MAKALAH KIMIA FARMASI ANALISIS I ELEKTROFORESIS
Disusun Oleh : KELOMPOK 17
Feni afriani
151650044
Laila Dw Dwi Anggraini
151650061
SEKOLAH TINGGI ILMU KESEHATAN (STIKes) KHARISMA PERSADA D III FARMASI
Jl. Padjajaran, Pamulang Barat, Tangerang Tangerang Selatan Tane!an Sela"an #$1%
&A& I PENDAHULUAN
A' La"a! &elaan
et!de "emi#a$an meru"a%an a#"e% "enting dalam &idang ilmu %imia %arena %e&an'a%an materi 'ang terda"at dialam da"at &eru"a (am"uran. )ntu% mem"er!le$ materi murni dari #uatu (am"uran , %ita $aru# mela%u%an #uatu "emi#a$an. Ber&agai te%ni% "emi#a$an da"at ditera"%an untu% memi#a$%an (am"uran . Seiring dengan %emajuan *aman 'ang #ema%in "e#at di negara+negara &er%erm&ang a%an #elalu dii%uti "ula dengan %emajuan ilmu "engeta$uan 'ang #ema%in mara% di &idang te%n!l!gi. Sala$ #atu diantaran'a adala$ "engem&angan di &idang Bi!l!gi !le%uler. Bidang ilmu "engeta$uan Bi!l!gi !le%uler ini tela$ dimulai "ada a%$ir a&ad %e 1, #etela$ rnet!de ele%tr!f!re#i# ditemu%an dan di"a%ai untu% menganali#a &er&agai %egiatan "enelitian di &idang -imia, Bi!l!gi /eneti%a, Ta%#!n!mi dan Bi!+#i#temati%. ing%a#n'a met!de ele%tr!f!re#i# ini mulai &er%em&ang a%$ir a&ad %e 1 #etela$ ditemu%an "enelitian 'ang menunju%%an adan'a efe% dari li#tri% ter$ada" "arti%el+"arti%el atau m!le%ul+m!le%ul 'ang &ermuatan li#tri%, dalam $a1 ini terma#u% juga "r!tein P!rnet, 2uin(%e, 3ard'. dalam i($ard#!n dkk, 16. menurut "a##teur dkk. 1 ele%tr!f!re#i# &era#al dari &a$a#a Junani 'angmem"un'ai arti tran#"!rt atau "er"inda$an melalui "arti%el+ "arti%el li#tri%. Pemi#a$an ele%tr!f!re#i# "ertama diter&it%an "ada ta$un 10 !le$ ilmuwan Swedia Arne Ti#eliu#. ia memi#a$%an "r!tein #erum #e#uai dengan ($anrge mere%a dalam
ta&ung
&er&entu%
u
dii#i
dengan
&uffer.
a((!m"li#$ment#.Ti#eliu# dianugera$i $adia$ n!&el
untu%
ini
"ada ta$un
dan
lainn'a
14.
3ari
ele%tr!f!re#i# ter&entu% &ai% "ada gel #la& atau #la& gel ele%tr!f!re#i# di%em&ang%an "ada ta$un 150 dan #eja% itu menjadi te%ni% #tandar 'ang diguna%an di la&!rat!rium &i!%imia. ele%tr!f!re#i# a"ilar' di%em&ang%an le&i$ &aru "ada 10+an. 7 da"at dengan muda$ !t!mati# dan #e%arang meru"a%an met!de 'ang &er%em&ang #angat (e"at dalam dunia a%ademi# dan indu#tri . &an'a% m!du# 'ang &er&eda ele%tr!f!re#i# tela$ di%em&ang%an untu% dila%u%an &ai% dalam gel dan (a"ilarie#. f!%u# di #ini adala$ #et "ada te%ni% 'ang #ering diguna%an untu% anali#i# D8A dan "r!tein.
&' Tuuan
1. engeta$ui "engertian dam jeni#+jeni# ele%tr!f!re#i# 9. engeta$ui "enga"li%a#ian ele%tr!f!re#i#. . engeta$ui (ara "er$itungan ele%tr!f!re#i#.
&A& II TIN*AUAN PUSTAKA
A. Pene!"ian ele"!+,+!esis 7le%tr!f!re#i# &era#al dari &a$a#a :unani 'ang mem"un'ai arti tran#"!rt atau "er"inda$an melalui "arti%el+"arti%el li#tri%. et!de ele%tr!f!re#i# tela$ diguna%an dan di%em&ang%an dalam te%ni% anali#a untu% "enelitian di &idang &i!l!gi dan geneti%a.et!de ter#e&ut &er%em&ang #angat "e#at #e%ali di *aman %emajuan te%n!l!gi, di#e&a&%an %arena "engerjaann'a 'ang #angat #eder$ana dan #angat muda$.Didalam ilmu &i!l!gi mau"un &i!l!gi m!le(ular, met!de ele%tr!f!re#i# &an'a% diguna%an untu% ta%#!n!mi, #i#temati%, dan geneti( dari $ewan atau"un tum&u$an. et!de "emi#a$an ele%tr!f!re#i# dida#ar%an "ada intera%#i "arti%el+"arti%el &ermuatan !le$ medan li#tri%. Parti%el &ermuatan li#tri% negatiaf a%an &ergera% %e%utu& "!#itif an!da. Se&ali%n'a , "arti%el &ermuatan li#tri% "!#itif a%an &ergera% %e%utu& negati;e %at!da. Sementara "arti%el netral tida% &ergera% . Jadi medan li#tri% men'e&a&%an "emi#a$an "ada met!de el%tr!f!re#i#. Sumar 3enda'ana, P$.D, 9006 Te%ni% ini da"at diguna%an dengan memanfaat%an muatan li#tri% 'ang ada "ada ma%r!m!le%ul, mi#aln'a D8A 'ang &ermuatan negatif. Ji%a m!le%ul 'ang &ermuatan negatif dilewat%an melalui #uatu medium, %emudian dialiri aru# li#tri% dari #uatu %utu& %e %utu& 'ang &erlawanan muatann'a ma%a m!le%ul ter#e&ut a%an &ergera% dari %utu& negatif %e %utu& "!#itif. -e(e"atan gera% m!le%ul ter#e&ut tergantung "ada muatan ter$ada" ma##an'a #erta tergantung "ula "ada &entu% m!le%uln'a. Pergera%an ini da"at dijela#%an dengan ga'a L!rent*, 'ang ter%ait dengan #ifat+#ifat da#ar
ele%tri# &a$an 'ang diamati
dan %!ndi#i
ele%tri#
ling%ungani(ard#!n dkk. 16< F adala$ ga'a L!rent*, = adala$ muatan 'ang di&awa !le$ !&je%, 7 adala$ medan
li#tri%.Se(ara
umum,
ele%tr!f!re#i#
diguna%an
untu%
memi#a$%an,
mengidentifi%a#i, dan memurni%an fragmen D8A. enurut Titrawani 16 e%tr!f!re#i# adala$ #uatu (ara anali#i# %imiawi 'ang dida#ar%an "ada "ergera%an m!le%ul+m!le%ul "r!tein &ermuatan di dalam medan li#tri% titi% i#!ele%tri%. Pergera%an m!le%ul dalam medan li#tri% di"engaru$i !le$ &entu%, u%uran, &e#ar muatan dan #ifat %imia dari m!le%ul. enurut i(ard#!n d%% 16 Pemi#a$an dila%u%an &erda#ar%an "er&edaan u%uran &erat m!le%ul dan muatan li#tri% 'ang
di%andung !le$ ma%r!+m!le%ul ter#e&ut. Bila aru# li#tri% dialir%an "ada #uatu medium "en'angga 'ang tela$ &eri#i "r!tein "la#ma ma%a %!m"!nen+ %!m"!nen "r!tein ter#e&ut a%an mulai &ermigra#i i(ard#!ndkk. 16. Per"inda$an "arti%el &ermuatan dalam %erta# tergantung "ada tanda dan &e#arn'a muatan "ada *at terlarut, "ermu%aan, muatan, tegangan 'ang diguna%an, %!n#entra#i ele%r!lit, %uat i!n, "3, tem"eratur, ;i#%!#ita#, ad#!rti;ita# *at terlarut dan #ifat+#ifat fi#i%a %imia lainn'a medium migra#i.>!n 'ang &er"inda$ "ada #uatu ara$ juga mem"engaru$i m!&ilita# i!n+i!n lain 'ang &ergera% "ada ara$ 'ang &erlawanan. &' *enis - *enis Ele"!+,+!esis
et!de ele%tr!f!re#i# meru"a%an #ala$ #atu met!de "emi#a$an %!n;en#i!nal 'ang tela$ mengalami "er%em&angan te%ni% dan met!de 'ang le&i$ (anggi$ atau m!dern #e&agai "en'em"urnaan dari met!de %!in;en#i!nal 'ang #e&elumn'a. Ada"un jeni#+jeni# ele%tr!f!re#i# 'ang di%enal 9 dua %el!m"!% te%ni% ele%tr!f!re#i#, 'aitu< a. Tan"a ada "engem&an "adat atau matri%# 7le%tr!f!re#i# la"i#an gera% ? m!;ing &!undar' i#aln'a 7le%tr!f!re#i# Ti#eliu# dimana "enentuan m!&ilita# dan titi% i#!ele%tri% #uatu "r!tein.!le%ul "r!tein 'ang di#elidi%i ada di#eluru$ larutan dan "!#i#in'a #e&agai fung#i wa%tu.-e%urangan dari alat ini adala$ ma$al dan "emamfaatan %urang. &. Dengan "engem&an "adat atau matri%# #e"erti< 1. 7le%tr!f!re#i# -erta# 9. 7le%tr!f!re#i# gel . 7le%tr!f!re#i# %a"iler
1' Ele"!+,+!esis e!"as
7le%tr!f!re#i# %erta# adala$ jeni# ele%tr!f!re#i# 'ang terdiri dari %erta# #e&agai fa#e diam dan "arti%el &ermuatan 'ang terlarut #e&agai fa#e gera%, terutama i!n+ i!n %!m"le%#.Pemi#a$an ini terjadi a%i&at adan'a grada#i %!n#entra#i #e"anjang #i#tem "emi#a$an. Pergera%an "arti%el dalam %erta# tergantung "ada muatan atau ;alen#i *at terlarut, lua# "enam"ang, tegangan 'ang diguna%an, %!n#entra#i ele%tr!lit, %e%uatan i!n, "3, ;i#%!#ita#, dan ad#!r&#i;ita# *at terlarut.
Te%ni% "emi#a$an D8A?8A &erawal dari #e%el!m"!% ilmuwan &i!%imia di awal ta$un 150+an 'ang #edang meneliti me%ani#me m!le%ular D8A?8A $idr!li#i#. Saat itu, te"atn'a ta$un 159, ar%$am dan Smit$ mem"u&li%a#i%an &a$wa $idr!li#i# 8A terjadi melalui me%ani#me "em&entu%an *at antara intermediate "!#fat #i%li%, 'ang %emudian meng$a#il%an nu%le!#ida 9@ + m!n!"!#fat dan @ +m!n!"!#fat . Tern'ata mere%a mengguna%an #uatu "eralatan 'ang da"at memi#a$%an %!m"!nen (am"uran rea%#i $idr!li#i# tadi, #ala$ #atun'a 'aitu nu%le!tida #i%li% 'ang mem&awa "ada %e#im"ulan &a$wa $idr!li#i# 8A terjadi melalui "em&entu%an intermediate "!#fat #i%li%. Peralatan itu dinama%an ele%tr!f!re#i#, 'ang di&uat dari %erta# #aring C$atman n!m!r , #e&ua$ tang%i %e(il dan &er&agai larutan "en'angga &uffer . 8u%le!tida 'ang #uda$ ter$idr!li#i# ditaru$ di ata# %erta# #aring, %emudian aru# li#tri% dialir%an melalui %edua ujung alat ele%tr!f!re#i#. Aru# li#tri% 'ang dialir%an ini tern'ata da"at memi#a$%an (am"uran %!m"le%# rea%#i tadi menjadi %!m"!nen+%!m"!nenn'a, ini a%i&at adan'a "er&edaan min!r antara #tru%tur m!le%ul 8A 'ang &elum ter$idr!li#i#, *at antara intermediate dan $a#il rea%#i nu%le!#ida 9@ +m!n!"!#fat dan nu%le!#ida @ +m!n!"!#fat 'ang men'e&a&%an m!&ilita# alia# "ergera%an mere%a "ada %erta# #aring &er&eda+&eda %e(e"atann'a. -arena "ada a%$ir "r!#e# ele%tr!f!re#i# %!m"!nen
ter#e&ut
ter"i#a$+"i#a$,
#e$ingga
da"at
mengi#!la#i
dan
mengidentifi%a#i #etia" %!m"!nen ter#e&ut. -ele&i$an 7le%tr!f!re#i# -erta# <
Pr!#e# migra#i le&i$ (e"at
Pemi#a$an #"!t menjadi le&i$ %e(il
uda$ memi#a$%an #am"le dengan #"e%tr!f!t!metri
uda$ dilarut%an dalam "elarut dalam jumla$ #edi%it -e%urangan 7le%tr!f!re#i#i -erta# <
Adan'a gangguan 'ang di#e&a&%an !le$ adalan'a gugu# 3 'ang terda"at "ada #elul!#a 'ang da"at &erintera%#i dengan m!le%ul "!lar #e$ingga da'a migra#i m!le%ul terganggu dan menjadi le&i$ renda$.
#' Ele"!+,+!esis Gel (GE) 7le%tr!f!re#i# gel meru"a%an #uatu te%ni% anali#i# "enting dan #angat #ering
di"a%ai dalam &idang &i!%imia dan &i!l!gi m!le%ular. 7le%tr!f!re#i# gel iala$ ele%tr!f!re#i# 'ang mengguna%an gel #e&agai fa#e diam untu% memi#a$%an m!le%ul+m!le%ul. Awaln'a ele%t!f!re#i# gel dila%u%an dengan medium gel %anji #e&agai fa#e diam untu% memi#a$%an &i!m!le%ul 'ang le&i$ &e#ar #e"erti "r!tein+ "r!tein. -emudian ele%tr!f!re#i# gel &er%em&ang dengan menjadi%an agar!#a dan "!lia%rilamida #e&agai gel media. Ta$un 155, Smit$ie# mendem!n#tra#i%an &a$wa gel 'ang ter&uat dari larutan %anji da"at diguna%an untu% memi#a$%an "r!tein+"r!tein #erum manu#ia. aran'a 'aitu dengan menuang%an larutan %anji "ana# %e dalam (eta%an "la#ti%, #etela$ di&iar%an mendingin %anji ter#e&ut a%an mem&entu% gel 'ang "adat namun ra"u$. /el %anji &er"eran #e&agai fa#a diam #tati!nar' "$a#e mengganti%an %erta# #aring C$atman "ada te%ni% terda$ulu. Te%ni% ele%tr!f!re#i# gel ma%in &er%em&ang dan di#em"urna%an, $ingga 19 ta$un %emudian ditemu%an gel "!lia%rilamida PA/7 E P!l'a(rilamide /el 7le(tr!"$!re#i# 'ang ter&entu% melalui "r!#e# "!limeri#a#i a%rilamida dan &i#+a%rilamida. PA/7 ini #anggu" memi#a$%an (am"uran D8A?8A atau "r!tein dangan u%uran le&i$ &e#ar. Se(ara "rin#i", te%ni% ini miri" dengan %r!mat!grafi 'aitu memi#a$%an (am"uran &a$an+&a$an &erda#ar%an "er&edaan #ifatn'a. Dalam ele%tr!f!re#i# gel, "emi#a$an dila%u%an ter$ada" (am"uran &a$an dengan muatan li#tri% 'ang &er&eda+&eda. 7le%tr!f!re#i# gel memi#a$%an ma%r!m!le%ul &erda#ar%an laju "er"inda$ann'a melewati #uatu gel di &awa$ "engaru$ medan li#tri%. 7le%tr!f!re#i# gel memi#a$%an #uatu (am"uran m!le%ul D8A menjadi "ita+"ita 'ang ma#ing+ma#ing terdiri ata# m!le%ul D8A dengan "anjang 'ang #ama. Ada tiga jeni# gel 'ang da"at diguna%an dalam ele%tr!f!re#i# D8A, 'aitu #e&agai &eri%ut < 1. 1./el "!lia%rilamida denatura#i, &erfung#i untu% memurni%an "enanda !lig!nu%le!tidadan menganali#i# $a#il e%#ten#i "rimer. 9. /el al%alin agar!#a, &erfung#i untu% memi#a$%an rantai D8A 'ang &eru%uran &e#ar. . ./el agar!#a f!rmalde$id denatura#i, &erfung#i untu% men'edia%an #i#tem ele%tr!f!re#i# 'ang diguna%an untu% fra%#i 8A "ada u%uran #tandar. Dalam "r!#e# ele%t!f!re#i# terda"at &e&era"a fa%t!r 'ang mem"engaru$i laju "ergera%an dari m!le%ul D8A, 'aitu<
a. )%uran !le%ul D8A !le%ul 'ang &eru%uran le&i$ %e(il a%an (e"at&ergera%melewati gel %arena $am&atan 'ang a%an di$ada"i tida% le&i$ &an'a% di&andig%an m!le%ul &eru%uran &e#ar. &. -!#entra#i gel #ema%in tinggi %arena %!n#entra#i agar!#a, #ema%in %a%u gel 'ang di&uat #e$ingga #u%ar untu% dilewati m!le%ul+m!le%ul D8A. -!n#entra#i agar!#a 'ang le&i$ tinggi memuda$%an "emi#a$an D8A 'ang &eru%uran %e(il, %!n#enta#i agar!#a 'ang le&i$ renda$ memuda$%an "emi#a$an D8A dengan u%uran 'ang le&i$ &e#ar. (. Bentu% m!le%ul 'ang memili%i &entu% eli"# atau fi&ril a%an le&i$ (e"at &ergera% di&anding%an dengan 'ang &er&entu% &ulat. d. Den#ita# muatan 'aitu muatan "er unit ;!lume m!le%ul. !le%ul dengan den#ita# muatan tinggi a%an &ergera% le&i$ (e"at di&anding%an m!le%ul dengan den#ita# muatan 'ang renda$. e. Sema%in %e(il "!ri+"!ri gel 'ang diguna%an, #ema%in lam&at "ergera%an m!le%ul D8A. f. Sema%in tinggi tegangan li#tri% 'ang di&eri%an, #ema%in (e"at "ergera%an m!le%ul D8A. g. Larutan &uffer, ele%tr!f!re#i# Buffer dengan %adar i!n tinggi a%an menai%%an %!ndu%tan#i li#tri% #e$ingga mem"er(e"at migra#i D8A. ar%er adala$ #egmen D8A 'ang #"e#ifi% dan tela$ di%eta$ui u%urann'a. ar%er &erfung#i #e&agai a(uan untu% mengeta$ui u%uran D8A $a#il am"ifi%a#i. ar%er D8A 'ang terda"at di dalam ruang ele%tr!f!re#i# &erfung#i #e&agai "enanda "!#i#i "a#angan &a#a dari m!le%ul D8A 'ang &ermigra#i. ar%er+mar%er D8A ter#e&ut meru"a%an mar%er 'ang tela$ di&uat !le$ "a&ri% #e$ingga tanda "a#angan &a#an'a jela#. Sala$ #atu (!nt!$ mar%er D8A adala$ lam&da 3ind >>>. ar%er ter#e&ut memili%i dela"an fragmen D8A dengan %i#aran 195 "& $ingga 9.10 "&. Penggunaan D8A mar%er ter#e&ut di%arena%an m!le%ul D8A 'ang a%an diamati memili%i fragmen D8A dengan u%uran 110++90.000 "&. 7le%tr!f!re#i# gel memili%i &e&era"a %!m"!nen 'ang terdiri dari< 1. Comb : Digunakan untuk membentuk well pada gel agarosa. 9. Tra' < Diguna%an untu% #e&agai (eta%an gel agar!#a. . $am&er< Diguna%an #e&agai wada$ gel agar!#a. 4. Sum&er Li#tri%< Diguna%an untu% mem&eri aru# #aat "r!#e# ele%tr!f!re#i#. Dalam ele%tr!f!re#i# juga diguna%an &a$an+&a$an #e"ert 7tidium Br!mida 'ang &er#ifat %ar#in!geni% dan Br!m Fen!l Blue. 3al ter#e&ut %arena 7tidium Br!mida da"at mening%at%an da'a flu!re#en#i dari D8A #e$ingga da"at
terli$at jela#, #edang%an Br!m Fen!l Blue &erfung#i #e&agai "ewarna untu% memantau %e(e"atan m!le%ul D8A "ada gel. anfaat ele%tr!f!re#i# gel antara lain untu% mengeta$ui u%uran fragmen D8A dari "r!du% P, memi#a$%an "r!du% D8A dari $a#il dige#ti 'ang &er&eda u%uran, lalu da"at di #e=uen(ing, dan juga untu% "emurnian atau "urifi%a#i D8A. 7le%tr!f!re#i# da"at dia"li%a#i%an untu% &er&agai ma(am %egiatan, antara lain mem&anding%an gen $!m!l!g dari #"e#ie# 'ang &er&eda, mengeta$ui #u#unan #e%uen# &er&agai gen!m, D8A finger "rinting , mengeta$ui ada atau tida%n'a gen+gen "en'e&a& %elainan geneti% atau "en'a%it tertentu, mendete%#i l!%a#i dan jumla$ m8A dalam #el atau jaringan tertentu, mengeta$ui a%ti;ita# gen #elama "er%em&angan &er&agai ti"e #el !rgani#me atau a%ti;ita# gen #e&elum dan #e#uda$ di&eri "erla%uan tertentu, mem"elajari e;!lu#i di ting%at m!le%ular, mengeta$ui ;aria#i geneti% dalam "!"ula#i natural di alam, menentu%an atau mengidentifi%a#i &erat m!le%ul fragmen D8A, 8A, "r!tein dan a%ti;ita# en*imati%, menganali#a fragmen D8A 'ang diam"lifi%a#i melalui P, mengidentifi%a#i "er#amaan dan "er&edaan geneti% antar indi;idu, dan menentu%an jumla$ fragmen D8A 'ang di%l!n dalam re%!m&inan "la#mid D8A. /el 'ang diguna%an &ia#an'a meru"a%an "!limer &ertautan #ilang (r!##lin%ed 'ang "!r!#ita#n'a da"at diatur #e#uai dengan %e&utu$an. )ntu% memi#a$%an "r!tein atau a#am nu%leat &eru%uran %e(il D8A, 8A, atau !lig!nu%le!tida, gel 'ang diguna%an &ia#an'a meru"a%an gel "!lia%rilamida, di&uat dengan %!n#entra#i &er&eda+&eda antara a%rilamida dan *at 'ang memung%in%an
"ertautan
#ilang
(r!##+lin%er,
meng$a#il%an
jaringan
"!lia%rilamida dengan u%uran r!ngga &er&eda+&eda. )ntu% memi#a$%an a#am nu%leat 'ang le&i$ &e#ar le&i$ &e#ar dari &e&era"a ratu# &a#a, gel 'ang diguna%an adala$ agar!#a dari e%#tra% rum"ut laut 'ang #uda$ dimurni%an.
Dalam "r!#e# ele%tr!f!re#i#, #am"el m!le%ul ditem"at%an %e dalam #umur well "ada gel 'ang ditem"at%an di dalam larutan "en'angga, dan li#tri% dialir%an %e"adan'a. !le%ul+m!le%ul #am"el ter#e&ut a%an &ergera% di dalam matri%# gel %e ara$ #ala$ #atu %utu& li#tri% #e#uai dengan muatann'a. Dalam $al a#am nu%leat, ara$ "ergera%an adala$ menuju ele%tr!da "!#itif, di#e&a&%an !le$ muatan negatif alami "ada rang%a gula+f!#fat 'ang dimili%in'a.)ntu% menjaga agar laju "er"inda$an a#am nu%leat &enar+&enar $an'a &erda#ar%an u%uran 'aitu
"anjangn'a, *at #e"erti natrium $idr!%#ida atau f!rmamida diguna%an untu% menjaga agar a#am nu%leat &er&entu% luru#.Sementara itu, "r!tein didenatura#i dengan deterjen mi#aln'a natrium d!de#il #ulfat, SDS untu% mem&uat "r!tein ter#e&ut &er&entu% luru# dan &ermuatan negatif. Setela$ "r!#e# ele%tr!f!re#i# #ele#ai, dila%u%an "r!#e# "ewarnaan #taining agar m!le%ul #am"el 'ang tela$ ter"i#a$ da"at dili$at. 7tidium &r!mida, "era%, atau "ewarna &iru !!ma##ie !!ma##ie &lue da"at diguna%an untu% %e"erluan ini. Ji%a m!le%ul #am"el &er"endar dalam #inar ultra;i!let mi#aln'a #etela$ diwarnai dengan etidium &r!mida, gel dif!t! di &awa$ #inar ultra;i!let. Ji%a m!le%ul #am"el mengandung at!m radi!a%tif, aut!radi!gram gel ter#e&ut di&uat. .' Ele"!+,+!esis Ka/ile! (0E)
7le%tr!f!re#i# %a"iler adala$ met!de ele%tr!f!re#i# 'ang diguna%an untu% memi#a$%an a#am amin!, "r!tein, li"id, %ar&!$idrat, dan nu%le!tida dengan re#!lu#i tinggi 'ang dila%u%an "ada "i"a %a"iler &eri#i &uffer. et!de ini mulai diguna%an #e(ara lua# "ada a%$ir ta$un 140. untu% a"li%a#i dalam &er&agai &idang
#e"erti
&i!te%n!l!gi, %imia,
ling%ungan, dan
anali#i#
farma#i.
7le%tr!f!re#i# %a"iler mengguna%an li#tri% &ertegangan tinggi 'ang men'e&a&%an #emua %!m"!nen i!n atau m!le%ul netral &ergera% %e %at!da. Dete%#i da"at dila%u%an dengan te%ni% "endete%#ian #"e%tr!metri atau ele%tr!%imia. Te%ni% "emi#a$an ini di"engaru$i !le$ tegangan li#tri%, %!efi#ien difu#i, "anjang, dan diameter "i"a %a"iler, #erta %!n#entra#i #am"el. et!de ini memili%i efi#ien#i dan #ele%ti;ita# 'ang &ai% namun &!r!# li#tri% %arena mengguna%an tegangan tinggi dan alatn'a juga ma$al. -ara%teri#ti% ele%tr!f!re#i# %a"iler 'aitu <
engguna%an "i"a %a"iler "ada "emi#a$an ele%tr!f!re#i#. emanfaat%an medan li#tri% &er%e%uatan tinggi, le&i$ dari 5 G?(m.
engguna%an dete%t!r &erte%n!l!gi m!dern, #e&agaimana 'ang ada
"ada %r!mat!gram.
7fi#ien#in'a %adang%ala #ama dengan %r!mat!grafi ga# %a"iler, namun juga &i#a le&i$ &e#ar.
em&utu$%an wa%tu &e&era"a menit untu% mengamati #am"el.
uda$ di!t!mati#%an untu% menganali#i# dalam #egi %uantitatif, dan muda$ diguna%an.
Ter&ata# dalam meng%!n#um#i meli&at%an #ejumla$ reagent.
et!de ini le&i$ a"li%atif untu% men'ele%#i dalam u%uran lua#, di&anding%an dengan te%ni% #e"ara#i lainn'a. Ber&agai
m!del
ele%tr!f!re#i# %a"iler da"at
dila%u%an
mengguna%an
in#trumen 7. Da#ar dari "er&edaan m!del "emi#a$an da"at di%arena%an &a$wa ele%tr!f!re#i# %a"iler tela$ di%em&ang%an dari #uatu %!m&ina#i ele%tr!f!re#i# dan te%ni% %r!mat!grafi. >#tila$ umumn'a ini da"at diangga" #e&agai "emi#a$an ele%tr!f!re#i# dari #ejumla$ #en'awa di dalam ta&ung #em"it. Calau"un #e&agian &e#ar a"li%a#i tela$ dila%u%an mengguna%an (airan #e&agai media "emi#a$, te%ni% ele%tr!f!re#i#
%a"iler
dimana
%a"iler
&eri#i
ele%tr!f!re#i#
gel,
la"i#an
%r!mat!grafi. >n#trumenta#i 7 terdiri dari < 1. Pi"a %a"iler Pi"a %a"iler &ertinda% #e&agai %!l!m tem"at "r!#e# "emi#a$an "engganti %erta# atau agar+agar "ada ele%tr!f!re#i# %!n;en#i!nal. Pi"a %a"iler ter&uat dari gela# dengan diameter dalam &er%i#ar antara 95+100 Hm dan "anjang antara 50+100 (m. #ema%in %e(il u%uran diameter "i"a %a"iler ma%a #ema%in &e#ar $arga 8. le$ %arena itu, #ema%in &e#ar diameter I100 ma%a "emi#a$an #ema%in tida% efi#ien. 9. Larutan &uffer Pi"a %a"iler dii#i dengan larutan &uffer dan %edua ujung "i"a %a"iler ter#e&ut ter(elu" dalam larutan &uffer. Larutan &uffer &erfung#i #e&agai larutan ele%tr!lit untu% meng$antar%an aru# li#tri% dan untu% "eng!ntr!l muatan m!le%ul. -arena m!le%ul da"at &ermuatan "!#itif, negati;e, atau netral &ergantung "ada "3 larutan dan #e&agaimana fung#i &uffer dalam mena$an "3. Dengan %ata lain, "3 &uffer da"at meng!ntr!% #ele%tifita# "emi#a$an ele%tr!f!re#i#, . Sum&er aru# #eara$ Dalam ele%t!f!re#i %!n;e#i!nal dialir%an aru# #eara$ #e%itar 100 ;!lt teta"i dalam ele%tr!f!re#i# %a"iler dialir%an aru# #eara$ &ertegangan #angat tinggi 10.000+0.000 ;!lt. le$ %arena itu, e%"erimen ele%tr!f!re#i# %a"iler da"at
dila%u%an dalam &e&era"a menit #edang%an e%#"erimen ele%tr!f!re#i# %!n;en#i!nal dila%u%an dalam wa%tu #e$ari. 4. Dete(t!r Dete(t!r da"at dileta%%an di#ala$ #atu ujung "i"a %a"iler 'aitu de%at %at!da. Ber&agai dete(t!r tela$ diguna%an untu% mendete%#i %!m"!nen+%!m"!nen $a#il "emi#a$an, antara lain < #"e%tr!metri #e"erti )G dan flu!re#en dan dete(t!r ele%tr!%imia #e"erti %!ndu%t!metri dan am"er!metri.
0' Funsi ele"!+,+!esis:
a. en'edia%an inf!rma#i mengenai u%uran, %!nfirma#i dan muatan dari "r!tein dan a#am nu%leat. &. Se&agai met!de "emi#a$an 'ang da"at diguna%an untu% menentu%an %!m"!nen dari "r!tein atau a#am nu%leat #etia" indu;idu. (. Pada &idang %e"!li#ian te%ni% met!de in diguna%an untu% "emeri%#aan D8A %ara%teri#ti% %$u#u# mi#aln'a #idi% jari. d. Dalam &idang m!le%uler, ele%tr!f!re#i# meru"a%an #ala$ #atu (ara untu% mem;i#uali#a#i%an %e&eradaaan D8A. D' P!insi/ e!a ele"!+,+!esis Berda#ar%an "ergera%an "arti%el+"arti%el &ermuatan negati;e ani!n a%an
&ergera% menuju %utu& 'ang "!#itif an!de, #edang%an "arti%el+"arti%el &ermuatan "!#itif an!de a%an &ergera% menuju %utu& 'ang negati;e ani!n.
&A& II METODE PENGGUNAAN
1' Ga2a! Ala" ele"!+,+!esis 2ese!"a 2aian32aiann4a
/am&ar 1.1 meru"a%an gam&ar alat ele%tr!f!re#i#
/am&ar 1.9 meru"a%an &agian+&agian alat ele%tr!f!re#i#
#' 0a!a Penunaan Ala" Ele"!+,+!esis
Se(ara umum "enggunaan alat ele%tr!f!re#i# #ama me#%i"un jeni# alat ele%tr!f!re#i# ter&agi dalam &e&era"a jeni#, 'ang mem&eda%an 'aitu media 'ang diguna%an. !nt!$n'a #e"erti %erta#, dan gel, !le$ %arena itu #e&elum alat ele%tr!f!re#i# di$idu"%an atau din'ala%an terle&i$ da$ulu men'ia"%an media 'ang di"erlu%an. Beri%ut (ara mengguna%an atau meng$idu"%an me#in ele%tr!f!re#i#.
1' Pa#ang ele%tr!de "ada ($am&er ele%tr!f!re#i# #e#uai dengan %utu& "!#itif dan
negatifn'a dengan (ara meng$u&ung%an ele%tr!da (!ne(t!r "ada ($am&er dengan lu&ang "ada eletr!de. #' Tutu" ($am&er ele%tr!f!re#i# dengan "enutu" ($am&er. .' Tan(a"%an #te%er "ada traf! #te" d!wn 'ang tela$ ditan(a"%an terle&i$ da$ulu
"ada #um&er tegangan. 5' Atur %e(e"atan running dengan memili$ t!m&!l GLTA/7 S7L7T 'ang
#e#uai 95G, 50G, 100G, 15G. 6' Lama wa%tu running da"at diatur dengan mene%an t!m&!l T>7 S7T
B)TT8S, dan lama wa%tu running a%an mun(ul "ada T>7 D>SPLA: dalam #atuan menit. %' 8'ala%an ele%tr!f!re#i# dengan mene%an t!m&!l 8 'ang terda"at "ada
ele%tr!da $ingga lam"u indi%at!r "ada ele%tr!da men'ala. 7' ati%an ele%tr!f!re#i# ($am&er dengan mene%an t!m&!l FF (a&ut #te%er dari
#um&er tegangan.
&A& III APLIKASI an PERHITUNGAN ELEKTROFORESIS
A. A"li%a#i 7le%tr!f!re#i# 7le%tr!f!re#i# da"at dia"li%a#i%an untu% &er&agai ma(am %egiatan #e&agai &eri%ut<
a. em&anding%an gen $!m!l!g dari ##"e#ie# 'ang &er&eda, mengeta$ui #u#unan #e%uen# &er&agai gen!m &. D8A Finger "rinting (. endete%#i %elainan geneti%. d. endete%#i l!%a#i dan jumla$ m8A dalam #el atau jaringan tertentu e. engeta$ui a%ti;ita# gen #elama "er%em&angan &er&agai ti"e #el !rgani#me atau "er(!&aan "erla%uan gen f. em"elajari e;!lu#i ting%at m!le(ular g. engeta$ui ;aria#i geneti% 'ang ada di alam $. enentu%an atau mengidentifi%a#i &erat m!le%ul D8A, 8A, dan "r!tein tertentu. i.
engidentifi%a#i "er#amaan dan "er&edaan geneti% antar indi;idu
j.
engeta$ui jumla$ fragmen D8A 'ang di%l!n dalam re%!m&inan D8A "la#mid
%. enganali#a fragmen D8A 'ang diam"lifi%a#i lewat P
0+n"+h s+al /e!hi"unan ele"!+,+!esis
1. Tentu%an Berat !le%ul #am"el Di"er!le$ data #e&agai &eri%ut <
Ban
Pr!tein
Di#tan(
F
L!g
d 1
e 4
0.059
Pr!tein 9.91K9
164.9
9
.KK
10.5
4 0.15441
1.06
K 9.94K4
1
9 0.111K6
1.1519
4
1 6K.K9
15.5
0.99K4
9 1.115
5
5 51.K915
1
1 0.9K41
1.K16K
6
99.0K6
0
9 0.4411K6
9 1.444
4
6
ara "en'ele#aian< 1. Per$itungan F dengan engguna%n rumu# F E
A B
#etela$ itu ma#u%an
%edalam %!l!m. -eterangan < F etenti!n Fa(t!r < Sam"el. A < Panjang Pita Sam"el B < Panjang Se"erating /el. 9. Buat %ur;a dari ta&le F dan L!g Pr!tein. . Buat Per#amaan eagenn'a 4. 3itung F #am"el lalu ma#u%an %edalam "er#amaan reagen 'ang tela$ ditemu%an. 5. 3a#il dari "er$itungan "er#amaan reagen di antil!g%an. 6. 3a#il dari antil!g itula$ 'ang menjadi Berat !le%um dari #am"le.
Jawa& <
y = -2.2831 x + 2.31! y = -2.2831"#$ %ample& + 2.31! y = -2.2831 "'.2()*12& + 2.31! y = 1.(13 y = log , y = anlog 1.(13 = 1.! kD
Log Protein 2. /"x& = - 2.28x + 2.3 #0 = 1
2
og rotein inear "og rotein&
1. 1 '. ' '
'.'
'.1
'.1
'.2
'.2
'.3
'.3
-ur;a l!g "r!tein
Sam"el $a#il "er(!&an
&A& I8 KESIMPULAN
'.*
'.*
'.
1'
7le%tr!f!re#i# adala$ met!de "emi#a$an &erda#ar%an "er&edaan m!&ilita# analit menunju%%an dalam medan li#tri% ditera"%an. met!de ele%tr!f!reti% da"at ditera"%an untu% "emi#a$an dari #uatu #am"el dengan ;ariet' lua#, terma#u% "r!tein, a#am nu%leat, a#am amin! dan %ar&!$idrat.
#'
et!de "emi#a$an ele%tr!f!re#i# dida#ar%an "ada intera%#i "arti%el+"arti%el &ermuatan !le$ medan li#tri%. Parti%el &ermuatan li#tri% negatiaf a%an &ergera% %e%utu& "!#itif an!da. Se&ali%n'a , "arti%el &ermuatan li#tri% "!#itif a%an &ergera% %e%utu& negati;e %at!da. Sementara "arti%el netral tida% &ergera% . Jadi medan li#tri% men'e&a&%an "emi#a$an "ada met!de ele%tr!f!re#i#.
.'
Jeni#+jeni# ele%tr!f!re#i# adala$ ele%tr!f!re#i# *!na wila'a$, ele%tr!f!re#i# %erta#, ele%tr!f!re#i# /el, dan ele%tr!f!re#i# %a"iler
5'
/el media dalam ele%tr!f!re#i# gel /7 adala$ gel agar!#a dan /el "!lia%rilamida
6'
7le%tr!f!re#i# diguna%an untu% meneliti D8A dalam &er&agai &idang, mi#aln'a
untu%
mem;i#uali#a#i%an
%e&eradaan
D8A,
"la#mid,
P.emuda$%an identifi%a#i "r!tein 'ang terda"at "ada #e&ua$ D8A.
DAFTAR PUSTAKA
dan
"r!du%
Andrea# an*, et.al, 9010, Bioanalytical Chemistry” "u&li#$ed &' >m"erial !llege Pre##, L!nd!n artin, . 16. /el ele(tr!"$!re#i#< nu(leid a(id#. Bi!# #(ientifi( Pu&li#$er, Mf!rd< M;i N 1K5 $lm. Ci&!w!, .S. 9010. 7le%tr!f!re#i#.Se%!la$ Farma#i >n#titut Te%n!l!gi Bandung. :uw!n!, T. 900.Bil!gi !le%ular.Ja%arta < Pener&itan 7rlangga Fat($i'a$. 9019. Anali#i# Bi!l!gi !le%uler. La&!rat!rium Bi!m!l< alang
