración invirtiendo invirtiendo la preparación preparación es decir colocarla con el papel celofán hacia abajo hasta el momento que se vaya a observar.
INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
IV. IV.
EXAMENES ESPECIALES :
* METODO DE GRAHAM ( RASPADO PERIANAL) FUNDAMENTO: Esta técnica se basa en que la hembra adulta de Enterobius vermicularis habitualmente no deposita sus huevos en el interior del intestino, sino que que por por lo general general emigra emigra duran durante te la noch noche, e, hacia hacia las las márge márgene ness del ano, ano, depositando los huevos en los pliegues perianales. Es por esto que la toma debe efectuarse en la mañana indicando que debe ir a defecar y no debe bañarse. umbricoides, Trichuris Ocasionalmente se pueden encontrar huevos de Ascaris umbricoides, trichiura, Hymenolepis nana, Taenia sp.
MATERIALy EQUIPO Portaobjetos De 26 X 76 mm Abatelenguas Cinta de celulosa Scotch Microscopio
METODO: a) Sobre Sobre un extrem extremo o del abatel abatelengu enguas as se coloca la cinta cinta Scotch con la parte parte adherente hacia fuera, sujetándola con los dedos pulgar e índice. b) Se presio presiona na la super superfifici cie e sobre sobre la regi región ón peri perian anal al hacia hacia uno uno y otro otro lado, lado, finalmente se hace un frote perianal. c) Separ Separar ar cuid cuidad adosa osame ment nte e la cint cinta a del del abate abatele lengu nguas as y adhe adheri rirl rlo o sobre sobre un portaobjetos. d) Observa Observarr con con objet objetivo ivo de de 10X. 10X. INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deber deberá á anot anotar ar en la hoja hoja de result resultad ados os el nombre nombre del paras parasitito o así así como como su estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
* MÉTODO DE HARADA MORI este méto método do perm permitite e Real Realiz izar ar un cult cultiv ivo o de huev huevos os para para obte obtene ner r FUNDAMENTO: este desarrollo de larvas y así poder precisar la especie.
MATERIAL Y EQUIPO: Agua Destilada Tubos de ensaye de punta cónica de 15 ml Gradilla Abatelenguas o aplicadores de madera
Tiras de papel filtro de 13 X 120 mm Portaobjetos de 26 X 76 mm Cubreobjetos de 22 X 22 mm Pipetas Pasteur con bulbo Sol. De lugol o ácido acético al 20% Microscopio
METODO: a) Se extiende extiende una una fina películ película a de heces heces ( de 1 a 2 mm) mm) en un lado lado del tercio tercio medio medio de una tira de papel filtro. b) Se coloca coloca el papel papel en un tubo tubo de ensaye con con 3 ml de agua destil destilada ada forzan forzando do la tira hasta aproximadamente el nivel de 1 cm y presionando el lado limpio contra la pared del tubo. c) Se conserva conserva el cultivo cultivo a temper temperatura atura ambiente ambiente (24-28° (24-28°C) C) en la oscuridad oscuridad durant durante e un periodo de 1-5 días añadiendo agua según se vaya necesitando para mantener el nivel bastante por encima del extremo inferior del papel filtro. d) El flujo flujo capilar capilar del agua agua que sube a través través del papel y la películ película a fecal fecal mantiene mantiene húmedas las heces y transporta sus elementos solubles hacia la parte superior del papel, donde se evaporan o acumulan en un depósito oscuro. e) Al alcanzar alcanzar la fase infeccios infecciosa, a, las larvas larvas migran migran hacia abajo contra contra la corriente corriente del flujo del agua, y al alcanzar el nivel de ésta se sumergen hacia el fondo, donde pued pueden en vers verse e con con una una lupa lupa y toma tomars rse e con con una una pipe pipeta ta para para su exam examen en microscópico. f) La tira tira de papel papel filtr filtro o pued puede e tran transf sfer erir irse se a un tubo tubo limp limpio io lleno lleno de agua para para recoger las larvas que hayan podido quedar en la película fecal. g) Alguna Algunass especies especies de larvas larvas tienen tenden tendencia cia a no migrar migrar hacia hacia abajo. abajo. Antes Antes de retirarlas, las larvas pueden inmovilizarse introduciendo el tubo a baño María (5060°C) o añadiendo una cantidad de ácido Acético al 20%.
INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá anotar en la hoja de resultados resultados el nombre del parasito parasito así como como su estadio evolutivo evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
* METODO DE BAERMAN Fundamento: Se basa en los tropismos positivos: geotropismo, termotropismo e hidrot hidrotropi ropismo smo de los trofoz trofozoít oítos os de protoz protozoos oos y larvas larvas de helmin helmintos tos.. Es útil útil principalmente para Balantidium coli y larvas de Strongyloides stercoralis. MATERIAL Y EQUIPO: Embudo de vidrio Gasa Coladera metalica
Pipeta pasteur Portaobjetos Solución salina Microscopio Estufa
METODO: a) Colocar Colocar la coladera coladera metálica metálica con la la gasa doblada doblada dentro del embudo embudo b) Coloca Colocarr dentro dentro de la la gasa de de 3 a 4 grs de de heces heces 0 c) Verter solución salina a 37 C en cantidad suficiente d) Dejar a temperatura o en la estufa a 280C – 370C de 30 a 50 minutos. e) Sacar Sacar la coladera coladera o rejilla rejilla y con ayuda de una pipeta pipeta Pasteur Pasteur,, obtener obtener un mililitro de sedimento. f) Colocar Colocar dicho dicho sediment sedimento o en un portaobje portaobjetos tos y observar al microsco microscopio. pio. g) Se deberán deberán reportar reportar los estadios estadios evolutivos evolutivos de los parásitos parásitos encontrad encontrados. os.
INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá anotar en la hoja de resultados resultados el nombre del parasito parasito así como como su estadio evolutivo evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
*ESTUDIO DE AMIBAS DE VIDA VID A LIBRE GENERALIDADES: Las amebas de vida libre son numerosas numerosas y se encuentran encuentran en la naturaleza, naturaleza, en medi medios os como como:: agua agua,, suel suelos os y vege vegeta taci ción ón.. Los Los géne género ross Naeg Naegler leria ia y Acanthamoeba ; tienen importancia en salud pública ya que pueden producir enfermedades de tipo mortal como la meningoencefalitis. meningoenc efalitis. La puerta de entrada para estas amebas al ser humano es a través de la piel o de las mucosas, así como también la inhalación de agua o aire contaminados con estos estos patógeno patógenos. s. Una vez en el organi organismo smo,, aparece aparece una lesión lesión y a través través del sistema sistema circulatorio, circulatorio, las amebas pueden alcanzan alcanzan el sistema sistema nervioso central. En este este tipo tipo de infe infecc cció ión n las las lesi lesion ones es se cara caract cter eriz izan an por por form formar ar grán gránul ulos os o tumoraciones en los tejidos. fowler fowleri i ; caus causa a una una infe infecc cció ión n llam llamad ada a meni mening ngoe oenc ncef efal alititis is amebiana amebiana primaria primaria (MEAP ). ). Esta infección se adquiere por la inhalación de agua Naegle Naegleri ria a
con amebas. Una vez en las fosas nasales las amebas viajan rápidamente a travé travéss de los los teji tejidos dos olfa olfato tori rios os llega llegand ndo o al cere cerebro bro y conce concent ntrá rándo ndose se en el encéfalo. Dado que la invasión es muy rápida y las amebas se reproducen acel aceler erad adam amen ente te,, comi comien enza za la dest destru rucc cció ión n masi masiva va del del cere cerebr bro o y ocur ocurre ren n numerosas hemorragias en gran parte del sistema nervioso central, y la muerte sobreviene sobreviene en el lapso de tres y siete días, dependiendo dependiendo del manejo manejo y resistencia resistencia del paciente, así como de la virulencia del microorganismo invasor. infección se adquiere por la inhalación de agua con amebas.
Las Las ameb amebas as del del géne género ro Acanthamoeba son son capace capacess de produ produci cirr un pade padeci cimi mien ento to llama lamado do encef ncefal alit itis is ameb amebia iana na gran granul ulom omat atos osa a (EAG (EAG)) o acanta acantameb mebios iosis, is, además además de otras otras enferme enfermedade dadess en ojo, ojo, oídos, oídos, piel, piel, pulmón, pulmón, hígado, próstata y útero entre otros órganos.
DIAGNOSTICO EN EL LABORATORIO: LABORATORIO: Para identificar las amebas de Naegleria fowleri ;se deberán realizar realizar frotes de LCR LCR y teñi teñirr con con Wrig Wright ht o Giem Giemsa sa.. Es impor importa tant nte e deci decirr, que que en estas estas preparaciones, las amibas muestran abundante citoplasma azulado y un nucleo pequ pequeñ eño o y deli delica cado do de colo colorr rosa rosa.E .Ell LCR LCR en esto estoss caso casoss es puru purule lent nto o o sang sangui uino nole lent nto, o, con con leuc leucoc ocititos os,, prin princi cipa palm lmen ente te neut neutro rofifilo loss hast hasta a más más de 3 20,0007mm , la glucosa es baja y el contenido de proteínas alto. Para la identificación de Acanthamoeba en LCR se deben Observar Observar de manera directa de la formas trofozoiticas. En tejido nervioso se deben observar las formas quísticas.
* ESTUDIO DE PROTOZOARIOS CILIADOS INTESTINALES FUNDAMENTO: Este método permite hacer la identificación por medio de un examen coproparasitoscópico directo del trofozoito trofozoito en heces diarreicas diarreicas y el quiste quiste en heces formadas del parásito Balantidium coli. MATERIAL Y EQUIPO Aplicadores de madera Portaobjetos de 25 X 76 mm Cubreobjetos de 22 X 22 mm Solución Salina isotónica Lugol Agua destilada Microscopio Materia fecal porcina
METODO a) Coloca Colocarr en un lado del porta portaobj objeto etoss una gota de solució solución n salina salina y del otro otro extremo una gota de lugol. b) Agregar Agregar una porción porción de materia materia fecal fecal porcina porcina y homogeneizar homogeneizar.. c) Colocar Colocar el cubreobjetos cubreobjetos procurando procurando no no hacer hacer vacíos. vacíos. d) Observar Observar al microscopio microscopio con objetivos objetivos de 10X 10X y 40X. 40X. e) Hacer Hacer los dibu dibujos jos y anota anotarr resulta resultados. dos. INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deber deberá á anot anotar ar en la hoja hoja de result resultad ados os el nombre nombre del paras parasitito o así así como como su estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos)
* ESTUDIO DE PROTOZOARIOS CILIADOS EN CAVIDADES FUNDAMENTO: Este método permite demostrar la presencia de protozoarios flagelados en exudados vaginales y uretrales y en orina por medio de examen directo. El parasito más comúnmente encontrado es Trichomonas vaginalis. MATERIAL Y EQUIPO Microscopio Hisopo Portaobjetos Cubreobjetos Tubo de ensaye con sol. Isotónica estéril Espejo vaginal Puente de tinción Pipeta Pasteur con bulbo Aceite de inmersión Colorante de Wright
Secreción vaginal, uretral u orina Pizeta con agua destilada
METODO: a) Se coloca coloca a la paciente paciente en posición posición ginecoló ginecológica. gica. b) Introd Introduci ucirr con cuida cuidado do el espejo espejo vagin vaginal. al. c) Con un hisopo tomar la muestra muestra del del fondo fondo de saco saco posterio posterior. r. d) Depositar Depositar la primera primera toma en un portaobjeto portaobjetoss limpio limpio y hacer hacer un extendido. extendido. e) La segu segund nda a tom toma depo deposi sittarla arla en un tubo ubo de ens ensaye aye con con soluc olució ión n sali salina na conservando a 37°C. f) Una vez vez seco seco el extendi extendido do se proced procede e a teñir con con el coloran colorante te de Wrigh Wrightt de 1 a 3 min. g) Se observa observa al micros microscop copio io con objetiv objetivos os de 10X, 40X y 100X agregan agregando do a éste último aceite de inmersión. h) Con Con una una pipeta pipeta Paste Pasteur ur se toma toma una gota gota del fondo fondo del tubo de ensaye ensaye y se deposita en un portaobjetos y se cubre. i) Exam Examin inar ar con con obj objet etiv ivos os de de 10X 10X y 40X. 40X. INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deberá anotar en la hoja de resultados resultados el nombre del parasito parasito así como como su estadio evolutivo evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos).
* ESTUDIO DE EXPECTORACION PARA LA BUSQUEDA DE PARASITOS PULMONARES
FUNDAMENTO: este método consiste en investigar en secreciones pulmonares, presencia de protozoarios. MATERIAL Y EQUIPO Microscopio Portaobjetos 25 X 76 mm Aplicador de madera Mechero Puente de tinción Colorante de Giemsa Sol. Buffer ph 7.0-7.2 Aceite de inmersión Frasco con expectoración o material de aspiración bronquial
METODO: a) En un portaobjetos limpio y desengrasado hacer un frotis de la expectoración. b) Deja Dejarr sec secar ar 5 min minut utos os.. c) Proce Procede derr a teñi teñirr cubri cubrien endo do el frot frotis is con sol. sol. colo colora rant nte e de Giems Giemsa a por por 30 minutos, escurrir y lavar con sol. s ol. buffer, buffer, escurrir y dejar secar. d) Obse Observa rvarr al micro microsco scopi pio o con con obje objetitivo voss de 10X, 10X, 40X 40X y 100X 100X agregan agregando do a esta última observación aceite de inmersión.
INTERPRETACION DE RESULTADOS: En caso de encontrar algún parasito durante la realización de esta prueba se deber deberá á anot anotar ar en la hoja hoja de result resultad ados os el nombre nombre del paras parasitito o así así como como su estadio evolutivo (trofozoito o quiste en el caso de los protozoos y huevo o larva en caso de helmintos).
* ESTUDIO DE PLASMODIUM PL ASMODIUM
GENERALIDADES: El procedimiento para el diagnóstico de protozoos en sangre circulante es el estud estudio io al micr microsc oscop opio io de prepa preparac racio ione ness en porta portaob obje jeto toss las las cual cuales es son son la extensión extensión fina y la gruesa. La extensión fina ideal es la que tiene el grosor de una célula y en la que los elementos celulares aparecen algo aplanados. La extensión fina es útil para estudiar detalles de los hematíes y de los parásitos de la sangre, su principal limitación es que la cantidad de sangre presente en la muestra es pequeña.La extensión gruesa contiene 6-20 veces más sangre por unidad de
superficie que la extensión fina. Es fundamental que no se fije antes de la tinción ya que los hematíes tienen que deshemoglobinizarse durante el procedimiento. La rotura de los hematíes hematíes y la pérdida pérdida de su hemoglobina hemoglobina permite la visión visión micros microscópi cópica ca de las demás demás estruct estructuras uras,, inclui incluidos dos los parási parásitos tos sanguí sanguíneo neos, s, aunque se encuentren en la parte más profunda de la extensión. La extensión gruesa resulta útil para el diagnóstico rápido de las parasitemias demasiado leves para apreciarse en la extensión fina, pero no sirve para estudios anatómicos finos. La toma de sangre periférica para Plasmodium vivax y P. Malarie deben efec efectu tuar arse se cuan cuando do el paci pacien ente te pres presen enta ta esca escalo lofr frío íoss para para la búsq búsque ueda da de esquizontes maduros. Para P. Falciparum se debe tomar la muestra después del acceso febril para observar los eritrocitos con varios trofozoitos antes que estos desaparezcan en capilares de órganos internos. Con el colorante Giemsa las estructuras se tiñen de la siguiente manera: ➢ ➢ ➢ ➢
Plasmodium: Citoplasma azul o azul grisáceo. Eritrocitos: Azulosos, grisáceos y en ocasiones rosados. Núcleo de los Leucocitos: Violeta o morado. Plaquetas: Violeta ligero o rosa pálido.
* COLORACION DE HEMATOXILINA FERRICA DE HEIDENHAIN FUNDAMENTO:Esta tinción permite colorear estructuras internas de especímenes adultos o fragmentadas del mismo . Se usa en casos de cestodos y trematodos. MATERIAL Y EQUIPO: portaobjetos Cubreobjetos Frasco coplin o placas Petri Colorante de hematoxilina Cytoseal o bálsamo de Canadá Alcoholes 50%, 70%, 85%, 95% Solución Schaudinn Solución mordiente de sulfato de fierro y amonio Tintura de yodo Solución fisiológica Microscopio binocular
METODO:
a) Preparar Preparar un set de de placas petri 100 x 150 mm o el frasco frasco Coplin Coplin con con los reactivos reactivos correspondientes y con ayuda de un estilete o pinza curva hacer un frotis fino en la lámina o la laminilla, esta última sujeta al porta-laminilla. b) Si la muestra muestra es dura, hacer hacer una emulsión emulsión previa previa en solución solución fisiológica fisiológica,, realizar realizar el frotis y pasaren solución Schaudinn por 3 a 5 minutos. c) Pasar por por alcohol alcohol 70% más más 1 a 2 gotas gotas de tintura tintura de de yodo por 5 minutos minutos d) Pasa Pasarr por por alco alcoho holl 70% 70% y 50% 50% de 5 a 10 minut minutos os cada cada vez. vez.-P -Pas asar ar por agua agua corriente por 5 a 10 minutos e) Pasa Pasarr por por la soluc solució ión n mord mordien iente te 2% de 5 a 10 minut minutos os y enju enjuaga agarr con agua corriente.
f) Pasar por colorante colorante por por 5 a 10 minutos minutos (1 mL de solución solución colorante colorante hemato hematoxilina xilina y 9 mL de agua) g) Lava Lavarr con con agua agua y pasa pasarr por por una una segu segunda nda soluc solució ión n de mordi mordien ente te al 2% para decolorar, observandola intensidad de la coloración h) Lavar con agua agua corriente corriente a chorro continuo continuo de 10 10 a 15 minuto minutoss i) Deshid Deshidrat ratar ar pasando pasando por por alcohol alcohol 70%, 70%, 85%, 85%, 95% y absolu absoluto, to, de 10 10 a 15 minutos minutos cada uno j) Aclara Aclararr con xilol xilol agitando agitando el frotis frotis,, montar montar con cytose cytoseal al o bálsamo bálsamo de Canadá Canadá y observar al microscopio. k) Informar Informar el el nombre nombre del del parásito parásito y el estadio estadio evolutiv evolutivo o
NOTA:
Observar con objetivo de inmersión 1000x. El citoplasma de los parásitos se observan de color azul oscuro y los núcleos de color morado intenso a negruzco.
INTERPRETACION INTERPRETACION DE RESULT RESULTADOS ADOS :En caso de encontrar algún parasito en la
tinción tinción se deberá anotar anotar en la hoja de resultados resultados el nombre del parasito parasito así como como su estadio evolutivo .
* TÉCNICA DE ZIEHL NEELSEN
(MODIFICADA PARA OBSERVAR COCCIDIAS:
CRIPTOSPORIDIUM)
FUNDAMENTO: Se basa en el comportamiento acido-resistente de la cubierta de estos parásitos , los cuales se tiñen de rojo y destacan sobre un fondo verde o azul , dependiendo del colorante de contraste usado.
MATERIAL Y EQUIPO: Portaobjetos Cubreobjetos Puente para tinción Fucsina fenicada Verde de malaquita o azul de metileno acuoso Metanol Hidróxido de sodio al 4% Alcohol acido METODO: a) Realizar Realizar un frote frote de heces heces en el portaobjet portaobjetos os y dejar dejar secar. secar. b) Colocar Colocar las laminas laminas sobre sobre el puente puente de tinción tinción c) Fijar Fijar la lamina lamina con alcohol metílico metílico de 2 a 3 minutos minutos y dejar secar secar d) Agregar Agregar hidróxido hidróxido de de sodio, sodio, sobre sobre el preparado preparado por un un minuto minuto y eliminar eliminar el exceso con agua de la llave.
e)
f) g) h) i) j) j) k) l)
Cubrir Cubrir la lamina lamina con fucsin fucsina a fenica fenicada da (previa (previa agitac agitación ión del frasco frasco que contie contiene ne dicho dicho reactiv reactivo). o). Por 5 minuto minutos. s. Es import important ante e recorda recordarr que la fucsina debe ser diluida previamente con agua al tercio (1 ml de colorante mas 2 ml de agua) Lavar Lavar suavem suavement ente e la lami lamina na con con agua agua corrien corriente te Cubrir Cubrir el portaobjeto portaobjetoss con alcohol alcohol acido por unos segundos segundos hasta hasta quitar quitar el colorante. Lavar suavemente suavemente la lamina lamina con agua agua corrient corriente e Colo Coloca carr el color coloran ante te de cont contra rast ste e a la lamin lamina a que que pued puede e ser ser verd verde e de malaquita al 1% o azul de metileno al 1.4%, durante 5 minutos( diluidas previamente al tercio) Lava Lavarr suav suavem emen ente te la lami lamina na con con agua agua corr corrie ient nte e y seca secarr a temp temper erat atur ura a ambiente. Realiz Realizar ar el montaje montaje con cytoseal cytoseal,, bálsamo bálsamo de Canadá o Permount, Permount, cubrir cubrir con un portaobjetos. Obse Observ rvar ar al al mic micro rosc scop opio io..
NOTA: Los ooquistes de Cryptosporidium, Isospora y Cyclospora, aparecen de un color rojo fucsina, sobre un fondo verdoso (verde de malaquita). En algunos no se colorean bien, pero la refringencia característica permite diferenciarlos.
INTERPRETACION DE RESULTADOS:
En caso caso de encont encontrar rar algún parasi parasito to acido acido alcoho alcoholl resist resistent ente e en la tinció tinción n se deberá deberá anotar en la hoja de resultados el nombre del parasito así como su estadio estadio evolutivo .
*PROTOZOOARIOS INTESTINALES: ENTAMOEBAS :
QUIST TROF OZOIT E O
Entamoeba :
*AMIBAS DE VIDA LIBRE :
AMEBA
TROFOZOITO
FLAGELADO TRANSITORIO
Naegleria fowleri
Acanthamoeba sp..
Balamuthia mandrillaris..
*PROTOZOOARIOS FLAGELADOS :
QUISTE
*PROTOZOOARIOS PROTOZOOA RIOS INTESTINALES CILIADOS , PROTOZOOARIOS COCCIDIOS Y BLASTOCYISTIS:
* HELMINTOS : HUEVOS DE NEMA NEM ATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :
*PROTOZOOARIOS PROTOZOOA RIOS INTESTINALES CILIADOS , PROTOZOOARIOS COCCIDIOS Y BLASTOCYISTIS:
* HELMINTOS : HUEVOS DE NEMA NEM ATODOS Y CESTODOS PRESENTES EN HECES :
* HUEVOS DE TREMATODOS TREMATODOS PRESENTES EN LAS HECES
ETAPA ETAPAS S JUVENILES , DE UNCINARIAS UNCINARIAS Y STRONGYLOIDES :
* PROGLOTIDOS GRAVIDOS GRAVIDOS Y ESCOLICES DE CÉSTODOS.
*
E T A P A S
RABDITOIDES RABDITOIDES Y FILARIFORMES DE UNCINARIAS Y STRONGYLOIDES:
*NOTA : LARVA RABDITOIDE : Larva de vida libre libre (viven en el el ambiente ) LARVA ARVA FIL F ILAR ARIF IFOR ORM ME : Tipo de forma larvaria en la cual se transforma una larva rabditoide rabditoide al encontrar un hospedero a quien quien parasitar
* TAMAÑO COMPARATIVO DE HUEVOS DE HELMINTOS : * HEMOFLAGELADOS : Tripanosoma Tripanosoma y Leishmania :
AMASTIGOTE ó LEISHMANIA
PROMASTIGOTE ò LEPTOMONA
Cinetoplasto
Flagelo
TRIPOMASTOGOTE EPIMASTIGOTE òò TRIPANOSOMA CRITHIDIA
Cinetoplasto
Flagelo
Cinetoplasto
*Forma hombre
Cinetoplasto
Flagelo
infectante
Gránulos de votulina CuerpoB asal
Membrana ondulante Membrana ondulante Núcleo
Núcleo *Forma transitoria
Núcleo
Núcleo
al
Cinetoplasto
Flagelo
Cinetoplasto
Flagelo
Cinetoplasto
*Forma hombre
Cinetoplasto
Flagelo
infectante
Gránulos de votulina CuerpoB asal
Membrana ondulante Membrana ondulante Núcleo
Núcleo *Forma transitoria
* Plasmodium FASE ERITROCITARIA :
Núcleo
Núcleo
al
JOVEN
VIEJO
TROFOZOITOS
INMADURO
MADURO
EZQUIZONTES
MASCULINO
FEMENINO
GAMETOCITOS
* FIJADORES y/o CONSERVADORES Los Los fija fijado dores res sirve sirven n para para pres preserv ervar ar prot protozo ozoar ario ios, s, sin sin que se modi modififique quen n las las estructuras internas, sobre todo cuando las muestras no pueden ser procesadas inmediatamente.
El conservad conservador or mas utilizado utilizado en el laborat laboratori orio o por económi económico co y eficaz eficaz es la Solución de formalina al 10 % también conocido como formol , aldehído fórmico o formaldehido. Sin embargo embargo a continuación continuación se hará hará referencia referencia a diversos diversos conservadore conservadoress que también se utilizan utilizan ampliamente dentro del laboratorio de Parasitologia : I. PAF (phenol-alcohol-formol):
UTILIDAD: Conserva las estructuras de los parásitos (trofozoítos, quistes, huevos y larvas), pudiéndose incluso observarse en semanas o meses (6) sin que haya ocurrido ocurrido deterioro deterioro alguno. alguno. Es recomendable recomendable mantener mantener el fijador fijador preparado preparado en frascos color ámbar. Además, permite observar el material al microscopio. MATERIAL: Fijador PAF Tionina o azure A Agua destilada. Hisopo. Tubos de centrífuga de 15 mL. Aplicadores. Tritón NE. Éter. Embudo de vidrio. Solución fisiológica PROCEDIMIENTO: a) La muest muestra ra de heces heces se mezc mezcla la con el fijad fijador or en un reci recipi pien ente te en la proporción 1:1. b) Para la observaci observación ón microscópica. microscópica. Mezclar Mezclar bien bien la muestra muestra fijada fijada en PAF PAF y con ayuda ayuda de un embudo embudo y una gasa doblada doblada en un tubode tubode 15 mL, colar colar de 3 a 4 mL del material fijado c) Agrega Agregarr solución solución salina salina hasta hasta un volumen volumen de 12 mL y centrif centrifuga ugarr a 1800 1800 r.p.m. r.p.m. por 3 minutos. menor, d) Decantar el sobrenadante y obtener un sedimento de 0,5 mL; si es menor, agregar de la muestra filtrada una cantidad suficiente y volver a centrifugar para obtener el volumen del sedimento deseado. e) Decan Decanta tarr el sobre sobrena nadan dante te y comp comple leta tarr 12 mL con soluci solución ón fisi fisiol ológ ógic ica, a, emulsionar con el aplicador centrifugar a 1800 r.p.m. por 3 minutos. f) Repeti Repetirr el cent centrif rifuga ugado do y lavar lavar de de 2 a 3 vece vecess más. más. g) Agre Agrega garr 2 mL de solu soluci ción ón fisi fisiol ológ ógic ica a al sedi sedimen mento to fina final,l, emul emulsi sion onar ar y obtener obtener una gota del sedimento con una pipeta pipeta Pasteur y colocarla colocarla en una lámina portaobjetos h) Agrega Agregarr una gota gota del coloran colorante te tioni tionina na o azure A, cubrir cubrir con con una lamini laminilla lla cubreobjetos y examinar al microscopio.
Al sedimento emulsionado y sobrante del procedimiento anterior, agregar 10 mL de solución fisiológica y una gota de Triton NE. j) j) Mezcl Mezclar ar,, agrega agregarr 2 mL de éter éter,, tapar tapar con un tapón tapón de jebe jebe o de corch corcho, o, agitar suavemente y destapar. k) Centrifugar a 2 000 r.p.m. por 3 minutos, decantar y eliminar los detritus de las paredes del tubo mediante un aplicador cubierto de algodón. l) Agregar Agregar al sedimento sedimento 1 ó 2 gotas gotas de soluci solución ón fisiol fisiológica, ógica, mezclar mezclar y obtener obtener del fondo del tubo con una pipeta Pasteur una gota que se colocará en una lámina portaobjeto. m) Agregar Agregar una gota de colorant colorante e tionina tionina o azure A, cubrir con con una laminilla laminilla y observar al microscopio i)
NOTA: Se deberán deberán observar observar los elemento elementoss parasitario parasitarios: s: el citoplasma citoplasma se se ve de color azul y el núcleo azul oscuro. •
II.
PVA (alcohol alco hol polivin pol ivinílic ílico): o):
UTILIDAD: Fija y preserva, principalmente los trofozoítos y quistes de protozoarios, por tiempo muy prolongado sin modificación importante de s u morfología. MATERIAL: Solución fijadora Conservador de PVA PVA Aplicador Viales de vidrio de 3 a 4 mL. Portaobjetos
PROCEDIMIENTO: a) Colocar Colocar en una lámina lámina portaobj portaobjetos etos 1 ó 2 mg mg de muestra, muestra, b) Secar Secar el frotis, frotis, agrega agregarr 2 ó 3 gotas de PVA PVA y secar secar o guardar guardar hasta por por 3 meses para colorearlos, c) Agrega Agregarr al frasco frasco que contien contiene e la muestra muestra v/v 1 a 4 mL. Gener Generalm alment ente e se puede preservar por meses y cuando se considere conveniente se realizará la coloración con co n Trichrome Gomori Wheatley. III. MIF (merthiolate - yodo - formol):
UTILIDAD:
Fija Fija y colo colore rea a simu simultltán ánea eame ment nte e los los quis quiste tess y huev huevos os de pará parási sito tos, s, permitiendo la observación inmediata de la muestra. MATERIAL: Solución MIF Viales de vidrio de 3 a 4 mL. Aplicador
PROCEDIMIENTO: a) Colocar Colocar 1 ó 2 mL de de la solución solución MIF en en el vial con con ayuda del una una pipeta. pipeta. b) Para la observación microscópica, colocar 1 ó 2 mL o su equivalente de la muestra fresca de heces. c) Mezcla Mezclarr y observa observarr al micros microscop copio. io. NOTA: Se deberán observar los parásitos teñidos de color amarillo oro. •
IV. IV. FIJADORES PARA PRESERVAR HELMINTOS ADULTOS: ADULTOS:
UTILIDAD: Conserva ejemplares adultos para su estudio morfológico, su preservación en museos o para contar con muestras de referencia. Los más usados suelen ser formol al 10%, AFA (Ácido acético - Formol- Alcohol) o SAF (Acetato sodio - ácido acético - formol)
.
MATERIAL: Formol 10% Solución AFA Alcohol 70% Glicerina 5% Láminas portaobjetos. Pabilo o pesas de metal según modelo Frascos boca ancha 150 – 200 mL. Placas petri 150 x 100 mm y 240 x 200 mm.
PROCEDIMIENTO: Colección y lavado de los helmintos:
Todo espécimen aislado del hospedero debe mantenerse fresco (agua o suero fisiológico) en un frasco con tapa. b) Los adultos colectados son lavados varias veces con solución fisiológica, para eliminar la mucosidad y otras sustancias adheridas al cuerpo del helminto. c) Finalmente, se lava con agua para permitir el relajamiento del parásitoCalentar Calentar a 55ºC de temperatura, temperatura, alcohol alcohol de 70%, formol 10% ó AFA, AFA, para que con la fijación los ejemplares queden estirados y pueda observarse sus estructuras internas. a)
Fijación:
Para Para una una conse conserva rvaci ción ón apro apropi piada ada usar usar form formol ol 10% 10% (par (para a césto céstodo doss y tremátodos) o una mezcla de alcohol 70% (para nemátodos), ambos con glicerina 5%. e) Todos los frascos deben ser rotulados, indicando el nombre del parásito, procedencia, localización y fecha de colección. f) Para la identificación, en ocasiones se requiere hacer el aclaramiento con lactofenol. d)
Aplanamiento:
Útil para para céstodes y tremátodes, tremátodes, los cuales se colocan colocan entre láminas láminas y se les ajusta con el pabilo para favorecer su aplanamiento h) Se sumerge en formol formol 10% o AFA AFA de 1 a 3 días, luego del cual cual se puede colorear o conservar como pieza de museo en formol 10% y glicerina 5%. tremátodes odes como como Fascio Fasciola la y/o Parago Paragonim nimus us pueden pueden prepara prepararse rse y i) Los tremát conservarse siguiendo los pasos dados para los céstodos. g)
AFA: Fijador conteniendo alcohol, formol y ácido acético. CÁPSULA OVÍGERA: Vesícula que contiene huevos. CESTODO: Gusano o helminto platelminto de forma acintada. COLORANTE VITAL: Colorante que permite ver la estructura interna del parásito vivo. COPRO-ANTÍGENO: Antígeno presente en las heces. CRISTAL DE CHARCOT - LEYDEN: Cristales de proteínas provenientes de los gránulos de eosinófilos, que se destruyen en el intestino. DIAFANIZAR: Aclarar para facilitar la visualización microscópica DIAGNÓSTICO PARASITOLÓGICO: Demostración directa o indirecta de alguna forma o estadio evolutivo del parásito.
ENTEROPARÁSITO: Parás Parásitito o que que tien tiene e por hábi hábita tatt el tubo tubo dige digest stivo ivo,, especialmente el intestino. ESPORA: Esporoquiste aislado. espor ozoítos. ESPOROQUISTE: Quiste con cubierta definida que contiene esporozoítos. ESTRÓBILA: Porción del cuerpo de las tenias o céstodes formadas por una cadena de proglótidos. FIJACIÓN: Conservación de la estructura del parásito. HECES: Mezcla de productos de excreción y secreción que se eliminan por el intestino. HELMINTO: Ser Ser pluri plurice celu lula larr con exoes exoesqu quel elet eto o flexi flexibl ble, e, ause ausenc ncia ia de apéndices y con movimientos reptantes. HPG: Número de huevos por gramo de heces. HUEVO: Producto de la fecundación con potencialidad de desarrollar un nuevo ser. LARVA: Estadio Estadio evolutivo de algunos seres vivos como los helmintos y los artrópodos en quienes aún no se han desarrollado los aparatos genitales. MIF: Fijador que contiene merthiolate, yodo y formol. MONTAR: Colocar el espécimen entre lámina y laminilla con bálsamo de Canadá para su conservación permanente. NEMATODO: Gusano o helminto de forma cilíndrica. OOQUISTE: Quiste que contiene el huevo o cigoto. PAF PAF: Fijado Fijadorr y/o conserva conservador dor conten contenien iendo do fenol, fenol, alcoho alcoholl y formol formol para muestras con parásitos, sobretodo protozoario. PVA: Alcohol Alcohol polivinílico, polivinílico, fijador fijador para conservar los parásitos parásitos en muestras fecales. PARÁSITO: Ser vivo de escala zoológica inferior que vive a expensas de otro de escala superior. su perior. PATOGENICIDAD: Capacidad de producir daño. PROTOZOARIO: Ser unicelular. PROGLÓTIDE: Segmento o anillo de la estróbila de las tenias o céstodes y que puede ser inmaduro, inmaduro, maduro o grávido, grávido, según el estadío estadío de desarrollo desarrollo de sus aparatos genitales.
QUISTE: Forma de resistencia de los protozoos, los cuales se rodean de una membrana dura e impermeable. SOLUCIÓN SOBRESATURADA: Solución en la cual el soluto está en su máxima concentración. pro tozoos. TROFOZOÍTO: Forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos. TREMÁTODE: Gusano aplanado o platelminto, que presenta su cuerpo indivisible.
BIBLIOGRAFIA: •
http://groups.msn.com/parasitologia1
•
http://www.invdes.com.mx/anteriores/Febrero2002/htm/amebas.html
•
http://www.drscope.com/privados/pac/generales/parasitologia/teniasis.html
•
http://www.scribd.com/doc/2362490/Manual-parasitologia-laboratorio-parte-I
•
http://www.scribd.com/doc/2362916/MANUAL-PARASI http://www.scribd.com/doc/2362916/MANUAL-PARASITOLOGIATOLOGIALABORATORIO-PARTE-II
•
http://www.scribd.com/doc/995852/165-NT37
