EQUIPOS Y MATERIALES UTILIZADOS EN EL LABORATORIO DE PARASITLOGIA
Los equipos básicos para un Laboratorio de parasitología son los siguientes: • Microscopio compuesto binocular • Centrífuga Eléctrica • Baño Maria • Balanzas de precisión y analítica • Incubadora • Esterilizador eléctrica a calor seco • Autoclave • Espectrofotómetro • Rotador eléctrica • Potenciómetro • Refrigeradora, Congeladoras, etc.
5. Instrumentos: • Tubos de ensayo diferentes medidas • Láminas porta objetos 76x 26 mm • Laminillas cubre objetos 22 x 22 mm • Matraces (matraz erlenmeyer y matraz de fondo plano) • Placas Petri • Beakers • Frascos goteros (ámbar y blanco)
capacidadess (10, 50, 100, 500, 5 00, 1000 ml.) • Probetas para diferentes capacidade • Pipetas volumétricas volumétricas diferentes tamaños (1, 2, 3, 5, 10 ml.). • Pipetas automáticas de rangos regulables. • Cepillos
• Asa de siembra • Morteros • Espátulas • Friotas • Mechero Bunsen y Mechero de alcohol • Láminas excavadas • Pipetas de Pasteur, etc.
DESCRIPCIÓN TÉCNICA DE EQUIPOS E INSTRUMENTOS DE LABORATORIO
1. MICROSCOPIO.- El microscopio es un instrumento óptico de gran aumento que sirve para observar objetos muy pequeños, se compone de dos lentes convergentes llamados objetivos y oculares. El objetivo es un lente convergente de pequeña distancia focal, la imagen que se forma es real, invertida y más grande que el objetivo enfocado; esta imagen queda colocada delante del lente ocular y va producir una imagen de mayor aumento que es derecho con respecto a la imagen que dio el objetivo pero invertido con respecto al objeto enfocado. a). Partes del Microscopio.- El microscopio esta compuesto de dos partes: 1. Parte Mecánica: • Pie o soporte del Microscopio • Brazo • Asa • Platina • Tubo ocular • Revolver • Tornillo Micrométrico • Tornillo Micrométrico • Subplatina
• Espejo o Luz incorporado
2. Parte Óptica • Los lentes oculares • Los lentes objetivos, secos y de inmersión, • La Resolución • El condensador y diafragma
b). Manejo del Microscopio: Se recomienda seguir los siguientes pasos: • Colocar la lámina sobre la pl atina, enfocar con el objetivo de menor aumento utilizando el
macro y el micrométrico, además acomodando el condensador para obtener iluminación adecuada. • Cambiar a los objetivos de mayor aumento según se a necesario enfocando adecuadamente.
Si se utiliza el objetivo de inmersión (100x), echar una gota de aceite de inmersión sobre la lámina seca y observar. • Después de acabado el trabajo limpiar con papel para lentes los objetivos y oculares sucios.
Finalmente tapar con una funda el aparato.
2. CENTRIFUGA.- Es un instrumento que utiliza la fuerza centrífuga para lograr separar estratos (capas) de diferente densidad, ejemplo: suero de glóbulos rojos en la sangre. Existen de diversos modelos, las más usadas son, las clásicas de mesa para 4 a 8 tubos, los de pie o de mayor capacidad que pueden ser de 36 tubos, que emiten mayores de 1000 RPM hasta 6,000 RPM. los de microhematocrito para colocar tubos capilares, son de cabezal plana, que tienen capacidad mayor de 10,000 rpm. y los de pie refrigeradas para centrifugar bolsas de sangre con alta velocidad de acuerdo a la necesidad, También existen centrifugadoras de uso industrial para mayores capacidades.
Descripción de la Centrífuga clásica.- Consta de las siguientes partes: 1. Cabezal.- Es un sistema de brazo metálico simétricos colocados horizontalmente sobre el eje del instrumento y sostiene en sus extremos los porta tubos. 2. Motor.- Se halla en la base del instrumento, moviliza un eje de tal forma que el cabezal gira horizontalmente a una determinada velocidad y tiempo que son graduados de acuerdo a la necesidad.
3. Envoltura y tapa.- Todo el aparato se halla cubierto por una envoltura de material resistente, generalmente metal, solo existe una abertura superior por donde se coloca los tubos, que se cierra con una tapa hermética antes de prender el motor.
Manejo de la Centrífuga.- Se recomienda lo siguiente: 1. Tomar por pares los tubos que se van a colocar, con sus respectivas portas tubos y equipararlos, de tal forma que ambos tubos pesen o midan igual. Esto es importante para evitar ruptura de tubos y desperfecto del aparato. 2. Colocar los pares de tubos contrapesados frente a frente en el cabezal de la centrífuga. 3. Cerrar bien la tapa del aparato. 4. Marcar el tiempo que se desea centrifugar y la velocidad requerida.
3. BAÑO MARIA.- Es un aparato de forma cuadrangular con tapa, que contiene agua a determinada temperatura standard, graduado por un termostato y controlado por un termómetro, pudiendo ser regulados a partir de 37°C en horas, días y semanas a una temperatura standard, también se puede regular a temperaturas mayores de acuerdo a la necesidad del Laboratorio y la complejidad. Manejo del baño María.- Su funcionamiento es la siguiente: 1. Echar agua destilada en cantidad necesaria y prender el aparato. 2. Graduar a temperatura de 37°C. o temperatura deseada y sumergir en el agua una gradilla porta tubos inoxidable. 3. Con el termómetro o en indicador del equipo, verificar que el agua alcance la tem peratura deseada. 4. Una vez encontrado la temperatura deseada, recién colocar los tubos en la gradilla que se halla dentro del agua y empezar a contabilizar el tiempo requerido.
4. ESTUFA O INCUBADORA.- Es un aparato eléctrico que produce calor seco, tiene forma cuadrangular encerrado un espacio donde el ambiente alcanza determinada temperatura, regulado por un termostato y controlado por un termómetro, alcanza temperaturas Standard requeridas de acuerdo a la necesidad, ejemplo 37°C., también puede regularse a temperaturas mayores dependiendo de la necesidad del servicio y la complejidad del Laboratorio.
MANEJO: 1. Prender el instrumento y graduar la temperatura deseada 2. Verificar con el termómetro que se haya alcanzado la temperatura indicada. 3. Colocar en el interior del aparato el material que se desea incubar y marcar el tiempo necesario.
5. ESTERILIZADOR DE CALOR SECO (HORNO).- Son aparatos muy semejantes a las estufas pero alcanzan temperaturas hasta de 240°C.. Se utiliza para esterilizar o secar material de vidrio, no sirve para líquidos y material de jefe a altas temperaturas, sino es necesario regular las temperaturas de acuerdo a la necesidad del Laboratorio clínico. Manejo.- Considerar los siguientes: 1. Para esterilizar los materiales de cristalería que tiene resistencia a altas temperaturas como los pirex, deben ser seleccionados, para graduar la temperatura y el tiempo necesario. 2. Los materiales que no resisten altas temperaturas deben ser seleccionados aparte, para regular la temperatura deseada y el tiempo. 3. Los materiales que resisten bajas temperaturas, como los guantes quirúrgicos y material de Jebe, también requiere las temperaturas adecuadas y el tiempo requerida.
6. AUTOCLAVE.- Es un aparato que produce calor húmedo en la forma de vapor a presión para lograr esterilizar. Los más utilizados tienen un cuerpo cilíndrico con tapa hermética, presentando en su exterior una escala de temperatura y presión (libras/pulg.2), además una válvula de evacuación y otra de seguridad. MANEJO.- Seguir las instrucciones del fabricante. Usualmente se realiza los siguientes pasos. 1. Llenar con agua destilada hasta la marca indicada y colocar los objetos que se quiere esterilizar. 2. Colocar la tapa cerrando herméticamente, verificar que funcione la válvula de seguridad y prender el aparato colocando el interruptor en el nivel más alto. 3. Dejar abierta la válvula de evacuación para que al calentar el aparato se expulse todo el aire existente en la cámara de esterilización, entonces recién cerrarla. Esto es importante por que de quedar aire a determinada presión, la temperatura será inferior.
4. Esperar que la escala de temperatura y presión marque 121°c y 15 libras/pulg.2, entonces bajar el interruptor a nivel medio y esperar 20 a 30 minutos para después apagar el aparato. 5. Dejar que enfríe bien, luego abrir la válvula de evacuación y después recién la tapa.
7. ESPECTROFOTOMETRO.- El espectrofotómetro es un aparato que tiene la capacidad de medir la concentración de una solución coloreada. Se fundamenta en el hecho de que la luz blanca (compuesta por todos los colores del espectro visible) al atravesar una solución transparente o no coloreada, ejemplo agua, es absorbida en muy pequeña cantidad, pero casi toda es transmitida a través del líquido. Si esta Luz incide sobre una célula fotoeléctrica conectada a un instrumento registrador puede medirse la cantidad de luz transmitida en porcentaje, es decir, casi 100( y la absorbancia será casi 0 (. Las partes de este aparato son esencialmente semejante al fotómetro de filtros, solo que a diferencia de éste utiliza un espectroscopio, bajo la forma de una rejilla de difracción o un prisma para obtener luz monocroma de una sola longitud de honda. El medidor presenta una doble escala paralela, transmitancía de 0 – 100( y absorbancia de 0 a 2. En la actualidad son los aparatos más utilizados por su exactitud y versatilidad como los Spectronic 20D Milton Roy digital, y los equipos de última generación y última tecnología de mayor precisión y exactitud los Spectronic 20 GENISIS. PARTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO.- Consiste en los siguientes partes: 1. Fuente de Luz: Lámpara de Tungsteno. 2. Los filtros: Son cristales coloreados intercambiables que seleccione el Rango de longitud de onda de 340 a 950 nm. y los equipos de última generación tienen un rango de longitud de onda de 340 a 1,100 nm 3. Cubeta: Es el tubo donde se coloca la solución coloreada motivo del examen. 4. Detectores Fotosensibles: son sistemas que convierten las ondas luminosas. 5. Medidor: Es el sistema que registra la energía eléctrica, para realizar las lecturas en escalas. MANEJO DEL ESPECTROFOTOMETRO.- En cada caso se debe seguir las instrucciones del fabricante, usualmente se realiza los siguientes pasos: • Prender el aparato y esperar que caliente. • Llevar el aparato a 0 de absorbancia ó 100 ( de Transmitancía, utilizando como “blanco” una
cubeta con agua destilada o con reactivo solo. • Depositar en otra cubeta la solución problema y colocar en lugar de la cubeta “ blanca”.
• Observar el desplazamiento del indicador del medidor y anotar la absorbancia o transmitancia
señalada.
8. POTENCIÓMETRO Se les utiliza para medir el pH de las soluciones buffer y medios de cultivo. Constituido de un par de electrodos sensibles a concentraciones de hidrogeniones, conectado a un potenciómetro que indique las mediciones. Los potenciómetros emplean un electrodo de vidrio, unido a un electrodo de calomel como estándar El electrodo de vidrio varía con los cambios de pH de la solución problema debe tenerse extremo cuidado con el manejo de electrodos, especialmente con la membrana del electrodo de vidrio que es muy delicado y se rompe al primer contacto con punzo cortantes. El electrodo de calomel debe estar siempre lleno de solución adecuada de sal (usualmente cloruro potásico saturado). Luego de cada medición deben lavarse los electrodos y sumergirlos en agua cuando no se use el aparato.
9. REFRIGERADORAS Y CONGELADORAS Son incubadoras de temperaturas frías. Se requiere para almacenar medios de cultivo, sueros y reactivos perecederos. Las congeladoras se requieren para almacenamientos más prolongados de sueros, enzimas, etc. Deben localizarse lejos de los hornos de aire caliente, de radiadores de tuberías de agua caliente.
10. BALANZAS.- Suele usarse balanzas de dos platillos para contrapesar tubos o para pesos groseros, cuando se realizan determinaciones finas se utiliza la balanza analítica, que puede ser mecánica o eléctrica. MANEJO.- Seguir estrictamente las instrucciones de cada fabricante, tener sumo cuidado para no alterar la precisión de estos delicados aparatos, debiendo evitar vibraciones, suciedades por restos de reactivos y siempre desconectar la balanza después de cada pesada.
11. MECHEROS.- Existen dos modelos clásicos: • El mechero de alcohol, que consiste en un depósito de alcohol con una mecha y su tapa para
apagar, es portátil, práctico, pero produce una llama sólo de moderada intensidad.
• El mechero de Bunsen, consiste en un tubo metálico en cuyo base presenta una ruedecilla que
gradúa la entrada del gas, el cual llega al mechero a través de una manguerilla conectada a un fuente de gas tiene la ventaja de producir una llama azulada y potente. 12. TUBOS DE ENSAYO.- Existe una gran variedad, pero deben ser de vidrio neutro, paredes gruesas de preferencia sin rebordes para facilitar el taponamiento. Para pruebas serológicas, tubos con tapa rosca o tapones de goma. Se usan de 13 x 100 mm y de l0 x 75 mm. Para cultivos microbianos puros y para diluciones de análisis cuantitativos se usan de 16 x 150 mm. y de 15 x l25 mm. Para hemólisis, estudios de fermentación y caracteres de cultivos bioquímicos se usan de 13 x l00mm. 13. LÁMINAS Y LAMINILLAS.- Las láminas portaobjetos miden 3 pulgadas de largo por 1 pulgada de ancho (76 x 26 mm) y pueden tener los extremos biselados. Las Laminillas cubreobjetos son cuadrados de vidrio delgada y existen de diversos tamaños, las más usados son de 18 x 18 mm y 22 x 22 mm. 14. MATRACES.- Son recipientes que tienen un cuello y un cuerpo que de acuerdo a este último se clasifica en: • Cónicos (Erlenmeyer), tiene graduaciones, pero la capacidad total indicada solo es
aproximadamente. • Redondos.- Pueden ser de fondo plano o redondo, tiene una marca en el cuello (aforo) que
indica con exactitud la capacidad total. 15. PLACAS PETRI.- Son recipientes planos de forma circular con rebordes elevados y tapa, que sirven para colocar medios de cultivo sólidos o muestras. 16. FRASCOS GOTEROS.- Son frascos transparentes o de color ámbar, con tapa la cual presenta una ranura que sirve de gotero. Se utiliza para colocar reactivos o colorantes. 17. PROBETAS.- Instrumento de Laboratorio que se utiliza, sobre todo en análisis químico, para contener o medir volúmenes de líquidos de una forma aproximada, es un recipiente cilíndrico con una base ancha, que generalmente lleva en la parte superior un pico para verter el líquido con mayor facilidad. Las probetas suelen ser graduadas, es decir, llevan grabada una escala por la parte exterior, que permite medir un determinado volumen, aunque sin mucha exactitud. Hay de capacidades de 10 ml hasta 2,000 ml. Las más utilizadas son las de 100, 250, 500 y 1000 ml.
18. BEKER.- Su forma es cilíndrica de boca ancha y con pico para verter líquidos presenta una graduación aproximada.
19. PIPETAS.- Existen de diversos tamaños y medidas de acuerdo al modo de utilización pueden ser: • Las que tienen las abreviaciones TC (To.Container) contienen de terminado volumen, pero al
vaciar no suministra todo el líquido, porque parte de éste queda adherida a las paredes de la pipeta. • Las que tienen las letras T.D (To Deliver) al vaciar la pipeta suministrará todo el volumen
especificado, quedando siempre líquido adherido a la pared y en la punta. • Se utilizan de dos tipos:
Volumétricas de Transferencia: Sólo tienen una graduación indicadora que su capacidad total y únicamente deben emplearse para la transferencia a medida del volumen correspondiente. Presentan una dilatación bulbosa central con una marca de aforamiento conocida, en el extremo próximal angosto de la pipeta, se les llama también pipetas de bola. Las medidas más conocidas son de 10, 25,50 y l00ml. Serológicas o de medida: Con subdivisiones de su capacidad total, se calibran en ml a 20°C. las más conocidas son PYREX, NORMAX, EXAX, CORNING, IVA, etc. Las pipetas NORMAX se usan para trabajos de precisión, son contrastadas una por una por la Oficina Nacional de Patrones en Norteamérica y tienen las siglas NBS y año de control de la pipeta. Por ejemplo una pipeta NORMAX serológica de 1ml de capacidad tiene un error tolerable de 0.01 (1 %), mientras que una pipeta PYREX del mismo volumen tiene un ET de 0.02 (2 %). Para medir un volumen determinado de líquido es preferible y más exacto elegir una pipeta de capacidad idéntica al volumen que pretendemos medir, que escoger una de capacidad inferior y realizar múltiples medidas. Estas pipetas son terminales y con capacidad de 0.1 a 25ml. y las de mayor uso son: Pipetas de 10 ml – 0.1 ml
para medir líquidos
Pipetas de 5ml - 0.1ml
pequeños volúmenes
Pipetas de l ml –0.1 y 0.01 ml Pipetas de 0.1 ml - 0.1 y 0.001 ml Pipetas de Dham de 0.125 - 0.0125 ml Pipetas de Dham de 0.250 - 0.0250 ml Pipetas de Bang de 0.2 - 0.08 - 0.005 ml
Para serología
