MANEJO DE LAS CAJAS DE PETRI EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA
Integrantes: Irina Teherán Rubén Lara Cristian Mendoza Wendy Castro Rocío Gómez Yeris Imitola
Introducción
La gente más feliz, no necesariamente tiene lo mejor de todo; simplemente disfrutan al máximo de todo lo que está en su camino.
GENERALIDADES Cápsula formada por dos discos de cristal que pueden adaptarse entre sí. En el disco que forma el fondo de la caja se deposita el agar y el conjunto puede ser ser fác fácilmente esterilizado, sembrado y colocado en la estufa. La caja de Pétri, se utiliza generalmente para la separación de los microbios cuyas colonias se desarrollan aisladamente y pueden ser estu estudia diada das s con con facil facilida idad. d.
HISTORIA
En 1881 Koch ideo un método para para repr reprod oduc ucir ir bact bacter eria ias s en un medio de cultivo sólido hecho con gelatina, e introdujo el método de la placa para aseg asegur urar ar cult cultiv ivos os pur puros. os. El uso uso de un medio sólido fue una idea nueva, ya que hasta esa época se habían empleado casi exclusivamente infus nfusiiones nes veget egetal ales es y otros tros líquidos, líquidos , lo que facilito la obt obtención ión de cultiv ltivo os puros de bacterias para su estudio ind indivi ividual. Para ara los cultiv ltivos os en placa empleamos una cajita de vidrio llamada cápsula o caj caja de Petri intr ntroducida por Petri, Petri, uno de los ayudantes de Koch Koch dura durant nte e 1887 1887..
UTILIDAD Es utilizada para preparar cultivos de hongos, virus y bacterias, y también para seleccionar mue muestr stras de animal males o alime liment ntos os.. Existen de 2 tipos las plasticas y las de cristal
Plásticas: desechables estériles
y
son vienen
Cristal: son reutilizables pero nuevas y/o usadas deben pasar por un proceso desinfección y esterilización antes de ser ser usad usadas as..
Material
de Vidrio:
Generalmente el
vidrio es de borosolicato, PYREX Y KIMAX
Y de aluminosilicato, vidrio COREX
PYREX Y KIMAX
Resiste todas la temperaturas de trabajo en el laboratorio de rutina Altamente resistente a los ataques químicos Tiene un alto punto de tensión, y le impide daños por acción del calor.
Bajo coeficiente de expansión lineal ( alrededor de 3 x 10 6 º Celsius), lo cual significa un pequeño cambio de volumen al cambiar de temperaturas y le da mayor fuerza mecánica
COREX
Además de las propiedades del Pirex y Kimax, el vidrio COREX presenta la ventaja de mayor resistencia mecánica: es más resistente al rayado , la rotura y oscurecimiento causado por los álcalis.
LIMPIEZA Y DESINFECCION
Material
de Vidrio:
Limpieza del Material de Vidrio:
NO OLVIDE NUNCA QUE:
El material nuevo de vidrio, que aún no ha sido utilizado, debe lavarse con solución detergente, enjuagarlo con abundante agua corriente y finalmente con agua destilada.
Todo material proveniente de procedimientos de laboratorio es potencialmente infectante. El material de vidrio debe estar químicamente limpio y libre de contaminación y residuos de grasas o detergentes
Limpieza del Material de Vidrio:
Es importante que el material de vidrio se encuentre totalmente limpio antes de usarlo para análisis o para calibrarlo. Debe permitir cuando se encuentra limpio que la superficie se humedezca uniformemente, y que el agua se adhiera a la superficie del vidrio en capa continua.
Limpieza del Material de Vidrio:
Hay varios métodos para limpiar el material de vidrio del laboratorio, el mas utilizado es la de ácido sulfúrico y dicromato de potasio sódico. También se pueden utilizar para lavado de material de vidrio: Ácido nítrico al 20% durante 12 horas ( material para mediciones de iones como sodio, potasio, calcio y hierro), ácido sulfúrico, alcohol y agua desionizada. La elección del agente limpiador depende de la naturaleza del contaminante.
Limpieza del Material de Vidrio:
Material que se va a usa por primera vez, material manchado, grasoso o pipetas con coágulos de sangre se debe pasar por una mezcla Sulfocrómica, si se necesita de urgencia debe dejarse por lo menos una hora, de lo contrario 12 horas. Enjuagar con agua del chorro y pasar por agua destilada.
Limpieza del Material de Vidrio: Mezcla
Sulfocrómica: Medir 500 ml de agua destilada en erlenmeyer de un litro Añadir lentamente con agitación constante 250 ml de ácido sulfúrico concentrado Sumergir el erlenmeyer en un recipiente que contenga agua corriente para enfriar el contenido Agregar 100 g de dicromato de potasio y mezclar hasta disolver Aforar a un litro con agua destilada
Material
de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio:
DESCONTAMINACIÓN: Es un procedimiento que remueve microorganismos patógenos de los objetos, dejándolos seguros para su manipulación. Se realiza utilizando el hipoclorito de sodio o dicloroisocianurato de sodio según sea el caso. Se emplea jabón enzimático.
Material
de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio:
LIMPIEZ A: Es la remoción de toda materia extraña ( suciedad, materia orgánica, etc) de los objetos o las superficies; usualmente es realizada con agua y detergente enzimático para los equipos, instrumental o elementos. El detergente común se usa para superficies como paredes, pisos, etc. Esta siempre debe proceder a los procesos de desinfección.
Material
de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio:
LIMPIEZ A: Detergente: Agente químico utilizado para la eliminación de suciedad . Debe eliminar la suciedad orgánica e inorgánica, no producir daño en los equipos, no dejar residuos ( facilidad de enjuague) y no ser tóxico para el personal que lo manipula. Detergente Enzimático: Detergente que contiene enzimas proteolíticas que disuelven la materia orgánica; preferiblemente de pH neutro, disminuyendo la posibilidad de corrosión y picado. Se utiliza para pre-remojo del instrumental, evitando la manipulación del material contaminado por parte del operario. Biodegradable y no iónico al 2% ( extran, tween )
Material
de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio:
LIMPIEZ A: Después de haber mantenido el material en la disolución limpiante lavar totalmente con agua del grifo lavar finalmente con agua destilada. si es material para contener como los vasos de precipitados, finalmente debe lavarse con alcohol etílico.
Material
de vidrio para análisis físicoquímico en el laboratorio:
L A V ADO DE RECIPIENTES:
Debe adicionarse suficiente solución limpiadora y girarlo varias veces, para que una capa de disolución cubra todo el interior, cualquier ruptura en la capa indica un lugar de contaminación.
PROTOCOLO DE DESINFECCION Y LAVADO DE MATERIAL CONTAMINADO EN EL LABORATORIO
Material
de Vidrio
Protocolo de Desinfección y Lavado Contaminado en el Laboratorio
DESINFECCIÓN: Es un proceso que elimina todos los microorganismos de los objetos o superficies con excepción de las esporas bacterianas. Se realiza utilizando un agente desinfectante. Los mas usados son yodóforos, aldehídos, clorados, alcoholes y peroxígenos
de Material
Protocolo de Desinfección y Lavado Contaminado en el Laboratorio
GERMICIDA
CONCEN TRACION
NIVEL ACCION
BACT
Alcohol etílico
50-75%
Interm ed
Peróxido de hidrogeno
3-25%
For maldehído
3-8%
de Material
VIRU LIPO
VIRU HIDRO
TBC
GOS
ESPO RAS
Si
Si
No
Si
Si
No
Alto
Si
Si
Si
Si
Si
Si
Alto
Si
Si
Si
Si
Si
Si
HON
Inter med Amonios
0.4-1.6% acuoso
Bajo
Si
Si
No
No
Si
No
Fenólicos
0.4-5% acuoso
Inter med Bajo
Si
Si
Si
No
Si
No
Cloro y derivados
100-10.000 ppm
Inter md
Si
Si
Si
Si
Si
No
30-50 pp m yodo libre
Inter med
Si
Si
Si
Si
Si
No
Alto
si
si
Si
Si
Si
Si
cuaternarios
Yodóforos Glutaraldehído
2%
Protocolo de Desinfección y Lavado Contaminado en el Laboratorio
de Material
DESINFECCIÓN: Prepare diariamente una solución de hipoclorito de sodio a 500 PPM, para el lavado de material así: 5 cc de límpido comercial (hipoclorito de sodio 5%) 500 cc de agua del chorro Utilícela para descartar el material y para descontaminar el material biológico (muestras) Deje actuar hasta el día siguiente ( mínimo dos horas) Esta solución se debe renovar todos los días, porque es desactivada por acción de la luz directa. Produce vapores tóxicos al incinerar los residuos infecciosos, cuando a sido agregada a estos
Protocolo de Desinfección y Lavado Contaminado en el Laboratorio
de Material
Ejemplo: Si deseamos preparar un litro de solución a una concentración de 5000 ppm y el hipoclorito viene en concentración del 5% sería: ( 1 litro) x 5000 ppm = 100 cc de hipoclorito 5 x 10 Si la concentración del cloro cambia sea 6%, 13% u otra simplemente cambie en la formula la concentración x= ( 1 litro) x 5.000 ppm = 38.46 cc de hipoclorito 13 x 10
Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio
Preparación:
Medir con probeta plástica los 100 cc de hipoclorito Agregar el hipoclorito al recipiente en el cual se va a preparar. Añadir agua hasta completar el volumen de solución a preparar. El recipiente usado debe tener una capacidad superior a la que se va a preparar.
Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio
Compuestos yodóforos: Son líquidos de acción contra virus, hongos y bacterias con un tiempo de contacto de 30 minutos. No tiene acción sobre esporas bacterianas. Desinfectante de nivel intermedio. Los más usados son yodopovidona en solución o jabón al 2,5% y yodo polietoxipolipropoxietanol. Desinfectar unidades y quirófanos, elementos no críticos.
Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio
ESTERILIZ ACION: Se hace con el fin de destruir, todos los microorganismos, tanto en medio de cultivo, como en recipiente o instrumentos.
Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio
ESTERILIZ ACIÓN: El material que amerite autoclavado por alta contaminación someterlo: a 121ºC, 15 libras de presión por 20 minutos.
Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio
ESTERILIZ ACIÓN: La central de Esterilización debe cumplir con: Recepción del material Lavado Secado Inspección Lubricación Empaque Procesamiento Almacenamiento materiales estériles Almacenamiento materiales no estériles
Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio
Una vez descontaminado el material deje en agua con jabón líquido neutro , lave con cepillo y asa de pipetas tubos o probetas; las láminas y laminillas deben ser enjuagadas con el cepillo respectivo o esponjilla ( este material no debe ser lavado más de 5 veces, después debe descartarse). Saque el agua de jabón con abundante agua del chorro y finalmente deje en agua destilada para extraer los residuos de jabón. Las láminas y laminillas sumergirlas en alcohol etílico y secar con tela que no deje escapar lanilla.
Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio
Los tubos y demás material de vidrio dejelos secar al aire, luego clasificar y colocar en sus respectivos puestos . Al material biológico de descarte adicionar hipoclorito a 500 PPM y descartar al día siguiente en las bolsas rojas que serán enviadas a incineración, mientras es recogida por la ruta de recolección, mantener en canecas con tapa hermética, para evitar sean regadas por animales, roedores o insectos en la central de aseo y residuos.
Protocolo de Desinfección y Lavado de Material Contaminado en el Laboratorio
En el laboratorio clínico, de aguas y alimentos, se hace diariamente una limpieza, para remover la suciedad o mugre y posteriormente una sanitización ( proceso de desinfección eficiente) para esto se utiliza un detergente eficaz, biodegradable y agua de buena calidad. La desinfección se hace con el objeto de destruir microorganismos patógenos, toxigénicos y saprofíticos.
Material del Laboratorio Microbiología
de
LIMPIEZ A DE MATERI AL DE VIDRIO:
El material de vidrio que contenga cultivos o cualquier otro tipo de material contaminado por microorganismos, es colocado en un recipiente de descarte para llevarlo a desinfección y posterior esterilización cuando así lo amerite. Luego se lava con agua corriente, se sumerge en solución detergente neutra y utilizando una esponjilla o cepillo de cerdas suaves se lava nuevamente con agua corriente, se deja escurrir y se seca al horno en calor seco, 200 ºC por 1 a 2 horas, según el volumen de material.
Material del Laboratorio Microbiología
de
El material de vidrio o cualquier otro material contaminado con microorganismos, es colocado en un recipiente para llevarlo al autoclave para su esterilización 121 º C por 30 minutos. Lavar con agua corriente, Luego se sumerge en solución detergente y posteriormente se lava normalmente con agua del chorro y una esponjilla, se deja escurrir y se seca en calor seco (horno).
Material del Laboratorio Microbiología
de
Las pipetas después de su uso, se colocan en un recipiente con solución de hipoclorito de sodio, 1 g/L de cloro libre( 1.000 ppm), se lavan con abundante agua del chorro, se enjuagan con agua destilada, se escurren, se secan en un ambiente de calor seco.
Material del Laboratorio Microbiología
de
ESTERILIZ ACION POR CALOR SECO: Se utiliza el flameado por mechero, para esterilizar asas resistentes al fuego. El horno de aire caliente, que se utiliza para esterilizar el material de vidrio y frascos para toma de muestras utiliza una temperatura de 170 º C por dos horas.
Material del Laboratorio Microbiología
de
ESTERILIZ ACION EN CALOR HÚMEDO Envolver el material en papel de esterilización (papel kraft), se sella con cinta de enmascarar para esterilización y se lleva al autoclave a 121·C por 15 a 20 minutos a 15 a 20 libras de presión. Se coloca un Indicador ya sea Químico ( Cinta Indicadora para vapor, Integradores químicos, Cinta Indicadora para Oxido de Etileno) o Biológico ( tiras con esporas específicas: Bacillus stearothermophilus ( vapor), B. subtilis ( oxido Etileno). Se usa para medios de cultivo y materiales
Material del Laboratorio Microbiología
de
ESTERILIZ ACION POR MEDIOS QUIMICOS:
Se utiliza hipoclorito de sodio al 5 %, a una concentración de 1.000 ppm de cloro libre, que es efectivo contra células bacterianas, vegetativas, esporuladas, virus, hongos y parásitos. Se utiliza para limpieza de los mesones, antes y después de trabajar, para limpiar paredes y pisos y para sumergir el material sucio antes de esterilizar, los mesones también son limpiados con fenol al 1 % o formol al 4%.
Material del Laboratorio Microbiología CARACTERÍSTIC
VAPOR
CALOR SECO
de PLASMA
OXIDO DE ETILENO
GAS DE FORMALDEHIDO
Qué
Líquidos
Artículos de
Elementos
Elementos
Elementos
esterilizar?
hidrosolubles, equipos metálicos e instrumental, material de caucho y material textil.
vidrio, instrumental delicado con bordes de corte.
sensibles al calor.
sensibles al calor.
sensibles al calor.
Qué no
Material
Telas y Siliconas
Artículos
esterilizar?
Telas y materiales de
Materiales que
ter mosensible.
caucho, material ter mosensible.
contengan celulosa: papel, tela, compresas, madera. No líquidos y polvos. Esterilización de canales largos y angostos como lúmenes, canales ciegos
porosos: papel, tela, compresas, líquidos. Polvos, silicona.
Material del Laboratorio Microbiología CARACTERÍST
VAPOR
CALOR SECO
PLASMA
OXIDO DE ETILENO
GAS DE FORMALDEHID
Tyvek/Mylar y
Kraf blanco, polietileno, Tyvek/Mylar, polipropileno no tejido
Kraf blanco, polietileno, Tyvek/Mylar, polipropileno no tejido
Proceso 6 horas.
8 horas a 65*C
Tipo de Empaque
Algodón, kraf
Tiempo y Temperatura
15 min a 121 *C
30 min a 180*C
10 min a 126*C
1 hora a 170*C
45 min a 50*C( 50Lt)
3 min a 134 *C ( solo en caso de urgencia)
2 horas a 160*C
75 min (100 Lt)
Aireamiento
2,5 horas a 150*C
54 min (100 Lt).
10 horas.
3 horas a 140*C
Temperatura
6 horas a 120*C
Ciclo corto: cargas que no contienen endoscopios flexibles
Cinta indicadora para Calor Seco ( en el exterior del paquete)
Cinta Indicadora para Plasma ( en el exterior del paquete)
Cinta Indicadora para Oxido de Etileno ( en el exterior del paquete)
Indicador químico
aluminio
de
blanco, polipropileno no tejido
Cinta indicadora para Vapor ( en el exterior del paquete)
polipropilen no tejido
entre 38*C y 55*C. Cinta Indicadora para For maldehído ( en el exterior del paquete)
Material del Laboratorio Microbiología CARACTERÍST
VAPOR
Indicador químico
Integrador químico Vapor ( interior del paquete)
Indicador
Test de Esporas de Bacillus stearothermophilus
biológico
( una vez al día en una carga aleatoria)
CALOR SECO
Test de Esporas de Bacillus subtilis variedad niger ( una vez al día en una carga aleatoria)
de
PLASMA
OXIDO DE ETILENO
GAS DE FORMALDEHID
Integrador Químico Plasma ( interior del paquete)
Integrador químico Oxido de Etileno ( interior del paquete)
Integrador químico Formaldehído ( interior del paquete)
Test de Esporas de Bacillus stearothermophilus
Test de Esporas Bacillus subtilis variedad niger ( una vez al día en una carga aleatoria)
Test de Esporas de Bacillus stearothermopilus (una vez al día en una carga aleatoria)
( una vez al día en una carga aleatoria)
Material del Laboratorio Microbiología
de
DESECHO DE MATERI AL DE CULTIVO
Cajas de Petri, tubos con solución salina, medios
Cuando? Que usa?
líquidos de cultivo
Diariamente Hipoclorito de sodio 5000 ppm
Recipientes para descartar el material
Elementos de protección personal
Material del Laboratorio Microbiología
de
DESECHO DE MATERI AL DE CULTIVO
Esterilizar en el autoclave a 121*C por 1 hora Medios de cultivo de las cajas de petri: desechar en la bolsa roja marcada ³peligroso infeccioso´ Solución salina y tioglicolato: desecharlos en el sifón Depositar los tubos en solución de hipoclorito a 5000 ppm durante 30 minutos Lavar los tubos según las indicaciones del lavado de material de vidrio.
Calidad del material de vidrio
PRUEB AS LIMPIEZ A PAR A MATERI AL VIDRIO:
DE EL DE
Prueba de limpieza
Los vasos sucios generalmente tienen gotas de agua en la superficie interna.
Prueba de limpieza
Observamos si el material de vidrio está
cubierto por una capa continua de agua que no for ma goticas en las paredes ni fluye de manera discontinua.
La for ma más simple es llenar el material
de vidrio con agua destilada ± desionizada y vaciarla.
Prueba de limpieza
Otra forma de controlar la calidad del lavado del material de vidrio es la presencia de manchas de agua dentro y fuera del vaso o tubo de ensayo. Estas manchas podrían originarse a partir del lavado inadecuado del material con agua dura, que produce manchas blanquecinas en las paredes al secarse.
Prueba de limpieza
El auxiliar del laboratorio como parte integrante del sistema de garantía de calidad, debe analizar algunos materiales al azar, por lo menos una vez a la semana para detectar restos de detergentes y debe registrar el resultado de esta supervisión, el cual debe ser avalado por el jefe directo o de la sección.
Prueba de limpieza
Cuando se advierte restos de detergentes en cualquiera de los materiales de vidrio deben tomarse las precauciones y ejercer los procedimientos de corrección de inmediato. Revisar la calidad del detergente o del agua y prolongar el tiempo de enjuague con agua del chorro y destilada posterior al proceso de limpieza.
Prueba de limpieza
La eliminación del detergente puede comprobarse con una solucion de: 2mg de sulfobromoftaleina sódica BSP en 10 ml de agua destilada O a 20 ml de agua desionizada agregar dos gotas de BSP
la disolución puede hacerse en un recipiente y ser usada para lavar las paredes internas y externas del material de vidrio seleccionado. La aparición de un color rosa ( púrpura) en cualquier momento indica la presencia de detergente residual.
Que
Dios los tenga en la palma de su mano Y que los Ángeles los cuiden siempre.
