UNIVERSIDAD RICARDO PALMA FACULTAD FACULTAD DE MEDICINA HUMANA PARASITOLOGÍA Guía de Practica
AUTORES: Dr. Náquira Velarde, César Dr. Verano Montesinos, Raúl Dr. Ortiz Pretel, Menandro Dra. Náquira Velarde, Frida
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Practica Nº 1 Características morfológicas de Protozoos, Helmintos y Artrópodos MATERIAL DE OBSERVACIÓN OBSERVACIÓN 1. Protozoos: Laminas microscópicas coloreadas de Entamoeba histolytica, Entamoeba coli, 2. 3. 4. 5.
Trypanosoma cruzi, cruzi , y Balantidium coli. coli. Observación a mayor aumento y o inmersión. Helmintos: Nematelmintos: Ejemplares preservados de adultos de Ascaris lumbricoides, Preparación microscópica microscópica de heces con huevos de Ascaris lumbricoides. Helmintos: Platelmintos: Cestodos: Lámina portaobjetos con proglotidos de adulto de Taenia sp., Preparación microscópica de heces con huevos de Taenia sp. sp. Helmintos: Platelmintos: Trematodos; Lámina portaobjeto con adultos de Fasciola hepática., Preparación microscópica microscópica de heces con huevos de Fasciola hepática. hepática. Artrópodos: Ejemplares disecados o preservados de Triatoma.
PROTOZOOS Son organism organismos os eucariota eucariotas, s, microscóp microscópicos icos constituido constituidoss por una célula, célula, que es una unidad unidad biológi biológica ca compleja compleja,, sumament sumamentee integrada integrada;; provista provista de membrana membrana celular celular,, lipo lipoprote proteica, ica, que cumple un papel esencial en el control de las concentraciones intracelulares. Se distingue distingue el citoplasma citoplasma o citosol, citosol, parte important importantee en el que se encuentra encuentrann estructur estructuras as fibrilares y vacuolas vacuolas nutritivas nutritivas o excreticias y el núcleo, en número de uno o más, más, conteniendo cromosomas en los que esta presente el material genético (ADN). Algunas especies presentan organelos especiales como citostoma, flagelos o cilios que cumplen funciones importantes. Los protozoos importantes para el hombre son las amebas, los flagelados, los ciliados y los esporozoarios. La reproducción binaria es característica de amebas, flagelados y ciliados, en cambio la reproducción sexual es propia de los esporozoarios.
AMEBAS: AMEBAS: Entamoeba histolytica. histolytica. OBSERVE trofozoitos y quistes en preparaciones microscópicas de heces humanas, humanas, teñidas con Hematoxilina Hematoxilina férrica. férrica. Reconozca el núcleo núcleo esférico con cariosoma cariosoma central y cromatina fina adosada a la pared interna de la membrana nuclear. Diferencie el trofozoito con un núcleo del quiste que posee de 1 a 4 núcleos y barras cromidiales. Entamoeba coli. OBSERVE en preparaciones coloreadas y en nuestra preservadas trofozoitos provisto provistoss de un núcleo; núcleo; diferenc diferencie ie en este este el cariosom cariosomaa excéntric excéntricoo y la cromatina cromatina gruesa gruesa adosada a la membrana nuclear. Identifique quistes provistos con más de 4 núcleos.
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K. cariosoma n. núcleo ect. Ectoplasto end. Endoplasma rbc. Glóbulo rojo B. Quiste tetranucleado
K. cariosoma f. Vacuola Digestiva Digestiv a n. núcleo ect. Ectoplasto end. Endoplasma
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FLAGELADOS Trypanosoma cruzi. En láminas preparadas OBSERVE la forma tripomastigote y distinga la membrana ondulante, flagelo, núcleo y kinetoplasto. En un preparado de cultivo de T. cruzi observe el movimiento producido por el flagelo. Guíese para sus observaciones del esquema adjunto.
a. Axonema b. Blefaropalsto f. Flagelo g. gránulos de cromatina k. cariosoma kn. Kinetoplasto n. núcleo pb. Cuerpo parabasal om. Membrana ondulante
CILIADOS Balantidium coli en preparaciones microscópicas de heces de cerdo, teñidos con hematoxilina férrica, OBSERVE trofozoitos de B. coli y distinga la forma, la presencia de cilios en la superficie y la presencia de un macro y micro núcleo.
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c. cilios cy. Citopigio cv. Vacuola contractil f. Vacuola digestiva g. citofaringe m. citostoma ma.n. macronúcleo mi.n. micronúcleo
HELMINTOS Son organismos pluricelulares, denominados metazoarios y exoesqueleto constituido por la cutícula fibrosa que cubre el cuerpo: Los helmintos de importancia médica son los nematelmintos o gusanos cilíndricos y los platelmintos o gusanos aplanados. Los nematelmintos se caracterizan por presentar dimorfismo sexual, o sea que hay diferencias morfológicas entre el macho y la hembra; por debajo de la cutícula está la hipodermis y capa muscular muy potente y en la cavidad corporal o pseudo celoma, que no está cubierta de membrana, se encuentra el contenido líquido o hemolinfa en que flotan los órganos internos, el tubo digestivo y el aparato genital. Presentan tres estadios evolutivos: huevo, larva y adulto. La larva para crecer debe periódicamente eliminar la cutícula o exoesqueleto y al formar la hipodermis la nueva cutícula, la larva aumenta de tamaño, estos estadios larvarios suelen ser 5. Los platelmintos o gusanos aplanados pueden corresponder a dos grupos importantes para el hombre: los cestodos o llamadas tenias que son gusanos acintados, aplanados y segmentados en las llamadas proglótidas o anillos. Y los trematodos o gusanos aplanados y no segmentados. Los cestodos tienen tres estadios evolutivos: huevo, larva y adulto. Los huevos son embriones hexacantos por presentar 3 pares de ganchos, las larvas tiene morfología vesicular y variada 5
según la especie y en general necesitan a un hospedero intermedario donde se desarrolla la larva para alcanzar luego en el hospedero definitivo el estadio adulto. Los trematodos tienen un ciclo evolutivo más complejo que los cestodos y presenta los estadios de huevo, varios estadios larvales y adultos y a semejanza de los cestodos necesitan de hospederos intermediarios donde se desarrollan los estadios larvarios y hospederos definitivos donde se desarrollan los adultos
TREMATODES Fasciola hepática a) Adulto OBSERVE formas aplanadas dorsoventralmente; distinga las ventosas oral y ventral y entre ellas el poro genital común; diferencie las estructuras del sistema digestivo y reproductor. b) Huevo: en un preparado microscópico reconozca huevos de F. hepática de forma ovalada, de pared lisa poco retráctil y fina de color ámbar claro; ubique el opérculo pequeño en un extremo. Guíese para sus observaciones en el esquema adjunto.
A. Forma adulta mostrando sistema reproductor femenino: v.o ventosa oral v.v. ventosa ventral g.a. atrio genital g.p. poro genital 6
oot. Ootipo ov. Ovario u. útero vl. Glándula vitelógena vld. Conducto de la glándula vitelógena B. Forma adulta mostrando sistema digestivo y reproductor masculino: c. ciego intestinal f. faringe t. testículo
CESTODES Taenia sp. a) Adulto: OBSERVE al microscopio estereoscopico y compuesto ejemplares adultos de Taenia sp. y distinga el escolex provisto de ventosas y un rostelo típico, retráctil o no, con o sin coronas o círculos de ganchos y el estróbilo compuesto de segmentos o proglotidos: inmaduros, maduros y grávidos; en los maduros diferencie estructuras del sistema reproductor. b) Huevo: en un preparado microscópico reconozca huevos de Taenia sp. De forma esférica con un embrióforo que puede ser delgado o muy grueso, radiado y poroso que toma la apariencia estriada. Guíese para sus observaciones en el dibujo adjunto.
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NEMATODES Ascaris lumbricoides a) Adulto: OBSERVE en ejemplares preservados la configuración cilíndrica del espécimen macho y de la hembra y establezca diferencias y semejanzas de ambos en sus extremos anterior y posterior; distinga al microscopio estereoscópico, en el extremo anterior, la presencia de tres labios y en el posterior de la hembra la forma roma y en el del macho la forma curvada con dos espículas copulatorias. b) Huevo: en un preparado microscópico reconozca huevos de A. lumbricoides de forma oval o redondeados con cubierta gruesa o mamelonada, de color gris oscuro, a veces con un tinte verdoso. También observe huevos no fecundados que se caracterizan por ser más alargados y afilados que presentan una cubierta más delgada y menos características. Guíese para sus observaciones en el esquema adjunto.
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ARTROPODOS Son animales invertebrados, provistos de una cavidad llamado hemocele. Tiene simetría bilateral. Cuerpo segmentado exteriormente, presenta cabeza, tórax y abdomen diferenciado o 9
fusionados; los apéndices pares son articulados y presentan diferencias en forma y función. La superficie del cuerpo esta cubierta por un exo–esqueleto quitinoso, segregado por la epidermis y con mudas periódicas. El tubo digestivo completo. Respiran por branquias, traqueas o sacos pulmonares. Órganos de los sentidos constituidos por antenas y pelos sensitivos, ojos simples y compuestos y órganos auditivos. Presentan sexos separados; son ovíparos con metamorfosis completa o gradual Las mudas permiten el crecimiento. Están adaptadas a la vida aérea, terrestre y acuática. Otros son parásitos de plantas y animales. Algunos insectos y garrapatas producen daños y trasmiten agentes etiológicos de enfermedades del hombre. Ejemplares de triatominos a) Reconozca las partes del cuerpo: cabeza, tórax, abdomen y apéndices. b) Con ayuda del estereoscopio identifique estructuras de cada parte del cuerpo. c) Observe y dibuje los estadios evolutivos del insecto
Practica Nº 2 Amebiosis u Amebiasis Definición: Infección parasitaria causada por Entamoeba histolytica, protozoario que tiene por hábitat la luz del intestino grueso del hombre donde puede ocasionar ulceraciones y ocasionalmente localizarse extraintestinalmente produciendo abscesos amibianos. El parásito: Entamoeba histolytica
Es la única ameba patógena para el hombre, protozoario, perteneciente a la clase Rhizopoda. Material de observación 1. Frotis de heces coloreado con Hematoxilina férrica o Gomorri-Trichrome. Observación con
lente de inmersión. 2. Corte histológico de intestino grueso con amebas, coloreado con Hematoxilina-eosina. Observación a mayor aumento. 3. Corte histológico de hígado con absceso amibiano, coloreado con Hematoxilina-eosina. Observación a mayor aumento. Morfología: Entamoeba histolytica presenta dos estadios evolutivos: trofozoito y quiste.
de heces y complemente con el dibujo adjunto.
OBSERVE el frotis
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a) trofozoito: organismo unicelular de forma irregular de 20 - 40 micrones en que se distinguen el citoplasma y el núcleo: El citoplasma presenta el ectoplasma hialino en el borde del trofozoito y el endoplasma granular conteniendo el núcleo, vacuolas alimenticias con bacterias, nutrientes y en ocasiones glóbulos rojos que se observan de color negruzco. El núcleo es redondeado y en el se distingue la cromatina fina en la periferia de la membrana nuclear y un cariosoma central. DIBUJE. b) quiste: de forma redondeada de 8-14 micrones de diámetro, rodeada de una membrana quística. En su interior se puede observar de uno a cuatro núcleos con las características ya mencionadas. Barras o cuerpos cromidiales pueden observarse como elementos alargados de color violáceo con sus extremos terminados en forma irregular. DIBUJE. En ocasiones se puede distinguir una forma intermediaria entre el trofozoito y el quiste que se denomina pre-quiste que es un trofozoito redondeado, en el que no se aprecia bien la membrana quística y en el que se distinguen barras cromidiales y vacuolas de glicógeno.
Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. La forma infectante es el quiste tetranucleado. El mecanismo de transmisión es por la contaminación del agua y alimento con quistes. La vía de penetración es la oral. La multiplicación es por división binaria del trofozoito. El quiste representa la forma de resistencia del parásito al ambiente.
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Acción patógena: Localización intestinal: OBSERVE el corte histológico del intestino grueso y complemente con el dibujo. Preste atención a las zonas de transición entre la mucosa normal y la lesión de la misma, representada por la pérdida de la mucosa intestinal (úlcera), donde se aprecia lisis de la submucosa y presencia de trofozoitos en las criptas intestinales y en la submucosa. Ellos se identifican por su mayor tamaño que las células intestinales y no siempre es posible observárseles el núcleo, debido a la dirección del corte histológico. DIBUJE. Localización extraintestinal: OBSERVE el corte histológico de hígado con absceso amibiano. Reconozca el tejido normal del hígado y el sitio de necrosis tisular del absceso y la presencia de trofozoitos de la ameba. DIBUJE. Diagnóstico: Se realiza por el hallazgo de trofozoitos y quistes en las heces en la localización intestinal de la ameba y por pruebas inmunológicas en la localización extraintestinal. Se han detectado coproantígenos que pueden ser puestos en evidencia mediante anticuerpos monoclonales, lo que permite hacer la diferenciación con Entamoeba dispar.
Otras amebas intestinales Definición: Son amebas que tienen por hábitat la luz del intestino grueso y son consideradas no patógenas, con excepción de Blastocystis hominis . . Los parásitos: Los más importantes en nuestro país son: Blastocystis hominis
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Entamoeba dispar Entamoeba coli Endolimax nana Iodamoeba butshlii
Material de observación 1. Frotices de heces coloreados con Hematoxilina férrica o Gomorri-Trichrome. Observación con lente de inmersión. 2. Preparaciones microscópicas de heces fijadas en formol y teñidas con Lugol. Observación a mayor aumento.
Morfología: OBSERVE trofozoitos y quistes de las amebas. Guíese por el dibujo adjunto para identificar las principales características de las amebas: 1. Blastocystis hominis: es más frecuente observar quistes de 5 a 10 micrones, de forma redondeada o irregular con doble membrana y gránulos periféricos entre las dos membranas. 2. Entamoeba dispar: los trofozoitos y los quistes tienen morfología similar a Entamoeba histolytica, excepto que los trofozoitos no contienen glóbulos rojos. 3. Entamoeba coli: Preste atención, en los trofozoitos de 20 a 30 micras a la distribución de la cromatina gruesa en la periferie del núcleo y a su cariosoma prominente y excéntrico; y en los quistes, de mayor tamaño de 15 a 30 micras de diámetro con más de cuatro núcleos y presencia, en ocasiones de barras cromidiales finas como astillas en el citoplasma. En las preparaciones teñidas con lugol se suele apreciar vacuolas yodófilas. 4. Endolimax nana: Los trofozoitos son pequeños entre 6 y 15 micras y los quistes de 5 a 10 micras de diámetro. El núcleo presenta un cariosoma grande que ocupa casi todo el núcleo. El quiste oval o redondeado, generalmente, presenta cuatro núcleos. La preparación teñida con lugol permite observar los núcleos como puntos más brillantes. 5. Iodamoeba butschlii: El trofozoito mide de 8 a 20 micras y el quiste de 5 a 14 micras. En las preparaciones teñidas con hematoxilina férrica o Gomorri-Trichrome se observa una vacuola vacía en el citoplasma y el núcleo presenta una cariosoma grande que emite fibrillas hacia la membrana nuclear. En la preparación teñida con lugol, la vacuola se aprecia teñida debido a su contenido de glicógeno (vacuola yodófila). Haga dibujos de sus observaciones.
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Haga dibujos de sus observaciones. Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto del ciclo biológico de Entamoeba coli y constate la similitud del ciclo evolutivo de estas amebas con las de Entamoeba histolytica .
Acción patógena: Solamente a Blastocystis hominis se le atribuye acción patógena condicionada a su abundancia y sola presencia en procesos diarreicos. Diagnóstico: Se realiza por el hallazgo de trofozoitos y /o quistes en heces. A semejanza que con E. histolytica, E. dispar excreta metabolitos que usados como coproantígenos han permitido preparar anticuerpos monoclonales que detectan la infección en caso que la diferenciación morfológica con E. histolytica no sea suficiente y sea necesario diferenciar inmunológica mente a ambos parásitos.
Balantidiosis Definición: Zoonosis parasitaria causada por Balantidium coli , protozoo ciliado que tiene por hábitat el intestino grueso del cerdo y accidentalmente del hombre. El parásito: Balantidium coli Balantidium coli es un protozoario de la Clase Ciliata
Material de observación
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1. Frotis de heces de cerdo coloreados con Hematoxilina férrica o Gomorri-Trichrome. Observación a menor y mayor aumento 2. Corte histológico de intestino grueso con B. coli . Observación a menor y mayor aumento. 3. Preparaciones microscópicas de heces de cerdo en solución fisiológica, con trofozoitos móviles de B. coli . Observación con lente panorámico y a menor aumento.
Morfología: Balantidium coli presenta
dos estadíos evolutivos, el trofozoito y el quiste. OBSERVE las preparaciones y complemente con los dibujos adjuntos: a)
b)
El trofozoito tiene forma piriforme y es el más grande de los protozoos intestinales del hombre, mide de 50 a 70 micras. Preste atención, en la preparación microscópica con suero fisiológico, al movimiento del parásito utilizando sus cilios y la velocidad de sus desplazamientos; así como, a la presencia del citostoma hacia la extremidad más adelgazada del parásito y de la vacuola contráctil en el citoplasma. En las preparaciones coloreadas aprecie el macronúcleo de forma arriñonada y el micronúcleo redondeado y situado hacia la concavidad del macronúcleo, aunque no es fácilmente distinguible por su tamaño pequeño. DIBUJE. El quiste es redondeado, cubierto de una membrana quística, mide de 40 a 60 micras de diámetro y contiene un solo parásito. Obsérvelo en las preparaciones en fresco y en las coloreadas. DIBUJE.
Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. La forma infectante es el quiste El mecanismo de transmisión es por la contaminación del agua de bebida y alimento con heces de cerdo que contienen los quistes del parásito. La puerta de entrada es la vía oral. La reproducción es por división binaria de los trofozoitos. La conjugación o intercambio de material genético de dos trofozoitos ha sido observado.
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Ciclo biológico 1. Trofozoito 2. Quiste 3. 3a-3c. Multiplicación por división binaria del trofozoito 4. El hombre: hospedero accidental 5. El cerdo: hospedero habitual (reservorio) que contamina el ambiente con sus heces El desarrollo sólo tiene lugar en el intestino grueso.
Acción patógena: Localización intestinal: Los trofozoitos de Balantidium coli pueden estar en la luz intestinal del intestino grueso, reproduciéndose o transformándose en quistes sin causar lesiones en la mucosa intestinal; sin embargo, en ocasiones, debido a factores diversos los trofozoitos pueden invadir la mucosa intestinal causando úlceras similares a las amebiana, de las cuales hay que diferenciarlas. OBSERVE las preparaciones histológicas y preste atención a las zonas sana y con lesiones de la mucosa intestinal. Observe trofozoitos de B. coli que se distinguen por su gran tamaño y por observarse en algunos el macronúcleo y muy rara vez el micronúcleo. Preste atención a la profundidad de las lesiones, que similarmente a E. histolytica puede penetrar hasta el peritoneo. DIBUJE.
Diagnóstico: Se realiza por el hallazgo de quistes y trofozoitos en heces. Se recomienda el método de Baermann.
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Giardiosis Definición: Infección parasitaria causada por Giardia lamblia, protozoo flagelado que tiene por hábitat el intestino delgado, principalmente duodeno del hombre y de algunos animales. El parásito: Giardia lamblia Giardia lamblia
es un protozoario flagelado perteneciente a la Clase Zoomastogophorea
Material de observación 1. 2.
Frotis de heces coloreados con hematoxilina férrica o Gomorri-Trichrome. Observación con lente de inmersión. Preparación microscópica de heces fijadas con formol y teñidas con lugol. Observación a mayor aumento.
Morfología: El parásito presenta dos formas evolutivas; el trofozoito y el quiste. OBSERVE las preparaciones y complete con los dibujos adjuntos. a)
El trofozoito es de forma piriforme y mide de 15x7 micras. En las preparaciones teñidas con hematoxilina férrica o Gomorri-Trichrome, ocasionalmente, es posible observar claramente los 4 pares de flagelos, un anterior, dos laterales y uno posterior, pero con claridad, los dos núcleos en la porción anterior o más ancha del trofozoito con la cromatina compacta central en cada uno de ellos. El axostilo o barra rígida recorre por la mitad del parásito de la extremidad anterior a la posterior. Hacia la mitad del mismo la atraviesan dos formaciones cortas o cuerpos parabasales. Cuando se observa el trofozoito de perfil se puede apreciar en la extremidad anterior una concavidad que corresponde a la depresión de los discos suctorios, órganos de fijación del parásito a la superficie de la mucosa intestinal. DIBUJE. b) El quiste es ovalado y mide de 10 micrones en su diámetro mayor. Reconózcalo en las preparaciones coloreadas con hematoxilina férrica o Gomorri-Trichrome y en las preparaciones teñidas con lugol, tiene una membrana quística doble y en se distinguen de dos a cuatro núcleos, el axostilo y en ocasiones los cuerpos parabasales. DIBUJE.
Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. La forma infectante es el quiste El mecanismo de transmisión es el agua de bebida o alimento contaminado con los quistes del parásito. La puerta de entrada es la vía oral 17
Los animales infectados no son tan importantes como reservorios de la infección como lo es el hombre.
Acción patógena: Los trofozoitos de Giardia lamblia se ubican en la superficie de las células epiteliales de la mucosa duodenal, sin penetran ella, ocasionando inflamación de la mucosa, lo que ocasiona la diarrea y a su vez puede bloquear la absorción de nutrientes, principalmente grasas, por lo cual se le considera como agente causante de mala absorción intestinal. La cuantía de parásitos, la edad del paciente y la reacción del hospedero, determinan, principalmente, la intensidad de la sintomatología digestiva.
Diagnóstico: Se hace por el hallazgo de trofozoitos y/o quistes en las heces. Se recomienda hacer, en casos indicados, sondaje duodenal o el uso de la cuerda encapsulada.
Otros flagelados intestinales Definición: Son flagelados no patógenos, con excepción de Dientamoeba fragilis a quien se le asocia con molestias digestivas. Los parásitos: Los más importantes en nuestro país son: Dientamoeba fragilis Chilomastix mesnili Trichomonas hominis
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Material de observación 1.
Frotis de heces coloreado con hematoxilina férrica o Gomorri-Trichrome. Observación con lente de inmersión Preparación de heces fijada con formol y teñidas con lugol. Observación a mayor aumento.
2.
Morfología: Dientamoeba fragilis y Trichomonas hominis Chilomastix mesnili , de trofozoito y quiste.
presentan sólo formas de trofozoito y
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Dientamoeba fragilis : los trofozoitos miden de 6 a
12 micras, de forma irregular presentan dos núcleos con gránulos de cromatina en su parte central en número de 4 a 8.
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Trichomonas hominis:
-
Chilomastix mesnili :
los trofozoitos tiene forma ligeramente piriforme y miden de 5 a 14 micras. Se pueden distinguir los flagelos anteriores en número de 5 y una membrana ondulante bordeada de un sexto flagelo que suele prolongarse por el extremo posterior. Se suele distinguir el núcleo anterior y un axostilo que recorre la parte media del parásito.
El trofozoito de forma piriforme mide de 6 a 20 micras de largo por 3 a 10 de ancho. Presenta 4 flagelos anteriores que no se les suele distinguir a todos ellos, se suele distinguir una depresión anterior a manera de citostoma. El núcleo está situado en la extremidad anterior. Se observa un surco en forma de espiral a lo largo del cuerpo. El quiste tiene forma redondeada con una prominencia que lo asemeja a un limón y mide de 6 a 10 micrones, presenta doble membrana y en su interior se observa los elementos descritos en el trofozoito. DIBUJE.
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Ciclo biológico: Dientamoeba fragilis
y Trichomonas intestinalis:
La forma infectante es el trofozoito. El mecanismo de transmisión es el agua de bebida o alimento contaminado con trofozoitos. La puerta de entrada es la vía oral. La reproducción es por división binaria en la luz del intestino Chilomastix mesnili :
El ciclo biológico es similar al de Giardia lamblia. La forma infectante es el quiste. El mecanismo de transmisión es el agua de bebida o alimento contaminado con quistes del parásito. La puerta de entrada es la vía oral. La reproducción es por división binaria de los trofozoitos en la luz intestinal. Acción patógena: Se atribuye a Dientamoeba fragilis ser causante de molestias digestivas, incluyendo diarrea. Diagnostico: Se hace por hallazgo de trofozoitos y/o quistes en las heces.
Coccidiosis intestinal Definición: Infección parasitaria humana causada por protozoos esporozoarios del Phylum Apicomplexa que tienen por hábitat el intestino y musculatura de animales y el intestino del hombre.
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Los parásitos: Los más importantes en nuestro país son: Isospora belli Cryptosporidium Cyclospora cayetanensis
Las coccideas pertenecen a la Clase Sporozoa. Material de observación 1. Preparación de heces fijadas en formol y teñidas con lugol. Observación a mayor aumento. 2. Frotis de heces teñidas con Ziehl- Nielsen. Observación a mayor aumento e inmersión Morfología y ciclo biológico: Las coccideas tienen dos ciclos de vida sexual y asexual, cuyas formas evolutivas no han sido completamente elucidadas en algunas de ellas. -
Isospora belli : ambos ciclos se realizan en el intestino delgado del hombre.
El ciclo asexual comprende las siguientes formas evolutivas: a) esporozoito, célula alargada, pequeña, mide de 2 a 4 micrones que penetra en la célula epitelial de la mucosa de intestino delgado. b) esquizonte, forma reproductiva, por división binaria, en las células epiteliales intestinales, contiendo los merozoitos c) merozoito, forma pequeña que penetra a otras células epiteliales para originar más esquizontes, que luego de varios ciclos se transforma en gametocito. El ciclo sexual comprende las siguientes formas evolutivas: a) microgametocito o gametocito masculino y b) macrogametocito o gametocito femenino. Ambos gametocitos evolucionan a gametos que se conjugan dando lugar al huevo. c) Huevo o zigote, aparece en la luz intestinal como una masa que se rodea de una membrana quística dando, lugar al ooquiste. d) Quiste inmaduro, al inicio el huevo o zigote se rodea de una membrana quística (esporoblasto). e) ooquiste maduro, el esporoblasto se divide en 2 esporoblastos y en el interior de cada uno de ellos la masa protoplasmática se divide dando lugar a 4 esporozoitos y los esporoblastos toman el nombre de esporoquistes. El ooquiste maduro contiene, finalmente 2 esporoquistes y cada uno de ellos 4 esporozoitos. En las preparaciones de heces coloreadas con lugol, observe ooquistes Inmaduros y maduros de Isospora belli . DIBUJE.
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El ciclo biológico Se representa en el esquema adjunto, observe que: La forma infectante es el ooquiste maduro El mecanismo de infección es por la contaminación del agua de bebida y del alimento contaminado con ooquistes maduros del Parásito. La puerta de entrada es la vía oral. El hombre es el único hospedero definitivo e intermediario a la vez. -
el ciclo asexual y sexual ocurre en el intestino delgado de diversos animales y del hombre, por lo que a la cryptoporidiosis se le considera una zoonosis parasitaria. Cryptosporidium:
El ciclo asexual ocurre en la porción intracelular y extracitoplasmática de las células epiteliales del intestino y comprende las siguientes formas evolutivas similares a I. belli : a) Esporozoito, que invade la célula epitelial b) esquizonte o meronte de primera generación, forma reproductiva que dá lugar a merozoitos que invaden nuevas células. c) esquizonte o meronte de segunda generación que da lugar a los gametocitos El ciclo sexual comprende las siguientes formas evolutivas: a) microgametocito, gametocito masculino b) macrogametocito, gametocito femenino c) huevo o zigote que se rodea de una membrana delgada o gruesa dando lugar a los ooquistes d) ooquiste, que contiene 4 esporozoitos.
Los ooquistes de pared delgada realizan la autoreinfección interna, y los de pared gruesa salen al exterior con las heces del hombre o de los animales. La especie identifica en las infecciones humanas es Cryptosporidium parvum, la misma que se ha identificado 23
También en animales. Observe en las láminas teñidas con Ziehl- Neelsen los ooquistes de 4 a 5 micrones, redondeados y de color rojizo. DIBUJE. El ciclo biológico está resumido en el esquema adjunto. OBSERVE. La forma infectante es el ooquiste de pared gruesa. El mecanismo de infección es por la contaminación de agua de bebida y alimento contaminado con ooquistes del parásito. La puerta de entrada es la vía oral. Los reservorios en la naturaleza serían animales domésticos. Es un parásito oportunista del SIDA, y en personas Inmunocomprometidas, se les ha encontrado localizaciones Extraintestinales del parásito.
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Cyclospora cayetanensis :
El ciclo evolutivo asexual y sexual no está perfectamente elucidado, aparentemente es similar a la Cryptosporidium y ocurre en las células epiteliales del intestino delgado. Se ha encontrado la infección en diversos animales y en el hombre, por lo que a la Cyclosporidiosis se le considera como una zoonosis parasitaria. El hombre infectado elimina ooquistes maduros de 8 a 10 micrones de diámetro, redondeados que contienen dos esporoquistes con dos esporozoitos cada uno. OBSERVE las preparaciones de heces teñidas con lugol, donde se parecía a los ooquistes poco teñidos y en las preparaciones teñidas con Ziehl-Neelsen de color rojizo. El ciclo biológico sería similar a Cryptosporidium. La forma infectante se considera que es el ooquiste maduro. El mecanismo de transmisión sería por el agua de bebida y el alimento contaminado con ooquistes maduros del parásito. La puerta de entrada sería la oral. Es un parásito oportunista del SIDA.
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Diagnóstico: El diagnóstico parasitológico de las coccideas intestinales se realiza por el hallazgo de ooquistes y en ocasiones de gametocitos en las heces de las personas parasitadas, utilizando la coloración de Ziehl-Neelsen, y también las de Kinyoun y Giemsa son útiles. 25
En Cryptosporidiosis, es posible demostrar el parásito por anticuerpos monoclonales marcados con fluorescencia y su observación al microscopio de fluorescencia, o marcados con enzimas para realizar técnicas inmunenzimáticas como ELISA; también se han demostrado anticuerpos circulantes.
Practica Nº 3 Nematodos intestinales ASCARIOSIS Definición Enfermedad parasitaria causada por Ascaris lumbricoides. Helmintos se localiza en el intestino delgado del hombre El parásito: Ascaris lumbricoides
Material de Observación 1. Ejemplares adultos de Ascaris lumbricoides : observación al microscopio estereoscopico.
2. Preparación microscópica de heces con huevos del parásito. Observación a menor y mayor aumento. Morfología: a) Adulto: OBSERVE ejemplares adultos de Ascaris lumbricoides . Distinga el dimorfismo sexual; preste atención al tamaño en la hembra de 25 a 35 cm. De largo y en el macho de 15 a 30 cm. Ubique dos bandas laterales a lo largo del cuerpo. Reconozca las partes descritas en la práctica correspondiente a las características morfológicas de los helmintos. b) Huevo: OBSERVE en un preparado de heces huevos de Ascaris lumbricoides de forma ovalada con cubierta mamelonada. En laminas preparadas OBSERVE cortes histológicos del cuerpo de A. lumbricoides y reconozca cutícula cubierta de espinal, hipodermis y capa muscular; asimismo, intestino, útero, oviducto y ovario. Ciclo Biológico: La forma infectante es el huevo de Ascaris. El mecanismo de transmisión al hombre es a través del agua y alimento contaminado con huevos de Ascaris, que son ingeridos por vía oral.
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Acción patógena: patógena: El parásito adulto adulto ocasiona daños mecánicos mecánicos por obstrucción intestinal intestinal y al migrar migrar penetra en conductos como el colédoco produciendo ictericias obstructivas, obstructivas, colecistis, colecistis, abscesos hepáticos y pancreatitis aguda. La penetración al apéndice y la perforación intestinal no es infrecuenté. El estadio larvario al migrar por el pulmón ocasiona microhemorragias. Desarrolla una respuesta toxialérgica. toxialérgica. Se observan infiltrados infiltrados linfoplasmocitarios linfoplasmocitarios y eosinofílicos eosinofílicos en tabiques y alvéolos, con congestión y exudado, que se visualizan radiológicamente como infiltrados intersticiales migratorios y se manifiestan clínicamente como una neumonitis asmatiforme. Diagnostico El examen de heces del del paciente sospechoso, sospechoso, con la ayuda ayuda del microscopio microscopio permitirá observar observar huevos del parásito. El diagnostico diagnostico se puede confirmar confirmar al observar larvas larvas en el esputo esputo o en el el contenido contenido de larvado larvado gástrico. El examen radiológico con métodos de contraste y la ecografía pueden ayudar al diagnostico.
TRICOCEFALOSIS Definición: Definición: Infección producida por Trichuris Trichuris trichura, nematode que se localizan en el intestino grueso. 27
El parásito: parásito: Trichuris trichura
Material de observación Trichuris trichura. Observación al microscopio 1. Lamina portaobjeto con adultos de Trichuris
compuesto. 2. Ejemplares preservados del T. Trichura. Observación al microscopio estereoscopico. 3. prepa preparac ración ión microsc microscópi ópica ca de heces heces con huevos huevos del parás parásito ito.. Observ Observac ación ión a menor menor y mayor aumento. Morfología: Morfología:
a) Adulto: Adulto: OBSERVE OBSERVE láminas preparadas con ejemplares adultos del parásito, parásito, distinga el color blanquecino blanquecino y la forma característica característica de un látigo con dos partes diferenciadas, diferenciadas, la anterior anterior más larg largaa y muy delgad delgadaa y la posteri posterior or grues gruesaa ensan ensancha chada, da, recta recta en la hembra hembra y enrosc enroscado ado ventralmente ventralmente en el macho, provisto de una espícula espícula contenida en una vaina. La hembra alcanza alcanza de 35 a 50 mm y el macho de 20 a 25 mm b) Huevo: Huevo: OBSER OBSERVE VE en un prepar preparado ado de heces heces de de huevo huevo de Trichuris trichura , de forma elíptica, de color parduzco cuya dimensión alcanza de 40 a 50 micras en su diámetro mayor. Presentan una envoltura gruesa y con tapones en ambos polos. Ciclo biológico: biológico: La forma infectante es el huevo de T. Trichura. El mecanismo de transmisión al hombre es el agua y alimento contaminado con huevos de T. trichura, que son ingeridos por vía oral.
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Acción patógena: Si la parasitosis es masiva se produce una hemorragia crónica por traumatismo del epitelio intestinal y al submucosa. Se observa una ligera inflamación linfoplasmocitaria entre las criptas de Liberkuhn y un ligero daño de la mucosa en los puntos de penetración de los gusanos. Diagnostico: Mediante el examen de heces en el que se observan huevos del parásito. Por observación directa de los parásitos al efectuar una rectoscopia o en la mucosa rectal, cuando se presentan prolapso.
ENTEROBIOSIS Definición: Infección producida por el nematodo Enterobius vermicularis , se localiza en el intestino grueso. El parasito: Enterobius vermicularis
Material de observación:
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1. lamina portaobjetos con hembra adulta de Enterobius vermicularis. Observación al
microscopio compuesto. 2. lamina portaobjeto con huevos de Enterobius vermicularis adheridos a cinta adhesiva. Morfología: a) Adulto: OBSERVE láminas preparados de ejemplares hembras adultas del parásito, cilíndricas y aguzadas; el extremo anterior presenta una expansión cuticular y el posterior recto y delgado como un hilo; mide 1cm de largo. El macho mide 0.5 cm de longitud, y presenta el extremo posterior esta engrosado.
b) Huevos: OBSERVE preparaciones según el método de Graham, conteniendo huevos del parásito; distinga la forma plana convexa a cada lado y el tamaño que alcanza de 50 a 60 micras de largo por 20 a 30 micras de ancho; en el interior reconozca la larva.
Ciclo biológico: La forma infectante es el huevo del parásito. 31
El mecanismo de transmisión al hombre es a través de los alimentos que contienen el huevo embrionado o por retroinfección cuando eclosionan los huevos en la región perianal y las larvas infectivas migran hacia el intestino grueso.
Acción patógena Produce prurito vulvar e inflamación de la vagina; cuando alcanza el peritoneo ocasiona una peritonitis. Diagnostico: Se efectúa mediante el hallazgo del parásito adulto o de huevos obtenidos por el método de Graham o de la cinta adhesiva. La cinta se aplica en la región perianal y luego se coloca sobre un porta objeto.
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UNCINARIOSIS Definición: Infección intestinal producida por los nematodes Ancylostoma duodenale y Necator americanus, conocidos como anquilostomideos; se localizan en el intestino delgado del hombre sobre todo en el yeyuno. El termino uncinaria se refiere a la curvatura del extremo anterior a manera de gancho, con cápsula bucal con dientes (Ancylostoma) o placas cortantes (Necator).
El parasito: Ancylostoma duodenale y Necator americanus .
Material de observación: 1. Lamina portaobjeto con ejemplares
adultos de Ancylostoma. Observación al
microscopio estereoscópico y compuesto. 2. preparación microscópica de heces con huevos del parásito. Observación al microscopio compuesto a menor y mayor aumento.
Morfología: a) Adulto: OBSERVE laminas preparadas de ejemplares adultos del parásito; distinga la forma cilíndrica presentan dimorfismo sexual, la hembra presenta el extremo posterior en punta y el macho en forma de campana llamada bolsa copulatriz. La longitud de los parásitos oscila entre 8 y 12 mm, cuyo diámetro alcanza de 0.4 a 0.6 mm .
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b) Huevo: OBSERVE en un preparado de heces huevos de uncinarias de forma oval, con cáscara delgada y traslucida y con blastómeros; miden de 60 a 70 micras por 30 a 40 micras.
Ciclo biológico: La forma infectante es la larva filariforme. El mecanismo de transmisión se da cuando la larva infectante se pone en contacto con la piel del hombre, penetrando a través de ella de manera activa.
Ciclo de Ancylostoma duodenale
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Acción patógena: Periodo cutáneo o de invasión, cuando la larva infectante penetra a través de la piel produce eritema y a veces vesículas, lesiones que pueden complicarse por infecciones secundarias. Periodo de migración o fase pulmonar, producen lesiones en los alvéolos pulmonares, desde pequeñas hemorragias hasta infiltrados celulares con fibroblastos y leucocitos, dando lugar a la neumonitis. Diagnostico: Mediante el examen de heces en el que se observan huevos del parásito. Por observación directa de los parásitos al efectuar una rectoscopia o en la mucosa rectal, cuando se presenta prolapso.
ESTROGILOIDIOSIS Definición: Infección ocasionada por el nematodo Strongyloides stercolaris se localiza en el intestino delgado del hombre, especialmente en el duodeno. El parasito: Strongyloides stercolaris
Material de observación Preparación microscópica de heces con larvas rabditoides del parásito. Observación al microscopio compuesto a menor y mayor aumento. Morfología: a) Adulto: nematodos filiformes; muy pequeños, el macho mide 0.7 mm de longitud por 40
micras de diámetro, la hembra mide 2.2 mm de largo por 20 a 70 micras de diámetro.
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b) Larva rabditoide: OBSERVE en preparados de heces larvas de 200 micras de longitud;
en la parte anterior localice cápsula bucal corta y un esófago con un bulbo posterior. Dibuje
Ciclo biológico: La forma infectante es la larva filariforme El mecanismo de transmisión se efectúa cuando la larva infectante penetra a través de la piel; para alcanzarla circulación general por lo vasos venosos y linfáticos. Acción patógena: En el estadio invasivo las larvas producen pequeñas hemorragias y edema conjurito intenso. En el estadio pulmonar las larvas producen lesión de los alvéolos, engrosamiento de los tabiques interalveolares y de los bronquiolos. En el estadio intestinal, producen cambios fibróticos y ulceraciones.
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Diagnostico: OBSERVACION, al microscopio compuesto, las larvas rabditoides en muestras de heces, procesados mediante los métodos directo y de Baermann o en el líquido intestinal obtenido por sondeo duodenal. Periodo intestinal, si la infección es masiva se produce lesión intestinal, con sangrado continuo ayudado por la sustancia anticoagulante del parásito, inflamación de la mucosa, enteritis e hiperplasia medular. Diagnostico: Examen directo de preparados de heces para observar huevos del parásito.
Practica Nº 4 CESTODES TENIOSIS Definición: Teniosis. Infección producida por cestodos adultos de los géneros Taenia que se localizan en el intestino delgado del hombre. El parsito: Taenia solium
y Taenia saginata
Material a observación 1.- Laminas portaobjeto con escolex y proglotidos de Taenia saginata. Observación al microscopio estereoscópico y compuesto. 2.- Lamina portaobjeto con proglotidas de Taenia saginata. Observación al microscopio estereoscópico. 3.- Preparación microscópica de heces con huevos del parásito. Observación a menor y mayor aumento.
Morfologia: a) Adulto OBSERVE ejemplares adultos del parásito, aplanados y acintados con tres partes:
cabeza o encoles, cuello y cuerpo o estróbilo. Preste atención al tamaño de escolex y las proglotidas. Distinga en el escolex de ambas especies cuatro ventosas y en el caso de Taenia solium un rostelo provisto de doble corona de ganchos. En el cuerpo o estróbilo del helminto reconozca poro genital único localizado lateralmente, proglotidas: 37
inmaduras mas anchos que largos, maduras cuadrangulares con aparato reproductor masculino y femenino diferenciados y grávido, más largos que anchos con un útero ramificado conteniendo numerosos huevos. Compare ambas especies en prelación a la forma de la proglotida y al número de ramas uterinas. DIBUJE. .
b) Huevo: OBSERVE muestras de heces preservadas y reconozca huevos de Taenia solium,
de forma esférica, con una cáscara gruesa y radiada conteniendo un embrión hexacanto u oncósfera en este distinga los ganchos.
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Ciclo biológico: La forma infectante de la teniasis es el estadio larvario o cisticerco presente en los músculos esqueléticos del cerdo ( Cysticercus cellulosae ) o de vacuno ( Cysticercus bovis ). El mecanismo de transmisión en el hombre es el cisticerco, contenido en carnes de cerdo o vacuno crudas o insuficientemente sometidas a cocción el que es ingerido por vía oral.
Acción patógena: El parásito adulto de T. solium y T. saginata provoca leve irritación en la mucosa del intestino delgado, debido a la adhesión del escolex o bien produce ocasionalmente oclusión intestinal. Los mecanismos patogénicos fundamentales son la utilización por el parásito del contenido intestinal del hospedero y el toxialergico por la producción de catabolitos por el helminto.
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Diagnostico: Para el caso de teniasis el diagnostico se basa en el hallazgo de proglotidas del parásito expulsadas por el paciente y mediante el examen microscópico de heces en los que se encuentran huevos de forma esférica.
DIFILOBOTRIOSIS Definición: Infección parasitaria causada por el cestote Diphyllobotrium pacificum, localizado principalmente en el intestino delgado del lobo marino y del hombre, siendo los peces marinos los hospederos intermedios. El parásito: Diphyllobotrium pacificum
Material de observación 1.- Lamina portaobjeto con proglotidas de Diphyllobotrium pacificum. Observación al microscopio estereoscópico y compuesto. 2.- Preparación microscópica de heces con huevos del parásito. Observación a menor y mayor aumento. 3.- Lamina portaobjeto con larva plerocercoide. Observación a menor y mayor aumento. Morfología: a) Adulto: OBSERVE la forma aplanada y acintada del parásito. Alcanza hasta 3 metros de
longitud. El cuerpo presenta tres partes: escolex, en forma de hoja provisto de dos bodrio; cuello corto y la estrobila, con proglotida que son mas anchas que largas. Ubique en la superficie ventral de la proglotida la abertura genital y uterina; internamente al centro, distinga el útero en forma de roseta conteniendo huevos y lateralmente numerosos testículos alternado con las glándulas vitelogenas.
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b) Huevo: OBSERVE muestras de heces preservadas y reconozca
huevos de Diphyllobothrium de forma ovalada y distinga en ellos la cubierta gruesa y en uno de sus polos el opérculo.
c) Larva plerocercoide: OBSERVE enlaminas preparadas larvas del parásito obtenidas de
los músculos de peces marinos cilíndricos de tamaño pequeño con dos bodrios en el escolex.
Ciclo biologico: La forma infectante es la larva plerocercoide del parásito. El mecanismo de transmisión es a través de los músculos esqueléticos crudos de peces marinos que contienen larvas plerocercoides y que son ingeridos por vía oral.
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Acción patógena: El mecanismo patogénico deriva de la acción toxica y alérgica que ejerce el parásito sobre el hospedero. Diagnostico: Se realiza sobre la base del hallazgo de proglotidas del parásito que se caracteriza por presentar un poro genital central y ventral y el útero en forma de roseta repleto de huevos y mediante el examen de heces en los que se observan huevos ovoides con un opérculo en uno de sus polos.
DIPILIDIOSIS Definición Es una infección causada por la forma adulta del cestote Dipylidium caninum, que se localiza frecuentemente en el intestino delgado del perro y ocasionalmente del hombre, siendo las pulgas los hospederos intermediarios.
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El parasito: Dipylidium caninum Material a observar: Laminas portaobjeto con escolex y proglotidas del parásito. Observación al microscopio estereoscópico y compuesto. Morfología: a) Adulto: OBSERVE ejemplares adulto del parásito, aplanados y acintados, de 20 a 70 cm
de longitud. La cabeza o escolex con cuatro ventosas y un rostelo provisto de cuatro a siete coronas de ganchos. En las proglotidas maduras, en forma de tonel, distinga doble juego de aparto reproductor y dos poros genitales localizados lateralmente y en las proglotidas grávidas un útero modificado mostrando cápsulas ovígeras u ootecas.
b) Cápsula ovígeras: se presentan como bolsas sacciformes conteniendo de 4 a 20 huevos
esféricos de corteza delgada y lisa y encierran un embrión hexacanto u oncósfera.
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Ciclo biológico: La forma infectante de la Dipiliosis es el estadio larvario o cisticercoide del parásito. El mecanismo de transmisión en el hombre (especialmente niños) es a través de la ingestión por vía oral, de la pulga u otros artrópodos que contengan la larva o cisticercoide. Acción patógena: La infección es benigna y de corta duración por lo que pasa desapercibida.
Diagnostico: Se basa en el hallazgo de proglotidas grávidas expulsadas por el paciente y de manera infrecuente por la presencia de cápsulas ovígeras o huevos al efectuar el examen parasitológico de las deposiciones. .
HIMENOLEPIOSIS Definición: Hymenolepis Infección parasitaria causada por los cestodos: Hymenolepis nana e diminuta, que se localizan en tercio inferior del intestino delgado del hombre, especialmente niños. H. diminuta, es un parásito común del intestino delgado de ratas y ratones.
El parásito: Hymenolepis nana
e Hymenolepis diminuta
Material de observación: 1.- Lamina portaobjeto con adulto de Hymenolepis. Observación al microscopio estereoscópico y compuesto. 2.- Preparación microscópica de heces con huevos de parásito.
Morfologia:
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a) Adulto: OBSERVE ejemplares adultos del parásito de forma aplanada y acintados. Hymenolepis nana “Tenia enana” mide 3 a 4 cm de longitud en tanto que Hymenolepis diminuta mide de 20 a 60 cm de longitud. Distinga en el escólex de ambas especies 4
ventosas y en caso de H. nana un rostelo retráctil provisto de una corona simple de ganchos. En la estróbila maduro del helminto distinga proglotidas de forma trapezoidal, con poros genitales dispuestos todos hacia el mismo lado y estructuras del sistema reproductor diferenciados y el la grávida el útero sacular con numeroso huevos.
b) Huevo: OBSERVE muestras de heces preservadas y reconozca huevos de Hymenolepis nana, de 30 a 40 micras de diámetro, que se caracteriza por presentar corteza gruesa,
transparente, membranas, provista de dos mamelones polares de donde nacen tres pares de filamentos, contiene un embrión hexacanto con ganchos dispuestos en paralelo. Los huevos de Hymenolepis diminuta de 70 a 80 micras de diámetro no presentan mamelones polares ni filamentos, el embrión hexacanto presenta ganchos extendidos en pares abiertos en abanico.
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c) Los huevos de Hymenolepis diminuta de 70 a 80 micras de diámetro no presentan
mamelones polares ni filamentos, el embrión hexacanto presenta ganchos extendidos en pares abiertos en abanico.
Ciclo biológicos: La forma infectante de la Himenolepiosis en el hombre es el huevo y la larva o cisticercoide. El mecanismo de transmisión es a través del agua y los alimentos contaminados con huevos del parásito. Para el caso de Hymenolepis nana existe una autoinfección externa por falta de higiene de las manos después de defecar y una autoinfección interna, a partir de huevos que eclosionan dentro del tubo digestivo de la persona infectada desarrollando el cisticercoide que invade las vellosidades intestinales. Las dos especies parasitas, H. nana y H. diminuta, presenta un ciclo indirecto, con la intervención de un hospedero intermediario constituido por artrópodos de los géneros Tribolium y Tenebrio, en los que desarrollan el cisticercoide. El hombre, la rata y los ratones adquieren la infección por ingestión de los insectos en estado larvario.
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Acción patógena: El parásito Hymenolepis nana ocasiona reacciones inflamatorias de la mucosa intestinal y destrucción de las vellosidades intestinales debido al desarrollo de cisticercoides en su interior. El mecanismo patogénico es toxialergico, determinado por la absorción de desechos metabólicos del parásito. Hymenolepis diminuta no produce efecto patógeno.
Diagnostico: Se realiza por el hallazgo de huevos en el examen seriado de heces. Para el caso de Hymenolepis nana, huevos con mamelones polares y filamentos.
Practica Nº 5 PHYLUM ARTHROPODA Los Artrópodos Los artrópodos son animales invertebrados con patas articuladas, estructuras que otorgan el nombre al Phylum. El cuerpo esta dividido en tres regiones que pueden estar diferenciados o no. Cuando están claramente diferenciadas las regiones, ellas son cabeza, tórax y abdomen, sin embargo, las dos primeras regiones pueden estar fusionadas constituyendo el cefalotórax y abdomen. En el primer caso tenemos como ejemplo a los insectos y el segundo caso se hallan por ejemplo las arañas. Un caso aparte lo constituyen los ácaros y las garrapatas, los que presentan una organización corporal muy particular en que es difícil diferenciar las regiones. El desarrollo de los artrópodos desde huevos a adultos, se efectúa a través de las mudas, que consisten en la eliminación de la cutícula, revestimiento externo del ectoesqueleto que no tiene elasticidad. Algunos grupos presentan variación en el aspecto externo durante su desarrollo
CLASE ARÁCNIDA
Orden Araneida Las arañas 47
Son artrópodos que presentan el cuerpo dividido en dos regiones, el cefalotórax y el abdomen. En la parte anterior del cefalotórax se hallan dos pares de apéndices, un par interno los quelíceros conformados cada uno de ellos por dos segmentos, uno basal y el otro distal con aspecto de garra lo que le permite inyectar el veneno que usualmente lo utilizan para inactivar a sus presas. Los apéndices externos se denominan pedipalpos y están conformados por seis segmentos, existiendo en estas estructuras una diferencia sexual. En el caso del macho termina en una expansión característica para cada especie, lo que utiliza para transferir la cuota espermática en el poro genital femenino. En el caso de la hembra todos los segmentos de los pedipalpos tienen un diámetro similar. En la parte ventrolateral del cefalotórax se implanta las patas las que se presentan en número de ocho, presentando cada una de ellas siete segmentos. En el dorso del cefalotórax se hallan los ojos simples. La forma, el tamaño y la disposición de estos ojos son utilizados como caracteres de importancia para determinar la familia a la que pertenecen las arañas.
El abdomen tiene un aspecto aproximadamente globoso. Está unido al cefalotórax a través de un corto y delgado pedicelo (pecíolo). En la porción caudal y ventral del abdomen están presentes las estructuras por donde salen los hilos de seda que provienen de glándulas especializadas contenidas en el abdomen. Estos hilos de seda cumplen variadas funciones, pero fundamentalmente sirven para tejer una red para capturar las presas, ya que son esencialmente predatoras. Algunas especies segregan sustancias que disuelven las partes duras de sus presas. Las diferentes especies no atacan al hombre. Los hacen solo en forma accidental. LOXOCELISMO Es el cuadro clínico consecutivo al envenenamiento producido por la mordedura de arañas que pertenecen al genero Loxosceles. En diversas regiones del mundo existen arañas de este genero, pero en América Latina, la especie más frecuente es Loxosceles laeta . Le siguen el importancia L. reclusa y L. rufescens, presentes en México, Colombia, Perú, Paraguay, Brasil. Todas estas especies tienen venenos con efecto para el hombre. La araña : Loxoceles laeta Material de observación: Ejemplares de arañas que pertenecen a esta especie expuesta en una placa de petri de 60 x 15 mm con alcohol al 70% y con ayuda de un microscopio estereoscópico. Distinguir los caracteres morfológicos diferenciales.
Morfología Los representantes de esta especie miden aproximadamente 4 cm de longitud, considerando la extensión de las patas. Presentan un color pardo con varias tonalidades y el cuerpo esta cubierto por una pilosidad corta y abundante.
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El cefalotórax es de aspecto piriforme y en su extremo anterior y dorsal presenta 3 pares de ojos simples dispuestos uno anterior y dos pares laterales, formando un triangulo. Las hembras son algo más voluminosas. Ciclo biológico: Su desarrollo es a través de mudas de las formas eclosionadas del huevo hasta alcanzar el estado adulto. La hembra deposita alrededor de 200 huevos dispuestos en un saco elaborado con hilos de seda por lo que se denomina ovisaco u ooteca. Este receptáculo es redondeado y se ubica en la vecindad de la tela. Las arañas que emergen primero ingieren a las restantes. Después de algunas semanas salen del saco y se dispersan por las proximidades, donde establecen nuevos nidos. El ciclo biológico dura aproximadamente un año.
Importancia médica: Se trata de una araña de hábitos solitarios, ubicándosele en el interior de las casas. Usualmente de halla en los rincones altos y sombríos, detrás de muebles. En estos lugares teje una tela laxa, algodonosa y sucia, que le sirve de refugio durante el día y hacia donde arrastra a las presas que captura. Su actividad es principalmente nocturna, y accidentalmente puede caminar sobre las partes expuestas de una persona (brazos, piernas) cuando esta duerme; y que inconscientemente al tratar de retirarla por la molestia que le causa, la araña para defenderse introduce sus quelíceros e inyectan el veneno. Otra forma accidental es cuando la víctima se pone la ropa o zapatos estando la araña oculta en estas indumentarias. El veneno de esta especie es necrotizante y hemolítico. En el sitio de la picadura se observa la huella de los quelíceros y a las pocas horas la piel se vuelve roja y edematosa y finalmente aparece una mancha de color violáceo, lo que indica que se está produciendo una necrosis. 49
En cuadros más graves se pueden observar la presencia de ampollas llenas de sangre. Puede haber fiebre y manifestaciones generales de toxemia. Otras personas desarrollan síndrome viscero- hemolítico, es decir que el veneno destruye los eritrocitos (intravascularmente). Al quedar la hemoglobina libre, es conducida a los riñones para su eliminación, pero al nivel de tubuli contortis distal se produce la precipitación de la hemoglobina y se acumula, ocasionando una obstrucción, que determina insuficiencia renal y la posible muerte de la persona. Todo ello depende de varios factores, como son la cantidad de veneno, la concentración de veneno, el sitio de la introducción del veneno, la respuesta individual, el tamaño de la persona.
LACTRODECTISMO Se denomina lactrodectismo al cuadro clínico consecutivo al envenenamiento producido por la picadura de arañas del Genero Lactrodectus, siendo la más común en América latina Lactrodectus mactans y usualmente conocida en nuestro país como “viuda negra”. La araña: Lactrodectus mactans Material a observar: Ejemplares de esta especie de araña preservada en alcohol al 70% y dispuesta en una placa de petri de 60 x 15 mm, con la ayuda de un microscopio estereoscópico. Reconocer las diferentes partes corporales. Morfología: Se trata de una especie que presenta dimorfismo sexual, es decir la hembra y el macho son de tamaño y color diferentes. Así la hembra que mide un promedio de 4 cm de longitud incluyendo las patas, presentan una coloración negra, presentando en la parte ventral del abdomen un par de triángulos opuestos de color rojo. El abdomen es relativamente grande y globoso. El macho es significativamente más pequeño y por lo general de color grisáceo, el que después que fecunda a la hembra es usualmente devorado por ésta, razón del apelativo en nuestro medio de “viuda negra” 50
Ciclo biológico Su desarrollo se realiza a través de mudas, hasta llegar al estado adulto. La hembra deposita un rango de huevos que oscila entre 100 a 500, encerrados en el interior de un ovisaco u ooteca. Al cabo de tres semanas emergen los juveniles, los que se pigmentan paulatinamente durante los 8 meses en que permanecen dentro del ovisaco. Presentan canibalismo. Usualmente sus presas son insectos que capturan por medio de su tela estratégicamente ubicada. Importancia médica El hábitat de esta especie es el medio rural, el campo en donde existen plantas silvestres y/o cultivadas. Se ubica en grietas, debajo de piedras, troncos de árboles. Tienen actividad diurna y el contacto con la persona es accidental, atacando preferentemente las piernas y los brazos. El veneno de esta especie es neurotóxico y se concentra en el sistema nervioso vegetativo. La picadura inicialmente produce una sensación de quemazón, luego el dolor migra hacia las partes iniciales de los brazos y/o piernas. Existen contracciones musculares y dificultad para respirar (disnea) y luego produce una sensación de muerte inminente. Acompañando a todo este cuadro, existe también sudoración, secreción lagrimal, contracción de esfínteres y aumento de la presión arterial. Tratamiento Existen sueros elaborados contra los venenos de las arañas, siendo buena su actividad dentro de las seis horas de producido el accidente. Posterior a ello, no tiene sentido la aplicación del suero, debiéndose recurrir a la medicación. En el caso de loxoscelismo se debe usar el suero antiloxoceles, así como corticoides y antihistamínicos; y en caso del lactrodectismo se debe usar sustancias bloqueadoras (Neostigmina, Fisostigmina, Prostigmina). A veces el dolor es tan intenso que se tiene que usar morfina.
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ORDEN SCORPIONES LOS ALACRANES O ESCORPIONES Son arácnidos que presentan el cuerpo dividido en dos regiones cefalotórax y abdomen, ampliamente unidos. En la parte anterior del cefalotórax están presentes los quelíceros conformados por tres segmentos y con aspectos de pinza, los que usan para triturar a sus presas. Lateralmente a estas estructuras se hallan los pedipalpos conformados por seis segmentos y también con aspectos de pinzas los que utilizan para atrapar a sus presas, Presentan cuatro pares de patas que se implantan en la parte látero – ventral del cefalotórax. En el dorso de esta primera región están presentes dos ojos simples; y en parte basal de las patas se hallan dos estructuras blanquecinas con aspectos de peines, por lo que se les denomina pectens y cumplen una función enteramente sensorial. El abdomen esta conformado por doce segmentos, de los cuales los siete primeros son anchos y conforman el pre – abdomen y los cinco últimos son delgados dando el aspecto de una cola, por lo que vulgarmente lo llaman cola del alacrán; sin embargo se trata del post – abdomen, al final del cual existe una vesícula que contiene a la glándula de veneno el cual es inyectado a través de una espina continua a la vesícula. SCORPIONISMO Se denomina así al cuadro clínico es de variable intensidad, según la especie involucrada. En América Latina existen temidas especies que pertenecen a los géneros Centruroides y Tiryus. En nuestro medio predomina la especie Hadruroides lunatus. El alacrán: Hadruorides lunatus Material a observar: Ejemplares de esta especie de alacrán dispuestos en placa de petri de 100 x 15 mm, preservados en alcohol al 70%. Morfología: Las características morfológicas son similares a las anteriormente descritas, señalando además que no existen diferencias morfológicas claras entre la hembra y el macho.
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Ciclo Biológico: La fecundación de la hembra se produce a través del “baile nupcial”, en donde ambos sexos se toman por medio de los pedipalpos que tienen aspectos de pinzas. Los juveniles presentan los mismos hábitos predatores que los adultos.
Importancia Médica Se distribuyen ruralmente, en el campo y principalmente son nocturnos. Cuando ocurre una picadura, las manifestaciones clínicas locales son dolor, edema eritema e infiltración subcutánea que puede terminar en la configuración de una placa violacea. La cual desaparece al cabo de cuatro a seis días. A veces puede haber fiebre, purito y fenómenos secretorios como la rinorrea. En casos severos se asocian espasmos musculares, convulsiones y otros síntomas similares al lactrodectismo. En algunas ocasiones, cuando la evolución es grave, existe acción central neurotóxica del veneno, el que actúa como un potente estimulador del sistema nervioso simpático, produciéndose hipertensión arterial, edema pulmonar y falla circulatoria periférica, entrando el paciente en estado crítico y pudiendo llegar a un desenlace fatal en pocas horas. La letalidad del escorpionismo es relativamente baja, dependiendo de la especie del agente ponzoñoso y de las características y condición general del individuo picado. La causa de la muerte es, en la mayoría de los casos, parálisis respiratoria por compromiso bulbar.
CLASE ACARI ÁCAROS Los ácaros que son de tamaño diminuto y algunos microscópicos, al igual que las garrapatas que son relativamente grandes, presentan un cuerpo globoso en que se pueden distinguir, una porción anterior pequeña denominado gnathosoma o capítulo, el que comprende los quelíceros trisegmentados conformando pinzas y lateralmente a estos están lo pedipalpos. Los quelíceros de las especies de ácaros predatores sirven para triturar, pero en especies parásitas están modificados para picar. La parte posterior denominada idiosoma, tiene en la parte antero- ventral cuatro pares de patas. ESCABIOSIS La especie Sarcoptes scabiei. var. hominis, causa la sarna humana, pero otras especies de ácaros también pueden acarosis. El parásito: Sarcoptes scabiei variedad hominis Material a observar: Láminas de microscopía con estados juveniles (ninfas) y adultos de esta especie. Reconocer las partes del cuerpo. Morfología: Regiones del cuerpo de manera similar a la anteriormente descrita. 53
Particularmente las dos patas posteriores de la hembra de esta especie terminan en cerdas, el cuarto par de patas de los machos terminan en ventosas o pulvillos. En el dorso que presenta rugosidades y espinas dirigidas antero – posteriormente, lo que tiene importancia en la migración del acaro parásito. Respiran a través de la cutícula. No tienen ojos, se guían por quimiotactismo. No son visibles a simple vista. Sus medidas son: Sexo / Medidas
Largo
Ancho
Hembra macho
300 - 400µ 200 - 250µ
250µ 150µ
Esta subespecie es parásito exclusivo del hombre y ataca la piel. La hembra fecundada labra un túnel en la epidermis, por varios días y siempre hacia adelante por las cerdas que presentan, las que le impiden retroceder. No invade la dermis; se sitúa formando una vesícula y se alimenta de detritus celulares y linfa. El macho vive usando los túneles que labra la hembra, esperándola para fecundarlas y luego muere. Consecuentemente el parasitismo es dado solo por la hembra.
Ciclo biológico La hembra fecundada deposita los huevos en el túnel y al cabo de 2 a 3 días emergen las larvas, las que contienen tan solo 3 pares de patas. Finalmente llega a ser adulto sexualmente maduro, que es el estado que labra la superficie de la piel causando las típicas galerías y el intenso purito. Importancia médica: La hembra fecundada infectante, puede vivir fuera del hospedero por algunos días, por ello, la infestación no solo se produce por contacto directo, sino por que la hembra persiste en ropa de uso común. La escabiosis es una ectoparasitosis familiar o de grupo humano. Por tal razón, el tratamiento se debe hacer, no sólo a una persona sino a todo el grupo humano en contacto. Las alteraciones que producen son las lesiones básicas por los túneles labrados. Se sitúa en la piel donde se encuentra mas delgada, como lo es del cuello para abajo, prefiriendo las muñecas, los pliegues interdigitales de las manos, las axilas, las mamas en las mujeres, particularmente las areolas del pezón, el abdomen y los pliegues inguinales. La hembra después de la digestión excreta catabolitos que producen una reacción alérgica, lo que causa escozor. El purito es la manifestación mas importante, lo que lleva al rascado y este a la vez a una infección (piodermitis) que enmascara las verdaderas lesiones. El diagnóstico se realiza mediante la búsqueda de parásitos en lesiones. 54
DEMODICIDOSIS Es un ectoparasitismo producido por ácaros que viven en los folículos pilosos y en la glándula sebáceas de los mamíferos. El parásito: Demodex folliculorum Material a observar: Láminas de microscopía con ejemplares adultos
Morfología: Tiene un aspecto alargado, vermiforme, que responde a las características descritas de modo general para los ácaros, con cuatro pares de patas cortas y un idiosoma largo. Tiene una longitud de 100 a 400 mµ, con un cuerpo segmentado.
Ciclo biológico Es más o menos similar al descrito a los otros ácaros. Importancia médica Es un ácaro ectoparásito de la piel, de cuerpo alargado que ataca los folículos pilosos de la cara, pestañas, cejas, barba o glándulas sebáceas anexas. Principalmente se ubican en la cara alrededor de la nariz y de los ojos; sin embargo excepcionalmente un aumento exagerado en número puede provocar cuadros inflamatorios más severos y crónicos denominados específicamente blefaritis cuando se localizan en las glándulas sebáceas de los folículos pilosos de las pestañas. Esta especie de acaro también puede agravar los cuadros de acné GARRAPATAS Al igual que los ácaros, pertenecen a la Clase Acari (o rango de orden para otros autores), presentan una morfología general similar a la descrita anteriormente. Es decir, el cuerpo esta conformado por un gnathosoma o capítulo que comprende dos pares de apéndices, internamente los quelíceros trisegmentados al que se le agrega ventralmente una estructura conocida como hypostoma, el que presenta una serie de placas triangulares, puntiagudas y orientadas hacia atrás; lo que facilita la introducción de estas estructuras al interior de la piel del hospedero y 55
mantenerse de esta forma por largo tiempo. Lateralmente a los quelíceros se hallan los pedipalpos. Posteriormente le sigue la mayor parte del cuerpo, el idiosoma, el que además esta subdividido tomando sus partes denominaciones específicas. En la parte anterior contiene los cuatro pares de patas, cada una de ellas conformada por siete segmentos.
Ciclo biológico Cada especie presenta particularidades en su ciclo biológico, como son por ejemplo el número de huevos depositados, el lugar de la ovoposición y la duración de cada estadío juvenil así como la longevidad que presentan los adultos, sin embargo; este se puede resumir de la siguiente manera: La hembra repleta de sangre y posterior a la cópula deposita en el suelo una cantidad de huevos que según la especie varia de 100 a 18,000 huevos. Posterior a la incubación emergen las larvas hexápodas, transformándose más adelante, previas mudas, en ninfas; las que se caracterizan por presentar 8 pares de patas y que finalmente son las que alcanzan el estado adulto. El ciclo biológico de ésta manera puede tener una duración que varía desde 6 semanas a 3 años según las especies, así como también teniendo en cuenta otros factores ambientales. Finalmente se deja establecido que existen especies de garrapatas que completan su ciclo biológico en uno, dos o tres hospederos. Importancia médica Prácticamente todos los vertebrados superiores están sujetos al ataque de las garrapatas siendo los mamíferos los hospederos principales, debido a su homeotermia. El alimento de las garrapatas consiste en sangre y linfa de sus hospederos. Todos los estadios evolutivos activos del parásito, es decir, larvas, ninfas, y adultos son hematófagos. Este hecho, unido a otras características biológicas, confiere a las garrapatas singulares ventajas para constituirse en vectores de diversas enfermedades infecciosas y parasitarias de los animales y el hombre. La mayoría de las especies poseen poca especificidad en cuanto a hospederos. Sólo muy pocas especies dependen de un único hospedero, como es el caso de Boophilus annulatus y B. microplus que parasitan al ganado bovino, desarrollando sobre el animal todo su ciclo evolutivo prolongado y una gran capacidad de ayuno, así como un alto potencial biótico. Todo lo anteriormente citado, evidencia la gran importancia medica que las garrapatas representan, tanto por su actividad parasitaria como por ser eficientes vectores de agentes productores de enfermedades infecciosas y parasitarias.
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Las garrapatas (todas pertenecen al grupo de los Metastigmata) comprende a dos grandes familias. Los Argasidae, conocidas como “garrapatas blandas” y los Ixodidae, conocidas como “garrapatas duras” Material a observar Ejemplares dispuestos en placas de petri de 60 x 15 mm preservadas en alcohol al 70% y bajo un microscopio estereoscópico. Familia Argasidae “garrapatas blandas” Se les puede reconocer porque el gnathosoma está dispuesto en la parte ventral y central del idiosoma, por lo que no puede verse desde un aspecto dorsal. Se puede citar al género Argas y a la especie Ornithodorus amblus . Familia Ixodidae ¨ garrapata dura¨ Se les puede reconocer porque el gnathosoma está dispuesto en la parte anterior y central del idiosoma, por lo que puede verse desde un aspecto dorsal. Comprenden las siguientes géneros de mayor importancia: Amblyomma, Hyalomma, Dermacentor , Boophilus, Ixodes, Rhipicephalus y Haemaphysalis
Practica Nº 6 CLASE INSECTA Estos artrópodos presentan su cuerpo dividido en tres regiones; cabeza, tórax y abdomen, muchos de ellos presentando dos pares de alas para el vuelo; se les distingue fundamentalmente porque presentan un tórax conformado por tres segmentos y cada uno de ellos porta un parte patas, teniendo consecuentemente todos los insectos sin excepción, tres pares de patas. Los hábitos alimenticios son muy variados, existiendo naturalmente los de importancia médica, como parásitos hematófagos y un buen número comportándose como vectores de agentes etiológicos de enfermedades infecciosas y parasitarias. ORDEN SIPHONAPTERA PULGAS Y PIQUES Son insectos ectoparásitos usualmente temporales y principalmente de mamíferos, Presentan una longitud promedio de 0,5 mm y con el cuerpo lateralmente comprimido. Los adultos son exclusivamente hematófagos. La cabeza puede tener ctenidea, estructura conformada por espinas de aspecto triangular y ordenadamente dispuestas, que les permiten adherirse al pelaje o plumas de sus hospederos. El abdomen es grande con relación al tamaño del insecto y contiene los órganos internos. En caso de la hembra es muy fácil de reconocer la espermateca, la que usualmente es esclerotizada adoptando una forma de C con una serie de variantes características para cada especie.
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PULICOSIS Es el resultado de las lesiones provocadas por las picaduras de las pulgas, las que se caracterizan por pápulas eritematosas con un punto central, denominado punto petequial. Produce purito y en ocasiones cuadros alérgicos que puede obligar al uso de antihistamínicos. Entre las especies mas comunes se encuentran la pulga del hombre, la pulga del perro y la pulga del gato. Pulex irritans, Ctenocephalidaes felis y C. Canis
Materiales a observar Láminas de microscopía Morfología: Además de las características referidas anteriormente para las pulgas, es preciso indicar que Pulex irritans no presentan ctenidia ni en la cabeza ni en tórax (pronotum), en cambio Ctenocephalidaes felis y C. canis si presentan ctenidia tanto en la cabeza como en el tórax, presentando mas bien la primera espina de la ctenidia de C. canis mas pequeña que las restantes. Además la forma de la cabeza es mas convexa en esta especie que en el caso de Ctenocephalidaes felis. También se debe tener en cuenta la forma de la espermateca, lo que debe compararse con esquemas previos elaborados por especialistas.
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Ciclo biológico Presentan metamorfosis completa u holometabola, presentando consecuentemente las fases de huevo, larva, pupa y adulto. Los huevos son relativamente grandes de alrededor de 0.5 mm de diámetro, blanquecinos y depositados en grupos, hasta completar un numero de 200 a 400 en la superficie de su hospedero y de allí caen al suelo. Incuban aproximadamente entre una a tres semanas, emergiendo luego la larva cuya forma del cuerpo es cilíndrica, vermiforme, apoda (sin patas), con pelos largos y con piezas bucales masticadoras que les sirven para alimentarse de la materia orgánica que se halla en el suelo. En este estado no se comportan como parásitos. Requiere de 9 a 15 días para completar su desarrollo, el que involucra tres mudas, para convertirse luego en pupa que se cubre paulatinamente de polvo y pelusas formando un saco pupal, que en un plazo variable de días o meses, dependiendo de los factores ambientales, da paso al estado adulto. Importancia médica Los adultos son parásitos obligatorios temporales. Son exclusivamente hematófagos. Pueden sobrevivir a períodos largos de inanición. Se hospedan indistintamente. Por lo general esperan al hospedero. A esta lista se debe agregar a Xenopsylla cheopis, la pulga de la rata y a Tunga penetrans, conocido vulgarmente como pique o nigua.
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Las pulgas se comportan como parásitas, afectando directamente al hospedero, así como también como vectoras de una serie de agentes etiológicos de enfermedades, como sucede con la peste bubónica, así como ser también hospederos intermediarios de helmintos. .
ORDEN ANOPLURA Piojos Son ectoparásitos exclusivos de mamíferos, con aparato bucal picador chupador, sin alas (ápteros) y muy específicos frente a sus hospederos. Las patas terminan en una sola uña larga, curva y puntiaguda que les sirve para adherirse a los pelos del hospedero. PEDICULOSIS Comprende al piojo del hombre Pediculus humanus, el que se presenta en dos variedades, Pediculus humanus var. capitis y Pediculus humanus var. corporis (conocido por algunos autores como vestimenta ) y que trasmite en nuestro país a Rickettsia prowasecki bacteria que ocasiona el tifo epidémico. Cada una de estas variedades se localiza en la cabeza y en el cuerpo, 60
respectivamente. Esta última cuando reposa se halla en la vestimenta. Puede comprenderse dentro de la pediculosis al piojo de la zona pública o ladilla Phthirus pubis, sin embargo, su infestación es tratada por algunos autores como PTIRIASIS. Los parásitos: Pediculus humanus y Phthirus pubis .
Material a observar Láminas de microscopia de los piojos antes citados, Morfología Las especies anteriormente citadas presentan el cuerpo dorsoventralmente comprimido, con piezas bucales picadoras chupadoras y sin alas. Las patas de P. humanus son todas del mismo tamaño, en cambio es diferente en P. pubis presenta el primer par de patas más delgadas que los dos últimos pares de patas. Además la primera especie citada presenta un abdomen conformado por nueve segmentos, en cambio P. pubis presenta sólo cinco segmentos abdominales y cada uno de ellos presenta protuberancias laterales. Ciclo Biológico Los piojos tienen hábitos estrictamente parasitarios, es decir son permanentes, además de ser específicos. Realizan todo su ciclo evolutivo sobre su hospedero. La hembra deposita un promedio de 30 huevos entre 5 a 10 días. Los huevos se denominan liendres. Posteriormente emergen los juveniles (denominados por algunos autores ninfas) los que pasan por tres mudas para alcanzar el estado adulto, requiriendo para ello alrededor de 30 días. El piojo del cuerpo deposita sus huevos sobre las costuras de las vestimentas, las que abandona para obtener sangre de su hospedero. Las liendres presentes en las ropas son viables por un mes. Importancia Médica se disemina por contacto físico o cabellos sueltos. Puede darse infestaciones leves, bajo las mejores condiciones sanitarias. La variedad corporis se ubica en la vestimenta, preferentemente en aquella ropa que está en contacto con el cuerpo. Hace contacto con el cuerpo durante la alimentación. Los huevecillos son depositados en la costura de la ropa. La variedad capitis deposita sus huevos pegándolos al cabello. Pediculus humanus
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es conocido como “ladilla”, “piojo púbico”, “crab louse” (por su apariencia de cangrejo). Es de menor tamaño que Pediculus humanus (1.5 a 2mm), casi tan ancho como largo y de color blanco grisáceo. Las patas anteriores son menos robustas. Infesta principalmente, pero también puede ser la zona púbica, axilas y otras zonas del cuerpo humano.
Phthirus pubis
Son extraordinariamente estacionarios en sus hábitos, permaneciendo con frecuencia adheridos durante días en un solo punto, con las piezas bucales insertadas en la piel. La defecación continúa durante ese tiempo, originando la acumulación de excremento alrededor del insecto. El prurito causado es muy intenso. La infestación se denomina Ptiriasis y es característica del humano adulto. Se presenta en subculturas donde hay relajamiento sexual. Se disemina por contacto directo.
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ORDEN HEMIPTERA CHINCHES Son insectos cuyas piezas bucales son picadoras chupadoras y con diversos hábitos alimenticios, entre los que de acuerdo a nuestro interés se hallan especies hematófagas. CHINCHES DE LA CAMA Son hemípteros hematófagos pertenecientes a la Familia Cimicidae, siendo de trascendencia para el hombre dos especies del Género Cimex , C. lectularius y Cimex hemipterus. El parasitismo que ocasionan estos insectos se denomina cimicosis.
El parásito: Cimex lectularius Material a observar Láminas de microscopía con ejemplares de Cimex lectularius . Morfología Son de aspecto ovoideo, aplanados dorsoventralmente, de color pardo rojizo y miden alrededor de 8 mm de longitud. La cabeza y el tórax son pequeños comparados con el abdomen voluminoso. Los adultos son ápteros. Ciclo Biológico Presentan metamorfosis gradual o paurometábola, Al cabo de unos 10 días emergen las ninfas y cada estado ninfal para seguir su evolución debe alimentarse de sangre por lo menos una vez.
Presentan metamorfosis gradual o paurometàbola, con los siguientes estados de desarrollo: huevo, ninfa (con 5 estadìos) y adulto. El ciclo dura entre 37 y 128 días. La hembra coloca entre 63
200 a 500 huevos, en posturas de 10 – 50 por vez. Son de color blanco amarillento, de alrededor 1mm de longitud. Al cabo de unos 10 días emergen las ninfas y cada estado ninfal para seguir su evolución debe alimentarse de sangre por lo menos una vez. Importancia Médica Esta especie es domiciliaria. Sus representantes emiten un olor desagradable y son hematófagos nocturnos, cosmopolitas y gregarios. Durante el día permanecen escondidos en las grietas de los muros, paredes y en los muebles, particularmente en las camas. En sus escondites depositan los huevos y se acumula el excremento de color negro. Todos los estadios de desarrollo presentan inanición prolongada. Sus picaduras producen lesiones papuloeritematosas marcadas y muy pruriginosas por reacciones alérgicas a la saliva. Puede haber sueño interrumpido o insomnio como resultado de las molestias.
Practica Nº 7 Malaria o Paludismo Definición: Malaria o Paludismo es una antropozoonosis parasitaria causada por protozoarios, esporozoarios del Género Plasmodium y transmitida por mosquitos del Género Anopheles. Los parásitos: Plasmodium vivax Plasmodium malariae Plasmodium falciparum Plasmodium ovale
Material de observación 1. Láminas portaobjetos con gotas gruesas y frotices de sangre periférica con formas sanguíneas de Plasmodium vivax, Plasmodium malariae y Plasmodium falciparum. Observación con
lente de inmersión 2. Preparación histológica de tejido hepático con esquizontes tisulares de Plasmodium. Observación a mayor aumento. 3. Preparaciones macroscópicas de adultos de Anopheles. Observación estereoscópica o con lente panorámico. 4. Preparaciones microscópicas de formas evolutivas de Anopheles: larvas y pupas. Observación con estereoscopio o lente panorámico
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Morfología: tiene un ciclo de vida asexual que se desarrolla en el hombre (hospedero intermediario) y un ciclo de vida sexual, que se desarrolla en el mosquito Anopheles (hospedero definitivo).
Plasmodium
El ciclo de vida asexual comprende las siguientes formas evolutivas: a) esporozoito: célula alargada de 10 micrones que es inoculada por el mosquito, en el momento de la picadura. b) Reproducción exoeritrocitaria: esquizonte tisular: ubicado en el citoplasma de los hepatocitos, de tamaño variable de aproximadamente 100 micrones que contiene merozoitos que pueden invadir otros hepatocitos. OBSERVE las preparaciones histológicas de tejido hepático, identifique a los esquizontes. DIBUJE. c) Reproducción eritrocitaria: Diferencias morfológicas de los Plasmodium más importantes en Perú Eritrocitos y Plasmodium vivax Plasmodium Plasmodium estadío evolutivo falciparum malariae Glóbulo rojo Hipertrofiado. Tamaño normal. Tamaño normal. Granulaciones de Frecuente infección Raras granulaciones Schüffner. múltiple. de Ziemann. Raras granulaciones de Maurer. Trofozoito joven Grande, anular. Pequeño, anular, Tendencia a forma periférico o con en banda doble cromatina. Trofozoito adulto
Grande, ameboide, No se le observa ocupa casi todo el glóbulo rojo. Esquizonte joven La cromatina No se observa extendida con signos de división, pigmento malárico Esquizonte maduro Gametocitos
Forma en banda, ocupa 2/3 partes del glóbulo rojo. Forma ovalada, cromatina extendida con signos de división y pigmento malárico Hasta 16 No se observa Hasta 12 merozoitos merozoitos. y pigmento Pigmento malárico. malárico, dispuestos como roseta. Grande, Forma de semiluna. Redondeado. redondeado. Macrogametocito: Macrogametocito: Macrogametocito: Cromatina densa, cromatina densa. cromatina densa. central. Microgametocito: Microgametocito: Microgametocito: cromatina laxa. cromatina laxa Cromatina laxa.
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OBSERVE las formas eritrocitarias en las láminas de gota gruesa y frotis de sangre con las formas eritrocitarias de los Plasmodium e identifíquelas de acuerdo al cuadro anterior. DIBUJE. Acción patógena: El acceso palúdico: escalofrío, fiebre y sudoración es la expresión del shock anafiláctico ocasionado por la ruptura del eritrocito y la liberación de los merozoitos al final del ciclo esquizogónico de los parásitos. La anemia que se observa en las formas de duración prolongada es debida a la destrucción de los glóbulos rojos parasitados. La hepatoesplenomegalia es producida por la hipertrofia del sistema retículo endotelial que hará la destrucción de os glóbulos rojos parasitados y en esos órganos se depositará, principalmente, el pigmento malárico. En el paludismo por Plasmodium falciparum las lesiones viscerales: cerebro, hígado, riñón etc. se deben a la adhesión de los glóbulos rojos parasitados al endotelio de los vasos capilares de esos órganos, alterando su funcionalidad, dando sintomatología grave y ocasionando, por insufiencia de los órganos comprometidos, la muerte, por ello al paludismo producido por P. falciparum se le conoce como paludismo maligno, siendo el benigno, el producido por P. vivax , que rara vez ocasiona complicaciones graves. Ciclo biológico: 67
El hombre es el único hospedero intermediario de los Plasmodium que lo parasitan. OBSERVE el esquema adjunto e identifique: el ciclo sexual, el asexual y las formas evolutivas en cada uno de ellos. Precise a los hospederos definitivo e intermediario, el ciclo esquizogónico, el esporogónico, en quienes se realiza, las fases eritrocítica y preeritrocítica. Establezca las diferencias entre las tres especies más importantes de Plasmodium, en el ciclo evolutivo y las formas sanguíneas. La forma infectante para el hombre es el esporozoito El mecanismo de transmisión es por la picadura del mosquito Anopheles. La puerta de entrada es la piel. Hay transmisión no vectorial de la Malaria a través de la transfusión sanguínea, a través de la placenta y por compartir agujas hipodérmicas (drogadictos). Diagnóstico: Se realiza por la búsqueda de las formas sanguíneas en frotis o gota gruesa de sangre, obtenida, de preferencia, durante el acceso palúdico. La determinación de la especie involucrada, principalmente P. falciparum , es importante para el establecimiento de la terapia apropiada. La sensibilidad del método de diagnóstico mejora cuando se " tiñen" los parásitos con naranja de acridina que hace fluorecer a la cromatina de los parásitos, permitiendo su visualización al microscopio de fluorescencia, o utilizando el método del QBC que recoge la sangre en un tubo capilar, tipo hematocrito y que centrifugado permite visualizar a los parásitos fluorescentes, en la zona límite del paquete de glóbulos rojos y blancos y el suero o plasma. La introducción de tiras reactivas de papel de nitrocelulosa con anticuerpos monoclonales a antígenos del parásito ha permitido detectar las infecciones por P. falciparum (Parasight) y además por P. vivax (Optimal) en forma sencilla y rápida, mejorando la oportunidad del tratamiento. Las reacciones serológicas como ELISA. HAI detectan anticuerpos específicos de cada especie y son útiles para estudios epidemiológicos. La aplicación del PCR, es también de utilidad en casos especiales de precisión del diagnóstico. Siendo el frotis y gota gruesa importante en el diagnóstico de la Malaria, durante el desarrollo de la práctica se procederá a realizar, entre los estudiantes la preparación y coloración de muestras de sangre obtenidas entre los mismos estudiantes, para lo cual, siguiendo el esquema adjunto, proceda de la siguiente manera: Limpie con algodón embebido con alcohol, el pulpejo del dedo medio, luego que se haya evaporado el alcohol, puncione con la lanceta el pulpejo del dedo y presione el dedo hasta que fluya una gota de sangre, deposítela en un extremo de una lámina portaobjeto y otra en el centro; con la primera haga una gota gruesa con la ayuda de la punta de otra lámina portaobjeto y con la segunda gota de sangre haga un frotis usando el borde de la lámina portaobjeto auxiliar. Coloree su preparación con colorante Giemsa. La gota gruesa debe tratarse con agua destilada para lisar los glóbulos rojos y luego fijar toda la lámina con alcohol metílico; finalmente, agregar el colorante diluido por 20 minutos, al cabo de los cuales, lavar a chorro con agua de caño. Secar y observar la lámina con inmersión. El mosquito: Especies del Género Anopheles son los vectores biológicos del Plasmodium en la transmisión natural de la infección. Las principales especies de importancia en nuestro país son: Anopheles pseudopuntipennis Anopheles benarrochi Anopheles albimanus Anopholes calderoni Anopheles darlingi
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Morfología y ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. Los Anopheles son mosquitos dípteros que pertenecen a la Clase Insecta. Ellos tienen metamorfosis completa, por lo que se le reconoce los estadíos evolutivos de huevo, larva, pupa y adulto. El huevo, la larva y la pupa se desarrollan en aguas limpias y de escasa corriente. a) El huevo es colocado aislado, mide aproximadamente 0.7 mm. de longitud y está provisto de flotadores en ambos lados.
b) La larva es de forma vermiforme de 8 a 10 mm de longitud y cubierto de vellosidades. Se
distingue la cabeza en que se reconoce un par de ojos, tórax y abdomen que poseen los espiráculos respiratorios, ya que carecen de sifón respiratorio, que si lo poseen los otros mosquitos: Aedes y Culex . OBSERVE las láminas microscópicas con larvas de Anopheles. DIBUJE.
c) La pupa tiene la forma de una coma o vírgula, la parte globosa corresponde a la cabeza y
tórax. y presentan sifones o cornetes respiratorios en la parte anterior. OBSERVE estas formas y DIBUJE.
d) El adulto o imago presenta dimorfismo sexual. EXAMINE la cabeza de especímenes
machos y hembras y establezca la diferencia. El macho presenta palpos plumosos densos. OBSERVE la terminación posterior de machos y hembras. Preste atención a la presencia de alas "manchadas". DIBUJE.
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Importancia médica: Además de ser el hospedero definitivo de los Plasmodium del hombre en el cual se desarrolla el ciclo sexual o esporogónico que ocurre en el estómago y pared del mosquito, también especies de Anopheles pueden ser hospederos intermediarios y vectores biológicos de algunas filarias como Wuchereria bancrofti.
Método del frotis y la gota gruesa 1. Limpiar el dedo con algodón impregnado con alcohol 2. Pinchar el pulpejo del dedo con una lanceta estéril y descartable 3. Tomar dos gotas de sangre en una lámina portaobjeto. Una en medio de la lámina y la otra hacia un extremo 4. Con la gota del centro de la lámina hacer un extendido con otra lámina portaobjeto inclinándola 45º. 5. Con la gota en el extremo haga una gota gruesa usando la punta de otra lámina portaobjeto con movimientos circulares. 6. Identifique con lápiz la muestra. 7. Tiña la muestra con colorante Giemsa
Enfermedad de Chagas o Trypanosomiasis americana Definición: Zoonosis parasitaria causada por Trypanosoma cruzi , flagelado transmitido por insectos hemípteros, heterópteros, hematófagos pertenecientes a tres Géneros, principalmente: Triatoma, Rhodnius y Panstrongylus. El parásito: Trypanosoma cruzi Trypanosoma cruzi es un flagelado de la Clase Zoomastigophora, que hay que distinguirlo de Trypanosoma rangeli, flagelado no patógeno que tiene una distribución geográfica que suele superponerse a la de Trypanosoma cruzi.
Material de observación 1. Frotis de sangre con trypomastigotes. Observación con lente de inmersión 2. Preparación en fresco de cultivo con epimastigotes. Observación a mayor aumento 70
3. Preparación microscópica de cultivo con epimastigotes teñidos con Giemsa. Observación con lente de inmersión. 4. Preparación histológica de corazón con formas amastigotes, teñidos con Hematoxilinaeosina. Observación con lente de mayor aumento y luego con inmersión. 5. Preparación, en fresco, de heces de triatominos infectados con epimastigotes. Observación a mayor aumento. 6. Reduvideos vivos en sus estadíos evolutivos: huevo, ninfa y adulto. Observación con estereoscopio. Caja de Xenodiagnóstico. Observación macroscópica Morfología: Morfología: EL Trypanosoma cruzi presenta tres formas evolutivas: Guíese por los dibujos adjuntos. a) Trypomastigote. EXAMINE la lámina con el frotis de sangre y observe una célula de forma semilunar de aproximadamente 10 a 15 micrones de longitud por 4 de diámetro trasversal, núcleo central, quinetoplasto en la extremidad posterior, muy prominente, del que emerge un flagelo que bordea una membrana ondulante y se prolonga hasta la extremidad anterior, de la que emerge sola. DIBUJE..
b) Epimastigote. EXAMINE la preparación en fresco de cultivo del parásito y de heces de
triatominos infectados; observe formas alargadas de 20 a 30 micrones de longitud de movimiento ondulado y rápido por la presencia de flagelo. OBSERVE la preparación microscópica de cultivo del parásito teñida con Giemsa. Preste atención a la forma el cuerpo alargado, presencia de núcleo y quinetoplasto prominente cercano al núcleo del que emerge un flagelo que bordea una membrana ondulante y se prolonga por la extremidad anterior del parásito, emergiendo de él. DIBUJE
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c)
Amastigote: EXAMINE la preparación histológica de corazón y ubique en el interior de las fibras musculares "nidos" de amastigotes, células redondeadas de 2 a 4 micrones de tamaño en los que se puede distinguir el núcleo y el quinetoplasto. Preste atención a la necrosis de las fibras musculares y a la infiltración de células polimorfonucleares y linfocitos intra e interfibrilares. DIBUJE.
Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto.
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La forma infectante para el hombre es el trypomastigote metacíclico El mecanismo de transmisión es la contaminación de la piel erosionada, mucosa o conjuntiva ocular con heces de triatomino conteniendo los trypomastigotes, las mismas que son depositadas por el insecto en el momento de la picadura. La puerta de entrada es la piel. El hombre puede adquirir la infección por transmisión no vectorial: transfusión sanguínea, transmisión placentaria, transplante de órganos. El parásito se reproduce por división binaria en los estadios de amastigote y epimastigote. El trypomastigote no se reproduce. Los principales reservorios de los parásitos son mamíferos, principalmente pequeños. En nuestro país se han demostrado al cobayo y mamíferos sinantrópicos como las ratas y ratones que son los principales reservorios.
Acción patógena: El parásito se ubica intracelularmente bajo la forma de amastigote. El parásito puede parasitar cualquier célula; sin embargo, son las células de los tejidos muscular, nervioso y linfático, los más frecuentemente parasitados. Al inicio de la infección, la reproducción abundante del amastigote en el interior de la célula determina la necrosis de la misma y el reemplazo por tejido conjuntivo fibroso que alterar la estructura y función del órgano parasitado (agrandamiento del corazón e insuficiencia cardiaca; destrucción de los ganglios de los plexos nerviosos intramurales de esófago e intestino determinando dilatación de dichos órganos: megaesófago, megacolon, etc.). En la enfermedad de Chagas o Trypanosomiasis americana se reconocen dos periodos: el agudo correspondiente a la necrosis celular y reacción inflamatoria de los tejidos parasitados y el crónico en que la fibrosis se hace más evidente, a lo que se agrega un estado de autoinmunidad pues en la lesión tisular es muy difícil mostrar la presencia del parásito y al parecer la destrucción tisular estimulada por el parásito determina la liberación de fracciones tisulares o complejos proteicos que actúan como autoantígenos favoreciendo la continuidad del daño celular
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Diagnóstico: El diagnóstico parasitológico directo, o sea la demostración del parásito puede hacerse por examen de sangre, en fresco, en frotis o gota gruesa, sólo en la etapa aguda o en el niño que nace con infección congénita, en esas situaciones son útiles el hemocultivo y el xenodiagnóstico que utiliza triatomas criados en el laboratorio y libres de infección para hacer picar al sospechoso de la infección y luego examinar las heces del insecto, lo cual demanda tiempo, hasta 4 meses de observación. Las pruebas serológicas como HAI (hemoaglutinación indirecta), IFI (inmunofluorescencia indirecta) y ELISA son útiles en la etapa crónica o subaguda. El PCR se emplea en casos especiales de precisión diagnóstica. Hay personas que son portadoras del parásito sin manifestaciones clínicas de la infección, las cuales deben ser reconocidas, principalmente mediante pruebas serológicas para evitar que donen sangre o preveer la transmisión congénita o donación de órganos; además, dichas personas deben ser periódicamente controladas clínicamente, pues, pueden tratarse de casos crónicos que puede aparecer la sintomatología con el correr del tiempo. El insecto vector: Los vectores biológicos de Trypanosoma cruzi son reduvideos, hemípteros, pertenecientes a la Clase Insecta, siendo los principales pertenecientes a tres géneros: Triatoma, Rhodnius y Panstrongylus.
En nuestro país se han identificado más de 15 especies de reduvideos relacionados a la transmisión del parásito. VER MAPA adjunto; de ellos, los más frecuentemente encontrados son: Triatoma infestans Triatoma carrioni Rhodnius ecuadoriensis Rhodnius pictipes Panstrongylus herreri Panstrongylus chinai
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Morfología y ciclo biológico: Los reduvideos tienen metamorfosis incompleta y sus estadios evolutivos son: huevo, cinco estadios ninfales y adulto. OBSERVE el esquema adjunto. a) huevo: OBSERVE huevos de Triatoma infestans. Preste atención a su tamaño de 2 a 3 mm, color blanquecino que cambia ha rosado en su evolución. Al cabo de un mes, aproximadamente, dependiendo de las condiciones ambientales eclosiona una ninfa. DIBUJE. b) ninfas: OBSERVE los estadios ninfales de Triatoma infestans, cuyo tamaño va creciendo conforme pasan de un estadio evolutivo al siguiente, lo que se acompaña de la pérdida del exoesqueleto o exuvia o muda. Preste atención a la morfología de estos estadios evolutivos semejantes al del insecto adulto. Cabeza aguzada, ojos compuestos, un par de antenas y probosis cuya extremidad anterior está doblada ventralmente y que se extiende sólo para alimentarse. Tórax con rudimentos de alas, más evidentes en las ninfas de cuarto y quinto estadio. Abdomen segmentado. Los tres pares de patas se insertan en los tres segmentos del tórax: pronoto, mesonoto y metanoto. Las patas son articuladas. DIBUJE. Triatoma c) adultos: OBSERVE ejemplares adultos, machos y hembras de infestans. Preste atención al tamaño, aproximadamente de 3 cms. de longitud. Se distinguen claramente los tres segmentos corporales. La cabeza y probosis alargadas. Los ojos compuestos implantados en la mitad de la cabeza y delante emergen las antenas. OBSERVE el dibujo adjunto para diferenciar, por la implantación de las antenas los tres géneros de reduvideos ya mencionados. En el tórax, el pronoto algo prominente. Los dos pares de alas o hélitros están superpuestos. Las superiores son membranosas y las inferiores delgadas; pero ellas no les sirven para el vuelo sino para dejarse caer. El abdomen presenta líneas de los segmentos que lo constituyen. El macho presenta la porción terminal del abdomen en forma roma y segmentada en la hembra, correspondiendo ello al aparato ovopositor. El borde del 75
abdomen o conexivo, presenta franjas negras y amarillas, cuya figura y color varía según la especie. DIBUJE. Las formas ninfales y adultos de ambos sexos son hematófagos y luego de cada alimentación es posible el cambio de estadío evolutivo. El tiempo desde huevo a ninfa es variable, dependiendo de la disponibilidad desde alimento, de 6 meses a un año. La capacidad de ayuno es muy grande, se estima hasta de un año.
Importancia médica Hay especies domiciliares, peri domiciliares y silvestres; la capacidad vectorial de las diversas especies está en relación al mayor o menor contacto con los animales reservorios domésticos o silvestres. Triatoma infestans, conocido con el nombre de "chirimacha" es el más importante vector en el país, por ser domiciliario, siendo su distribución en los departamentos del suroeste del sur. Triatoma carrioni y Rhodnius ecuadoriensis , peri domiciliarios se les suele encontrar en el interior del domicilio en los departamentos del norte; y en la selva Panstrogylus herreri ha sido con frecuencia encontrado. La crianza de los reduvideos en laboratorio se hace alimentándolos sobre aves, ya que en ellas no se desarrolla el parásito, con lo cual se puede tener insectos libres de infección que se pueden usar en la preparación de los xenodiagnósticos. Métodos de diagnóstico de laboratorio de la Enfermedad de Chagas Método
Etapa aguda Etapa crónica
Congénita
Portador
Sangre fresca Frotis y gota gruesa Hemocultivo Pruebas serológicas Xenodiagnóstico
++ + +++ -++++
++++ ++ ++++ ++ ? ++++
------------++++ ++
----------++++ ++
-) no útil; +) poco útil, ++) útil, +++) muy útil, ++++) preferencia ++?) Sólo tiene valor el hallazgo de IgM específica, pues la IgG de la madre pasa la placenta. 76
Practica Nº 8 Leishmaniosis Definición: Zoonosis parasitaria causada por protozoos flagelados pertenecientes a especies del Género Leishmania que tiene por hábitat la piel y mucosas (leishmaniosis tegumentaria), así como las vísceras (leishmaniosis visceral) de mamíferos, incluyendo al hombre. Especies de mosquitos flebótomos de los Géneros Phlebotomus y Lutzomya son los vectores del parásito. Leishmaniosis tegumentaria es la única leishmaniosis demostrada en el país y los mosquitos que la transmite son especies del Género Lutzomya El parásito: Se reconocen, actualmente, y posiblemente con modificaciones futuras, dos Subgéneros de Leishmania: Leishmania y Vianna, cada con complejos que han sido caracterizados por métodos bioquímicos e inmunológicos. Al subgénero Leishmania pertenecen los complejos L. donovani, L. tropica, L. major, L. aethiopica y L. mexicana y al subgénero Vianna, los complejos L. braziliensis y L. guyanensis . y Leishmania (V) braziliensis peruviana , son las dos especies identificadas con mayor frecuencia en el, Perú; sin embargo, se ha señalado la identificación de Leishmania de los complejos L. (L) aethiopica y L. (V) guyanensis . OBSERVE el mapa de distribución de las dos formas clínicas más importantes de la leishmaniosis tegumentaria en el país: la cutánea o UTA y la cutáneo-mucosa o ESPUNDIA.
Leishmania (V) braziliensis, braziliensis
. Material de observación 1. Preparación microscópica de frotis de lesión cutánea de Leishmaniosis. Observación con lente de inmersión. 2. Preparación histológica de úlcera cutánea. Observación a mayor aumento y luego con lente de inmersión. 3. Preparación microscópica en fresco de cultivo de Leishmania. Observación a mayor aumento. 4. Preparación de cultivo de Leishmania, fijado y coloreado con Giemsa. Observación con lente de inmersión. 5. Preparaciones de adultos de Lutzomya.
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Morfología: Las especies de Leishmania tienen, a la microscopía de luz, características morfológicas similares, lo que hace difícil distinguirlas, y de allí la necesidad de los métodos bioquímicos e inmunológicos. Leishmania presenta dos formas evolutivas: amastigote y promastigote. a) Amastigote: es similar al amastigote descrito en las lesiones tisulares de Trypanosoma cruzi . OBSERVE el frotis de la lesión cutánea. Preste atención al tamaño pequeño: 2 a 4
micrones, la presencia de núcleo y quinetoplasto y su ubicación en el citoplasma del macrófago, en ocasiones están libres los parásitos por el trauma del frotis. DIBUJE.
b) Promastigote: OBSERVE la preparación del cultivo teñido con Giemsa. Preste atención al
tamaño del parásito: 10 a 15 micrones de longitud, reconozca el núcleo y el quinetoplasto que está situado por delante y del cual nace un flagelo que se extiende por la porción anterior y emerge por la misma extremidad. DIBUJE.
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Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. La forma infectante para el hombre y animales es el promastigote El mecanismo de transmisión es por la picadura de Lutzomya. La puerta de entrada es la piel. Los principales reservorios son los mamíferos pequeños, en especial los roedores silvestres. En nuestro país se ha encontrado la infección en perros y roedores. No se ha demostrado transmisión no vectorial. El amastigote y el promastigote se reproducen por división binaria, el amastigote en el interior de los macrófagos y el promastigote en el estómago del mosquito transmisor y en los medios de cultivo. Acción patógena: La UTA es una lesión cutánea ulcerativa que ocasionalmente se extiende a las mucosas. Es la forma andina o de los valles precordilleranos y algunos interandinos, de curación espontánea y que deja inmunidad perenne. La ESPUNDIA es la lesión cutáneo-mucosa, con lesión ulcerativa cutánea que concomitantemente o en meses o años de haberse cicatrizado aparece lesiones en la mucosa orofaringea donde destruye mucosa y cartílago, evolucionan rápidamente y si no hay tratamiento adecuado el pronóstico es malo. OBSERVE la preparación histológica de la lesión cutánea y aprecie la ubicación intracelular de los amastigotes, la reacción inflamatoria en el borde de la lesión. DIBUJE. Diagnóstico: El diagnóstico parasitológico directo, con la demostración del parásito se realiza, básicamente, por el frotis de los bordes de la lesión, previa eliminación de la contaminación bacteriana que suele estar presente y recogiendo la linfa por medio de una aguja de tuberculina, con el cual se puede inocular un anestésico local, lo cual puede permitir hacer una biopsia y con una parte de él, realizar un macerado e inoculación del mismo en medio de cultivo y otra parte, el estudio histológico. La combinación de estos tres métodos permite la probabilidad de la demostración del parásito en alrededor del 80%. 79
La intradermoreacción o Reacción de Montenegro, ayuda a determinar la situación de hipersensibilidad al parásito, demostrando, indirectamente la infección; de la misma manera las reacciones serológicas, principalmente, la IFI (inmunofluorescencia indirecta) tiene utilidad para orientar el diagnóstico. Recientemente se viene utilizando el PCR para amplificar el ácido nucleico del parásito, cuando el mismo es escaso en la biopsia de la lesión y luego con el "primer" o cebador realizar la hibridización respectiva y así mejorar la sensibilidad del diagnóstico específico del parásito. El mosquito vector: Especies del Género Lutzomya son los vectores de las diferentes especies de Leishmania. OBSERVE el mapa de la distribución de Lutzomya en el país. La demostración de su infección por Leishmania sólo ha sido posible en sólo algunas especies, ya sea por hallazgo directo del parásito o por uso del PCR. El mosquito recibe el nombre de "titira", "manta blanca", etc. Morfología y ciclo biológico: Las especies de Lutzomya son dípteros de la Clase Insecta, tienen metamorfosis completa. huevo: pequeño, colocado en el suelo, a los 10 a 12 días, dependiendo de las condiciones ambientales, eclosiona la larva. b) larva: pequeña, blanquecina, voraz, se alimenta de materia orgánica del suelo y pasando por 4 estadios evolutivos se convierten en pupa. c) pupa: inmóvil por alrededor de 14 días y del eclosiona el adulto. d) adulto: OBSERVE ejemplares adultos, machos y hembras. Preste atención al tamaño de 2 a 5 mm de longitud. Se le distingue una cabeza pequeña en que se observa los ojos compuestos y la probosis corta. El tórax tiene el mesonoto prominente, dándole una forma encorvada al insecto. Tiene tres pares de patas largas y un par de alas con claras nervaduras cuya distribución permite servir de reparo para la clasificación del insecto. El abdomen es delgado. La hembra termina en forma roma y el macho muestra los clipsers o elementos copulatrices. DIBUJE. a)
Importancia médica: Lutzomyia es baciliformis.
reconocido, en nuestro país como vector biológico de Leishmania y Bartonella
El nicho ecológico de los mosquitos son cuevas, hueco de árboles, pircas y rara vez el interior de la vivienda. A diferencia de otros dípteros, no necesita acumulo de agua para su desarrollo. La hembra es la única hematófaga. El mosquito se infecta al picar al animal u hombre y al ingerir la sangre puede arrastrar macrófagos con amastigotes, los que se transformarán en promastigotes en el estómago y luego migran a la probosis del flebótomo para que en su próxima alimentación los inocule durante la picadura. L. peruensis y L. ayacuchensis han sido encontradas infectadas naturalmente con Leishmania.
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Filariosis Definición: Conjunto de parasitismos ocasionados por especies diversas de nemátodos que se caracterizan porque los adultos son de diámetro muy delgado como "filamentos", que se localizan en tejidos diversos del hombre y de algunos animales, según la especie, y son transmitidos por insectos de diversos géneros. Las especies más conocidas como causantes de las filariosis son: Wuchereria bancrofti y Brugia malayi productoras de la filariosis linfática, y transmitidas por especies de Anopheles, Aedes y Culex . Onchocerca volvulus transmitida por especies de Simulium y Loa loa, transmitida por especies de Chrysops , y son causantes de la filariosis subcutánea; y Mansonella ozzardi y Dipetalonema o Mansonella perstans, transmitidas por especies de Simulium y Culicoides y se les consideran no patógenas. Mansonella ozzardi es la única filaria descrita en nuestro país. Material de observación 1. Preparación microscópica de gota gruesa y frotis de sangre con Mansonella ozzardi.
Observación con lente de inmersión. 2. Preparación de Adultos de Simulium y Culicoides. Observación en microscopio estereoscópico. Morfología: Las filarias, como todo nemátodo, presentan las formas evolutivas de adultos y larvas. Sólo describimos a Mansonella ozzardi. a) adulto: hay dimorfismo sexual, el macho mide de 3 a 4 cm. y la hembra 7cms., su hábitat
son la cavidad abdominal y toráxica, en el tejido retromesentérico. La hembra fecundada coloca embriones que se denominan microfilarias que pasan al torrente sanguíneo. b) microfilarias: OBERVE las preparaciones con frotis o gota gruesa de sangre que contiene las microfilarias. Ellas tienen forma alargada, semejan a larvas. La porción anterior termina en forma roma y la posterior en punta. Miden alrededor de 200 micrones, por lo cual se les identifica fácilmente a menor aumento. Lo característico de estas microfilarias, que la diferencian de otras, es que no presentan vaina y los núcleos del embrión están dispuesto a lo largo del cuerpo excepto en la terminación posterior. Las microfilarias deben ser ingeridas por el vector biológico Simulium o Culicoides, donde se ubicarán en la musculatura del mosquito y allí se desarrollarán las larvas rabditoides y filariformes que migran a la probosis del vector para penetrar en la piel al picar el mosquito al hombre susceptible. DIBUJE.
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Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. La forma infectante para el hombre es la larva filariforme. El mecanismo de transmisión es a través de la picadura del vector. La puerta de entrada es la piel. Se han encontrado infección en primates, por lo que puede considerarse como una zoonosis parasitaria. Acción patógena: La mansonellosis se considera que no causa patología; sin embargo se le han señalado como causantes de problemas alérgicos, eosinofilia etc., difícil de corroborar. En nuestro país fue señalado por primera vez en Iquitos en un anciano y luego se ha comprobado su amplia distribución en nuestra selva sin correlación con alguna patología especial. Diagnóstico: Se realiza por el hallazgo de las microfilarias en la sangre periférica. No es frecuente observarlas en una muestra de frotis o gota gruesa, siendo necesario realizar métodos de concentración; uno de ellos es el Método de Knott, que básicamente consiste en tratar una muestra de sangre con formol al 2% en la proporción de 1 a 10 y luego de hemolizada la muestra y fijadas las microfilarias, centrifugar la muestra y examinar el sedimento. El mosquito vector: Simulium Culicoides
Examinar ejemplares adultos de Culicoides. Preste atención a su tamaño, morfología y color de su cuerpo
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Importancia médica: y Culicoides se les conocen con el nombre de "jenjenes" tienen por hábitat los sitios de cursos de agua donde se desarrollan los estadios evolutivos. Las hembras son hematófagas y las que transmiten la infección.
Simulium
Practica Nº 9 Hidatidosis Definición: Zoonosis parasitaria causada por la larva (hidátide) de Echinococus granulosus , que se localiza en hígado, pulmón y otros órganos del ganado y del hombre y el adulto tiene por hábitat el intestino delgado del perro y otros cánidos. El parásito: Echinococcus granulosus
Material de observación 1.
2. 3. 4.
Preparaciones microscópicas con adultos de Echinococcus granulosus. Observación a menor y mayor aumentos. Preparación histológica de pulmón con hidátide. Observación a menor y mayor aumento. Preparaciones macroscópicas de quistes hidatídicos en diferentes órganos. Observación macroscópica. Preparaciones microscópicas de sedimento de líquido hidatídico. Observación a mayor aumento. 83
5.
Láminas con preparación del Método de la doble difusión (DD5).
Morfología: OBSERVE los dibujos adjuntos. a) adultos: OBSERVE la preparación microscópica con Echinococcus granulosus. Tenia
pequeña de 2 a 10 mm de longitud. Escolex con 4 ventosas y una corona de ganchos, seguida de un cuello corto y cuerpo o estróbila con tres proglótidas: inmadura, madura y grávida, la cual contiene un útero lleno de huevos. La proglótida grávida es la más grande de las tres y mide la mitad o dos tercios de todo el cuerpo. DIBUJE.
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b) hidátide: OBSERVE el corte histológico de pulmón. Distinga las dos membranas la
cutícula, externa, anhista, gruesa, constituida por la superposición de láminas y la germinativa o proliferativa, interna, delgada, de 20 micrones de espesor. Es un sincicio constituido por núcleos y protoplasma sin división celular. Preste atención a la presencia de protoescólices nacientes de la membrana prolígera y desarrollado hacia la luz de la hidátide. El protoescolex contiene el escólex invaginado, mide de 100 a 200 micrones y presenta ventosas y ganchos. Se puede observar también vesículas prolígeras que contienen protoescólices. DIBUJE. c) Quiste hidatídico: OBSERVE el mismo corte histológico de pulmón. Preste atención a la adventicia que es la capa de tejido fibroso que rodea a la cutícula. El quiste hidatídico es la hidátide más la adventicia. d) Arenilla hidatídica: OBSERVE la preparación con el sedimento del líquido hidatídico. Preste atención a la presencia de protoescólices y ganchos. Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. La forma infectante para el hombre es el huevo de la tenia La forma infectante para el perro es la hidátide. El mecanismo de transmisión al hombre es por el agua de bebida y alimento contaminado con los huevos de la tenia. El mecanismo de infección del perro es porque el hombre le da al perro, como alimento, vísceras conteniendo las hidátides del parásito. La puerta de entrada para el hombre y el perro es la vía oral. El ganado es el hospedero intermediario habitual y el hombre un hospedero intermediario accidental. El perro es el hospedero definitivo habitual. En nuestro país los auquénidos presentan generalmente hidátides infértiles y el perro constituye el único hospedero definitivo de importancia epidemiológica. Acción patógena:
La tenia no produce patología importante en el perro. El quiste hidatídico es la expresión del desarrollo de la hidátide y la respuesta tisular del órgano parasitado. Los órganos más frecuentemente parasitados son el hígado y el pulmón. El crecimiento de la larva es lento, lo que no suele ocasionar sintomatología importante. La ruptura del quiste a las cavidades pleural y/o abdominal permite que los protoescólices se desarrollen en nuevos quistes provocando la hidatidosis secundaria. La localización en hueso, donde no se puede formar la adventicia, el desarrollo de la hidátide es invasivo. La ruptura del quiste hidatídico pulmonar hacia la vía respiratoria y el vaciamiento de su contenido en forma violenta determinan la "vómica" o sea la eliminación violenta del líquido hidatídico con la sensación de asfixia consiguiente. La ruptura del quiste hidatídico hepático en las vías biliares puede provocar obstrucción biliar por la eliminación de las membranas de la hidátide que suele resolverse espontáneamente. En la cavidad del quiste eliminado, ya sea pulmonar o hepático, suele instalarse una infección y el cuadro clínico evoluciona como absceso pulmonar o hepático. Localizaciones en el cerebro, bazo, páncreas, etc. han sido descritas. Diagnóstico: 85
La demostración directa del parásito es posible realizarla en escasas ocasiones como en la vómica, pues el examen del contenido eliminado o del esputo en los días posteriores al accidente, se puede encontrar escolex o ganchos. El diagnóstico indirecto del parasitismo se realiza mediante pruebas inmunológicas, en especial pruebas serológicas como ELISA, HAI (hemaglutinación indirecta) que tienen alta sensibilidad pero baja especificidad. La inmunoelectroforesis y la doble difusión para detectar el arco 5 de Caprón (DD5) tienen alta especificidad pero baja sensibilidad. El Inmunoblot ha mostrado tener alta sensibilidad y especificidad. OBSERVE las láminas con el método de la doble difusión; identifique el arco 5 y las tiras de inmunoblot para detectar las bandas de 21 a 31 kd. . El estudio radiológico pulmonar, la ecografía hepática, la tomografía axial computarizada (TAC) y la resonancia magnética han mostrado ser muy útiles en el diagnóstico de la hidatidosis.
Cisticercosis Definición: Zoonosis parasitaria causada por la larva (cisticerco) de Taenia solium que se localiza en los tejidos del cerdo y del hombre y el adulto en el intestino delgado del hombre. El parásito: Taenia solium
Material de observación 1. Preparación microscópica de proglótidos de Taenia solium. Observación al estereoscopio.
2. Preparación macroscópica de cisticercos. Observación macroscópica. 3. Preparación histológica de músculo con cisticerco. Observación a mayor aumento. Morfología: OBSERVE los dibujos adjuntos a) adulto: proglótida grávida: OBSERVE la preparación microscópica conteniendo la proglótida de Taenia solium. Preste atención a la forma arboriforme del útero lleno de
huevos. Determine que el número de ramificaciones, a partir del tronco principal es menor a 12. DIBUJE. b) cisticerco: OBSERVE la preparación macroscópica y el corte histológico del músculo con cisticerco. Preste atención a la forma de vesícula que deja apreciar una mancha en su interior, correspondiente al escolex de la tenia que está invaginada. Observe, en el corte histológico, el escolex, alguna de las ventosas y los ganchos. DIBUJE.
Ciclo biológico: OBSERVE los esquemas adjuntos. El huevo es la forma infectante para que el cerdo o el hombre adquieran la cisticercosis. 86
El cisticerco contenido en el músculo del cerdo es la forma infectante para que el hombre adquiera la teniasis.
El mecanismo de infección para que el hombre adquiera la cisticercosis es la ingesta de agua de bebida y/o alimento contaminado con huevos del parásito. El mecanismo de infección para el cerdo adquiera la cisticercosis es la ingesta de heces humanas conteniendo huevos o proglótidas del parásito. La puerta de entrada para las formas infectantes es la vía oral en el hombre y en el cerdo. El hombre es el único hospedero definitivo de Taenia solium . El cerdo es el hospedero intermediario habitual de la tenia, siendo el hombre un hospedero intermediario accidental. Acción patógena: La teniasis por Taenia solium no suele producir alteraciones digestivas o generales importantes. La cisticercosis humana es producida por dos tipos de cisticerco, el quístico y el racemoso, el primero corresponde a la descripción vesicular que se ha mencionado y el racemoso a una vesícula que no tiene escolex de forma irregular y que se ubica en el cerebro, en la base del 87
cráneo, a la salida de los pares craneales y en las cavidades. Correspondería a una forma degenerativa del cisticerco quístico. Los cisticercos pueden localizarle en cualquier tejido, pero con más frecuencia en el tejido celular subcutáneo, músculo, ojo y sistema nerviosos central, de estas localizaciones, la neurocisticercosis es la forma más grave por las lesiones que ocasiona según la localización del o los cisticercos. La sintomatología es muy variada desde síntomas neurológicos hasta psiquiátricos, desde cefalea hasta epilepsia entre otros. Diagnóstico El diagnóstico de la teniasis se hace por el hallazgo de proglótidas en las deposiciones, ya que la presencia de huevos nos es suficiente, pues la morfología de los mismos es indistinguible de los de Taenia saginata; sin embargo el uso de anticuerpos monoclonales contra los huevos de T. solium marcados con fluorescencia y su observación al microscopio de fluorescencia ha mejorado este diagnóstico, así como la preparación de anticuerpos monoclonales contra antígeno excretado/secretado (E/S) marcados con enzima y su determinación por ELISA en las heces. El diagnóstico parasitológico directo de la cisticercosis es posible en la localización ocular, en que se puede observar, por el oftalmoscopio al parásito, identificable por el movimiento del escolex ante la luz del oftalmoscopio. La demostración indirecta de la cisticercosis se basa en la detección de anticuerpos en el suero sanguíneo o en el líquido céfalo-raquídeo. La prueba de ELISA es altamente sensible, pero de baja especificidad, pues suele cruzar con hidatidosis, teniasis por Hymenolepis nana y otros procesos parasitológicos y no parasitológicos. El inmunoblot ha mostrado tener alta sensibilidad y especificidad. OBSERVE tiras de nitrocelulosa impregnadas de antígeno de cisticerco y las bandas que se desarrollan con los sueros positivos de cisticercosis. El resultado con el suero sanguíneo es similar al obtenido con el líquido céfalo-raquídeo. Las pruebas de estudio por imágenes como la tomografía axial computarizada (TAC) y la resonancia magnética son magníficos auxiliares en el diagnóstico.
Practica Nº 10 Fasciolosis Definición: Zoonosis parasitaria causada por los adultos de Fasciola hepatica, trematodo que se localiza en las vías biliares de animales herbívoros, principalmente el ganado y el hombre, siendo los caracoles lymnaeidos los hospederos intermediarios. El parásito: Fasciola hepatica
Material de observación 88
1. Lámina portaobjeto con adultos de Fasciola hepatica. Observación al microscopio
2. 3. 4. 5. 6. 7. 8.
estereoscópico. Preparación microscópica de heces con huevos del parásito. Observación a menor y mayor aumento. Preparación microscópica con miracideos. Observación a mayor aumento. Preparación microscópica con redias. Observación a menor y mayor aumento. Preparación microscópica con cercarias. Observación a menor y mayor aumento. Preparación microscópica con metacercarias. Observación a menor y mayor aumento. Preparación histológica de vías biliares con adulto del parásito. Observación a mayor aumento. Lámina con método de inmunoelectroforesis. Observación macroscópica.
Morfología: OBSERVE los dibujos adjuntos. a) adulto: OBSERVE la preparación con el ejemplar adulto del parásito. Preste atención al
tamaño, alrededor de 3 cms de longitud, la forma de hoja y la estructura interna. Distinga la ventosa oral y el tubo digestivo bifurcado y terminado en fondo ciego. Reconozca la ventosa ventral, el aparato genital masculino (testículos) dispersos en el cuerpo y el aparato genital femenino, principalmente los ovarios y útero. Ubique el poro genital por delante de la ventosa ventral y observe el útero cargado de huevos. Reconozca, en los bordes del cuerpo, las espinas que lo cubren. DIBUJE. b) huevo: OBSERVE la preparación de heces. Reconozca los huevos de Fasciola hepatica por el mayor tamaño con relación a los de los otros parásitos, la forma ovalada de los mismos y la presencia de opérculo. DIBUJE.
c) Los estadíos larvarios: 1. miracidio: OBSERVE la preparación microscópica coloreada con fucsina. Preste
atención a la presencia de la mancha ocular y cilios en la superficie. DIBUJE.
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2. redia: OBSERVE preparaciones microscópicas coloreadas con fucsina. Las redias hijas
se visualizan como sáculos alargados con cercarias en su interior. Reconozca las cercarias por su cuerpo redondeado y la presencia de cola. DIBUJE.
3. cercaria: OBSERVE en la preparación microscópica teñida con fucsina al parásito de
cuerpo redondeado, esbozo de ventosas y tubo digestivo y la cola. DIBUJE.
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4. metacercaria: OBSERVE la preparación microscópica. Reconozca al parásito por su
forma redondeada y el halo cementante que rodea al cuerpo. DIBUJE.
Acción patógena: El parásito ocasiona lesiones durante el recorrido de la forma juvenil por el hígado (fase invasiva o aguda) y en las vías biliares donde se localiza el parásito adulto (fase de estado o crónica). Durante su pasaje por el hígado produce lisis en su trayecto, produciéndose un estado inflamatorio con la consiguiente hepatomegalia, fiebre y dolor en sus manifestaciones clínicas. El estudio histopatológico muestra necrosis en el trayecto de la forma juvenil del parásito con infiltrado de eosinófilos explica la eosinofilia con que transcurre la infección en el periodo agudo o invasivo. En el periodo de estado o crónico, que corresponde a la localización del parásito adulto en las vías biliares, (OBSERVE la preparación histológica de hígado) hay alteraciones en la mucosa de las vías biliares: pérdida de mucosa, sangrado, metaplasia e infiltrado inflamatorio. La pared de las vías biliares están distorsionadas y hay una intensa fibrosis pericanalicular, que explica la sintomatología hepatobiliar que presentan los pacientes en esta etapa de la infección, con alteraciones del contenido biliar, favoreciendo la formación de cálculos. La acción exfoliatriz de la mucosa es causada por las espinas de la cubierta del parásito. Es posible apreciar cortes transversales del parásito que permite identificar el tubo digestivo y testículos. DIBUJE. En ocasiones, no infrecuentes, el parásito no alcanza a llegar al hígado y se le puede encontrar en otros tejidos: epiplon, páncreas, tejido celular subcutáneo, especialmente en la región del hipocondrio derecho constituyendo localizaciones extrahepáticas, de difícil diagnóstico. Diagnóstico Es importante distinguir los dos periodos de la infección en el paciente en que se realiza el estudio, pues los métodos de laboratorio varían en importancia en el periodo agudo o invasivo y en el crónico. En el periodo agudo la forma juvenil está migrando por la cavidad peritoneal y el hígado por aproximadamente dos a tres meses, antes de alcanzar las vías biliares y desarrollarse allí el estado adulto del parásito. El diagnóstico directo del parásito en el periodo agudo es imposible, por lo que las pruebas serológicas tienen importancia. En el periodo crónico, la demostración del parásito se hace por la presencia de huevos en las deposiciones y extrañamente las pruebas serológicas se suelen tornar negativas.
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El examen de heces para buscar huevos de Fasciola debe hacerse usando el método de sedimentación en copa (ver el capítulo de Métodos de laboratorio). La búsqueda de huevos también se realiza con mayor efectividad mediante el sondaje duodenal o el uso de la sonda de Beal o la cuerda encapsulada. El excretado/secretado (E/S) del parásito sirve como antígeno (coproantígeno) para preparar anticuerpos monoclonales que permiten realizar la técnica de ELISA en las heces. Las pruebas serológicas más apropiadas en nuestro medio son la inmunoelectroforesis o la doble difusión buscando el arco 2 de Caprón (DD2) y el inmunoblot buscando las bandas de 28 y 14 kd.
Paragonimiosis Definición: Zoonosis parasitaria causada por adultos de especies del género Paragonimus que se localizan en los pulmones de animales silvestres y el hombre y necesitan dos hospederos intermediarios, caracoles hydrobideos y cangrejos de agua dulce. El parásito: Paragonimus
Los Paragonimus pertenecen a la Clase Trematoda. Hay varias especies en el mundo, siendo la más conocida P. westermani prevalente en Asia. Las siguientes especies han sido descritas en el país: P. peruvianus (mexicanus) P. caliensis P. amazonicus P. inca
Se considera que habrían más especies, pues, algunos hallazgos en animales así lo indicarían; sin embargo, la más relacionada a la infección humana sería P. peruvianus (mexicanus). Material de observación 1. Lámina portaobjeto con adulto de P. peruvianus (mexicanus). Observación al microscopio
2. 3. 4. 5. 6.
estereoscópico y menor aumento. Preparación microscópica de metacercaria del parásito. Observación a menor aumento. Preparación microscópica de heces conteniendo huevos del parásito. Observación a mayor aumento. Preparación histológica de pulmón de gato con lesión por el parásito. Observación a menor y mayor aumento. Ejemplares de caracoles Aroapyrgus colombiensis . Ejemplares de cangrejos Hypolobolcera chilensis.
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Morfología: Las formas evolutivas ocurren en el hospedero definitivo mamíferos y el hombre y los estadios larvarios en el caracol y el cangrejo. Las formas que se han identificado, en nuestro país son las formas adultas, las metacercarias y los huevos, que serán los que observen. OBSERVE los dibujos adjuntos.
a) adulto: OBSERVE la preparación con el ejemplar adulto: gusano que en condiciones normales es redondeado, aquí se observa aplanado de 2 a 3 cm de longitud., similar a F. hepatica presenta dos ventosas oral y ventral, compare el tamaño pequeño de la oral con
respecto a la ventral. Preste atención al tubo digestivo bifurcado y terminado en fondo ciego. Hermafrodita, presenta los testículos dispersos en el cuerpo, ovario y útero en la parte anterior, ramificados, la superficie cubierta de espinas. DIBUJE.
b) metacercaria: OBSERVE en la preparación a la forma larvaria que tiene un aspecto similar
a la del adulto; no se observa cubierta quística y se distingue las ventosa y el esbozo del tubo digestivo. DIBUJE.
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c) huevo: OBSERVE la preparación de heces. Los huevos se observan ovoides de 80 por 50
micrones, aproximadamente, oscuros y provistos de opérculo. Preste atención a la irregularidad de la pared. DIBUJE.
d) caracol: OBSERVE el tamaño de 2 a 4 mm de longitud, preste atención a los surcos
helicoidales. DIBUJE. e) cangrejo: OBSERVE el tamaño variable, el cuerpo y quelas. DIBUJE. Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. La forma infectante para el mamífero y el hombre es la metacercaria El mecanismo de transmisión para los mamíferos y el hombre es la ingesta de cangrejos crudos o insuficientemente cocidos. La puerta de entrada para el mamífero y el hombre es la vía oral. El caracol se infecta por la penetración del miracideo. El cangrejo se infecta por la penetración de la cercaria.
Acción patógena: El parásito adulto se localiza en el parénquima pulmonar produciendo lesiones cavitarias por necrosis del tejido pulmonar, lo que ocasiona hemoptisis. Alrededor de los huevos que coloca el parásito se forman focos inflamatorios y fibrosis. OBSERVE la preparación histológica del pulmón parasitado. Identifique a los huevos por los restos de la cáscara y la reacción inflamatoria caracterizada por el infiltrado celular y tejido fibrótico. DIBUJE. El paciente es diagnosticado como portador de tuberculosis, entidad con la que se debe establecer el diagnóstico diferencial. Diagnóstico: Se realiza por el hallazgo de huevos en el esputo y/o en las deposiciones; para ello debe usarse el método de la sedimentación en copa, ya mencionado en el diagnóstico de Fasciolosis. El esputo colectado de 24 horas y para fluidificarlo debe tratarse con hidróxido de sodio diluido. La intradermoreacción es útil, así como las pruebas serológicas como la contrainmunoelectroforesis, doble difusión, inmunoelectroforesis, etc. Los exámenes por imágenes: radiografías de tórax y tomografía axial computarizada son útiles pues suelen dar imágenes sugestivas de la infección. 94
Practica Nº 11 Toxoplasmosis Definición: Zoonosis parasitaria causada por Toxoplasma gondii , coccideo que parasita los tejidos de animales mamíferos, algunas aves y al hombre. El hospedero definitivo del parásito es el gato y otros felinos en los que se desarrolla el ciclo sexual. El parásito: Toxolasma gondii Toxolasma gondii pertenece a la Clase Sporozoa y al Phylum Apicomplexa.
Material de observación 1. Preparación microscópica de frotis de exudado peritoneal de ratón teñidos con Giemsa. Observación con lente de inmersión. 2. Preparación histológica de cerebro infectado con el parásito. Observación a mayor aumento. Morfología: El parásito presenta formas evolutivas en el intestino del gato correspondientes al ciclo sexual y formas evolutivas en los tejidos de los animales y el hombre que corresponden al ciclo asexual; son estas últimas las que se observarán: OBSERVE los dibujos adjuntos. a) trofozoito: OBSERVE la preparación con frotis de exudado peritoneal de ratón. Preste
atención a la forma semilunar, de 4 a 6 micrones de longitud, la presencia de núcleo y formas en división binaria. DIBUJE.
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b) quiste: OBSERVE la preparación histológica de cerebro. Preste atención a la presencia de
quistes redondeados en pleno tejido nervioso, sin reacción inflamatoria alrededor y conteniendo numerosos trofozoitos. DIBUJE.
Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. La forma infectante para el hombre y animales mamíferos es: el ooquiste maduro, el quiste tisular y el trofozoito. El mecanismo de transmisión es por la contaminación de agua de bebida y alimentos con ooquistes maduros. Además por la ingesta de carnes o tejidos de animales insuficientemente cocidos con quistes o a través de la placenta con trofozoitos procedente de la madre, o por transplante de órganos con quistes. La puerta de entrada es la oral, el útero o el transplante, según sea el mecanismo de transmisión. El gato es el hospedero definitivo por que en su intestino se desarrollan las formas sexuadas y, el hombre y otros animales, los hospederos intermediarios, ya que en ellos se desarrollan las formas asexuadas. Acción patógena: El parásito se localiza en diferentes órganos, siendo los más importantes el ojo, los ganglios linfáticos y el cerebro. Se considera que el 50% de la población está infectada con el parásito, pero un número pequeño hace la enfermedad, lo cual dependería de la patogenicidad de la cepa, la susceptibilidad de la persona, en especial el estado inmunitario, pues en personas inmunocompetentes probablemente no haya enfermedad. La forma evolutiva del parásito que se observan los tejidos es el quiste, tal como se observa en las láminas histológicas de cerebro, sin reacción inflamatoria, aquí los trofozoitos se reproducen lentamente como bradizoitos; si en circunstancias, como en el SIDA, disminuye la respuesta inmunitaria los parásitos se reproducen rápidamente (taquizoitos) y aparecen lesiones inflamatorias graves, siendo por ello Toxoplasma gondii un parásito oportunista del SIDA. 96
El parásito atraviesa la barrera placentaria solamente si la madre se infecta durante el embarazo y la proporción de niños que nacen con toxoplasmosis congénita es baja 1de cada 100 o 200 gestantes con infección aguda. Diagnóstico: La demostración directa del parásito es muy difícil y sólo se logra en casos especiales como la biopsia de ganglio, examen histológico de la placenta, etc.; por lo que se considera que el diagnóstico de la toxoplasmosis es serológico. La elevación de las inmunoglobulinas tiene importancia, siendo necesario conocer que la IgG e IgM específicas nos ayudan a establecer mejor el diagnóstico, el estado de la infección y la evolución, lo cual tiene importancia para implantar el tratamiento y seguir el resultado del mismo. La prueba serológicas más corrientemente usadas por su alta sensibilidad y especificidad son HAI ( hemaglutinación indirecta), IFI ( inmunofluorescencia indirecta) y ELISA, las cuales miden, según sea el kit usado, la IgG, para determinar la presencia de la infección o la IgM que nos indica la actividad de la infección, lo que se logra también con la Fijación del Complemento. La persona que se ha infectado por cualquiera de los mecanismos mencionados anteriormente muestra un incremento de la IgG e IgM sanguínea durante un tiempo no muy prolongado, semanas o uno a dos meses, luego de lo cual, disminuyen los títulos de ambas inmunoglobulinas, la Ig M específica desaparece y la IgG persiste por vida en las personas inmunocompetentes. En las personas con lesiones oculares, ganglionares o cerebrales la IgM se eleva, cuya evolución es importante seguir durante el tratamiento, pues nos orienta sobre la actividad de la lesión. En el recién nacido en que se sospecha toxoplasmosis congénita se debe realizar la búsqueda de IgM específica, pues la IgG pasa de la madre al niño y no indica que haya habido transmisión transplacentaria.
Practica Nº 12 Trichomoniosis vaginal Definición: Infección parasitaria causada por el flagelado Trichomonas vaginalis que se localiza en el aparato genital masculino y femenino. Se le considera una infección de transmisión sexual. El parásito: Trichomonas vaginalis
Material de observación 1. Lámina con secreción vaginal teñida con Giemsa. Observación con lente de inmersión. 2. Preparación microscópica de cultivo, en fresco, de Tichomona s. Observación a mayor aumento.
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Morfología: Trichomonas vaginalis
es un flagelado de la CLASE Zoomastigophora. Sólo presenta el estadío
de trofozoito. OBSERVE los dibujos adjuntos.
Trofozoito: OBSERVE la lámina con secreción vaginal. Identifique al parásito por su forma piriforme, tamaño de 10 a 30 micras de longitud por 10 a 18 de amplitud. Se suelen distinguir alguno de los 4 flagelos anteriores, el axostilo, la membrana ondulante, así como el núcleo. DIBUJE. En la preparación con material fresco de cultivo, observe el movimiento del parásito.
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Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. La forma infectante es el trofozoito El mecanismo de transmisión es, en general, por contacto sexual. Puede ser por contacto con prendas intimas húmedas contaminadas con el parásito. La puerta de entrada es la vagina o la uretra, según el sexo. El hombre suele ser el principal reservorio. El parásito se reproduce por división binaria. Acción patógena: El parásito se ubica en la próstata, sin ocasionar mucha sintomatología, en ocasiones uretritis con secreción y dolor a la micción. La colonización en el aparato genital femenino, se favorece por cambios en el pH vaginal normal ácido, debido a causas fisiológicas u hormonales, principalmente. Las lesiones de inflamación de vagina explica la "leucorrea" o flujo vaginal. Diagnóstico: Se realiza por el hallazgo de los trofozoitos en la secreción vaginal o uretral. El examen directo, en fresco de esta secreción puede ser suficiente y en ocasiones, el cultivo es más apropiado. En el hombre asintomático es necesario hacer masaje prostático, previo al examen de la orina para tener éxito en el hallazgo del parásito.
Amebas de vida libre Definición: Infección parasitaria causada por amebas que usualmente viven libremente en aguas y materias orgánicas en descomposición y pueden invadir la piel, ojos y cerebro del hombre. El parásito: Se reconocen, hasta el momento, especies de tres géneros: Acanthamoeba Naegleria Balamuthia
Material de observación 1. Preparación microscópica con cultivo de Naegleria. Observación con lente de inmersión. 2. Preparaciones microscópicas con cultivo de Acanthamoeba. Observación con lente de
inmersión. 3. Preparaciones microscópicas, en fresco, de cultivo de Acanthamoeba.
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Morfología: OBSERVE los dibujos adjuntos. Naegleria:
Trofozoito: OBSERVE la preparación microscópica con cultivo de Naegleria. Preste atención a la forma irregular, tamaño de 13 micrones, algunos con seudópodos y núcleo con nucleolo central. DIBUJE.
Acanthamoeba:
Trofozoito: OBSERVE la preparación con forma de cultivo de Acanthamoeba. Preste atención a la forma redondeada de los trofozoitos y el tamaño de alrededor de 20 micrones, núcleo con cromatina nuclear dispersa y nucleolo prominente. En la preparación de cultivo, en fresco, aprecie el movimiento lento y la emisión de seudópodos del parásito. DIBUJE.
Quiste: OBSERVE en las preparaciones anteriores la presencia de quistes redondeados, de doble membrana, la externa arrugada. DIBUJE.
Ciclo biológico: OBSERVE el esquema adjunto. Las amebas de vida libre presentan los estadios de trofozoito y quiste. El trofozoito es la forma activa y de reproducción por división binaria, el quiste es la forma resistencia a las condiciones ambientales. La forma infectante es el trofozoito. El mecanismo de transmisión es por el contacto con la piel, mucosas o, conjuntiva de aguas o materias orgánicas con los trofozoito. 100
La puerta de entrada es la piel, mucosa nasal o conjuntiva. En el Género Acanthamoeba, A. castellani y A. culbersttoni , son las que más frecuentemente se les ha identificado. En el género Naegleria, N. fowleri es la especie más identificada del género. En el Género Balamuthia, B. mandrilensis es la única especie identificada. OBSERVE el esquema adjunto. Acción patógena: Las localizaciones cutáneas son úlceras que ocasionan las amebas en la piel, cuando hay una lesión previa. La penetración de las amebas por la mucosa nasal ocasiona, al inicio, una rinitis que luego progresa hacia una invasión del nervio oftálmico y el cerebro. La invasión ocular de la ameba se ha observado en el uso de lentes de contacto, los cuales no son guardados en condiciones higiénicas apropiadas en los líquidos de limpieza. Las ulceraciones cutáneas y las queratitis son causadas principalmente por Acanthamoeba. Hay dos formas de lesiones cerebrales descritas en las amebas de vida libre: la meningitis amibiana primaria (MAP) producida por Naegleria y la encefalitis granulomatosa amibiana (EGA) producida por Acanthamoeba y Balamuthia. En la meningitis amibiana primaria, el cerebro presenta lesiones necrotizantes hemorrágicas con compromiso de las meninges y en la encefalitis granulomatosa hay presencia de granulomas. El pronóstico de los casos cerebrales es malo, generalmente son casos fatales. Diagnóstico: Se realiza por el hallazgo del parásito en las lesiones cutáneas, mucosas o conjuntivales ya sea en raspados de las lesiones o cultivo de material de las mismas; solamente Balamuthia no se puede cultivar en medios corrientes. Las pruebas para el diagnóstico inmunológico están siendo implementadas, por lo que su uso es limitado.
TOXOCARIOSIS Definición Infección parasitaria producida por la larva del nematodo Toxocara canis con menor frecuencia por Toxocara felis. Material de observación
- Adultos de Toxocara canis - Huevos de Toxocara canis
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Morfología Los ejemplares adultos de Toxocara canis semejan a adultos de Ascaris lumbricoides , por la forma cilíndrica, el color y el tamaño, diferenciándose de ellos por la presencia de expanciones en la parte anterior de su cuerpo DIBUJE. Los huevos de Toxocara canis son redondos y con una membrana externa, brevemente mamelonada. Ciclo biológico Toxocara canis es un nematodo intestinal del perro cuyo ciclo biológico es similar al de Ascaris lumbricoides por presentar ciclo de Looss. El perro infectado, al defecar deja los
huevos en el suelo donde maduran hasta alcanzar el estadio de huevo larvado o forma infectante, que al ser ingerido por el perro, esta larva eclosiona en el intestino y atraviesa la mucosa, alcanza los venas intestinales y llega al pulmón donde atraviesa la pared de los alvéolos y alcanza los bronquios y luego la faringe y por deglución llega al intestino y se desarrolla el adulto. Si el hombre y en especial los niños, por sus hábitos de jugar en el suelo, pueden, accidentalmente ingerir los huevos larvados, cuyas larvas no hacen el ciclo de Los. Sino que las larvas en el interior de los vasos sanguíneos pueden alcanzar diversos tejidos dando lugar al cuadro clínico conocido como larva migrans visceral. Un hecho importante es que en la perra infectada gestante, la larva pude llegar , a través de la placenta al cachorro que al nacer ya puede estar eliminando huevos al ambienteAcción patógena La larva puede migara a diversos órganos dando sintomatología escasa, intensa o ninguna, dependiendo del órgano parasitado, el número de larvas y la respuesta del hospedero, hay cuadros respiratorios, viscerales y lo más grave sea la toxocariosis ocular por la lesión de la retina causada por la larva Diagnóstico El diagnóstico es serológico cuya sensibilidad y especificidad depende de la calidad
Métodos de laboratorio Introducción: El diagnóstico de cualquier parasitismo del hombre debe mostrar directamente la presencia del parásito causante o indirectamente, a través de las pruebas inmunológicas o de hipersensibilidad. La demostración directa del parásito se realiza tomando muestras del organismo según sea la etiología que se sospecha. La demostración indirecta se hace mediante la búsqueda de los anticuerpos en sangre o secreciones, o anfígenos circulantes o eliminados por las excretas o secreciones del organismo. 102
El diagnóstico de cualquier parasitismo del hombre debe mostrar directamente la presencia del parásito causante o indirectamente, a través de las pruebas inmunológicas o de hipersensibilidad. hipersensib ilidad. La demostración directa del parásito se realiza tomando muestras del organismo según sea la etiología que se sospecha. La demost demostraci ración ón indire indirecta cta se se hace hace median mediante te la la búsque búsqueda da de los anticuer anticuerpos pos en sangre sangre o secreciones, o anfígenos circulantes o eliminados por las excretas o secreciones del organismo.
Examen directo o parasitológico La búsqueda búsqueda de estado estadoss evolutivo evolutivoss del parásito parásito tiene tiene relació relaciónn con las caract caracterís erística ticass de la biología de cada uno de ellos. Los siguientes son los principales exámenes que se solicitan: Heces Contenido duodenal Sangre Biopsia Esputo Piel Pelos Ropa
Examen de heces: El examen de heces incluye el examen macroscópico y microscópico de las mismas. Para realizar realizar un buen examen de de heces se requiere una muestra reciente reciente y proglotidos103mente proglotidos103mente emitida, libre de orina. Cuando solamente se necesita necesita hacer el examen examen microscópico microscópico y las heces son proglotido de obtener obtener frescas frescas,, se les les debe fijar fijar utiliza utilizando ndo los los fijador fijadores es apropiad apropiados os para la la búsqued búsquedaa del parásito. Examen macroscópico: Este examen puede permitir: Hallar adultos o partes de helmintos o gusanos, incluyendo proglotidos de tenias. Membranas de quistes hidatídicos. Precisar las características organolépticas de las heces, incluyendo la presencia de moco y sangre. Hay dos posibilidades de realizar este método, según sea el parasitismo que Se investiga. 1. Sediment Sedimentació aciónn en tubo: tubo: el proce procedimi dimiento ento es senci sencillo: llo: En tubo de centrífuga de plástico de 50 ml de capacidad amarre en su boca gasa doblada a manera de colador colador.. Coloque en ella ella 5 gramos de heces o su equivalente equivalente en volumen que han sido homogenizados con suero fisiológico en un recipiente limpio, limp io, de vidrio vidrio o plásti plástico. co. Haga Haga pasar pasar suero fisio fisiológi lógico co por la muestr muestraa con homogeni homogenizaci zación ón constant constantee hasta casi completar completar los 50 ml del tubo de plástic plástico. o. Dejar reposar por 20 minuto se eliminar eliminar la gasa y luego decantar decantar el sobrenadante y reemplazar por suero fisiológic fisiológico, o, una o dos veces mas hasta que que el sobrenadante sobrenadante este claro. Eliminar Eliminar casi todo todo el sobrenadant sobrenadantee y del poco que quede, quede, tomar muestra muestra para examen directo con suero fisiológico fisiológico y del sedimento sedimento otra muestra para el examen examen 103
directo y teñido teñido con lugol. Este Este método puede variarse, variarse, reemplazando reemplazando el tubo por un vaso cónico de igual igual capacidad capacidad y colador colador de plástico plástico en su boca provisto de la gasa doblada, siendo el resto del método igual al mencionado. La observaci observación ón de formas formas móviles móviles de protozoa protozoarios rios es posible posible hacerse hacerse en el examen de la muestra del sobrenadante sobrenadante y los los quistes quistes y huevos en el sedimento. Estudios comparativos comparativos con otros métodos, la sedimentación sedimentación espontánea espontánea a mostrado ser de alta confiabilidad en el diagnostico de protozoos y huevos. 2. Sedime Sedimento nto espon espontán tánea ea en copa copa para para el el diagno diagnosti stico co de Fasciola hepática: Los huevos de Fasciola hepática son lo suficientemente grandes (120 micrones) como para que puedan romperse en la centrifugación; centrifugación; por ello, conviene concentrados mediante la sedimentación con una metódica similar a la anterior, debiendo añadir que el recipien recipiente te (vaso) (vaso) debe tener tener una capacida capacidadd de mayor mayor a 100 ml. Y en lugar de usar suero fisiológico, fisiológico, basta usar agua de caño. Todo el sedimento se observa colocándolo en una placa petri pequeña y se observa a menor aumento o en el microscopio estereoscópico. 3. Técnica Técnica de Baermann: Baermann: permite permite concentra concentrarr las larvas larvas de Strongyloides stercolaris en el sedimento, aprovechando el geotropismo geotropismo y termotropismo termotropismo de las mismas. mismas. El procedimiento procedimiento que se emplea en en nuestro medio, es una modificación modificación del método original que lo hace más más simple sin alterar alterar su buen rendimiento. El procedimiento procedimiento es similar similar al usado en los anteriores métodos descritos de sedimentac sedimentación, ión, pero en este debe usarse el vaso, el colador, colador, la doble capa de gasa y suero suero fisiológico fisiológico a 37º C y todo el sistema llevarlo a la estufa a 37º C por 30 minutos y luego con una pipeta pipeta Pasteur Pasteur retirar retirar una muestra del fondo de la copa, ella colocarl colocarlaa en lamina lamina escavada y observar las larvas en movimiento. Sedimentación por centrifugación: la técnica mas conocida es la Ritchie que utilizar formol éter para diluir el sedimento sedimento de la muestra muestra de heces y luego de de la centrifugación centrifugación observar observar el sedimento; una variante variante es la la técnica de Telemann Telemann que directamente directamente hace la mezcla por por lo que se ahorra tiempo. -
Examen microscópico:
Método directo: a) Examen Examen en fresco: fresco: es el el examen examen de las las heces, heces, con con ayuda ayuda de suero suero fisioló fisiológico gico y mejor, mejor, si el examen se hace en microscopio microscopio con platina caliente caliente (37º C). Permite observar formas móviles de los parásitos: trofozoitos y larvas, además de otros elementos. b) Examen Examen de de muest muestras ras colo colorea readas das:: Coloración con lugol lugol: el lugol es una solución yodada que permite permite teñir teñir los quis quiste tes, s, huev huevos os y otro otross elem elemen ento tos, s, favor favorec ecie iend ndoo su recon reconoc ocim imie ient ntoo y diagnostico. Coloración de Hematoxilina Hematoxilina – férrica de Heidenhain: para realizar se necesita haber haber fijado fijado la muestra muestra de heces heces con el fijador fijador de Schaudin Schaudinnn o de de alcohol alcohol polivinílico polivinílico (PVA). (PVA). Permite una buena coloración de los los protozoos, protozoos, en especial los núcleos, por lo que se le recomienda cuando se examina amibas. Coloración de Gomorri – Trichrome o tricrómica: similar a la coloración anterior se necesita necesita la fijación de la la muestra muestra son Schaudin o PVA PVA y permite una buena observación morfológica de los protozoarios. Colora Coloració ciónn de Ziehl Ziehl – Neelse Neelsen: n: se utili utiliza za para para colore colorear ar ooquis ooquistes tes de Cryptosporidium y Ciclospora, para lo cual se preparar laminas portaobjetos portaobjetos con la muestra en fresco y previa fijación con alcohol metílico se procede en •
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forma similar a la coloración de esputo para la búsqueda de Bacilo de Koch. Los parásitos parásitos se observan observan de color color rojo o rojizo. rojizo. c) Examen Examen por cultivo cultivo:: se usan usan poco como como método método de diagn diagnosti ostico, co, siendo siendo más más important importantee en el aislamiento de cepas de amibas con fines de investigación. Los más importantes son: Medios de Boeck y Drbohlav, Drbohlav, de Inoki, Takada Takada y Nakabayasi, Nakabayasi, de Robinson, Robinson, de Diamond, de Pavlova y de Lumbreras, Lumbreras, usados usados principalmente principalmente para el aislamiento aislamiento y mantenimiento de amibas, flagelados y ciliados. Medio Medio de la arena arena o carbón carbón vegetal, vegetal, usado usado para para la obtenci obtención ón y desarroll desarrolloo de •
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Strongyloides stercolaris.
Método de concentración concentración : Consiste en concentrar los quistes, huevos y larvas de los parásitos cuyas formas evolutivas mencionadas se eliminan por las heces. Hay varios varios métodos métodos de concen concentraci tración, ón, según según la forma forma de realizar realizar la concentr concentració aciónn de las formas evolutivas de los parásitos: a) Métodos Métodos de concentrac concentración ión por sediment sedimentació ación: n: en los cuales cuales la concentrac concentración ión se hace por el peso peso de los quistes, quistes, huevos huevos y geotropismos geotropismos de las larvas. Los Los mas frecuentemente frecuentemente usados son: Sedimentación Sedimentación espontánea: espontánea: que no utiliza utiliza centrifugación centrifugación y por su simplicidad simplicidad y buen buen rendim rendimien iento to se recomi recomien enda da en zonas donde donde los recurs recursos os son escaso escasos, s, incluyendo la ausencia ausencia de centrífuga. El estudiante estudiante practicará este método método por por que lo puede aplicar en el ejercicio de su profesión. b) Método Métodoss de conce concentr ntraci ación ón por por concen concentra traci ción ón por por flotac flotación ión:: Sirve Sirve para para concen concentra trar r quistes y huevos, aprovechando que ellos flotan por menor densidad cuando se les coloca en soluciones de mayor densidad. •
1. Técni Técnica ca de Wil illis lis – Mollo Molloy: y: util utiliza iza como como soluc solución ión más densa densa (1.20 (1.200), 0), soluci solución ón hipertónica de cloruro cloruro de sodio, la cual cual puede puede reemplazarse por sal sal de cocina. Se mezcla mezcla 1 gramo de heces heces con 10 a 20 ml de la solución solución salina salina todo lo cual se coloca en un tubo de ensayo y se completa con la solución salina hasta hacer un menisco en le borde. Se cubre el tubo con una laminilla por 15 minutos y luego se le coloca en una lamina portaobjeto para ser observada. Esta técnica permite observar quistes y huevos. 2. Técnica Técnica de Parodi Parodi – Alcaraz: Alcaraz: util utiliza iza como solución solución de mayor densidad densidad,, solución solución hipers hip ersatu aturad radaa de azúcar azúcar;; si es rubia, rubia, mejor mejor.. El procedi procedimie miento nto es simil similar ar al mencionado para la técnica de Willis. c) Método Método combinad combinadoo de sediment sedimentació aciónn y flotació flotación: n: uti utiliza liza una en forma sucesiva sucesiva la sediment sedimentació aciónn por por centri centrifuga fugación ción y la la flota flotación ción en el el paso paso final. final. Las Las técnicas técnicas más conocidas son: 1. Técnica Técnica de Faust: Faust: en un primer primer momen momento to se filtran filtran las materias materias fecales fecales a través través de gasa con agua destilada, destilada, se coloca en un tubo de centrífuga, centrífuga, se centrífuga y al sedimento se agrega sulfato de zinc al 33% ( densidad 1.180); se homogeniza y se se vuelve vuelve a centrifug centrifugar ar hasta hasta que pare pare sin freno freno y luego luego se se coloca coloca el tubo tubo en una una gradilla gradilla,, se compl completa eta con sulfa sulfato to de zinc el conten contenido ido del del tubo tubo hasta hasta formar formar un menisco en la boca del tubo, se coloca una laminilla cubreobjeto cubreobjeto sobre ella y se se deja por 10 minutos minutos y luego se le retira y se le coloca sobre sobre un portaobjeto portaobjetoss para observarse al microscopio. 105
2. Técnica de Sheater: Es muy útil para concentrar, separar y recobrar ooquistes de coccidios: Isospora, Cryptosporidium y Clyclospora . Similar a la técnica de Faust,
las heces deben filtrarse y centrifugarse; luego, al sedimento del tubo de ensayo agregarle solución de azúcar sobresaturada- fenolada y centrifugar. Llevar el tubo a una gradilla, completar con la solución de azúcar – fenolada hasta formar menisco en la boca del tubo, dejarlo reposar y luego tomar con asa de platino la superficie del menisco colocarlo en lámina portaobjeto y observar al microscopio. d) Búsqueda de coproantigenos: En los últimos años se han venido preparando anticuerpos
monoclonales contra proteínas antigénicas de parásitos intestinales o biliares, especialmente proteínas de la superficie del parásito o el excretado / secretado del mismo. Las proteínas antigénicas que son excretadas con las heces pueden ser reconocidas por estos anticuerpos, ya sea utilizando las pruebas de la inmunofluorescencia o ELISA, como ocurre con Entamoeba histolytica, Entamoeba dispar, Giardia lamblia, Cryptosporidium , huevos de Taenia solium, Fasciola hepática, etc
Contenido duodenal Los parásitos que se localizan en las partes altas del intestino delgado, en especial en el duodeno como Giardia lamblia, Strogyloides stercolaris o los huevos, son eliminados por el conducto de Oddi como Fasciola hepática, se pueden encontrar en el contenido duodenal obtenido ya sea por sondaje duodenal o utilizando el método de la cuerda encapsulada que consiste hacer deglutir una cuerda de nylon enrollada en una cápsula que tiene un peso metálico. El extremo libre se fija en la mejilla y la cápsula englutida debe llegar al duodeno a las 4 o 5 horas, lapso en que se le hace deglutir agua al paciente. Al final del tiempo transcurrido se extrae la cuerda, se exprime el extremo que llego al duodeno, lo que se reconoce por el color amarillo de la misma o por el pH de ese extremo es alcalino. El líquido exprimido se coloca en una lámina portaobjeto para examinar al microscopio. Sangre: Parásitos que tiene por hábitat el torrente sanguíneo o que lo utilizan en sus migraciones dentro del organismo, pueden ser detectados haciendo el examen de la sangre. En el suero sanguíneo también podemos detectar anticuerpos o antígenos de parásitos mediante pruebas inmunológicas. a) Examen de sangre en fresco: 1. Diagnostico de Chagas congénito: el examen de una gota de sangre fresca y observada al microscopio es útil para el diagnostico de formas móviles de trypomastigotes de Tripanosoma cruzi en niños de madre chagásica que se sospeche de chagas congénito. 2. Diagnostico de Malaria: el uso de tiras reactivas o dipsteak requiere una gota de sangre capilar que impregna una tira de papel de nitrocelulosa que contiene anticuerpos específicos a antígenos del parásitos actualmente esta metódica permite detectar infecciones por Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum con alta confiabilidad, así como tratar a la muestra con naranja de acridina que hace fluorecer el contenido de ácidos nucleicos de los parásitos, permitiendo su mejor observación en el microscopio de fluorescencia. b) frotis y gota gruesa: es el método mas usado para el diagnostico de Malaria y en forma casual de filariasis. El procedimiento se ha explicado en el capitulo de Malaria. Es importante mencionar que existen muchos métodos de coloración, 106
siendo la coloración con Giemsa la más apropiada, pero coloraciones como la de Field que usa azul de metileno, de colorantes Wrigth y Leishman son útiles también. c) Concentración de hemoparasitos: Glóbulos rojos con Plasmodium puede concentrarse por centrifugación de la sangre, ubicándose ellos en la zona limite del paquete globular y suero. 1. Método del Dr. Takami: utiliza tubos de hematocrito de plástico que al final de la centrifugación corta por debajo del limite del paquete globular para vaciar esta porción rica en glóbulos rojos parasitados en una lamina que se colorea para su observación. 2. Técnica del OBC: utiliza tubos similares a los de hematocrito que contienen naranja de acridina; a estos tubos se les introduce un embolo que deja una luz entre él y la pared del tubo de 40 micrones. Se centrífuga y luego se observa al microscopio de fluorescencia la zona limite del paquete globular con el suero; en la luz de 40 micrones, se puede detectar a los parásitos que fluorescen. Esta técnica se usa también para detectar microfilarias. 3. Método de Knott: permite concentrar microfilarias como ha sido descrito en el capitulo correspondiente. Suero Sanguíneo: La búsqueda de anticuerpos es el objetivo de la mayor parte de las pruebas serológicas y en menor proporción la búsqueda de antígenos circulantes. Las pruebas serológicas más frecuentemente usadas son: Hemaglutinación indirecta (HAI): Enfermedad de Chagas, Toxoplasmosis. Inmunofluorescencia indirecta (IFI): Malaria, Enfermedad de Chagas, Toxoplasmosis, leishmaniasis. ELISA: Enfermedad de Chagas, Toxoplasmosis, Cisticercosis. Inmunoelectroforesis (IEF) ó Doble difusión (DD): Hidatidosis (DD5), Fasciolasis (DD2), Paragonimiosis. Inmunoblot o Western Blot: Hidatidosis, Cisticercosis, Fascioliosis. Contrainmunoelectroforesis: Paragonimiosis. Los fundamentos y procedimientos de estas pruebas están descritos en libros de texto de Parasitología e Inmunología. En los capítulos de las parasitosis enumeradas se han señalado las interpretaciones de los resultados de estas pruebas. Biopsia Ella esta indicada en alguna parasitosis: Amebiosis y Balantidiosis: úlceras del colon por rectosigmoidoscopía. Leishmaniosis: piel y mucosas. La manera de tomar la muestra de la piel se menciona en el capitulo correspondiente a Leishmaniosis. La biopsia de la mucosa de la orofaringe debe hacerse por el otorrinolaringólogo. Enfermedad de Chagas: piel, del chagoma de inoculación, también suele hacerse del ganglio infartado. Toxoplasmosis: de ganglio infartado. Cisticercosis: localizan subcutánea del cisticerco Amebiosis por amebas de vida libre: piel, mucosa nasal. El estudio histopatológico y la búsqueda del parásito se debe hacer, pero también se utiliza para la demostración del parásito se debe hacer, pero también se utiliza para la demostración del parásito usando métodos inmunohistológicos, utilizando, utiliza para la demostración del 107
